Name: functional assessment of intestinal permeability and neutrophil transepithelial migration in mice using a standardized intestinal loop model
Uploaded: 2021-02-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model at JoVE.com

Os autores agradecem ao Dr. Sven Flemming da Universidade de Wuerzburg por suas contribuições para o estabelecimento do modelo proximal de laço de cólon, Sean Watson pela gestão das colônias de ratos e Chithra K. Muraleedharan por ajudar na aquisição das fotos do modelo iLoop. Este trabalho foi apoiado pela German Research Foundation/DFG (BO 5776/2-1) para KB, R01DK079392, R01DK072564 e R01DK061379 para C.A.P.

Todos os experimentos em animais foram conduzidos de acordo com as diretrizes e políticas dos Institutos Nacionais de Saúde e aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Michigan.
1. Preparação pré-operatória
NOTA: Este método foi gerado empregando camundongos adultos de origem genética C57BL/6, de 8 a 12 semanas. Todos os camundongos foram mantidos sob rigorosas condições específicas de livre patógenos com acesso a...

Os mecanismos responsáveis pela desregulação da função da barreira intestinal e o recrutamento de células imunes em condições patológicas como o IBD são incompletamente compreendidos. Aqui, detalhamos um modelo robusto in vivo murine que emprega um segmento intestinal exteriorizado bem vascularizado de cólon ileum ou proximal e permite a avaliação da permeabilidade intestinal, estudos de migração de neutrófilos, bem como outras aplicações.
O iLoop é uma cirurgia de não recu...

A mucosa intestinal abrange uma única camada de células epiteliais intestinais colunares (IECs), células imunes de lamina propria subjacentes e mucosa muscular. Além de seu papel na absorção de nutrientes, o epitélio intestinal é uma barreira física que protege o interior do corpo de bactérias luminais, patógenos e antígenos dietéticos. Além disso, IECs e células imunes lamina propria coordenam a resposta imune induzindo tolerância ou resposta, dependendo do contexto e estímulos. Foi relatado que o rompimento da barreira epitelial pode preceder o aparecimento de inflamação patológica da mucosa e contribuir para a doença inflamatória intestinal (DII) que abrange tanto a colite ulcerativa quanto a doença de Crohn1,2,3,4,5,6,7. Indivíduos com colite ulcerativa apresentam migração transepitetelial excessiva (TEpM) de neutrófilos polimorfonucleares (PMN) formando abscessos cripticos, achado que tem sido associado à gravidade da doença8,9. Embora a função da barreira epitelial comprometida e as respostas imunes excessivas sejam marcas do DII, faltam ensaios in vivo experimentais para realizar avaliações quantitativas da permeabilidade intestinal e do recrutamento de células imunes na mucosa intestinal.
Os métodos mais comuns utilizados para estudar a permeabilidade epitelial intestinal e o PMN TEpM empregam abordagens ex vivo baseadas em câmaras usando monocamadas IEC cultivadas em pastilhas de membrana porosa semi-permeável10,11,12. A integridade da barreira epitelial é monitorada por medidas de resistência elétrica transeptelial (TEER) ou pelo flux paracelular do isothionato fluoresceína (FITC) rotulado de dextran de apical ao compartimento basal13,14,15. Da mesma forma, o PMN TEpM é tipicamente estudado em resposta a um quimioattractant que é adicionado na câmara inferior16. O PMN é colocado na câmara superior e após um período de incubação, o PMN que migrou para o compartimento basal são coletados e quantificados. Embora esses métodos sejam úteis, fáceis de executar e muito reprodutíveis, eles são obviamente abordagens reducionistas e não representam necessariamente um reflexo preciso das condições in vivo.
Em camundongos, um ensaio comum para estudar a permeabilidade paracelular intestinal é por gavage oral do FITC-dextran e posterior medição da aparência FITC-dextran no soro sanguíneo13,17. A desvantagem deste ensaio é que representa uma avaliação da integridade geral da barreira do trato gastrointestinal e não da das contribuições regionais intestinais. Além disso, o azul Evans é comumente usado para avaliar vazamento vascular in vivo18 e também tem sido empregado para avaliar a permeabilidade mucosa intestinal em camundongos e ratos19,20,21. A quantificação de Evans azul na mucosa intestinal requer extração de tecido empregando incubação em formamide durante a noite. Portanto, o mesmo tecido não pode ser usado para estudar permeabilidade epitelial intestinal e infiltração de neutrófilos.
Aqui destacamos um protocolo simples que reduz o número de animais necessários para coletar dados reprodutíveis sobre permeabilidade mucosa cólon e migração transepitelial leucócito in vivo. Recomendamos, portanto, o uso de fitc-dextrans que são facilmente detectáveis no soro sanguíneo sem comprometer a integridade das alças intestinais que podem ser colhidas para análise posterior. Note-se que as alças ligadas intestinais têm sido utilizadas em várias espécies (incluindo rato, rato, coelho, bezerro) para estudar infecção bacteriana (como Salmonella, Listeria monocytogenes e Escherichia coli)22,23,24,25, bem como permeabilidade intestinal26; no entanto, até onde sabemos, não há estudos que investiguem mecanismos de PMN TEpM em regiões específicas do intestino, como íleo ou cólon que estejam comumente envolvidos no IBD.
Aqui descrevemos o modelo de alça intestinal do camundongo (iLoop) que é um método in vivo microcirúrgico robusto e confiável que emprega um segmento intestinal bem vascularizado e exteriorizado do íleo ou do cólon proximal. O modelo iLoop é fisiologicamente relevante e permite a avaliação da integridade da barreira intestinal e do PMN TEpM em camundongos vivos sob anestesia. Demonstramos duas aplicações: 1) quantificação dos níveis de soro de 4 kDa FITC-dextran após administração intraluminal no iLoop 2) quantificação de PMN transmigrado no lloop lúmen após injeção intraluminal do potente chemottractant Leukotriene B4 (LTB4)27. Além disso, utilizando o modelo iLoop com ratos ou ratos jam-a-nulosque abrigam perda seletiva de JAM-A em IECs(Villin-cre; Jam-a fl/fl) em comparação com os camundongos de controle, somos capazes de corroborar estudos anteriores que relataram uma grande contribuição para a proteína associada à junção apertada JAM-A à permeabilidade intestinal e transmigração de neutrófilos15,28,29,30,31.
O modelo iLoop é um método altamente funcional e fisiológico que pode ser usado para corroborar ensaios in vitro. Além disso, este é um modelo experimental versátil que permite o estudo de vários reagentes que podem ser injetados no lúmen de loop, incluindo quimiocinas, citocinas, patógenos bacterianos, toxinas, anticorpos e terapêuticas.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipment and Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Alcohol Swabs</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle, 25G X 5/8&#34;</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle, 30G X 1/2&#34;</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1ml Tuberculin Syringe Without Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15ml Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 96-Well Solid Black Polystyrene Microplate</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>07-200-592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Non-treated Culture Dish, 10cm</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>CLS430588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator (cotton swab), 6&#34;, sterile</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>25806 2WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynarex Cotton Filled Gauze Sponges, Non-Sterile, 2&#34; x 2&#34;</td>
			<td>Medex</td>
			<td>3249-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EZ-7000 anesthesia vaporizer (Classic System, including heating units)</td>
			<td>E-Z Systems</td>
			<td>EZ-7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Centrifuge Tube 50ml&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Colored Labeling Tape</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>15-901-10R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey Needle Holder (needle holder)&#160;</td>
			<td>FST</td>
			<td>12001-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes, small (tissue wipe)</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.7ml Microcentrifuge Tubes&#160;</td>
			<td>Thomas Scientific&#160;</td>
			<td>c2170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Tube 1.3ml Z (serum clot activator tube)</td>
			<td>Sarstedt&#160;</td>
			<td>41.1501.105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria Fine Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14370-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5ml Polystyrene Round-Bottom Tube with Cell-Strainer Cap (35 &#181;m nylon mesh)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet Ointment, Sterile Ocular Lubricant</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>12920060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring Forceps (blunt tissue forceps)</td>
			<td>FST</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roboz Surgical 4-0 Silk Black Braided, 100 YD</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>NC9452680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps (anatomical forceps)</td>
			<td>FST</td>
			<td>1108-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sofsilk Nonabsorbable Coated Black Suture Braided Silk Size 3-0, 18&#34;, Needle 19mm length 3/8 circle reverse cutting&#160;</td>
			<td>HenrySchein</td>
			<td>SS694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Fine Forceps, Angled</td>
			<td>FST</td>
			<td>91110-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10ml Syringe PP/PE without needle</td>
			<td>Millipore Sigma&#160;</td>
			<td>Z248029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yellow Feeding Tubes for Rodents 20G x 30 mm</td>
			<td>Instech</td>
			<td>FTP-20-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solutions and Buffers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accugene 0.5M EDTA</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>51201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium-Chloride-Potassium (ACK) Lysing Buffer</td>
			<td>BioWhittaker</td>
			<td>10-548E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-023-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline without Calcium and Magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Anti-Mouse Ly-6G Antibody (1A8)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>127610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b Monoclonal Antibody, PE, eBioscience (M1/70)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-0112-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CountBright Absolute Counting Beads</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C36950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiotreitol</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP172-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, heat inactivated</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>511550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein Isothiocyanate-Dextran, average molecular weight 4.000</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>60842-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Halocarbon</td>
			<td>12164-002-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leukotriene B4</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>71160-24-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP Rat Anti-Mouse CD45 (30-F11)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>557235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD FC Block)</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Murine IFN-&#947;</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>315-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Murine TNF-&#945;</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>315-01A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functional assessment of intestinal permeability and neutrophil transepithelial migration in mice using a standardized intestinal loop model

A mucosa intestinal é forrada por uma única camada de células epiteliais que forma uma barreira dinâmica que permite o transporte paracelular de nutrientes e água, evitando a passagem de bactérias luminais e substâncias exógenas. Uma violação dessa camada resulta em maior permeabilidade ao conteúdo luminal e recrutamento de células imunes, ambas marcas de estados patológicos no intestino, incluindo doença inflamatória intestinal (DII). 
Os mecanismos que regulam a função da barreira epitelial e a migração transepitelial (TEpM) de neutrófilos polimorfonucleares (PMN) são incompletamente compreendidos devido à falta de métodos experimentais in vivo que permitem análises quantitativas. Aqui, descrevemos um modelo experimental murino robusto que emprega um segmento intestinal exteriorizado de íleo ou cólon proximal. O laço intestinal exteriorizado (iLoop) é totalmente vascularizado e oferece vantagens fisiológicas sobre abordagens baseadas em câmara ex vivo comumente usadas para estudar permeabilidade e migração de PMN através de monocamadas de células epiteliais.
Demonstramos duas aplicações deste modelo em detalhes: (1) medição quantitativa da permeabilidade intestinal através da detecção de dextrans rotulados por fluorescência no soro após injeção intraluminal, (2) avaliação quantitativa do PMN migrado através do epitélio intestinal para o lúmen intestinal após introdução intraluminal de quimioattractants. Demonstramos viabilidade deste modelo e fornecemos resultados utilizando o iLoop em camundongos sem a proteína epitelial associada à junção JAM-A em comparação com os controles. O JAM-A tem sido mostrado para regular a função da barreira epitelial, bem como pmn TEpM durante respostas inflamatórias. Nossos resultados utilizando o iLoop confirmam estudos anteriores e destacam a importância do JAM-A na regulação da permeabilidade intestinal e do PMN TEpM in vivo durante a homeostase e doença. 
O modelo iLoop fornece um método altamente padronizado para estudos in vivo reprodutíveis de homeostase intestinal e inflamação e aumentará significativamente a compreensão da função da barreira intestinal e inflamação mucosa em doenças como o DII.

Uma representação esquemática dos modelos ileal loop e pcLoop é retratada na Figura 1 e Figura 2, respectivamente. As imagens anatômicas exibem as etapas críticas do procedimento, incluindo a exteriorização do segmento intestinal (Figura 1B e Figura 2B),identificação de um local apropriado para ligaduras que permite perturbação mínima do suprimento de sangue<strong ...

