Name: massive pontine hemorrhage by dual injection of autologous blood
Uploaded: 2021-05-29T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood at JoVE.com

Denna studie stöddes ekonomiskt av National Science Foundation of China (81471181 och 81870933) och Opening Lab Program of Guangzhou Medical University (0506308) till Y Jiang, och av National Science Foundation of China (81701471) och det vetenskapliga programmet för Guangzhou Municipal Health Commission (20191A011083) till Z Qiu och av National Science Foundation of China (81501009) till L Wu.

Protokollet granskades och godkändes av Institutional Animal Care and Use Committee vid det andra anslutna sjukhuset i Guangzhou Medical University. Råttor tillhandahölls av Animal Center of Southern Medical University. Den experimentella designen visas i figur 1.
1. Djur och instrument
<ol><li>Använd 8 veckor gamla hanråttor som väger 250 ± 10 g.</li>
	<li>Inhys råttorna i minst 7 dagar före operationen under kontrollerade miljöförhållanden med en o...

<ol>
	<li>Charidimou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+hemorrhage+recurrence,+small+vessel+disease+type,+and+cerebral+microbleeds:+A+meta-analysis.">Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis.</a> Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).</li><li>Tao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+brainstem+hemorrhage+model+by+autologous+blood+infusion+in+Rat:+White+Matter+Injury,+Magnetic+Resonance+Imaging,+and+Neurobehavioral+features.">A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).</li><li>Ichimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+treatment+for+primary+brainstem+hemorrhage+to+improve+postoperative+functional+outcomes.">Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes.</a> World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).</li><li>Behrouz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+pontine+haemorrhage:+A+systematic+review.">Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review.</a> European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).</li><li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainstem+iron+overload+and+injury+in+a+rat+model+of+brainstem+hemorrhage.">Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).</li><li>Chung, Y., Haines, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+brain+stem+surgery.">Experimental brain stem surgery.</a> Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).</li><li>Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+pontine+hemorrhage.">A rat model of pontine hemorrhage.</a> Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).</li><li>Lekic, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+hematoma+consequences,+neurobehavioral+profiles,+and+histopathology+in+a+rat+model+of+pontine+hemorrhage.">Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage.</a> Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).</li><li>Shrestha, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+brainstem+hemorrhage+model:+Key+points+to+success+in+modeling.">Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling.</a> World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).</li><li>Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+acute+pontine+infarction+in+rats+by+electrical+stimulation.">Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).</li><li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keep+warm+and+get+success:+The+role+of+postischemic+temperature+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model.">Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model.</a> Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).</li></ol>

I den nuvarande studien tillhandahöll vi ett protokoll för att generera en massiv pontinsk blödning råtta modell. Denna modell kan användas för forskning om patofysiologisk mekanism och prognos av massiva pontin blödning.
Under hela experimentet användes 25 råttor, varav endast en dog. Verifieringen av MRI, brutto anatomi och HE färgning anges att denna metod hade en mycket låg dödlighet och en hög framgång. För att fastställa massiv pontinblödningsmodell måste två problem l...

Intracerebral blödning står för en femtedel av strokepatienterna. Prognosen för intrakraniell blödning beror på blödningens hastighet, volym och placering av blödning1,2. Jämfört med förhjärnblödningen har hjärnstammen blödning högre dödlighet och sjuklighet3. Cirka 40% av hjärnstammen blödning förekommer i pons4. Etiologin och patofysiologin hos pontinblödning är helt annorlunda och mindre studerade än förhjärnblödning5.
Det finns två typer av pontinska blödningsdjurmodeller. Den ena är spontan blödningsmodell inducerad genom infusion av bakteriella kollagenaser i ponsna6,7,8. Den största fördelen med denna modell är att blödningen är spontan. Kollagenas kan dock bara inducera en liten volym pontinblödning. Dessutom kan kollagenas orsaka andra skador på hjärnan. Den andra modellen induceras genom stereotaktisk injektion av autologt blod i pons9. Fördelen med denna modell är att det är lätt att behärska med en hög framgångsgrad. Teoretiskt sett kan forskare injicera vilken mängd blod som helst på vilken plats som helst av pons. På grund av ryggläckaget genom nålvägen är dock den injicerade volymen begränsad. Nyligen har dubbelinjektionsmetoden främjats för att minska ryggläckaget9. Denna metod injicerar autologt blod två gånger med 20 minuters intervall mellan injektionerna. Dubbelinsprutningsmetoden används för att inducera mild (30 μL) och måttlig (60 μL) pontinblödning men inte massiv pontinblödning. I kliniken har majoriteten av pontinska blödningspatienter med dålig prognos massiv blödning (mer än 10 ml).
I den tidigare studien tillhandahöll vi ett protokoll för att upprätta en pontinsk ischemisk strokemodell hos råtta10. I denna studie ändrar vi den befintliga dubbla injektionsmetoden och ger ett detaljerat protokoll för att inducera massiv pontin blödning hos en råtta genom dubbel injektion av 100 μL autologt blod på två olika platser i pons.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100ml Saline solution</td>
			<td>Guangdong yixiang</td>
			<td>191222201 C1</td>
			<td>Preparing heparin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100&#956;l Microinjector</td>
			<td>Shanghai Gaoge</td>
			<td></td>
			<td>Injection of autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe</td>
			<td>Jiangsu Zhiyu</td>
			<td>20191014</td>
			<td>Withdraw autologous blood from the tail vein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Alcohol</td>
			<td>Shandong Lierkang</td>
			<td></td>
			<td>Disinfection of rat tail</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive tape</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal anesthesia system</td>
			<td>RWD</td>
			<td>R510-31S-6</td>
			<td>Inducing and maintaining anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance beam</td>
			<td>Jiangsu Saiangsi</td>
			<td></td>
			<td>For neurological deficit scores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blades</td>
			<td>Shanghai Feiying</td>
			<td>74-C</td>
			<td>For gross anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone cement</td>
			<td>Shanghai Xinshiji</td>
			<td>20180306</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain tank</td>
			<td>Shenzhen LEIYEA</td>
			<td></td>
			<td>For gross anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol tartrate</td>
			<td>Jiangsu Hengrui</td>
			<td></td>
			<td>For pain management</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric cranial drill</td>
			<td>Nanjing&#160; Darwin biotechnology</td>
			<td>20180090018</td>
			<td>Making a burr hole on the skull</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP tube</td>
			<td>Nantong Surui</td>
			<td></td>
			<td>Transfer autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythromycin eye cream</td>
			<td>Yunnan pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Eyes protection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye liquor</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1120</td>
			<td>For HE staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating&#160;pad</td>
			<td>Dangerous Jungle</td>
			<td>JR01</td>
			<td>Keeping warm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium injection</td>
			<td>Chengdu Haitong Pharmacal Company</td>
			<td>190701</td>
			<td>Preparing heparin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IndoPhors</td>
			<td>Guoyao of China</td>
			<td></td>
			<td>Sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD</td>
			<td>20080701</td>
			<td>Inducing and maintaining anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light dark box</td>
			<td>Jiangsu Saiangsi</td>
			<td></td>
			<td>For neurological deficit scores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-injection pump</td>
			<td>Baoding Leifu</td>
			<td>TFD03-01-C</td>
			<td>Injection of autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRI system</td>
			<td>Philips</td>
			<td></td>
			<td>Confirmation of infarction in vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J32020</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin</td>
			<td>Guoyao of China</td>
			<td></td>
			<td>Infection Prevention</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q-tips</td>
			<td>Jiangxi Songhe</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalp heedle</td>
			<td>Jiangxi Hongda</td>
			<td>20200313</td>
			<td>Withdraw autologous blood from the tail vein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Shanghai Kaiyuan</td>
			<td>170902</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shearing scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>Y00040</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
			<td>RWD</td>
			<td>900-00001-00</td>
			<td>for surgical positioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical towel</td>
			<td>Xinxiang Huakangweicai</td>
			<td>20070601</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture needle</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J25041</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue holding forcepts</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J31080</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

massive pontine hemorrhage by dual injection of autologous blood

Vi tillhandahåller ett protokoll för att etablera en massiv pontinsk blödningsmodell hos en råtta. Råttor som väger cirka 250 gram användes i denna studie. Hundra mikroliter autologt blod togs från svans venen och stereotaxically injiceras i pons. Injektionsprocessen delades in i 2 steg: Först injicerades 10 μL blod på en specifik plats, anteroposterior position (AP) -9, 0 mm; sido (Lat) 0 mm; vertikal (Vert) -9,2 mm, följt av en andra injektion av restblodet vid AP -9,0 mm; Lat 0 mm; Vert -9,0 mm med 20 minuters intervall. Balansstråletestet, limb placering test och den modifierade Voestch neuroscore användes för att utvärdera neurologiska funktion. Magnetic Resonance Imaging (MRT) användes för att bedöma volymen av blödning in vivo. Symptomen på denna modell var i linje med patienter med massiva pontinska blödning.

Totalt användes 25 djur, 3 för kontroll, 6 för 30 μL, 6 för 60 μL och 10 för 100 μL blodinjektioner. En råtta som fick en 100 μL injektion av autologt blod (1/10) dog inom 24 timmar efter kirurgi.
Beteendetester utfördes dag 1, dag 3, dag 7 och dag 14 efter operationen. Poängen för kontrollgruppen och blodinjektionsgrupperna på olika tidpunkter efter operationen presenteras i tabell 2. Pontin blöd...

Watch this Scientific Journal Video about Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood at JoVE.com

Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood

Vi presenterar ett protokoll för att upprätta en massiv pontinska blödning modell i en råtta via dubbla injektion av autolog blod.

Massiv pontinsk blödning genom dubbel injektion av autologt blod

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred ...

