Name: massive pontine hemorrhage by dual injection of autologous blood
Uploaded: 2021-05-29T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood at JoVE.com

Denne studien ble økonomisk støttet av National Science Foundation of China (81471181 og 81870933) og Åpningslabprogrammet til Guangzhou Medical University (0506308) til Y Jiang, og av National Science Foundation of China (81701471) og det vitenskapelige programmet til Guangzhou Municipal Health Commission (20191A011083) til Z Qiu, og av National Science Foundation of China (81501009) til L Wu.

Protokollen ble gjennomgått og godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee ved Det andre tilknyttede sykehuset ved Guangzhou Medical University. Rotter ble levert av Animal Center of Southern Medical University. Den eksperimentelle utformingen vises i figur 1.
1. Dyr og instrumenter
<ol><li>Bruk 8 uker gamle mannlige Sprague-Dawley rotter som veier 250 ± 10 g.</li>
	<li>Hus rottene i minst 7 dager før operasjonen under kontrollerte miljøforhold m...

<ol>
	<li>Charidimou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+hemorrhage+recurrence,+small+vessel+disease+type,+and+cerebral+microbleeds:+A+meta-analysis.">Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis.</a> Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).</li><li>Tao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+brainstem+hemorrhage+model+by+autologous+blood+infusion+in+Rat:+White+Matter+Injury,+Magnetic+Resonance+Imaging,+and+Neurobehavioral+features.">A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).</li><li>Ichimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+treatment+for+primary+brainstem+hemorrhage+to+improve+postoperative+functional+outcomes.">Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes.</a> World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).</li><li>Behrouz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+pontine+haemorrhage:+A+systematic+review.">Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review.</a> European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).</li><li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainstem+iron+overload+and+injury+in+a+rat+model+of+brainstem+hemorrhage.">Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).</li><li>Chung, Y., Haines, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+brain+stem+surgery.">Experimental brain stem surgery.</a> Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).</li><li>Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+pontine+hemorrhage.">A rat model of pontine hemorrhage.</a> Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).</li><li>Lekic, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+hematoma+consequences,+neurobehavioral+profiles,+and+histopathology+in+a+rat+model+of+pontine+hemorrhage.">Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage.</a> Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).</li><li>Shrestha, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+brainstem+hemorrhage+model:+Key+points+to+success+in+modeling.">Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling.</a> World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).</li><li>Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+acute+pontine+infarction+in+rats+by+electrical+stimulation.">Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).</li><li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keep+warm+and+get+success:+The+role+of+postischemic+temperature+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model.">Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model.</a> Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).</li></ol>

I den nåværende studien ga vi en protokoll for å generere en massiv pontinblødning rotte modell. Denne modellen kan brukes til forskning på patofysiologisk mekanisme og prognose for massiv pontinblødning.
Gjennom hele eksperimentet ble 25 rotter brukt, hvorav bare en døde. Verifiseringen av MR, brutto anatomi og HE-farging indikerte at denne metoden hadde en svært lav dødelighet og høy suksessrate. For å etablere massiv pontinblødningsmodell, må to problemer løses, det injiserte ...

