Name: functional assessment of intestinal permeability and neutrophil transepithelial migration in mice using a standardized intestinal loop model
Uploaded: 2021-02-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model at JoVE.com

Авторы благодарят доктора Свена Флемминга из Университета Вюрцбурга за его вклад в создание модели проксимальной петли толстой кишки, Шона Уотсона за управление колониями мышей и Читру К. Муралидхаран за помощь в приобретении изображений модели iLoop. Эта работа была поддержана Немецким исследовательским фондом/DFG (BO 5776/2-1) в KB, R01DK079392, R01DK072564 и R01DK061379 в C.A.P.

Все эксперименты на животных проводились в соответствии с руководящими принципами и политикой Национальных институтов здравоохранения и одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных в Мичиганском университете.
1. Предоперационная подготовка</...

Механизмы, ответственные за дисрегуляцию кишечной барьерной функции и рекрутирование иммунных клеток в патологических условиях, таких как ВЗК, изучены не полностью. Здесь мы подробно описываем надежную модель мышениц in vivo, которая использует хорошо васкуляризованный экстериоризован...

Слизистая оболочка кишечника включает в себя один слой столбчатых эпителиальных клеток кишечника (IIC), лежащих в основе иммунных клеток lamina propria и слизистых мышц. Помимо своей роли в поглощении питательных веществ, эпителий кишечника является физическим барьером, который защищает внутреннюю часть организма от просветных комменсальных бактерий, патогенов и диетических антигенов. Кроме того, ИЭК и иммунные клетки lamina propria координируют иммунный ответ, вызывая либо толерантность, либо реакцию в зависимости от контекста и стимулов. Сообщалось, что нарушение эпителиального барьера может предшествовать возникновению патологического воспаления слизистой оболочки и способствовать воспалительным заболеваниям кишечника (ВЗК), охватывающим как язвенныйколит,так и болезнь Крона1,2,3,4,5,6,7. Лица с язвенным колитом представляют чрезмерную трансэпителиальную миграцию (TEpM) полиморфноядерных нейтрофилов (PMN), образующих абсцессы крипты, что было связано с тяжестью заболевания8,9. Хотя нарушенная эпителиальная барьерная функция и чрезмерные иммунные реакции являются отличительными признаками ВЗК, отсутствуют экспериментальные анализы in vivo для выполнения количественных оценок проницаемости кишечника и рекрутации иммунных клеток в слизистую оболочку кишечника.
Наиболее распространенные методы, используемые для исследования проницаемости эпителия кишечника и PMN TEpM, используют подходы на основе камер ex vivo с использованием монослоев МЭК, культивируемых на полупроницаемых пористых мембранных вставках10,11,12. Целостность эпителиального барьера контролируется либо измерениями трансэпителиального электрического сопротивления (TEER), либо параклеточного потока флуоресцеина изотиоцианата (FITC), меченого декстраном от апикального до базального компартмента13,14,15. Аналогичным образом, PMN TEpM обычно изучается в ответ на хемоатрактант, который добавляют в нижнюю камеру16. ПМН помещают в верхнюю камеру, и после инкубационного периода ПМН, которые мигрировали в базальный отсек, собирают и количественно оценивают. Хотя эти методы полезны, просты в исполнении и очень воспроизводимы, они, очевидно, являются редукционистскими подходами и не обязательно представляют собой точное отражение условий in vivo.
У мышей распространенным анализом для изучения кишечной параклеточной проницаемости является пероральный прием FITC-декстрана и последующее измерение появления FITC-декстрана в сыворотке крови13,17. Недостатком этого анализа является то, что он представляет собой оценку общей барьерной целостности желудочно-кишечного тракта, а не регионального кишечного вклада. Кроме того, синий Эванс обычно используется для оценки сосудистой утечки in vivo18, а также был использован для оценки проницаемости слизистой оболочки кишечника у мышей и крыс19,20,21. Количественная оценка синего цвета Эванса в слизистой оболочке кишечника требует извлечения из ткани с использованием инкубации в формамиде в течение ночи. Поэтому одну и ту же ткань нельзя использовать для изучения проницаемости эпителия кишечника и нейтрофильной инфильтрации.
Здесь мы выделяем простой протокол, который уменьшает количество животных, необходимых для сбора воспроизводимых данных о проницаемости слизистой оболочки толстой кишки и трансэпителиальной миграции лейкоцитов in vivo. Поэтому мы рекомендуем использовать FITC-декстранс, которые легко обнаруживаются в сыворотке крови без ущерба для целостности кишечных петель, которые могут быть собраны для дальнейшего анализа. Следует отметить, что кишечные лигированные петли использовались у различных видов (включая мышь, крысу, кролика, теленка) для изучения бактериальной инфекции (такой как Salmonella, Listeria monocytogenes и Escherichia coli)22,23,24,25, а также кишечной проницаемости26; однако, насколько нам известно, нет исследований, изучающих механизмы PMN TEpM в определенных областях кишечника, таких как подвздошная кишка или толстая кишка, которые обычно участвуют в ВЗК.
Здесь мы описываем модель кишечной петли мыши (iLoop), которая является надежным и надежным микрохирургическим методом in vivo, который использует хорошо васкуляризованный и экстериоризованный кишечный сегмент подвздошной или проксимальной толстой кишки. Модель iLoop физиологически актуальна и позволяет оценить целостность кишечного барьера и PMN TEpM на живых мышах под наркозом. Мы демонстрируем два применения: 1) количественная оценка сывороточных уровней 4 кДа FITC-декстрана после внутрипросветного введения в iLoop 2) количественная оценка трансмигрированного PMN в просвете iLoop после внутрипросветного введения мощного хемоттрактанта Лейкотриена B4 (LTB4)27. Кроме того, использование модели iLoop с мышами Jam-a-null или мышами, переносимыми селективную потерю JAM-A на IIC(Villin-cre; Jam-a fl/fl) по сравнению с контрольными мышами, мы можем подтвердить предыдущие исследования, в которых сообщалось о значительном вкладе в плотное соединение-ассоциированный белок JAM-A в проницаемость кишечника и трансмиграцию нейтрофилов15,28,29,30,31.
Модель iLoop является высокофункциональным и физиологическим методом, который может быть использован для подтверждения анализов in vitro. Кроме того, это универсальная экспериментальная модель, которая позволяет изучать различные реагенты, которые могут быть введены в просвет петли, включая хемокины, цитокины, бактериальные патогены, токсины, антитела и терапевтические средства.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipment and Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Alcohol Swabs</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle, 25G X 5/8&#34;</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle, 30G X 1/2&#34;</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1ml Tuberculin Syringe Without Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15ml Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 96-Well Solid Black Polystyrene Microplate</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>07-200-592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Non-treated Culture Dish, 10cm</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>CLS430588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator (cotton swab), 6&#34;, sterile</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>25806 2WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynarex Cotton Filled Gauze Sponges, Non-Sterile, 2&#34; x 2&#34;</td>
			<td>Medex</td>
			<td>3249-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EZ-7000 anesthesia vaporizer (Classic System, including heating units)</td>
			<td>E-Z Systems</td>
			<td>EZ-7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Centrifuge Tube 50ml&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Colored Labeling Tape</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>15-901-10R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey Needle Holder (needle holder)&#160;</td>
			<td>FST</td>
			<td>12001-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes, small (tissue wipe)</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.7ml Microcentrifuge Tubes&#160;</td>
			<td>Thomas Scientific&#160;</td>
			<td>c2170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Tube 1.3ml Z (serum clot activator tube)</td>
			<td>Sarstedt&#160;</td>
			<td>41.1501.105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria Fine Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14370-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5ml Polystyrene Round-Bottom Tube with Cell-Strainer Cap (35 &#181;m nylon mesh)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet Ointment, Sterile Ocular Lubricant</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>12920060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring Forceps (blunt tissue forceps)</td>
			<td>FST</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roboz Surgical 4-0 Silk Black Braided, 100 YD</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>NC9452680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps (anatomical forceps)</td>
			<td>FST</td>
			<td>1108-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sofsilk Nonabsorbable Coated Black Suture Braided Silk Size 3-0, 18&#34;, Needle 19mm length 3/8 circle reverse cutting&#160;</td>
			<td>HenrySchein</td>
			<td>SS694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Fine Forceps, Angled</td>
			<td>FST</td>
			<td>91110-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10ml Syringe PP/PE without needle</td>
			<td>Millipore Sigma&#160;</td>
			<td>Z248029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yellow Feeding Tubes for Rodents 20G x 30 mm</td>
			<td>Instech</td>
			<td>FTP-20-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solutions and Buffers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accugene 0.5M EDTA</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>51201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium-Chloride-Potassium (ACK) Lysing Buffer</td>
			<td>BioWhittaker</td>
			<td>10-548E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-023-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline without Calcium and Magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Anti-Mouse Ly-6G Antibody (1A8)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>127610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b Monoclonal Antibody, PE, eBioscience (M1/70)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-0112-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CountBright Absolute Counting Beads</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C36950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiotreitol</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP172-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, heat inactivated</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>511550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein Isothiocyanate-Dextran, average molecular weight 4.000</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>60842-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Halocarbon</td>
			<td>12164-002-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leukotriene B4</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>71160-24-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP Rat Anti-Mouse CD45 (30-F11)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>557235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD FC Block)</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Murine IFN-&#947;</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>315-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Murine TNF-&#945;</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>315-01A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functional assessment of intestinal permeability and neutrophil transepithelial migration in mice using a standardized intestinal loop model

Слизистая оболочка кишечника выстлена одним слоем эпителиальных клеток, который образует динамический барьер, позволяющий параклеточный транспорт питательных веществ и воды, одновременно предотвращая прохождение просветных бактерий и экзогенных веществ. Нарушение этого слоя приводит к увеличению проницаемости для просветного содержимого и рекрутирования иммунных клеток, которые являются отличительными признаками патологических состояний в кишечнике, включая воспалительное заболевание кишечника (ВЗК). 
Механизмы, регулирующие эпителиальную барьерную функцию и трансэпителиальную миграцию (TEpM) полиморфноядерных нейтрофилов (PMN), изучены не полностью из-за отсутствия экспериментальных методов in vivo, позволяющих проводить количественный анализ. Здесь мы описываем надежную экспериментальную модель мышечных животных, которая использует экстериоризованный кишечный сегмент подвздошной или проксимальной кишки. Экстериоризированная кишечная петля (iLoop) полностью васкуляризирована и предлагает физиологические преимущества по сравнению с подходами на основе камер ex vivo, обычно используемыми для изучения проницаемости и миграции PMN через монослои эпителиальных клеток.
Мы подробно демонстрируем два применения этой модели: (1) количественное измерение кишечной проницаемости путем обнаружения флуоресцентно меченого декстрана в сыворотке крови после внутрипросветной инъекции, (2) количественная оценка мигрировавших ПМН через эпителий кишечника в просвет кишечника после внутрипросветного введения хемоатрактантов. Мы демонстрируем осуществимость этой модели и предоставляем результаты с использованием iLoop у мышей, у которых отсутствует эпителиальный плотный соединительный связанный белок JAM-A по сравнению с контрольной частью. Было показано, что JAM-A регулирует функцию эпителиального барьера, а также PMN TEpM во время воспалительных реакций. Наши результаты с использованием iLoop подтверждают предыдущие исследования и подчеркивают важность JAM-A в регуляции кишечной проницаемости и PMN TEpM in vivo во время гомеостаза и заболевания. 
Модель iLoop обеспечивает высоко стандартизированный метод воспроизводимых in vivo исследований кишечного гомеостаза и воспаления и значительно улучшит понимание кишечной барьерной функции и воспаления слизистой оболочки при таких заболеваниях, как ВЗК.

Схематическое представление моделей петли подвздошной кисти и pcLoop изображено на рисунке 1 и рисунке 2соответственно. Анатомические снимки отображают критические этапы процедуры, включая экстериоризацию кишечного сегмента(Фиг.1В и <...

Watch this Scientific Journal Video about Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model at JoVE.com

Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

Дисрегулируемая функция кишечного эпителиального барьера и иммунные реакции являются отличительными признаками воспалительных заболеваний кишечника, которые остаются плохо изученными из-за отсутствия физиологических моделей. Здесь мы описываем модель кишечной петли мыши, которая использует хорошо васкуляризованный и экстериоризованный сегмент кишечника для изучения проницаемости слизистой оболочки и рекрутации лейкоцитов in vivo.

Функциональная оценка кишечной проницаемости и трансэпителиальной миграции нейтрофилов у мышей с использованием стандартизированной модели кишечной петли

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...

Кишечная модель является широко адаптируемым и физиологическим способом измерения того, насколько протекает кишечник и как лейкоциты мигрируют в кишечнике у мышей in vivo. Этот метод помогает лучше понять механизмы, лежащие в основе повышенной кишечной проницаемости и патологического воспаления кишечника. Этот метод может быть использован, чтобы помочь в нашем понимании механизмов, лежащих в основе барьерной функции кишечника, и патологического воспаления, как видно при язвенном колите и болезни Крона.Эта модель использует хорошо васкуляризованный, экстериоризованный сегмент кишечника, либо подвздошной кишки, либо проксимальной части толстой кишки, для изучения кишечной барьерной функции или набора иммунных клеток у мышей. Благодаря этому широкому применению модель кишечной петли может обеспечить понимание заболеваний, возникающих в результате протекания кишечного барьера, а также воспалительной реакции. Борьбу можно преодолеть, практикуя хирургические шаги.Критически важно экстериоризировать полностью васкуляризованный сегмент кишечника и выбрать подходящие места для перевязок, чтобы избежать кровотечения. Модель кишечной петли является микрохирургической техникой, поэтому, как и в случае с другими хирургическими процедурами, она значительно выигрывает от визуальной демонстрации и пошагового представления метода. После достижения хирургической плоскости анестезии начните с очистки меха брюшной средней линии спиртовыми тампонами или марлевой губкой, пропитанной 70% этанолом.Не смачивайте широкий участок меха спиртом для предотвращения переохлаждения. С помощью ножниц выполните лапаротомию средней линии. Сделайте горизонтальный разрез в середине живота, и обнажите брюшину, заботясь о том, чтобы не травмировать внутрибрюшные органы.Поместите предварительно нарезанную мокрую ватную марлю на открытую внутрибрюшную полость. Используйте влажные ватные тампоны для мобилизации и экстериоризации слепой кишки и аккуратно поместите ее на мокрую ватную марлю. Затем мобилизуйте и мягко экстериоризуйте подвздошную кишки.Разверните не менее шести сантиметров терминальной подвздошной кишки на влажной ватной марле, не нарушая брыжеечные сосуды и кровоснабжение. Держите открытые ткани влажными в любое время с теплым HBSS. Определите основную артерию, снабжающую подвздошную кишки в бледентерии, близко к слепой кишки.Затем найдите два участка перевязки в жентерии, которые свободны от критических кровеносных сосудов. Крепко захватите терминальную подвздошную кишки тупыми тканевыми щипцами и используйте тонкие щипцы для фенестрации мезентерии, избегая кровеносных сосудов. Наложите шелковый шов на перфорацию и завяжите хирургический узел, чтобы создать первую перевязку.Используйте линейку, чтобы измерить четыре сантиметра от первой лигатуры и создать вторую лигатуру. Аккуратно разрезайте рядом с каждой перевязкой тонкими ножницами, чтобы изолировать четырехсантиметровую петлю подвздошной кисти, сохраняя кровоснабжение и брыжеечную мембрану нетронутыми. Осторожно промойте содержимое сегмента петли подвздошной кисти теплым HBSS с помощью гибкой желтой питательной трубки, прикрепленной к шприцу размером 10 миллилитров.Обязательно вымывайте просветное содержимое из брюшной полости, чтобы сохранить место операции чистым. Обрежьте два разрезанных конца промытой подвздошной петли шелковым швом. Используйте один миллилитр шприца с иглой 30 калибра, чтобы медленно вводить 250 микролитров реагента, такого как FITC-декстранс или хемоцин, в просвет кишечника.Петля подвздошной кисти будет надуваться, вызывая умеренное растяжение слизистой. Закройте брюшную стенку с помощью игольчатого держателя, анатомических щипцов и 3,0 нерассасывающихся шелковых швов обратной режущей иглой. После высыхания животного для предотвращения переохлаждения поместите его в регулируемую температуру анестезионную камеру на инкубационный период.Подготовьте мышь к операции и экстериоризуйте мекулу, как было показано ранее. Используя влажные ватные тампоны, экстериоризируйте всю подвздошную кишечель и поместите ее поверх влажной ватной марли. Выявляют проксимальный комплекс толстой кишки и кровоснабжение, расположенное в мезоколоне.Мобилизуйте проксимальную обивку и создайте первую лигатуру в области, свободной от сосудов в мезоколоне на уровне около 0,5 сантиметра от слепой кишки. Измерьте два сантиметра от первой лигатуры и создайте вторую лигатуру в области, свободной от кровоснабжения в мезоколоне. Используя тонкие ножницы, аккуратно разрезайте рядом с каждой перевязкой, чтобы выделить двухсантиметровый pcLoop.Осторожно промойте pcLoop теплым HBSS для удаления фекалий с помощью гибкой желтой питательной трубки, прикрепленной к шприцу 10 миллилитров. Обязательно вымывайте просветное содержимое из брюшной полости, чтобы сохранить место операции чистым. Затем обрезайте два разрезанных конца промытого pcLoop с помощью шелкового шва.Используйте один миллилитр шприца с иглой 30 калибра, чтобы медленно вводить 200 микролитров реагента, такого как FITC-декстран или хемоцин, в просвет кишечника. PcLoop будет раздуваться, вызывая умеренное растяжение слизистой. Используйте влажные ватные тампоны, чтобы аккуратно положить обратно лигированный pcLoop, подвздошную кисть и тесную кисть.Закройте брюшную стенку с помощью игольчатого держателя, анатомических щипцов и 3,0 нерассасывающихся шелковых швов обратной режущей иглой. После инкубационного периода усыплите обезболенную мышь и соберите ткани для анализа. С целью проверки точности модели I петли для оценки кишечной проницаемости был проведен анализ FITC-декстран pcLoop для оценки роли плотного соединения ассоциированного белка Jam-a в регуляции кишечной барьерной функции in vivo.С моделью pcLoop 2,5-кратное увеличение уровня FITC-декстрана в сыворотке крови было количественно определено у мышей Jam-a по сравнению с контрольной частью. Аналогичные результаты были получены на мышах, у кого была селективная потеря Jam-a на эпителиальных клетках кишечника. Модель pcLoop использовалась для изучения полиморфноядерных нейтрофилов, или PMN, рекрутации в слизистую оболочку кишечника и последующей трансэпителиальной миграции in vivo.Количество PMN в просветном содержании pcLoop количественно оценивали с помощью анализа проточной цитометрии. Количество ПМН, присутствующих в сегменте проксимальной кишки, было низким в физиологических условиях. Предварительная обработка провоспалительными цитокинами, TNF альфа и IFN гамма, до операции, привела к увеличению количества PMN, набранного в просвет pcLoop.Введение химиоаттрактантата PMN LTB4 привело к резкому увеличению количества PMN. Иммуногистохимическое окрашивание ПМН в слизистой оболочке толстой кишки подтверждает повышенный набор ПМН после стимуляции цитокинами и LTB4. Вклад Jam-a в трансэпителиальную миграцию PMN был изучен с использованием модели pcLoop на мышах, имеющих селективную потерю Jam-a на эпителиальных клетках кишечника.Потеря эпителиального Jam-a привела к снижению количества трансмигрированных ПМН в просвете толстой кишки по сравнению с контрольной частью помета. Критическим аспектом для этой техники является не забывайте сохранять кровоснабжение экстериоризированного сегмента кишечника при выполнении операции. Следуя этому протоколу, другие методы, такие как анализ кишечной проницаемости и анализ миграции нейтрофильных трансэпителиальных веществ, могут быть выполнены для исследования потери целостности барьера и воспаления кишечника in vivo.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Применение Мышь лигируют Патч Пейера Кишечные Пробирной Loop для оценки бактериальной поглощение М клетки

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Кишечные бактериальной инвазии эпителиальных клеток кишечника<em&gt; In Vitro</em&gt; Резко усиливается с помощью вертикальной модели диффузионной камере

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

In vitro Coculture Assay для оценки патогена индуцированной нейтрофил трансэпителиальной миграции

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Quantitative Assessment of Human Neutrophil Migration Across a Cultured Bladder Epithelium

Количественная оценка миграции нейтрофилов человека во культурный мочевого эпителия

The recruitment of immune cells from the periphery to the site of inflammation is an essential step in the innate immune response at any mucosal surface. ...

Real-time Imaging of Myeloid Cells Dynamics in ApcMin/+ Intestinal Tumors by Spinning Disk Confocal Microscopy

Real-time Imaging of Myeloid Cells Dynamics in ApcMin/+ Intestinal Tumors by Spinning Disk Confocal Microscopy

В режиме реального времени изображений миелоидных клеток Dynamics в<em&gt; Арс<sup&gt; Мин / +</sup</em&gt; Кишечная Опухоли на вращающемся диске конфокальной микроскопии

Myeloid cells are the most abundant immune cells within tumors and have been shown to promote tumor progression. Modern intravital imaging techniques ...

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

Mesenteric лимфатический проток канюлированного крысиной модели: Приложение к оценке кишечных лимфатической транспорта лекарства

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Индукционная мышиных воспаление кишечника с помощью приемных передачи эффекторных CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Высокая</sup&gt; Т-клеток в иммунодефицитных мышей

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

Иммунофлуоресцентный анализ образования гранулята после бактериальной выделения клеток млекопитающих

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice

Индукция кишечного трансплантата – versus – хост заболевания и его мини эндоскопическая оценки в живых мышей

Acute graft-versus-host disease (GvHD) represents the most severe complication that patients previously undergoing allogeneic hematopoietic stem cell ...

Human Colonoid Monolayers to Study Interactions Between Pathogens, Commensals, and Host Intestinal Epithelium

Человеческого Colonoid монослои для изучения взаимодействия между патогенов, Комменсалами и принимающих кишечного эпителия

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal ...