Name: functional assessment of intestinal permeability and neutrophil transepithelial migration in mice using a standardized intestinal loop model
Uploaded: 2021-02-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model at JoVE.com

저자는 근접 결장 루프 모델의 설립에 자신의 기여에 대한 우에르츠부르크 대학의 박사 스벤 플레밍, 마우스 식민지의 관리에 대한 숀 왓슨과 iLoop 모델의 사진의 수집을 돕는 치트라 K. Muraleedharan에 대한 감사. 이 작품은 독일 연구 재단/DFG(BO 5776/2-1)에서 KB, R01DK079392, R01DK072564, R01DK061379에서 C.A.P까지 지원했다.

모든 동물 실험은 국립 보건원의 지침과 정책에 따라 수행되었으며 미시간 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다.
1. 수술 전 준비
참고: 이 방법은 8-12주 된 C57BL/6 유전적 배경에서 성인 마우스를 채용하여 생성되었다. 모든 마우스는 정상적인 차우와 물에 대한 광고 리비툼 액세스를 가진 엄격한 특정 병원체 없는 조건하에서 보관되?...

IBD와 같은 병리학 적 조건하에서 장 장벽 기능 및 면역 세포 모집의 장애 조절을 담당하는 메커니즘은 불완전하게 이해됩니다. 여기서, 우리는 ileum 또는 근위 결장의 잘 혈관화된 외부장 세그먼트를 채택하고 장 투과성, 호중구 이주 연구 및 그밖 응용의 평가를 허용하는 강력한 생체 내 murine 모형을 상세히 기술합니다.
iLoop는 살아있는 동물에서 수행되는 비 회복 수술입니다...