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Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

Função de barreira epitelial intestinal disregulada e respostas imunológicas são marcas de doença inflamatória intestinal que permanecem mal investigadas devido à falta de modelos fisiológicos. Aqui, descrevemos um modelo de alça intestinal de camundongos que emprega um segmento intestinal bem vascularizado e exteriorizado para estudar a permeabilidade mucosa e o recrutamento de leucócitos in vivo.

Avaliação Funcional da Permeabilidade Intestinal e Migração Transepitelial de Neutrófilo em Camundongos usando um Modelo de Laço Intestinal Padronizado

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...

O modelo intestinal é uma maneira amplamente adaptável e fisiológica de medir o quão vazável é o intestino e como os leucócitos migram no intestino em camundongos, in vivo. Este método ajuda a entender melhor os mecanismos subjacentes ao aumento da permeabilidade intestinal e inflamação intestinal patológica. A técnica pode ser empregada para auxiliar em nossos mecanismos de compreensão da função da barreira intestinal, e inflamação patológica, como visto na colite ulcerativa e na doença de Crohn.Este modelo emprega um segmento intestinal bem vascularizado e exteriorizado, seja do íleo ou cólon proximal, para o exame da função da barreira intestinal ou recrutamento de células imunes em camundongos. Com esta ampla aplicação, o modelo de loop intestinal pode fornecer insights sobre doenças que resultam tanto de uma barreira intestinal vazando, bem como da resposta inflamatória. As lutas podem ser superadas praticando os passos cirúrgicos.É extremamente importante exteriorizar um segmento intestinal totalmente vascularizado e selecionar locais apropriados para as ligaduras para evitar sangramento. O modelo de loop intestinal é uma técnica microcirúrgica, assim, como em outros procedimentos cirúrgicos, beneficia-se muito da demonstração visual e de uma apresentação passo a passo do método. Depois de alcançar um plano cirúrgico de anestesia, comece esfregando a pele da linha média abdominal com cotonetes de álcool ou uma esponja de gaze encharcada com 70% de etanol.Não molhe uma ampla área de pele com álcool para evitar hipotermia. Usando uma tesoura, faça uma laparotomia midline. Faça uma incisão horizontal no meio do abdômen, e exponha o peritônio, tomando cuidado para não ferir órgãos intra-abdominais.Coloque gaze de algodão molhado pré-cortada sobre a cavidade intra-abdominal exposta. Use cotonetes de algodão molhado para mobilizar e exteriorizar o ceco e colocá-lo cuidadosamente em gaze de algodão molhado. Em seguida, mobilize e solize suavemente o íleo.Implante pelo menos seis centímetros de íleo terminal na gaze de algodão molhado sem interromper os vasos mesenéricos e o suprimento de sangue. Mantenha os tecidos expostos úmidos o tempo todo com HBSS quente. Identifique a artéria principal que fornece o íleo na mesenteria, perto do ceco.Então, localize dois locais de ligadura na mesenteria que estão livres de vasos sanguíneos críticos. Pegue firmemente o íleo terminal com fórceps de tecido contundente e use fórceps finos para fenestrar a mesenteria, evitando vasos sanguíneos. Coloque a sutura de seda através da perfuração, e amarre um nó cirúrgico para criar a primeira ligadura.Use a régua para medir quatro centímetros de distância da primeira ligadura, e crie a segunda ligadura. Corte cuidadosamente ao lado de cada ligadura com uma tesoura fina para isolar o laço ileal de quatro centímetros, mantendo o suprimento de sangue e a membrana mesentérica intactas. Lave suavemente o conteúdo do segmento de loop ileal com HBSS quente usando um tubo de alimentação amarelo flexível ligado a uma seringa de 10 mililitros.Certifique-se de retirar o conteúdo luminal da cavidade abdominal para manter o local cirúrgico limpo. Ligate as duas extremidades cortadas do laço ileal lavado com sutura de seda. Use uma seringa de um mililitro com uma agulha de calibre 30 para injetar lentamente 250 microliters de reagente, como FITC-dextrans ou quimiocina, no lúmen intestinal.O laço ileal irá inflar, causando uma distensão moderada da mucosa. Feche a parede abdominal usando um suporte de agulha, fórceps anatômicos e suturas de seda não absorvíveis de 3,0 com uma agulha de corte reversa. Depois de secar o animal para evitar hipotermia, coloque-o em uma câmara de anestesia regulada pela temperatura durante o período de incubação.Prepare o rato para a cirurgia e exteriorize o ceco como demonstrado anteriormente. Usando cotonetes de algodão molhado, exteriorize todo o íleo e coloque-o em cima de uma gaze de algodão molhado. Identifique o cólon proximal e o suprimento de sangue localizado no mesocólon.Mobilize o cólon proximal e crie a primeira ligadura em uma área livre de navios no mesocólon a cerca de 0,5 centímetros distal do ceco. Meça dois centímetros da primeira ligadura e crie uma segunda ligadura em uma área livre de suprimento de sangue no mesocólon. Usando uma tesoura fina, corte cuidadosamente ao lado de cada ligadura para isolar um pcLoop de dois centímetros de comprimento.Lave suavemente o pcLoop com HBSS quente para remover fezes usando um tubo de alimentação amarelo flexível ligado a uma seringa de 10 mililitros. Certifique-se de retirar o conteúdo luminal da cavidade abdominal para manter o local cirúrgico limpo. Em seguida, ligate as duas extremidades cortadas do pcLoop lavado usando sutura de seda.Use uma seringa de um mililitro com uma agulha de calibre 30 para injetar lentamente 200 microliters de reagente, como FITC-dextran ou quimiokine, no lúmen intestinal. O pcLoop vai inflar, causando uma distensão moderada da mucosa. Use cotonetes de algodão molhado para colocar de volta suavemente o pcLoop, íleo e ceco.Feche a parede abdominal usando um suporte de agulha, fórceps anatômicos e suturas de seda não absorvíveis de 3,0 com uma agulha de corte reversa. Após o período de incubação, eutanize o camundongo anestesiado e colete tecidos para análise. A fim de verificar a precisão do modelo de loop I para a avaliação da permeabilidade intestinal, foi realizado um ensaio FITC-dextran pcLoop para avaliar o papel da proteína associada à junção apertada Jam-a na regulação da função de barreira intestinal in vivo.Com o modelo pcLoop, um aumento de 2,5 vezes nos níveis de soro FITC-dextran foi quantificado em camundongos nulos jam-a em comparação com os controles. Resultados semelhantes foram obtidos com camundongos abrigando perda seletiva de Jam-a em células epiteliais intestinais. O modelo pcLoop foi utilizado para estudar neutrófilo polimorfonuclear, ou PMN, recrutamento na mucosa intestinal e posterior migração transeptelial in vivo.O número de PMN no conteúdo luminal do pcLoop foi quantificado pela análise de citometria de fluxo. O número de PMN presente no segmento do cólon proximal foi baixo em condições fisiológicas. O pré-tratamento com citocinas pró-inflamatórias, tnf alfa e gama IFN, antes da cirurgia, resultou em um número aumentado de PMN recrutado no lúmen pcLoop.A administração da quimio-tramubo LTB4 levou a um aumento dramático nas contagens de PMN. A coloração imunohistoquímica do PMN na mucosa colonia corrobora o elevado recrutamento de PMN após estimulação com citocinas e LTB4. A contribuição de Jam-a para a migração transepitelial pmn foi estudada utilizando o modelo pcLoop em camundongos que abrigam perda seletiva de Jam-a em células epiteliais intestinais.A perda de jam-a epitelial levou a um número reduzido de PMN transmigrado no lúmen colonico em comparação com os controles de ninhada. Um aspecto crítico para esta técnica é lembrar de preservar o suprimento de sangue para o segmento intestinal exteriorizado ao realizar a cirurgia. Seguindo este protocolo, outros métodos como um ensaio de permeabilidade intestinal e um ensaio de migração transepitelial de neutrófilo podem ser realizados para investigar a perda de integridade da barreira e inflamação intestinal in vivo.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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Aplicação de um rato ligado patch Peyer Assay alça intestinal para avaliar absorção pelas células bacterianas M

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Imunologia e Infecção

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

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Entérico invasão bacteriana de células epiteliais intestinais<em&gt; In Vitro</em&gt; É dramaticamente aumentada usando um Vertical Modelo câmara de difusão

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

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