Vi tillhandahåller ett protokoll för att fastställa massiva pontinska blödningar i en råtta. Denna modell är lätt att etablera, repeterbar och mycket framgångsrik. Destillerad injektion av autolog råtta metod kan användas för att göra blödning i någon av hjärnregionerna.Människor som vill prova dessa tekniker bör lära sig att använda en stereotaxisk ram och vara bekanta med pontinsk anatomi. Börja med att placera ett kirurgiskt draperi över musen. Gör ett snitt med en skalpell längs den markerade mittlinjen.Använd en bomullspinne för att ta bort eventuellt blod. Placera sedan en bit tång på varje sida av hårbottenklaffen för att exponera skallen. Doppa en bomullspinne i 0,9% saltlösning och ta försiktigt bort bindväven från skallbenet.Använd en markörpenna för att markera knäggens centrala punkt som ursprungspunkt. Utför en kraniotomi med hjälp av en mikroborr och fortsätt försiktigt. När du är klar tar du bort mikroborren från stereotaxisk ram.Lägg en 100 mikroliter Hamilton spruta i stereotaxic hållaren. Slå på insprutningspumpens strömbrytare. Klicka på snabb inandningsknappen.Aspirera sedan heparinlösningen till 100 mikroliter och dränera den helt. Applicera klorhexidin och 75% alkohol kirurgisk skrubb på hela berättelsen från rot till spets minst tre gånger för att desinficera huden, mjuka upp kåtan och vidga svans venen för att öka injektionshastigheten. Fäst en hårbottenakupunktur på en milliliter spruta, sätt sedan in hårbotten akupunktur i en laterala svans ven tre centimeter från svansspetsen och för att ta 150 mikroliter blod.Ta bort hårbottenakupunkturen från en millilitersprutan och överför blodet till ett rör. Arbetar snabbt för att förhindra blodkoagulering. Byt operationshandskar.Välj uttagsläge. Ställ in volymen på 100 mikroliter och ställ in hastigheten på 200 mikroliter per minut. Klicka på körknappen och aspirera 100 mikroliter blod i Hamilton-sprutan.Växla till infuseringsläget och ställ in hastigheten på en mikroliter per minut. För fram sprutan tills spetsen når 9,2 millimeter under hjärnans yta och injicera de första 10 mikroliter blod. Klicka på körknappen.Stoppa injektionen och låt sprutan vara på plats i 20 minuter för att förhindra att blod strömmar in i det subarachnoida utrymmet. Dra tillbaka sprutan tills spetsen anländer till nio millimeter under hjärnans yta och starta sedan om injektionen med samma hastighet som en mikroliter per minut tills det återstående blodet har injicerats helt. Låt sprutan vara på plats i 10 minuter för att undvika blodspill.Ta långsamt bort sprutan från hjärnan. Använd sedan bencement för att täcka kraniotomihålet. När cementet torkar suturera såret med en fyra noll polyamid sutur glödtråd.Efter att ha sytt tre eller fyra stygn binder 2 en-en standard kirurgiska knutar. Observera råttan var 15: e minut tills den helt återhämtar sig från anestesi och sätt sedan tillbaka den i den ursprungliga buren med en värmeplatta under. Ge råttan fri tillgång till mat och vatten.Totalt 25 djur användes för kontroll av 30 mikroliter, 60 mikroliter och 100 mikroliterblodinjektioner. Beteendemässiga tester utfördes dag ett, tre, sju och 14 efter kirurgi. Pontinska blödning orsakade neurologiska underskott som minskad hornhinnans reflex och cirkla.Injektion av 100 mikroliter blod inducerade också myotonia. MRI Scanning utfördes 24 timmar efter kirurgi. I blodinjektionsgrupperna upptäcktes blödning som en hypointense fälg med en ISO till något hyperintense kärna i basilerdelen av dammarna.Volymen blödning ökade med injektionsvolymen. Råttorna offrades 24 timmar och 14 dagar efter operationen. Och två millimeter tjocka sektioner gjordes.Blödning upptäcktes runt injektionsstället och distribution i basen av dammarna. Det fanns ett litet ödem runt blödningen i 100 mikroliter blodinjektionsgruppen. Några av råttorna offrades tre dagar efter kirurgi och paraffin avsnitt gjordes för HE färgning.Resultaten visade att i blodinjektionsgrupperna inflammatoriska celler berikade i parablödningszonen förblev hemoglobinet inneslutet med intakta röda blodkroppar. När du försöker detta protokoll, se till att komma ihåg injektionspositionen. Denna metod kan användas för att inducera en blödning i någon specifik cerebral region.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Identified by Green Fluorescent Protein (GFP) in Hypothalamic Slices

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone GnRH Neurons Identified by Green Fluorescent Protein GFP in Hypothalamic Slices

Dubbla Somatisk Inspelningar från gonadotropinfrisättande hormon (GnRH) Nervceller Märkt med grönt fluorescerande protein (GFP) i hypotalamus Slices

Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) is a small neuropeptide that regulates pituitary release of luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating ...

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Gene Leverans till Postnatal råtthjärna av icke-ventrikulär Plasmid Injection och elektroporation

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Autologt blod Injection till Model Spontan intracerebralt blödning i Möss

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Live avbildning av<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvneuroblaster

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given ...

Experimental Demyelination and Remyelination of Murine Spinal Cord by Focal Injection of Lysolecithin

Experimentell Demyelinisering och remyelinisering av murina ryggmärgs genom Focal Injektion av Lysolecitin

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease of the central nervous system characterized by plaque formation containing lost ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

En volymetrisk metod för kvantifiering av Cerebral Vasospasm i en murin modell av subarachnoidalblödning

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Minimally Invasive Endoscopic Intracerebral Hemorrhage Evacuation

Minimalt invasiv endoskopisk intracerebral blödning evakuering

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a subtype of stroke with high mortality and poor functional outcomes, largely because there are no evidence-based ...

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

Subakut Cerebral Microhemorrhages induceras av lipopolysackarid injektion hos råttor

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

Inrättande av akut pontinska infarkt hos råttor genom elektrisk stimulering

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Dubbel direktinsprutning av blod i Cisterna Magna som en modell av Subarachnoid Hemorrhage

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...