장 점막은 기둥 장 상피 세포 (IeCs), 기본 라미나 프로프리아 면역 세포 및 근막 점막의 단일 층을 포괄합니다. 영양분의 흡수에 그것의 역할 이외에, 장 상피는 발광 장성 박테리아, 병원체 및 규정식 항원에서 바디 내부를 보호하는 물리적 장벽입니다. 또한, IeCs 및 lamina propria 면역 세포는 문맥과 자극에 따라 내성 또는 반응을 유도하는 면역 반응을 조정합니다. 상피 장벽의 붕괴는 병리학점막 염증의 발병을 선행하고 궤양성 대장염과 크론병1,2,3,4,5,6,7을모두 포괄하는 염증성 장질환(IBD)에 기여할 수 있다고 보고되었다. 궤양성 대장염을 가진 개인은 다형성 핵 호중구(PMN)의 과도한 환전성 이동(TEpM)을 존재하여 토굴 농양을 형성하고, 질병의 중증도와 연관된 발견8,9. 손상된 상피 장벽 기능및 과도한 면역 반응은 IBD의 특징이지만, 장 투과성 및 면역 세포 모집의 정량적 평가를 수행하기 위한 생체 내 분석의 부족이 장 점막으로.
장 상피 투과성을 연구하는 데 사용되는 가장 일반적인 방법은 반투과성 다공성 멤브레인삽입물 10,11,12에배양된 IEC 단층제를 사용하여 전 생체 챔버 기반 접근법을 채용한다. 상피 장벽 무결성은 형광전기 저항(TEER) 또는 플루오레세인 이소티오카네이트(FITC)의 파라세포 플럭스의 측정에 의해 모니터링되며,기저구(13,14,15)에대한 대피에서 표기된 dextran을 표기한다. 유사하게, PMN TEpM은 전형적으로 하부챔버(16)에첨가되는 화학요법제에 대한 응답으로 연구된다. PMN은 상부 챔버에 배치되고 인큐베이션 기간 이후에, 기저 구획으로 마이그레이션된 PMN은 수집및 정량화된다. 이러한 방법은 유용하고, 수행하기 쉽고, 매우 재현가능하지만, 분명히 감소주의적 접근 방식이며 반드시 생체 내 조건의 정확한 반사를 나타내는 것은 아닙니다.
마우스에서, 장 내 세포 투과성을 연구하는 일반적인 분석은 FITC-dextran의 경구 영역및 혈액혈청(13,17)에서FITC-dextran 외관의 후속 측정에 의한 것이다. 이 분석의 단점은 지역 장 기여보다는 위장관의 전반적인 장벽 무결성에 대한 평가를 나타낸다는 것입니다. 또한, 에반스 블루는 일반적으로 생체 내 혈관 누설을 평가하는 데사용되며 마우스 및쥐(19, 20,21)에서장점 막투도를 평가하기 위해 사용되어 왔다. 장 점막에서 에반스 블루의 정량화는 하룻밤 포르마이드에서 배양을 사용하는 조직에서 추출이 필요합니다. 따라서 동일한 조직을 사용하여 장상피성 투과성 및 호중구 침투를 연구할 수 없습니다.
여기서 우리는 생체 내에서 대장 점막 투과성 및 백혈구 환전 이동에 재현 가능한 데이터를 수집하는 데 필요한 동물의 수를 줄이는 간단한 프로토콜을 강조합니다. 따라서 추가 분석을 위해 수확할 수 있는 장 루프의 무결성을 손상시키지 않으면서 혈액 혈청에서 쉽게 감지할 수 있는 FITC-덱스트랜스를 사용하는 것이 좋습니다. 참고, 장 계측 루프는 세균 감염(예: 살모넬라, 리스테리아 단세포유전자 및 대장균)22,23,24,25뿐만 아니라 장 투과성(26)을 연구하기 위해 다양한 종(마우스, 쥐,토끼,송아지 포함)에서 사용되어 왔다. 그러나, 우리의 지식의 최고에 IBD에 일반적으로 관련 되 고 ileum 또는 결장 과 같은 창 자에 있는 특정 지역에서 PMN TEpM의 메커니즘을 조사 하는 연구.
여기서 우리는 장 내 루프 (iLoop) 모델을 설명하며, 이는 ileum 또는 근위 결장의 잘 혈관화되고 외부화 된 장 세그먼트를 사용하는 생체 내의 견고하고 신뢰할 수있는 미세 수술 방법입니다. iLoop 모형은 생리적으로 관련있고 마취의 밑에 살아있는 마우스에 장 장벽 무결성 및 PMN TEpM의 평가를 허용합니다. 우리는 두 가지 응용 프로그램을 시연 : 1) iLoop 2) 강력한 chemottractant Leukotriene B4 (LTB4) 27의인트라피컬 주입 후 iLoop 루멘에서 전환 PMN의 정량화 후 4kDa FITC-dextran의 혈청 수준의 정량화 . 더욱이, ILOOP 모델을 활용하여 잼-a-null마우스 또는 마우스가 IC에 JAM-A의 선택적 손실을 품고있다(빌린-크레크; Jam-a fl/fl)대조마우스에 비해, 우리는 장 투과성 및 호중구 환전에 단단한 접합 관련 단백질 JAM-A에 대한 주요 기여를 보고한 이전 연구를 확증할 수 있다15,28,29,30,31.
iLoop 모델은 체외 학적 으로 확증하는 데 사용할 수있는 고기능적이고 생리적 인 방법입니다. 더욱이, 이것은 화학, 사이토카인, 세균병원균, 독소, 항체 및 치료제를 포함하여 루프 루멘에 주입될 수 있는 각종 시약을 연구할 수 있는 다목적 실험 모델입니다.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipment and Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Alcohol Swabs</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle, 25G X 5/8&#34;</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle, 30G X 1/2&#34;</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1ml Tuberculin Syringe Without Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15ml Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 96-Well Solid Black Polystyrene Microplate</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>07-200-592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Non-treated Culture Dish, 10cm</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>CLS430588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator (cotton swab), 6&#34;, sterile</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>25806 2WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynarex Cotton Filled Gauze Sponges, Non-Sterile, 2&#34; x 2&#34;</td>
			<td>Medex</td>
			<td>3249-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EZ-7000 anesthesia vaporizer (Classic System, including heating units)</td>
			<td>E-Z Systems</td>
			<td>EZ-7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Centrifuge Tube 50ml&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Colored Labeling Tape</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>15-901-10R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey Needle Holder (needle holder)&#160;</td>
			<td>FST</td>
			<td>12001-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes, small (tissue wipe)</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.7ml Microcentrifuge Tubes&#160;</td>
			<td>Thomas Scientific&#160;</td>
			<td>c2170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Tube 1.3ml Z (serum clot activator tube)</td>
			<td>Sarstedt&#160;</td>
			<td>41.1501.105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria Fine Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14370-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5ml Polystyrene Round-Bottom Tube with Cell-Strainer Cap (35 &#181;m nylon mesh)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet Ointment, Sterile Ocular Lubricant</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>12920060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring Forceps (blunt tissue forceps)</td>
			<td>FST</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roboz Surgical 4-0 Silk Black Braided, 100 YD</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>NC9452680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps (anatomical forceps)</td>
			<td>FST</td>
			<td>1108-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sofsilk Nonabsorbable Coated Black Suture Braided Silk Size 3-0, 18&#34;, Needle 19mm length 3/8 circle reverse cutting&#160;</td>
			<td>HenrySchein</td>
			<td>SS694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Fine Forceps, Angled</td>
			<td>FST</td>
			<td>91110-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10ml Syringe PP/PE without needle</td>
			<td>Millipore Sigma&#160;</td>
			<td>Z248029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yellow Feeding Tubes for Rodents 20G x 30 mm</td>
			<td>Instech</td>
			<td>FTP-20-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solutions and Buffers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accugene 0.5M EDTA</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>51201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium-Chloride-Potassium (ACK) Lysing Buffer</td>
			<td>BioWhittaker</td>
			<td>10-548E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-023-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline without Calcium and Magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Anti-Mouse Ly-6G Antibody (1A8)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>127610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b Monoclonal Antibody, PE, eBioscience (M1/70)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-0112-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CountBright Absolute Counting Beads</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C36950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiotreitol</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP172-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, heat inactivated</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>511550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein Isothiocyanate-Dextran, average molecular weight 4.000</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>60842-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Halocarbon</td>
			<td>12164-002-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leukotriene B4</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>71160-24-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP Rat Anti-Mouse CD45 (30-F11)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>557235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD FC Block)</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Murine IFN-&#947;</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>315-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Murine TNF-&#945;</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>315-01A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functional assessment of intestinal permeability and neutrophil transepithelial migration in mice using a standardized intestinal loop model

장 점막은 발광 박테리아와 외인성 물질의 통행을 방지하면서 영양분과 물의 파라세포 수송을 허용하는 동적 장벽을 형성하는 상피 세포의 단일 층에 의해 줄지어 있습니다. 이 층의 위반은 발광 내용및 면역 세포의 모집에 증가 투과성 귀착됩니다, 둘 다 염증성 장 질환 (IBD)을 포함하여 창자에 있는 병리학 상태의 특징입니다. 
다형성 핵 호중구(PMN)의 상피 장벽 기능 및 환피상전환(TEpM)을 조절하는 메커니즘은 정량적 분석을 허용하는 생체 내 실험 적 방법의 부족으로 인해 불완전하게 이해된다. 여기서, 우리는 ileum 또는 근위 결장의 외부화된 장 세그먼트를 채택하는 강력한 뮤린 실험 모형을 기술합니다. 외부장 루프(iLoop)는 완전히 혈관화되어 있으며 상피 세포 단층층을 통해 투과성 및 PMN 이동을 연구하는 데 일반적으로 사용되는 전 생체 내챔버 기반 접근 방식에 비해 생리적 이점을 제공합니다.
우리는 이 모델의 두 가지 적용을 자세하게 보여줍니다: (1) 내루피알 주사 후 혈청에서 형광 라벨덱스트랜스의 검출을 통한 장 투과성의 정량적 측정, (2) 장 내 상피로 이동된 PMN의 정량적 평가는 항문 내 항막내 도입 후 장 루멘으로. 우리는 이 모형의 타당성을 입증하고 대조군에 비해 상피 단단한 접합 관련 단백질 JAM-A가 결여된 마우스에 있는 iLoop를 이용한 결과를 제공합니다. JAM-A는 염증 반응 도중 PMN TEpM뿐만 아니라 상피 장벽 기능을 조절하기 위하여 보였습니다. iLoop를 사용하여 우리의 결과는 이전 연구 결과를 확인하고 항상성 및 질병 도중 생체내에 있는 장 투과성 및 PMN TEpM의 규칙에 있는 JAM-A의 중요성을 강조합니다. 
iLoop 모델은 장 내 항상성 및 염증의 생체 내 연구에서 재현 가능한 고도로 표준화된 방법을 제공하며 IBD와 같은 질병의 장 장벽 기능 및 점막 염증에 대한 이해를 크게 향상시킵니다.