Intracerebral blødning står for en femtedel av slagpasienter. Prognosen for intracerebral blødning avhenger av hastigheten, volumet og plasseringen av blødning1,2. Sammenlignet med forebrain blødning, hjernestammeblødning har høyere dødelighet og sykelighet3. Omtrent 40% av hjernestammeblødningen forekommer i pons4. Etiologien og patofysiologien til pontinblødning er ganske forskjellige og mindre studert enn forebrain blødning5.
Det finnes to typer pontinblødning dyremodeller. Den ene er spontan blødningsmodell indusert ved infusjon av bakteriell kollagen i pons6,7,8. Den største fordelen med denne modellen er at blødningen er spontan. Imidlertid kan kollagenase bare indusere et lite volum pontinblødning. Dessuten kan kollagenase forårsake andre skader på hjernen. Den andre modellen er indusert ved stereotaktisk injeksjon av autologt blod i pons9. Fordelen med denne modellen er at den er lett å mestre med høy suksessrate. Teoretisk sett kan forskere injisere ethvert volum blod på et hvilket som helst sted av pons. På grunn av tilbakelekkasjen gjennom nåleruten er imidlertid det injiserte volumet begrenset. Nylig har dobbeltinjeksjonsmetoden blitt forfremmet for å redusererygglekkasjen 9. Denne metoden injiserer autologt blod to ganger med et 20-minutters intervall mellom injeksjonene. Dobbeltinjeksjonsmetoden brukes til å indusere mild (30 μL) og moderat (60 μL) pontinblødning, men ikke massiv pontinblødning. På klinikken har flertallet av pontinblødningspasienter med dårlig prognose massiv blødning (mer enn 10 ml).
I den forrige studien ga vi en protokoll for å etablere en pontin iskemisk slagmodell hos rotte10. I denne studien modifiserer vi den eksisterende doble injeksjonsmetoden, og gir en detaljert protokoll for å indusere massiv pontinblødning hos en rotte ved dobbel injeksjon av 100 μL autologt blod på to forskjellige steder i ponlene.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100ml Saline solution</td>
			<td>Guangdong yixiang</td>
			<td>191222201 C1</td>
			<td>Preparing heparin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100&#956;l Microinjector</td>
			<td>Shanghai Gaoge</td>
			<td></td>
			<td>Injection of autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe</td>
			<td>Jiangsu Zhiyu</td>
			<td>20191014</td>
			<td>Withdraw autologous blood from the tail vein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Alcohol</td>
			<td>Shandong Lierkang</td>
			<td></td>
			<td>Disinfection of rat tail</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive tape</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal anesthesia system</td>
			<td>RWD</td>
			<td>R510-31S-6</td>
			<td>Inducing and maintaining anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance beam</td>
			<td>Jiangsu Saiangsi</td>
			<td></td>
			<td>For neurological deficit scores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blades</td>
			<td>Shanghai Feiying</td>
			<td>74-C</td>
			<td>For gross anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone cement</td>
			<td>Shanghai Xinshiji</td>
			<td>20180306</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain tank</td>
			<td>Shenzhen LEIYEA</td>
			<td></td>
			<td>For gross anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol tartrate</td>
			<td>Jiangsu Hengrui</td>
			<td></td>
			<td>For pain management</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric cranial drill</td>
			<td>Nanjing&#160; Darwin biotechnology</td>
			<td>20180090018</td>
			<td>Making a burr hole on the skull</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP tube</td>
			<td>Nantong Surui</td>
			<td></td>
			<td>Transfer autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythromycin eye cream</td>
			<td>Yunnan pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Eyes protection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye liquor</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1120</td>
			<td>For HE staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating&#160;pad</td>
			<td>Dangerous Jungle</td>
			<td>JR01</td>
			<td>Keeping warm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium injection</td>
			<td>Chengdu Haitong Pharmacal Company</td>
			<td>190701</td>
			<td>Preparing heparin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IndoPhors</td>
			<td>Guoyao of China</td>
			<td></td>
			<td>Sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD</td>
			<td>20080701</td>
			<td>Inducing and maintaining anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light dark box</td>
			<td>Jiangsu Saiangsi</td>
			<td></td>
			<td>For neurological deficit scores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-injection pump</td>
			<td>Baoding Leifu</td>
			<td>TFD03-01-C</td>
			<td>Injection of autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRI system</td>
			<td>Philips</td>
			<td></td>
			<td>Confirmation of infarction in vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J32020</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin</td>
			<td>Guoyao of China</td>
			<td></td>
			<td>Infection Prevention</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q-tips</td>
			<td>Jiangxi Songhe</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalp heedle</td>
			<td>Jiangxi Hongda</td>
			<td>20200313</td>
			<td>Withdraw autologous blood from the tail vein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Shanghai Kaiyuan</td>
			<td>170902</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shearing scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>Y00040</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
			<td>RWD</td>
			<td>900-00001-00</td>
			<td>for surgical positioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical towel</td>
			<td>Xinxiang Huakangweicai</td>
			<td>20070601</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture needle</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J25041</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue holding forcepts</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J31080</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

massive pontine hemorrhage by dual injection of autologous blood

Vi tilbyr en protokoll for å etablere en massiv pontinblødningsmodell i en rotte. Rotter som veide ca 250 gram ble brukt i denne studien. Hundre mikroliter autologt blod ble tatt fra halevenen og stereotaktisk injisert i ponsene. Injeksjonsprosessen ble delt inn i 2 trinn: Først ble 10 μL blod injisert på et bestemt sted, anteroposterior posisjon (AP) -9,0 mm; lateral (Lat) 0 mm; vertikal (Vert) -9,2 mm, etterfulgt av en ny injeksjon av restblodet som ligger ved AP -9,0 mm; Lat 0 mm; Vert -9,0 mm med et intervall på 20 minutter. Balansestråletesten, lemplasseringstesten og den modifiserte Voestch-nevroscoren ble brukt til å evaluere nevrologisk funksjon. Magnetisk resonansavbildning (MR) ble brukt til å vurdere volumet av blødningsblødning in vivo. Symptomene på denne modellen var i tråd med pasienter med massiv pontinblødning.

Totalt 25 dyr ble brukt, 3 for kontroll, 6 for 30 μL, 6 for 60 μL og 10 for 100 μL blodinjeksjoner. En rotte som fikk en 100 μL injeksjon av autologt blod (1/10) døde innen 24 timer etter operasjonen.
Atferdstester ble utført på dag 1, dag 3, dag 7 og dag 14 etter operasjonen. Poengsummene for kontrollgruppen og blodinjeksjonsgruppene på ulike tidspunkter etter operasjonen er presentert i tabell 2. Ponti...

Watch this Scientific Journal Video about Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood at JoVE.com

Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood

Vi presenterer en protokoll for å etablere en massiv pontinblødningsmodell i en rotte via dobbel injeksjon av autologt blod.

Massiv Pontine blødning ved dobbel injeksjon av autologt blod

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred ...

Vi tilbyr en protokoll for å etablere massiv pontinblødning hos en rotte. Denne modellen er enkel å etablere, repeterbar og svært vellykket. Destillert injeksjon av autolog rottemetode kan brukes til å gjøre blødning i noen av hjerneregionene.Folk som ønsker å prøve disse teknikkene bør lære å bruke en stereotaxisk ramme, og være kjent med pontin anatomi. Begynn med å plassere en kirurgisk gardin over musen. Lag et snitt med en skalpell langs den merkede midtlinjen.Bruk en bomullspinne for å fjerne potensielt blod. Plasser deretter et stykke tang på hver side av hodebunnsklaffen for å eksponere skallen. Dypp en bomullspinne i 0,9% saltvann og fjern forsiktig bindevevet fra skallebenet.Bruk en markørpenn til å markere det sentrale punktet i bregmaen som utgangspunkt. Utfør en kraniotomi ved hjelp av en mikrobor, fortsett forsiktig. Når du er ferdig, fjern mikroboret fra den stereotaktiske rammen.Sett en 100 mikroliter Hamilton sprøyte inn i stereotaxic holderen. Slå på sprøytepumpebryteren. Klikk på den raske innåndingsknappen.Deretter aspirerer heparinoppløsning til 100 mikrolitere og drenerer den helt. Påfør klorhexidin og 75% alkohol kirurgisk skrubb til hele historien fra rot til spiss minst tre ganger for å desinfisere huden, myke kåtheten og utvide halevenen for å øke suksessraten for injeksjon. Fest en hodebunnsakupunktur til en en milliliter sprøyte, sett deretter hodebunnen akupunktur inn i en lateral hale vene tre centimeter fra halespissen og for å ta 150 mikroliter blod.Fjern akupunkturen i hodebunnen fra den ene millilitersprøyten og overfør blodet til et rør. Jobber raskt for å forhindre blodpropp. Bytt kirurgiske hansker.Velg tilbaketrekksmodus. Sett volumet til 100 mikroliter og sett hastigheten til 200 mikroliter per minutt. Klikk på løpeknappen, og aspirer 100 mikroliter blod inn i Hamilton-sprøyten.Bytt til infuse-modus og sett hastigheten til en mikroliter per minutt. Før sprøyten frem til spissen når 9,2 millimeter under overflaten av hjernen og injiser de første 10 mikroliter blod. Klikk på kjør-knappen.Stopp injeksjonen og la sprøyten være på plass i 20 minutter for å forhindre at blodet strømmer inn i subarachnoid-rommet. Trekk sprøyten tilbake til spissen kommer til ni millimeter under overflaten av hjernen, og start deretter injeksjonen på nytt med samme hastighet på en mikroliter per minutt til restblodet er injisert helt. La sprøyten stå på plass i 10 minutter for å unngå blodtilstrømning.Fjern sprøyten langsomt fra hjernen. Bruk deretter beinsement for å dekke kraniotomihullet. Når sementen tørker suturer såret med en fire null polyamid suturfilament.Etter sying tre eller fire masker knytte 2 en-en standard kirurgiske knuter. Vær oppmerksom på rotten hvert 15. Gi rotten fri tilgang til mat og vann.Totalt 25 dyr ble brukt til kontroll 30 mikroliter, 60 mikroliter og 100 mikroliter blodinjeksjoner. Atferdstester ble utført på dag én, tre, syv og 14 etter operasjonen. Pontinblødning forårsaket nevrologiske underskudd som redusert hornhinnen refleks og sirkler.Injeksjon av 100 mikroliter blod forårsaket også myotonia. MR-skanning ble utført 24 timer etter operasjonen. I blodinjeksjonsgruppene ble blødning oppdaget som en hypointense kant med en ISO til litt hyperintense kjerne i Basiler-delen av dammene.Volumet av blødning økte med injeksjonsvolumet. Rottene ble ofret på 24 timer og 14 dager etter operasjonen. Og to millimeter tykke seksjoner ble laget.Blødning ble oppdaget rundt injeksjonsstedet og distribuert i bunnen av dammene. Det var et lite ødem rundt blødningen i 100 mikroliter blodinjeksjonsgruppen. Noen av rottene ble ofret tre dager etter operasjonen, og parafinseksjoner ble laget for HE-farging.Resultatene viste at i blodinjeksjonsgruppene inflammatoriske celler beriket i parablødningssonen forble hemoglobin inneholdt med intakte røde blodlegemer. Når du prøver denne protokollen, må du huske injeksjonsposisjonen. Denne metoden kan brukes til å indusere blødning i en bestemt hjerneregion.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Identified by Green Fluorescent Protein (GFP) in Hypothalamic Slices

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone GnRH Neurons Identified by Green Fluorescent Protein GFP in Hypothalamic Slices

Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) is a small neuropeptide that regulates pituitary release of luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating ...

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Live-Imaging av<em&gt; Drosophila</em&gt; Larve neuroblasts

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given ...

Experimental Demyelination and Remyelination of Murine Spinal Cord by Focal Injection of Lysolecithin

Eksperimentell Demyelinisering og Remyelinering av Murine Spinal Cord av Focal Injeksjon av Lysolecithin

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease of the central nervous system characterized by plaque formation containing lost ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Volumetrisk metode for kvantifisering av Cerebral vasospasme i en Murine modell av Hjernehinneblødning

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Minimally Invasive Endoscopic Intracerebral Hemorrhage Evacuation

Minimalt invasiv endoskopisk intracerebral blødning evakuering

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a subtype of stroke with high mortality and poor functional outcomes, largely because there are no evidence-based ...

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

Sub akutt Cerebral Microhemorrhages av lipopolysakkarid injeksjon i rotter

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

Etablering av akutt pontinfarkt hos rotter ved elektrisk stimulering

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Dobbel direkte injeksjon av blod inn i Cisterna Magna som modell av Subaraknoid blødning

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...