Name: fat-covered islet transplantation using epididymal white adipose tissue
Uploaded: 2021-05-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue at JoVE.com

Denne undersøgelse blev finansieret af et tilskud til videnskabelig forskning (C) (19K09839, NS) fra Japans ministerium for uddannelse, kultur, sport, videnskab og teknologi.

Følgende procedure udføres i tre trin. Det første trin omfatter induktion af diabetes hos modtagermusene og isolering af donorøer. Det andet trin indebærer forberedelse af holme før transplantation. I det tredje trin udføres øtransplantation på epididymalt fedtvæv og dækning af øerne ved hjælp af fedtvævet. Derefter blev de terapeutiske virkninger vurderet. Håndteringen af musene og de eksperimentelle procedurer, der er udført i denne undersøgelse, er i overensstemmelse med '' Principper for laboratoried...

<ol>
	<li>Barton, F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+in+outcomes+of+clinical+islet+transplantation:+1999-2010.">Improvement in outcomes of clinical islet transplantation: 1999-2010.</a> Diabetes Care. 35 (7), 1436-1445 (2012).</li><li>Balamurugan, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+product+characteristics+and+factors+related+to+successful+human+islet+transplantation+from+the+Collaborative+Islet+Transplant+Registry+(CITR)+1999-2010.">Islet product characteristics and factors related to successful human islet transplantation from the Collaborative Islet Transplant Registry (CITR) 1999-2010.</a> American Journal of Transplantation. 14 (11), 2595-2606 (2014).</li><li>Collaborative Islet Transplant Registry. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Collaborative Islet Transplant Registry. Annual Report. , (2017).</li><li>Rajab, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+Pancreatectomy+and+Islet+Autotransplantation+Following+Treated+Hepatitis+C+Infection.">Total Pancreatectomy and Islet Autotransplantation Following Treated Hepatitis C Infection.</a> Cell Transplantation. 27 (10), 1569-1573 (2018).</li><li>Mellgren, A., Schnell Landstrom, A. H., Petersson, B., Andersson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+renal+subcapsular+site+offers+better+growth+conditions+for+transplanted+mouse+pancreatic+islet+cells+than+the+liver+or+spleen.">The renal subcapsular site offers better growth conditions for transplanted mouse pancreatic islet cells than the liver or spleen.</a> Diabetologia. 29 (9), 670-672 (1986).</li><li>Hiller, W. F., Klempnauer, J., Luck, R., Steiniger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+deterioration+of+endocrine+function+after+intraportal+but+not+kidney+subcapsular+rat+islet+transplantation.">Progressive deterioration of endocrine function after intraportal but not kidney subcapsular rat islet transplantation.</a> Diabetes. 40 (1), 134-140 (1991).</li><li>Yasunami, Y., Lacy, P. E., Finke, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+site+for+islet+transplantation--a+peritoneal-omental+pouch.">A new site for islet transplantation--a peritoneal-omental pouch.</a> Transplantation. 36 (2), 181-182 (1983).</li><li>Kin, T., Korbutt, G. S., Rajotte, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+metabolic+function+of+syngeneic+rat+islet+grafts+transplanted+in+the+omental+pouch.">Survival and metabolic function of syngeneic rat islet grafts transplanted in the omental pouch.</a> American Journal of Transplantation. 3 (3), 281-285 (2003).</li><li>Kasoju, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+a+pre-vascularized+pouch+for+subsequent+islet+transplantation+using+VEGF-loaded+polylactide+capsules.">Bioengineering a pre-vascularized pouch for subsequent islet transplantation using VEGF-loaded polylactide capsules.</a> Biomaterials Science. 8 (2), 631-647 (2020).</li><li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+Adipose+Tissue+as+a+Site+for+Islet+Transplantation.">White Adipose Tissue as a Site for Islet Transplantation.</a> Transplantology. 1 (2), 55-70 (2020).</li><li>Osama Gaber, A., Chamsuddin, A., Fraga, D., Fisher, J., Lo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+independence+achieved+using+the+transmesenteric+approach+to+the+portal+vein+for+islet+transplantation.">Insulin independence achieved using the transmesenteric approach to the portal vein for islet transplantation.</a> Transplantation. 77 (2), 309-311 (2004).</li><li>Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+endoscopic+biopsy+of+islet+allografts+transplanted+into+the+gastric+submucosal+space+in+pigs.">Technique of endoscopic biopsy of islet allografts transplanted into the gastric submucosal space in pigs.</a> Cell Transplantation. 22 (12), 2335-2344 (2013).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategy+for+clinical+setting+in+intramuscular+and+subcutaneous+islet+transplantation.">Strategy for clinical setting in intramuscular and subcutaneous islet transplantation.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 30 (1), 1-10 (2014).</li><li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplant+Site+Influences+the+Immune+Response+After+Islet+Transplantation:+Bone+Marrow+Versus+Liver.">Transplant Site Influences the Immune Response After Islet Transplantation: Bone Marrow Versus Liver.</a> Transplantation. 101 (5), 1046-1055 (2017).</li><li>White, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risks+of+total+pancreatectomy+and+splenic+islet+autotransplantation.">The risks of total pancreatectomy and splenic islet autotransplantation.</a> Cell Transplantation. 9 (1), 19-24 (2000).</li><li>Itoh, T., Nishinakamura, H., Kumano, K., Takahashi, H., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spleen+Is+an+Ideal+Site+for+Inducing+Transplanted+Islet+Graft+Expansion+in+Mice.">The Spleen Is an Ideal Site for Inducing Transplanted Islet Graft Expansion in Mice.</a> PLoS One. 12 (1), 0170899 (2017).</li><li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spleen+as+an+Optimal+Site+for+Islet+Transplantation+and+a+Source+of+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Spleen as an Optimal Site for Islet Transplantation and a Source of Mesenchymal Stem Cells.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), (2018).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+rat-to-mouse+bioartificial+pancreas+xenotransplantation+on+diabetic+renal+damage+and+survival.">Effect of rat-to-mouse bioartificial pancreas xenotransplantation on diabetic renal damage and survival.</a> Pancreas. 32 (3), 249-257 (2006).</li><li>Nagaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+bioengineered+islet+cell+sheets+for+the+treatment+of+diabetes+mellitus.">Effectiveness of bioengineered islet cell sheets for the treatment of diabetes mellitus.</a> Journal of Surgical Research. 227, 119-129 (2018).</li><li>Weaver, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+hydrogel+enhances+islet+survival,+engraftment,+and+function+in+leading+extrahepatic+sites.">Vasculogenic hydrogel enhances islet survival, engraftment, and function in leading extrahepatic sites.</a> Science Advances. 3 (6), 1700184 (2017).</li><li>Dufour, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+ectopic+site+for+islet+transplantation,+using+biodegradable+scaffolds.">Development of an ectopic site for islet transplantation, using biodegradable scaffolds.</a> Tissue Engineering. 11 (9-10), 1323-1331 (2005).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epididymal+fat+pad+as+a+transplant+site+for+minimal+islet+mass.">The epididymal fat pad as a transplant site for minimal islet mass.</a> Transplantation. 84 (1), 122-125 (2007).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+Transplanted+Islet+Engraftment+in+Visceral+White+Adipose+Tissue.">Mechanism of Transplanted Islet Engraftment in Visceral White Adipose Tissue.</a> Transplantation. 104 (12), 2516-2527 (2020).</li><li>Navarro-Requena, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PEG+hydrogel+containing+calcium-releasing+particles+and+mesenchymal+stromal+cells+promote+vessel+maturation.">PEG hydrogel containing calcium-releasing particles and mesenchymal stromal cells promote vessel maturation.</a> Acta Biomaterialia. 67, 53-65 (2018).</li><li>Phelps, E. A., Headen, D. M., Taylor, W. R., Thule, P. M., Garcia, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+bio-synthetic+hydrogel+for+enhancement+of+pancreatic+islet+engraftment+and+function+in+type+1+diabetes.">Vasculogenic bio-synthetic hydrogel for enhancement of pancreatic islet engraftment and function in type 1 diabetes.</a> Biomaterials. 34 (19), 4602-4611 (2013).</li><li>Manzoli, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoisolation+of+murine+islet+allografts+in+vascularized+sites+through+conformal+coating+with+polyethylene+glycol.">Immunoisolation of murine islet allografts in vascularized sites through conformal coating with polyethylene glycol.</a> American Journal of Transplantation. 18 (3), 590-603 (2018).</li><li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets.">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li><li>Brandhorst, D., Brandhorst, H., Hering, B. J., Bretzel, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+survival,+morphology+and+in+vitro+function+of+isolated+pig+islets+under+different+culture+conditions.">Long-term survival, morphology and in vitro function of isolated pig islets under different culture conditions.</a> Transplantation. 67 (12), 1533-1541 (1999).</li><li>Noguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+preservation+of+isolated+islets+is+superior+to+conventional+islet+culture+before+islet+transplantation.">Low-temperature preservation of isolated islets is superior to conventional islet culture before islet transplantation.</a> Transplantation. 89 (1), 47-54 (2010).</li><li>Itoh, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+temperature+condition+prevents+hypoxia-induced+islet+cell+damage+and+HMGB1+release+in+a+mouse+model.">Low temperature condition prevents hypoxia-induced islet cell damage and HMGB1 release in a mouse model.</a> Cell Transplantation. 21 (7), 1361-1370 (2012).</li><li>Komatsu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Temperature+and+Oxygen+Supports+Long-term+Culture+of+Human+Islets.">Optimizing Temperature and Oxygen Supports Long-term Culture of Human Islets.</a> Transplantation. 103 (2), 299-306 (2019).</li><li>Unger, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+overload+and+overflow:+metabolic+trauma+and+the+metabolic+syndrome.">Lipid overload and overflow: metabolic trauma and the metabolic syndrome.</a> Trends in Endocrinology, Metabolism. 14 (9), 398-403 (2003).</li><li>Mao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+macroporous+heparin-releasing+silk+fibroin+scaffold+improves+islet+transplantation+outcome+by+promoting+islet+revascularisation+and+survival.">A macroporous heparin-releasing silk fibroin scaffold improves islet transplantation outcome by promoting islet revascularisation and survival.</a> Acta Biomaterialia. 59, 210-220 (2017).</li><li>Wang, K., Wang, X., Han, C. S., Chen, L. Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold-supported+Transplantation+of+Islets+in+the+Epididymal+Fat+Pad+of+Diabetic+Mice.">Scaffold-supported Transplantation of Islets in the Epididymal Fat Pad of Diabetic Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e54995 (2017).</li><li>Wang, X., Wang, K., Zhang, W., Qiang, M., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bilaminated+decellularized+scaffold+for+islet+transplantation:+Structure,+properties+and+functions+in+diabetic+mice.">A bilaminated decellularized scaffold for islet transplantation: Structure, properties and functions in diabetic mice.</a> Biomaterials. 138, 80-90 (2017).</li><li>Rios, P. D., Zhang, X., Luo, X., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mold-casted+non-degradable,+islet+macro-encapsulating+hydrogel+devices+for+restoration+of+normoglycemia+in+diabetic+mice.">Mold-casted non-degradable, islet macro-encapsulating hydrogel devices for restoration of normoglycemia in diabetic mice.</a> Biotechnology and Bioengineering. 113 (11), 2485-2495 (2016).</li></ol>

Den fedtdækkede øtransplantationsmetode inkorporerer teknikker fra to forskellige transplantationsteknikker: intraperitoneal øtransplantation og intrafedtvævsøtransplantation. Da overflademembranen af epididymalt hvidt fedtvæv anses for at være det hvide fedtvæv, der er dækket af peritoneum, og som er knyttet til epididymis, kan den fedtdækkede øtransplantationsmetode anatomisk kategoriseres som en type intraperitoneal øtransplantation. Teknikken, hvormed øerne leveres til modtagerdyret, ligner imidlertid me...

Hældningstransplantation er en cellulær erstatningsterapi til patienter med svær diabetes mellitus. Nylige rapporter har vist, at antallet af insulinuafhængighed tre år efter transplantation forbedres op til 44%1 , og at ca. 80% af modtagerne, der modtager mere end 600.000 samlede ø-ækvivalenter, opnår insulinuafhængighed2. Desuden blev det i den seneste Collaborative Islet Transplant Registry-rapport afsløret, at fastende blodsukkerniveauer blev opretholdt på 60-140 mg / dL i over en periode på 5 år hos over 70% af patienterne, der gennemgik øtransplantation alene. Undersøgelsen fastslog også, at omkring 90% af de patienter, der fik øtransplantation alene eller øtransplantation efter nyretransplantation, ikke udviklede nogen alvorlige hypoglykæmiske hændelser i over 5 år3.
Selvom de kliniske resultater af denne behandling er blevet bedre, skal der stadig tages fat på nogle begrænsninger, herunder nødvendigheden af at etablere et optimalt transplantationssted. Leveren er et typisk transplantationssted for klinisk øtransplantation, fordi det er det største organ, der kan rumme et stort volumen af holme. Hos nogle patienter er leveren imidlertid ikke tilgængelig (f.eks. på grund af portalhypertension, hepatitis og / eller cirrose4) og derfor andre steder, herunder det renale subkapsulære rum5,6, omental pose 7,8,9,10, mesentri 11, mave-tarmkanalen 12, skeletmuskulatur 13, subkutant væv 13, knoglemarv 14 og milt 15 ,16,17, er blevet betragtet som alternative transplantationssteder.
Selvom intraperitoneal øtransplantation let kan udføres under lokalbedøvelse, hvilket gør intraperitonealhulen til et tiltalende sted for klinisk øtransplantation, spredes øerne ved transplantation gennem hele intraperitonealhulen, hvilket gør ø-engraftmentdetektion og vellykket engraftmentbekræftelse vanskelig. Derfor er intraperitonealhulen ikke bredt anerkendt som et ideelt klinisk transplantationssted. I stedet bruges det ofte som en kontrolmodel til prækliniske undersøgelser for at undersøge effektiviteten af transplanterede indkapslede18 og bioengineered holme19. En nøjagtig sammenligning mellem bioengineered og kontroløer er imidlertid vanskelig at opnå på grund af udfordringerne med at udføre en nøjagtig engraftmentvurdering.
I modsætning hertil er brugen af intraperitonealt hvidt fedtvæv i omentalposen8, mesenteriet og andre ekstrahepatiske steder blevet godt rapporteret 10,20,21,22,23, og mange af de undersøgelser, der undersøgte funktionen af bioengineered holme transplanteret ved hjælp af hvidt fedtvæv, var i stand til at rapportere lovende terapeutiske resultater20,24,25, 26. Da brugen af epididymalt fedtvæv letter påvisning af transplanterede øer, blev den "fedtdækkede øtransplantationsmetode", der anvender epididymalt fedtvæv, udviklet til at overvinde begrænsningerne ved intraperitoneal øtransplantation. I dette papir beskrives fedtdækket øtransplantation ved hjælp af epididymalt fedtvæv.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-0 Nylon</td>
			<td>Alfresa</td>
			<td>ER2004NA45-KF2</td>
			<td>Closing abdomen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-conjugated donkey anti-guinea pig</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>706-546-148</td>
			<td>Secondary antibody for insulin antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 647-conjugated donkey anti-rabbit</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>711-606-152</td>
			<td>Secondary antibody for von Willebrand factor antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, low glucose, pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11885084</td>
			<td>Culturing islets, transplanting islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Fujifilm Wako Chemicals</td>
			<td>051-06515</td>
			<td>Using for staining tissue by eosin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120086</td>
			<td>Collecting islets&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 15 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352095</td>
			<td>Collecting islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 40 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352070</td>
			<td>Discarding excessive medium/buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guinea pig anti-insulin</td>
			<td>Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako)</td>
			<td>IR002</td>
			<td>Primary antibody for murine insulin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Muto Pure Chemicals Co., Ltd.</td>
			<td>30002</td>
			<td>Using for staining tissue by hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isodine solution 10%</td>
			<td>Shionogi&#38;Co., Ltd.</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>Using for disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Fujifilm Wako Chemicals</td>
			<td>095-06573</td>
			<td>Using for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labcon 1000 &#181;L ZapSilk Low Retention Pipette Tips</td>
			<td>Labcon</td>
			<td>1177-965-008</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labcon 200 &#181;L ZapSilk Low Retention Pipette Tips</td>
			<td>Labcon</td>
			<td>1179-965-008</td>
			<td>Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mintsensor</td>
			<td>Sanwa Kagaku Kenkyusho Co. Ltd.,</td>
			<td>8AEB02E</td>
			<td>Using for monitoring blood glucose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetteman P-1000</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123602</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetteman P-200</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-vWF</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6994</td>
			<td>Primary antibody for murine von Willebrand factor</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fat-covered islet transplantation using epididymal white adipose tissue

Ø transplantation er en cellulær erstatningsterapi for svær diabetes mellitus. Intraperitonealhulen er typisk transplantationsstedet for denne procedure. Imidlertid har intraperitoneal øtransplantation nogle begrænsninger, herunder dårlig transplantationseffektivitet, vanskelig transplantatdetektionsevne og manglende graftektomikapacitet til analyse efter transplantation. I dette papir bruges "fedtdækket øtransplantation", en intraperitoneal øtransplantationsmetode, der anvender epididymalt hvidt fedtvæv, til at vurdere de terapeutiske virkninger af bioengineered holme. Metodens enkelhed ligger i såning af holme på epididymalt hvidt fedtvæv og brug af vævet til at dække øerne. Mens denne metode kan kategoriseres som en intraperitoneal øtransplantationsteknik, deler den egenskaber med intra-fedtvævsøtransplantation. Den fedtdækkede øtransplantationsmetode viser imidlertid mere robuste terapeutiske virkninger end intra-fedtvævsø-øtransplantation, herunder forbedring af blodsukker- og plasmainsulinniveauer og potentialet for transplantatfjernelse. Vi anbefaler vedtagelsen af denne metode til vurdering af mekanismerne for holmens indkapsling i hvidt fedtvæv og de terapeutiske virkninger af bioengineered holme.

For at sammenligne transplantationseffekten af fedtdækket øtransplantation med den efter intraperitoneal øtransplantation blev det samme antal holme implanteret på peritoneum i det venstre parakole rum af kontrolmodtagende diabetiske dyr. Blodglukoseniveauerne hos mus med fedtdækket øtransplantation blev observeret til gradvist og signifikant fald sammenlignet med intraperitoneale øtransplanterede mus (p = 0,0023; Figur 3A). En måned efter transplantationen blev blodglukosen hos mus ...

Watch this Scientific Journal Video about Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue at JoVE.com

Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

Denne fedtdækkede øtransplantationsmetode er egnet til påvisning af indpodede øer i intraperitonealhulen. Det kræver især ikke brug af biobindingsmidler eller suturering.

Fedtdækket øtransplantation ved hjælp af epididymalt hvidt fedtvæv

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...

Denne protokol gør det muligt at vurdere mekanismen for holmens indlejring i hvidt fedtvæv. Den største fordel ved denne fedtdækkede øtransplantationsmetode er, at den er teknisk let at replikere. Metoden kan anvendes på andre sygdomsmodeller.For eksempel kan det bruges til at skabe en musemodel af kræft. Naoaki Sakata, lektor ved Fukuoka University, demonstrerer proceduren. Under et dissekeringsmikroskop skal du bruge en P 200 mikropipette til at fjerne eventuelle ekstra økomponenter fra bugspytkirtelfordøjelsen, herunder acinar og fibrøst væv.Brug derefter en cellesi til at filtrere enkelte acinarceller ud. Overfør de filtrerede øer til en ny kulturskål, der indeholder det relevante dyrkningsmedium eller bufferopløsning suppleret med kvægserum eller albumin, og hvirvl skålen for at placere holmene i midten. Brug en P 200 mikropipette til at vælge de enkelte holme i et passende opsamlingsrør.Placer en ny 40 mikrometer cellesi oven på et 50 milliliter plastrør. Brug en 1000 mikroliter pipette til at tilføje holmene til silen for at adskille holmene og de enkelte acinarceller. Brug tang til at invertere silen på en ny 60 eller 100 ml størrelse ikke-behandlet kulturskål indeholdende kulturmedium eller en passende bufferopløsning suppleret med kvægserum eller albumin.Brug frisk medium eller buffer til at skylle øerne i en ny kulturskål, og tilsæt derefter nok medium eller buffer til kulturskålen til at nå et samlet volumen på ca. 20 ml. Tæl holmene under et mikroskop og divider antallet af holme ligeligt mellem individuelle 1,5 ml plastcentrifugerør i henhold til antallet af donordyr. Centrifuge øerne ved 2.100 G i et minut ved stuetemperatur og kassér supernatanten.Omkring 20 til 30 mikroliter restopløsning forbliver typisk i røret. Efter fjernelse af håret fra maven for at forhindre infektion placeres musen i liggende stilling. Efter desinfektion af maven og inguinalområdet indskæres huden ved nedre medianområde, hvilket skaber et hudsnit, der er cirka to centimeter langt.Klem den venstre mavevæg med tang eller retraktorer og træk vævet til venstre side af musen for at sikre det kirurgiske felt. Brug en vatpind til at mobilisere tyndtarmen og tyktarmen til højre side af musen. Det venstre epidermale hvide fedtvæv i bukhulen er placeret i venstre inguinalområde.Mobiliser det epidermale hvide fedtvæv og venstre testikler til ydersiden af maven og stræk vævet ud. Brug en P 200 mikropipette til at samle hele mængden af holme fra et 1,5 milliliter rør, og pas på, at der ikke er nogen holme tilbage i røret ved indsamling. Lad de opsamlede holme sætte sig i spidsen af pipetten ved tyngdekraften.Mikropipettespidsen placeres let på det udspilede fedtvæv, og sørg for at forhindre overdreven skylning af mediet eller bufferen i spidsen. Frø forsigtigt øerne på vævet. Efter såning skal du bekræfte den korrekte placering af øerne under et dissekerende mikroskop.Dæk øerne med det epidermale hvide fedtvæv, placer derefter venstre testikler under det episomale hvide fedtvæv og returner vævene til intraperitonealhulen. Luk huden i to lag ved hjælp af en 4-o sutur. Når du er færdig, skal du placere musen under en varmelampe og overvåge den indtil fuld genopretning.For at sammenligne transplantationseffekten af fedtdækket øtransplantation med den efter intraperitoneal øtransplantation blev det samme antal holme implanteret på peritoneum i det venstre parakole rum af kontrolmodtagerdiabetiske dyr. Blodglukoseniveauerne hos mus med fedtdækket øtransplantation blev observeret til gradvist og signifikant fald sammenlignet med intraperitoneale øtransplanterede mus. Intraperitoneal glukosetolerancetest blev udført en måned efter transplantation.Blodsukkeret hos mus med fedtdækket øtransplantation blev opretholdt på lavere niveauer end det, der blev observeret hos intraperitoneale øtransplanterede mus. Histologisk undersøgelse blev brugt til at vurdere holmens engraftment i det epidermale hvide fedtvæv. I fedtdækkede øtransplantationsrecipientdyr afslørede hæmatoxylin eocænfarvning tilstedeværelsen af holme i det epidermale hvide fedtvæv.Derudover lettede fluorescenskonjugeret antistoffarvning af insulinpositive øer påvisning af von Willebrand-faktorpositive mikrokar i det epidermale hvide fedtvæv hos alle modtagermus. For at lykkes med denne procedure skal du sørge for at lade øerne sætte sig helt ved spidsen af pipetten og så dem på fedtvævet uden at spilde.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Transplantation af pulmonale ventilen med en musemodel af Heterotop Heart Transplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Cerenkov Luminescence Imaging af interscapular brunt fedtvæv

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Indkapsling Thermogenic præadipocytter for transplantation i fedtvæv Depoter

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Oprettelse og Transplantation af et fedtholdigt-afledte stamceller (ASC) ark i en diabetisk sårheling Model

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

Vurdering af menneskers fedtvæv mikrovaskulære funktion ved hjælp af Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Transplantation af fedtvæv-afledte stamceller ark til at reducere udsivningen efter delvis kolektomi i en rotte Model

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Karakterisering af immunceller i menneskers fedtvæv ved hjælp af flowcytometri

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Hele kroppen og regionale kvantificering af aktive menneskelige brunt fedtvæv bruger 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

Inguinal Subkutan hvidt fedtvæv (ISWAT) Transplantation Model af Murine Holme

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...