일루프 및 pcLoop 모델의 회로도 표현은 각각 도 1과 도 2에묘사됩니다. 해부학 사진은 장세그먼트(도 1B 및 도 2B)의외부화를 포함한 절차의 중요한 단계를 표시하며, 혈액 공급의 최소한의 교란을 허용하는 결찰에 적합한 위치의 식별(도 1C 및 도 2C)및 시약 용액(...

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Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

Dysregulated 장 상피 장벽 기능 및 면역 반응은 생리적인 모형의 부족 때문에 제대로 조사되지 않는 선동적인 장 질병의 특징입니다. 여기서는 생체 내 점막 투과성 및 백혈구 모집을 연구하기 위해 잘 혈관화되고 외부화된 장 세그먼트를 사용하는 마우스 장 루프 모델을 설명합니다.

표준화된 장 루프 모델을 사용하여 마우스에서 장 투과성 및 호중구 환전 이동의 기능 평가

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...

장 모델은 창자 얼마나 새는지 측정 하는 광범위 하 고 생리적인 방법 얼마나 새는 쥐에서 창 자에서 마이그레이션 하는 방법, 생체 내. 이 방법은 증가 된 장 투과성과 병리학장 염증의 기본 메커니즘을 더 잘 이해하는 데 도움이됩니다. 이 기술은 궤양성 대장염과 크론병에서 볼 수 있듯이 창자 장벽 기능 및 병리학적 염증의 근본적인 이해 메커니즘을 돕기 위해 사용될 수 있습니다.이 모델은 장 장벽 기능 또는 마우스의 면역 세포 모집을 검사하기 위해 장막 또는 근위 결장 중 잘 혈관, 외부화된 창자 세그먼트를 사용합니다. 이 광범위한 응용 프로그램을 통해 장 루프 모델은 새는 장 장벽과 염증 반응으로 인한 질병에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 수술 단계를 연습하면 어려움을 극복할 수 있습니다.완전히 혈관화된 장 세그먼트를 외부화하고 출혈을 피하기 위해 결찰에 적합한 위치를 선택하는 것이 매우 중요합니다. 장 루프 모델은 마이크로 외과 기술이므로 다른 외과 적 절차와 마찬가지로 시각적 데모 및 방법의 단계별 프리젠 테이션에서 크게 이점을 얻을 수 있습니다. 마취의 수술 평면을 달성 한 후, 알코올 면봉 또는 70 %에탄올에 담근 거즈 스폰지로 복부 미드 라인의 모피를 문질러 시작합니다.저체온증을 방지하기 위해 알코올로 모피의 넓은 영역을 적시지 마십시오. 가위를 사용하여 중간 라인 복강경 절제술을 수행합니다. 복부 의 중간에 수평 절개를하고 복막을 노출하여 복부 내 장기를 손상시키지 않도록주의하십시오.노출 된 복강 내 구멍 위에 미리 절단 된 젖은 면 거즈를 놓습니다. 젖은 면봉을 사용하여 cecum을 동원하고 외부화하고 젖은 면 거즈에 조심스럽게 배치하십시오. 그런 다음, 동원하고 부드럽게 ileum을 외부화.장막 혈관과 혈액 공급을 방해하지 않고 젖은 면 거즈에 적어도 6 센티미터의 말단 일루를 배치하십시오. 노출 된 조직을 항상 촉촉하게 유지하십시오. 간질에 있는 ileum을 공급하는 주요 동맥을 확인합니다, cecum에 가까운.그런 다음 중요한 혈관이없는 막질에 두 개의 결찰 부위를 찾습니다. 무딘 조직 집게로 말기 일루를 단단히 잡고 미세 팁 집게를 사용하여 혈관을 피하면서 장간을 회귀합니다. 천포에 실크 봉합사를 놓고 수술 매듭을 묶어 첫 번째 결찰을 만듭니다.눈자를 사용하여 첫 번째 합자에서 4센티미터 떨어진 곳에 측정하고 두 번째 합자를 만듭니다. 4센티미터 의 일루 루프를 분리하여 혈액 공급과 막막을 그대로 유지하기 위해 미세 가위로 각 결찰 옆에 조심스럽게 잘라냅니다. 10 밀리리터 주사기에 부착된 유연한 노란색 공급 튜브를 사용하여 따뜻한 HBSS로 일릴 루프 세그먼트의 함량을 부드럽게 플러시합니다.수술 부위를 깨끗하게 유지하기 위해 복부에서 발광 내용을 씻어 내십시오. 실크 봉합사를 곁들인 플러시 일루 루프의 두 컷 끝을 리게이트합니다. 30 게이지 바늘로 1 밀리리터 주사기를 사용하여 FITC-덱스트랜스 또는 케모킨과 같은 시약 250 마이크로리터를 장 루멘에 천천히 주입하십시오.일막 루프가 팽창하여 점막의 적당한 팽창을 일으킵니다. 바늘 홀더, 해부학 집게 및 3.0 흡수할 수 없는 실크 봉합사를 역절단 바늘로 사용하여 복부 벽을 닫습니다. 저체온증을 방지하기 위해 동물을 건조 한 후, 잠복기 동안 온도 조절 마취 챔버에 놓습니다.수술을 위해 마우스를 준비하고 이전에 설명한 대로 cecum을 외부화하십시오. 젖은 면 봉면을 사용하여 전체 일루를 외부화하고 젖은 면 거즈 위에 놓습니다. 메소콜론에 있는 근위 결장및 혈액 공급을 확인합니다.근위 결장을 동원하고 메소콜론의 선박이 없는 지역에서 약 0.5cm의 하스쿼터를 생성한다. 첫 번째 합자에서 2 센티미터를 측정하고 메소콜론에서 혈액 공급이없는 영역에서 두 번째 합자를 만듭니다. 미세 한 가위를 사용 하 여 각 결찰 옆에 조심스럽게 잘라 2 센티미터 긴 pcLoop를 격리 합니다.10 밀리리터 주사기에 부착된 유연한 노란색 공급 튜브를 사용하여 pcLoop를 따뜻한 HBSS로 부드럽게 플러시하여 대변을 제거합니다. 수술 부위를 깨끗하게 유지하기 위해 복부에서 발광 내용을 씻어 내십시오. 그런 다음 실크 봉합사를 사용하여 플러시 pcLoop의 두 컷 끝을 리게이트합니다.30 게이지 바늘이 있는 1밀리리터 주사기를 사용하여 FITC-dextran 또는 chemokine와 같은 시약 200 마이크로리터를 장 루멘에 천천히 주입하십시오. pcLoop는 팽창하여 점막의 적당한 팽창을 일으킵니다. 젖은 면봉을 사용하여 ligated pcLoop, 일루, cecum을 부드럽게 다시 넣습니다.바늘 홀더, 해부학 집게 및 3.0 흡수할 수 없는 실크 봉합사를 역절단 바늘로 사용하여 복부 벽을 닫습니다. 잠복기 후 마취 된 마우스를 안락사시키고 분석을 위해 조직을 수집합니다. 장 투과성 평가를 위한 I 루프 모델의 정확성을 확인하기 위해 FITC-dextran pcLoop 분석체는 생체내 장 장벽 기능의 조절에서 단단한 접합 관련 단백질 Jam-a의 역할을 평가하기 위해 수행되었다.pcLoop 모델을 사용하면 FITC-dextran 혈청 수치가 대조군에 비해 Jam-a null 마우스에서 2.5배 증가하였다. 유사한 결과는 장 상피 세포에 Jam-a의 선택적 손실을 품고 있는 마우스로 얻어졌다. pcLoop 모델은 다형성 핵 호중구 또는 PMN을 연구하는 데 사용되었으며, 장 점막으로의 모집 및 생체 내의 후속 환피성 마이그레이션을 연구하는 데 사용되었습니다.pcLoop의 발광 함량에서 PMN의 수는 유동 세포 측정 분석에 의해 정량화되었다. 근위 결장의 세그먼트에 존재하는 PMN의 수는 생리적 조건하에서 낮았다. 프로 염증 사이토카인, TNF 알파 및 IFN 감마를 가진 전처리는 수술 전에 pcLoop 루멘에서 모집된 PMN의 증강된 수의 결과로 이어졌습니다.PMN 화학 요법의 투여는 PMN 카운트의 극적인 증가로 이어졌다 LTB4. 대장 점막에서 PMN의 면역히스토케미칼 염색은 사이토카인 및 LTB4를 자극한 후 PMN의 높은 모집을 확증한다. PMN 환피성 이동에 Jam-a의 기여는 장 상피 세포에 Jam-a의 선택적 손실을 항구 마우스에 pcLoop 모델을 사용하여 연구되었다.상피 잼-a의 손실은 쓰레기 대조군에 비해 식민지 루멘에서 전환 PMN의 감소 된 수로 이어졌다. 이 기술에 대 한 중요 한 측면 수술을 수행 할 때 외부 장 세그먼트에 혈액 공급을 보존 하는 것을 기억 하는. 이 프로토콜에 따라, 장 투과성 분석 및 호중구 환전 이동 분석과 같은 다른 방법은 생체 내 장벽 무결성 및 장 염증의 손실을 조사하기 위해 수행 될 수있다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

