Name: massive pontine hemorrhage by dual injection of autologous blood
Uploaded: 2021-05-29T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood at JoVE.com

Это исследование было финансово поддержано Национальным научным фондом Китая (81471181 и 81870933) и Программой открытия лабораторий Медицинского университета Гуанчжоу (0506308) для Y Jiang, а также Национальным научным фондом Китая (81701471) и Научной программой Муниципальной комиссии по здравоохранению Гуанчжоу (20191A011083) для Ц цз цю и Национальным научным фондом Китая (81501009) для L Wu.

Протокол был рассмотрен и одобрен Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию Второй аффилированной больницы Медицинского университета Гуанчжоу. Крысы были предоставлены Центром животных Южного медицинского университета. Экспериментальная конструкция пок...

<ol>
	<li>Charidimou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+hemorrhage+recurrence,+small+vessel+disease+type,+and+cerebral+microbleeds:+A+meta-analysis.">Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis.</a> Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).</li><li>Tao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+brainstem+hemorrhage+model+by+autologous+blood+infusion+in+Rat:+White+Matter+Injury,+Magnetic+Resonance+Imaging,+and+Neurobehavioral+features.">A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).</li><li>Ichimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+treatment+for+primary+brainstem+hemorrhage+to+improve+postoperative+functional+outcomes.">Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes.</a> World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).</li><li>Behrouz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+pontine+haemorrhage:+A+systematic+review.">Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review.</a> European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).</li><li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainstem+iron+overload+and+injury+in+a+rat+model+of+brainstem+hemorrhage.">Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).</li><li>Chung, Y., Haines, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+brain+stem+surgery.">Experimental brain stem surgery.</a> Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).</li><li>Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+pontine+hemorrhage.">A rat model of pontine hemorrhage.</a> Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).</li><li>Lekic, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+hematoma+consequences,+neurobehavioral+profiles,+and+histopathology+in+a+rat+model+of+pontine+hemorrhage.">Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage.</a> Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).</li><li>Shrestha, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+brainstem+hemorrhage+model:+Key+points+to+success+in+modeling.">Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling.</a> World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).</li><li>Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+acute+pontine+infarction+in+rats+by+electrical+stimulation.">Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).</li><li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keep+warm+and+get+success:+The+role+of+postischemic+temperature+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model.">Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model.</a> Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).</li></ol>

В настоящем исследовании мы предоставили протокол для создания модели крыс с массивным понтийным кровоизлиянием. Данная модель может быть использована для исследования патофизиологического механизма и прогноза массивного понтинового кровоизлияния.
На протяжении все...

Внутримозговое кровоизлияние составляет пятую часть пациентов с инсультом. Прогноз внутримозгового кровоизлияния зависит от скорости, объема и локализации кровотечения1,2. По сравнению с кровоизлиянием в передний мозг, кровоизлияние в ствол мозга имеет более высокую смертность и заболеваемость3. Около 40% кровоизлияний в ствол мозга происходит в понс4. Этиология и патофизиология понтинного кровоизлияния совершенно различны и менее изучены, чем кровоизлияние в передний мозг5.
Существует два вида понтийных кровоизлияния на животных моделях. Одной из них является модель спонтанного кровоизлияния, индуцированная инфузией бактериальной коллагеназы в понс6,7,8. Самым большим преимуществом этой модели является то, что кровотечение является спонтанным. Однако коллагеназа может вызвать только небольшой объем понтинового кровоизлияния. Кроме того, коллагеназа может вызвать другие травмы головного мозга. Другая модель индуцируется стереотаксической инъекцией аутологичной крови в понс9. Преимущество этой модели в том, что ее легко освоить с высоким показателем успешности. Теоретически, исследователи могли бы вводить любой объем крови в любое место понсов. Однако из-за обратной утечки через игольчатый путь объем инъекций ограничен. В последнее время был предложен метод двойной инъекции для уменьшения обратной утечки9. Этот метод вводит аутологистную кровь дважды с 20-минутным интервалом между инъекциями. Метод двойной инъекции применяется для индуцирования легкого (30 мкл) и умеренного (60 мкл) понтинового кровоизлияния, но не массивного понтинового кровоизлияния. В клинике большинство пациентов с понтийным кровоизлиянием с плохим прогнозом имеют массивное кровоизлияние (более 10 мл).
В предыдущем исследовании мы предоставили протокол для установления модели ишемического инсульта понтина у крыс10. В этом исследовании мы модифицируем существующий метод двойной инъекции и предоставляем подробный протокол, чтобы вызвать массивное понтийное кровоизлияние у крысы путем двойной инъекции 100 мкл аутологичной крови в двух разных местах в понс.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100ml Saline solution</td>
			<td>Guangdong yixiang</td>
			<td>191222201 C1</td>
			<td>Preparing heparin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100&#956;l Microinjector</td>
			<td>Shanghai Gaoge</td>
			<td></td>
			<td>Injection of autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe</td>
			<td>Jiangsu Zhiyu</td>
			<td>20191014</td>
			<td>Withdraw autologous blood from the tail vein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Alcohol</td>
			<td>Shandong Lierkang</td>
			<td></td>
			<td>Disinfection of rat tail</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive tape</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal anesthesia system</td>
			<td>RWD</td>
			<td>R510-31S-6</td>
			<td>Inducing and maintaining anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance beam</td>
			<td>Jiangsu Saiangsi</td>
			<td></td>
			<td>For neurological deficit scores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blades</td>
			<td>Shanghai Feiying</td>
			<td>74-C</td>
			<td>For gross anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone cement</td>
			<td>Shanghai Xinshiji</td>
			<td>20180306</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain tank</td>
			<td>Shenzhen LEIYEA</td>
			<td></td>
			<td>For gross anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol tartrate</td>
			<td>Jiangsu Hengrui</td>
			<td></td>
			<td>For pain management</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric cranial drill</td>
			<td>Nanjing&#160; Darwin biotechnology</td>
			<td>20180090018</td>
			<td>Making a burr hole on the skull</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP tube</td>
			<td>Nantong Surui</td>
			<td></td>
			<td>Transfer autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythromycin eye cream</td>
			<td>Yunnan pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Eyes protection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye liquor</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1120</td>
			<td>For HE staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating&#160;pad</td>
			<td>Dangerous Jungle</td>
			<td>JR01</td>
			<td>Keeping warm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium injection</td>
			<td>Chengdu Haitong Pharmacal Company</td>
			<td>190701</td>
			<td>Preparing heparin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IndoPhors</td>
			<td>Guoyao of China</td>
			<td></td>
			<td>Sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD</td>
			<td>20080701</td>
			<td>Inducing and maintaining anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light dark box</td>
			<td>Jiangsu Saiangsi</td>
			<td></td>
			<td>For neurological deficit scores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-injection pump</td>
			<td>Baoding Leifu</td>
			<td>TFD03-01-C</td>
			<td>Injection of autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRI system</td>
			<td>Philips</td>
			<td></td>
			<td>Confirmation of infarction in vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J32020</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin</td>
			<td>Guoyao of China</td>
			<td></td>
			<td>Infection Prevention</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q-tips</td>
			<td>Jiangxi Songhe</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalp heedle</td>
			<td>Jiangxi Hongda</td>
			<td>20200313</td>
			<td>Withdraw autologous blood from the tail vein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Shanghai Kaiyuan</td>
			<td>170902</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shearing scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>Y00040</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
			<td>RWD</td>
			<td>900-00001-00</td>
			<td>for surgical positioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical towel</td>
			<td>Xinxiang Huakangweicai</td>
			<td>20070601</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture needle</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J25041</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue holding forcepts</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J31080</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

massive pontine hemorrhage by dual injection of autologous blood

Мы предоставляем протокол для установления модели массивного понтийного кровоизлияния у крысы. Крысы весом около 250 граммов были использованы в этом исследовании. Сто микролитров аутологичной крови брали из хвостовой вены и стереотаксически вводили в понс. Процесс инъекции разделили на 2 этапа: сначала 10 мкл крови вводили в определенное место, переднезадневое положение (АП) -9,0 мм; боковой (Лат) 0 мм; вертикальная (Верт) -9,2 мм, с последующим вторым введением остаточной крови, расположенной при АП -9,0 мм; Лат 0 мм; Верт -9,0 мм с 20-минутным интервалом. Для оценки неврологической функции использовались тест на балансир, тест на размещение конечностей и модифицированный нейрооценка Voestch. Магнитно-резонансная томография (МРТ) использовалась для оценки объема кровоизлияния in vivo. Симптомы этой модели соответствовали пациентам с массивным понтийным кровоизлиянием.

В общей сложности было использовано 25 животных, 3 для контроля, 6 для 30 мкл, 6 для 60 мкл и 10 для инъекций в кровь по 100 мкл. Одна крыса, получившего инъекцию 100 мкл аутологиозной крови (1/10), умерла в течение 24 часов после операции.
Поведенчески?...

Watch this Scientific Journal Video about Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood at JoVE.com

Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood

Мы представляем протокол для установления модели массивного понтийного кровоизлияния у крысы с помощью двойной инъекции аутологичной крови.

Массивное понтиновское кровоизлияние путем двойной инъекции аутологичной крови

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred ...

Мы предоставляем протокол для установления массивного понтинового кровоизлияния у крысы. Эта модель проста в установке, повторяема и очень успешна. Дистиллированная инъекция аутологичного крысиного метода может быть использована для кровоизлияния в любую из областей мозга.Люди, которые хотят попробовать эти методы, должны научиться использовать стереотаксическую рамку и быть знакомыми с анатомией понтий. Начните с размещения хирургической драпировки над мышью. Сделайте разрез скальпелем вдоль отмеченной средней линии.Используйте ватный тампон, чтобы удалить любую потенциальную кровь. Затем поместите кусок щипцов на каждую сторону лоскута головы, чтобы обнажить череп. Окуните ватный тампон в 0,9% физиологического раствора и аккуратно удалите соединительные ткани из кости черепа.Используйте маркерную ручку, чтобы отметить центральную точку брегмы в качестве точки начала. Выполняют краниотомию с помощью микродрели, протекая осторожно. По завершении снимите микродрель со стереотаксической рамки.Вставьте 100-микролитровый шприц Hamilton в стереотаксический держатель. Включите переключатель ТНВД. Нажмите кнопку быстрого вдоха.Затем аспират раствора гепарина до 100 микролитров и полностью слить его. Нанесите хлоргексидин и 75% спиртовой хирургический скраб на всю сказку от корня до кончика не менее трех раз, чтобы продезинфицировать кожу, смягчить роговость и расширить хвостовую вену, чтобы увеличить частоту успеха инъекции. Прикрепите иглоукалывание кожи головы к шприцу в один миллилитр, затем вставьте иглоукалывание кожи головы в боковую хвостовую вену в трех сантиметрах от кончика хвоста и возьмите 150 микролитров крови.Извлеките иглоукалывание кожи головы из одного миллилитра шприца и перенесите кровь в пробирку. Работа быстро, чтобы предотвратить свертывание крови. Смените хирургические перчатки.Выберите режим вывода средств. Установите громкость на 100 микролитров и установите скорость 200 микролитров в минуту. Нажмите кнопку «Бег» и аспирировать 100 микролитров крови в шприц Гамильтона.Переключитесь в режим infuse и установите скорость на один микролитр в минуту. Выдвигайте шприц до тех пор, пока наконечник не достигнет 9,2 миллиметра ниже поверхности мозга и введите первые 10 микролитров крови. Нажмите на кнопку запуска.Остановите инъекцию и оставьте шприц в положении на 20 минут, чтобы предотвратить поступление крови в субарахноидальное пространство. Втяните шприц до тех пор, пока наконечник не прибудет на девять миллиметров ниже поверхности мозга, затем возобновите инъекцию с той же скоростью один микролитр в минуту, пока остаточная кровь не будет введена полностью. Оставьте шприц в положении на 10 минут, чтобы избежать обратного кровотока.Медленно извлеките шприц из мозга. Затем используйте костный цемент, чтобы покрыть отверстие в краниотомии. Когда цемент высохнет, швом раны с четырьмя нулевыми полиамидными шовными нитями.После сшивания трех-четырех швов завязывают 2 по одному-одному стандартные хирургические узлы. Наблюдайте за крысой каждые 15 минут, пока она полностью не оправится от анестезии, а затем верните ее в исходную клетку с грелкой под ней. Обеспечьте крысе свободный доступ к пище и воде.В общей сложности 25 животных использовались для контроля 30 микролитровых, 60 микролитров и 100 микролитровых инъекций крови. Поведенческие тесты проводились в первый, третий, седьмой и 14-й дни после операции. Понтинское кровоизлияние вызывало неврологический дефицит, такой как снижение рефлекса роговицы и кружение.Инъекция 100 микролитров крови также индуцировала миотонию. МРТ-сканирование проводилось через 24 часа после операции. В группах инъекций крови кровоизлияние было обнаружено как обод с ипоинтенсом с ISO до слегка гиперинтензивного ядра в базиликовой части прудов.Объем кровоизлияния увеличивался с объемом инъекций. Крыс приносили в жертву через 24 часа и 14 дней после операции. И были сделаны два миллиметровых сечения.Было обнаружено кровоизлияние, окружающее место инъекции и распространяющееся в основании прудов. Наблюдался небольшой отек вокруг кровоизлияния в группе инъекций крови 100 микролитров. Некоторые из крыс были принесены в жертву через три дня после операции, а парафиновые срезы были сделаны для окрашивания HE.Результаты показали, что в группах инъекций крови воспалительные клетки, обогащенные в зоне паракроизлияния, гемоглобин оставался содержащимся с неповрежденными эритроцитами. При попытке этого протокола обязательно запомните положение инъекции. Этот метод может быть использован для индуцирования кровоизлияния в любую конкретную область мозга.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Identified by Green Fluorescent Protein (GFP) in Hypothalamic Slices

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone GnRH Neurons Identified by Green Fluorescent Protein GFP in Hypothalamic Slices

Двойной Записи Соматические от гонадотропин-рилизинг гормона (ГнРГ) Нейроны, идентифицируемый зеленый флуоресцентный белок (GFP) в гипоталамус Ломтики

Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) is a small neuropeptide that regulates pituitary release of luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating ...

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Гена Доставка в послеродовой мозга крысы по Non-желудочковой плазмиды инъекция и Электропорация

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Инъекции аутологичной крови в модели спонтанного внутримозгового кровоизлияния у мышей

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Живая съемка<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Личиночные нейробласты

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given ...

Experimental Demyelination and Remyelination of Murine Spinal Cord by Focal Injection of Lysolecithin

Экспериментальная Демиелинизация и ремиелинизацию мышиной спинного мозга Focal инъекций лизолецитина

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease of the central nervous system characterized by plaque formation containing lost ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Объемный метод количественного определения церебрального спазм сосудов в мышиных модели субарахноидальное кровоизлияние

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Minimally Invasive Endoscopic Intracerebral Hemorrhage Evacuation

Минимально инвазивная эндоскопическая внутримозговая эвакуация кровоизлияния

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a subtype of stroke with high mortality and poor functional outcomes, largely because there are no evidence-based ...

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

Подостром мозгового Microhemorrhages, вызванных инъекции липополисахарида в крыс

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

Создание острого инфаркта понтий в Крысах электрической стимуляцией

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Двойная прямая инъекция крови в Цистерна Магна как модель субарахноидового кровоизлияния

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...