마우스의 응용은 M 세포에 의해 박테리아 이해를 평가하는 Peyer의 패치 장 루프 분석 출혈도 잡았

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

연구

면역학 및 감염병학

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

장 상피 세포의 장내 세균의 침입<em&gt; 체외</em&gt; 크게 수직 확산 챔버 모델을 사용하여 향상

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

시험관 내 병원균 유도 호중구 트랜스 상피 이동을 평가하는 공동 문화 분석

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Quantitative Assessment of Human Neutrophil Migration Across a Cultured Bladder Epithelium

교양 방광 상피 세포 간 인간 호중구 이주의 정량 평가

The recruitment of immune cells from the periphery to the site of inflammation is an essential step in the innate immune response at any mucosal surface. ...

Real-time Imaging of Myeloid Cells Dynamics in ApcMin/+ Intestinal Tumors by Spinning Disk Confocal Microscopy

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골수 세포 역학의 실시간 영상<em&gt; APC<sup&gt; 최소 / +</sup</em&gt; 소장 종양 디스크 공 초점 현미경을 회전시켜

Myeloid cells are the most abundant immune cells within tumors and have been shown to promote tumor progression. Modern intravital imaging techniques ...

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

장간막 림프 덕트 유관 쥐 모델 : 창자 림프 약물 운송의 평가에 응용

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; 높은</sup&gt; 면역 결핍 마우스에게 T 세포

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

포유류 세포의 박테리아 감염 후 스트레스 과립 형성의 면역 형광 분석

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice

장 이식-비교-호스트 질병 및 라이브 쥐에서 미니 내 시경 평가의 유도

Acute graft-versus-host disease (GvHD) represents the most severe complication that patients previously undergoing allogeneic hematopoietic stem cell ...

Human Colonoid Monolayers to Study Interactions Between Pathogens, Commensals, and Host Intestinal Epithelium

병원 균, 공생, 그리고 호스트 창 자 상피 사이 상호 작용을 공부 하는 인간 Colonoid Monolayers

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal ...