Name: fat-covered islet transplantation using epididymal white adipose tissue
Uploaded: 2021-05-25T14:00:00
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이 연구는 일본 문부 과학성의 과학 연구 보조금 (C) (19K09839, NS)의 지원을 받았습니다.

다음 절차는 세 단계로 수행됩니다. 첫 번째 단계는 수용자 마우스에서 당뇨병의 유도와 기증자 섬의 분리를 포함합니다. 두 번째 단계는 이식 전에 췌도를 준비하는 것입니다. 제 3 단계에서는 부고환 지방 조직에 췌도 이식을 실시하고 지방 조직을 이용하여 췌도를 덮는다. 그 후, 치료 효과를 평가하였다. 본 연구에서 실시한 마우스의 취급 및 실험 절차는 '실험동물 관리의 원리'(실험동물의 관...

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	<li>Barton, F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+in+outcomes+of+clinical+islet+transplantation:+1999-2010.">Improvement in outcomes of clinical islet transplantation: 1999-2010.</a> Diabetes Care. 35 (7), 1436-1445 (2012).</li><li>Balamurugan, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+product+characteristics+and+factors+related+to+successful+human+islet+transplantation+from+the+Collaborative+Islet+Transplant+Registry+(CITR)+1999-2010.">Islet product characteristics and factors related to successful human islet transplantation from the Collaborative Islet Transplant Registry (CITR) 1999-2010.</a> American Journal of Transplantation. 14 (11), 2595-2606 (2014).</li><li>Collaborative Islet Transplant Registry. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Collaborative Islet Transplant Registry. 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V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+metabolic+function+of+syngeneic+rat+islet+grafts+transplanted+in+the+omental+pouch.">Survival and metabolic function of syngeneic rat islet grafts transplanted in the omental pouch.</a> American Journal of Transplantation. 3 (3), 281-285 (2003).</li><li>Kasoju, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+a+pre-vascularized+pouch+for+subsequent+islet+transplantation+using+VEGF-loaded+polylactide+capsules.">Bioengineering a pre-vascularized pouch for subsequent islet transplantation using VEGF-loaded polylactide capsules.</a> Biomaterials Science. 8 (2), 631-647 (2020).</li><li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+Adipose+Tissue+as+a+Site+for+Islet+Transplantation.">White Adipose Tissue as a Site for Islet Transplantation.</a> Transplantology. 1 (2), 55-70 (2020).</li><li>Osama Gaber, A., Chamsuddin, A., Fraga, D., Fisher, J., Lo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+independence+achieved+using+the+transmesenteric+approach+to+the+portal+vein+for+islet+transplantation.">Insulin independence achieved using the transmesenteric approach to the portal vein for islet transplantation.</a> Transplantation. 77 (2), 309-311 (2004).</li><li>Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+endoscopic+biopsy+of+islet+allografts+transplanted+into+the+gastric+submucosal+space+in+pigs.">Technique of endoscopic biopsy of islet allografts transplanted into the gastric submucosal space in pigs.</a> Cell Transplantation. 22 (12), 2335-2344 (2013).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategy+for+clinical+setting+in+intramuscular+and+subcutaneous+islet+transplantation.">Strategy for clinical setting in intramuscular and subcutaneous islet transplantation.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 30 (1), 1-10 (2014).</li><li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplant+Site+Influences+the+Immune+Response+After+Islet+Transplantation:+Bone+Marrow+Versus+Liver.">Transplant Site Influences the Immune Response After Islet Transplantation: Bone Marrow Versus Liver.</a> Transplantation. 101 (5), 1046-1055 (2017).</li><li>White, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risks+of+total+pancreatectomy+and+splenic+islet+autotransplantation.">The risks of total pancreatectomy and splenic islet autotransplantation.</a> Cell Transplantation. 9 (1), 19-24 (2000).</li><li>Itoh, T., Nishinakamura, H., Kumano, K., Takahashi, H., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spleen+Is+an+Ideal+Site+for+Inducing+Transplanted+Islet+Graft+Expansion+in+Mice.">The Spleen Is an Ideal Site for Inducing Transplanted Islet Graft Expansion in Mice.</a> PLoS One. 12 (1), 0170899 (2017).</li><li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spleen+as+an+Optimal+Site+for+Islet+Transplantation+and+a+Source+of+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Spleen as an Optimal Site for Islet Transplantation and a Source of Mesenchymal Stem Cells.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), (2018).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+rat-to-mouse+bioartificial+pancreas+xenotransplantation+on+diabetic+renal+damage+and+survival.">Effect of rat-to-mouse bioartificial pancreas xenotransplantation on diabetic renal damage and survival.</a> Pancreas. 32 (3), 249-257 (2006).</li><li>Nagaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+bioengineered+islet+cell+sheets+for+the+treatment+of+diabetes+mellitus.">Effectiveness of bioengineered islet cell sheets for the treatment of diabetes mellitus.</a> Journal of Surgical Research. 227, 119-129 (2018).</li><li>Weaver, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+hydrogel+enhances+islet+survival,+engraftment,+and+function+in+leading+extrahepatic+sites.">Vasculogenic hydrogel enhances islet survival, engraftment, and function in leading extrahepatic sites.</a> Science Advances. 3 (6), 1700184 (2017).</li><li>Dufour, J. 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A., Headen, D. M., Taylor, W. R., Thule, P. M., Garcia, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+bio-synthetic+hydrogel+for+enhancement+of+pancreatic+islet+engraftment+and+function+in+type+1+diabetes.">Vasculogenic bio-synthetic hydrogel for enhancement of pancreatic islet engraftment and function in type 1 diabetes.</a> Biomaterials. 34 (19), 4602-4611 (2013).</li><li>Manzoli, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoisolation+of+murine+islet+allografts+in+vascularized+sites+through+conformal+coating+with+polyethylene+glycol.">Immunoisolation of murine islet allografts in vascularized sites through conformal coating with polyethylene glycol.</a> American Journal of Transplantation. 18 (3), 590-603 (2018).</li><li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets.">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li><li>Brandhorst, D., Brandhorst, H., Hering, B. J., Bretzel, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+survival,+morphology+and+in+vitro+function+of+isolated+pig+islets+under+different+culture+conditions.">Long-term survival, morphology and in vitro function of isolated pig islets under different culture conditions.</a> Transplantation. 67 (12), 1533-1541 (1999).</li><li>Noguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+preservation+of+isolated+islets+is+superior+to+conventional+islet+culture+before+islet+transplantation.">Low-temperature preservation of isolated islets is superior to conventional islet culture before islet transplantation.</a> Transplantation. 89 (1), 47-54 (2010).</li><li>Itoh, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+temperature+condition+prevents+hypoxia-induced+islet+cell+damage+and+HMGB1+release+in+a+mouse+model.">Low temperature condition prevents hypoxia-induced islet cell damage and HMGB1 release in a mouse model.</a> Cell Transplantation. 21 (7), 1361-1370 (2012).</li><li>Komatsu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Temperature+and+Oxygen+Supports+Long-term+Culture+of+Human+Islets.">Optimizing Temperature and Oxygen Supports Long-term Culture of Human Islets.</a> Transplantation. 103 (2), 299-306 (2019).</li><li>Unger, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+overload+and+overflow:+metabolic+trauma+and+the+metabolic+syndrome.">Lipid overload and overflow: metabolic trauma and the metabolic syndrome.</a> Trends in Endocrinology, Metabolism. 14 (9), 398-403 (2003).</li><li>Mao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+macroporous+heparin-releasing+silk+fibroin+scaffold+improves+islet+transplantation+outcome+by+promoting+islet+revascularisation+and+survival.">A macroporous heparin-releasing silk fibroin scaffold improves islet transplantation outcome by promoting islet revascularisation and survival.</a> Acta Biomaterialia. 59, 210-220 (2017).</li><li>Wang, K., Wang, X., Han, C. S., Chen, L. Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold-supported+Transplantation+of+Islets+in+the+Epididymal+Fat+Pad+of+Diabetic+Mice.">Scaffold-supported Transplantation of Islets in the Epididymal Fat Pad of Diabetic Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e54995 (2017).</li><li>Wang, X., Wang, K., Zhang, W., Qiang, M., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bilaminated+decellularized+scaffold+for+islet+transplantation:+Structure,+properties+and+functions+in+diabetic+mice.">A bilaminated decellularized scaffold for islet transplantation: Structure, properties and functions in diabetic mice.</a> Biomaterials. 138, 80-90 (2017).</li><li>Rios, P. D., Zhang, X., Luo, X., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mold-casted+non-degradable,+islet+macro-encapsulating+hydrogel+devices+for+restoration+of+normoglycemia+in+diabetic+mice.">Mold-casted non-degradable, islet macro-encapsulating hydrogel devices for restoration of normoglycemia in diabetic mice.</a> Biotechnology and Bioengineering. 113 (11), 2485-2495 (2016).</li></ol>

지방으로 덮인 췌도 이식 방법은 복강 내 췌도 이식과 지방 조직 내 췌도 이식의 두 가지 이식 기술의 기술을 통합합니다. 부고환 백색 지방 조직의 표면막은 복막에 의해 덮여 있고 부고환에 부착되어있는 백색 지방 조직으로 간주되기 때문에 지방으로 덮인 췌도 이식 방법은 해부학 적으로 복강 내 섬 이식의 일종으로 분류 할 수 있습니다. 그러나 췌도가 수용자에게 전달되는 기술은 지방 조직 ...

췌도 이식은 중증 당뇨병 환자를위한 세포 대체 요법입니다. 최근 보고서에 따르면 이식 후 3년 후 인슐린 자립율은 최대 44%1까지 향상되며, 총 췌도 등가물 600,000건 이상을 투여받은 수혜자의 약 80%가 인슐린 자립성을 달성합니다2. 또한, 가장 최근의 협력 췌도 이식 등록 보고서에서 췌도 이식만 받은 환자의 70% 이상에서 공복 혈당 수치가 5년 동안 60-140mg/dL로 유지되는 것으로 나타났습니다. 이 연구는 또한 췌도 이식 단독 또는 신장 이식 후 췌도 이식을받은 환자의 약 90 %가 5 년 이상 심각한 저혈당 사건을 일으키지 않았다고 결정했습니다3.
이 치료의 임상 결과가 개선되고 있지만 최적의 이식 부위를 구축해야 할 필요성을 포함하여 몇 가지 제한 사항을 해결해야 합니다. 간은 많은 양의 췌도를 수용할 수 있는 가장 큰 기관이기 때문에 임상 췌도 이식을 위한 전형적인 이식 부위입니다. 그러나, 일부 환자에서는 간을 이용할 수 없고(예를 들어, 문맥 고혈압, 간염 및/또는 간경변4로 인해) 따라서 신장 피막하 공간5,6, 안주머니 7,8,9,10, 장간막(11), 위장관(12), 골격근(13), 피하 조직(13), 골수(14) 및 비장(15)을 포함하는 다른 부위 ,16,17은 대체 이식 부위로 간주되었습니다.
복강 내 췌도 이식은 국소 마취하에 쉽게 수행 할 수있어 복강 내 강이 임상 췌도 이식을위한 매력적인 부위가되지만, 이식시 췌도가 복강 전체에 분산되어 췌도 생착 검출 및 성공적인 생착 확인이 어렵습니다. 따라서, 복강 내 공동은 이상적인 임상 이식 부위로 널리 인식되지 않는다. 대신, 이식된 캡슐화된 섬(18 ) 및 생체공학적 섬(19)의 효과를 조사하기 위한 전임상 연구를 위한 대조 모델로서 자주 활용된다. 그러나 생체 공학과 대조 섬 간의 정확한 비교는 정확한 생착 평가를 수행하는 데 어려움이 있기 때문에 달성하기 어렵습니다.
대조적으로, omental pouch8, 장간막 및 기타 간외 위치에서 복강 내 백색 지방 조직의 사용은 잘 보고되었으며10,20,21,22,23 백색 지방 조직을 사용하여 이식된 생체 공학 섬의 기능을 조사하는 많은 연구에서 유망한 치료 결과를 보고할 수 있었습니다20,24,25, 26. 부고환 지방 조직의 사용이 이식 된 췌도의 검출을 용이하게함에 따라 복강 내 섬 이식의 한계를 극복하기 위해 부고환 지방 조직을 활용 한 "지방 피복 섬 이식 방법"이 개발되었습니다. 본 논문에서는 부고환 지방 조직을 이용한 지방으로 덮인 췌도 이식에 대해 설명한다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-0 Nylon</td>
			<td>Alfresa</td>
			<td>ER2004NA45-KF2</td>
			<td>Closing abdomen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-conjugated donkey anti-guinea pig</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>706-546-148</td>
			<td>Secondary antibody for insulin antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 647-conjugated donkey anti-rabbit</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>711-606-152</td>
			<td>Secondary antibody for von Willebrand factor antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, low glucose, pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11885084</td>
			<td>Culturing islets, transplanting islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Fujifilm Wako Chemicals</td>
			<td>051-06515</td>
			<td>Using for staining tissue by eosin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120086</td>
			<td>Collecting islets&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 15 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352095</td>
			<td>Collecting islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 40 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352070</td>
			<td>Discarding excessive medium/buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guinea pig anti-insulin</td>
			<td>Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako)</td>
			<td>IR002</td>
			<td>Primary antibody for murine insulin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Muto Pure Chemicals Co., Ltd.</td>
			<td>30002</td>
			<td>Using for staining tissue by hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isodine solution 10%</td>
			<td>Shionogi&#38;Co., Ltd.</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>Using for disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Fujifilm Wako Chemicals</td>
			<td>095-06573</td>
			<td>Using for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labcon 1000 &#181;L ZapSilk Low Retention Pipette Tips</td>
			<td>Labcon</td>
			<td>1177-965-008</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labcon 200 &#181;L ZapSilk Low Retention Pipette Tips</td>
			<td>Labcon</td>
			<td>1179-965-008</td>
			<td>Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mintsensor</td>
			<td>Sanwa Kagaku Kenkyusho Co. Ltd.,</td>
			<td>8AEB02E</td>
			<td>Using for monitoring blood glucose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetteman P-1000</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123602</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetteman P-200</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-vWF</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6994</td>
			<td>Primary antibody for murine von Willebrand factor</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fat-covered islet transplantation using epididymal white adipose tissue

췌도 이식은 중증 당뇨병에 대한 세포 대체 요법입니다. 복강 내강은 일반적으로이 절차의 이식 부위입니다. 그러나 복강 내 췌도 이식은 이식 효능이 좋지 않고 이식편 검출 능력이 어렵고 이식 후 분석을위한 이식 절제술 능력이 부족하다는 점에서 몇 가지 한계가 있습니다. 이 논문에서는 부고환 백색 지방 조직을 활용한 복강 내 췌도 이식 방법인 "지방으로 덮인 췌도 이식"을 사용하여 생체 공학 췌도의 치료 효과를 평가합니다. 이 방법의 단순성은 부고환 백색 지방 조직에 섬을 뿌리고 조직을 사용하여 섬을 덮는 데 있습니다. 이 방법은 복강 내 췌도 이식 기술로 분류 할 수 있지만 지방 내 조직 췌도 이식과 특성을 공유합니다. 그러나 지방으로 덮인 췌도 이식 방법은 혈당 및 혈장 인슐린 수치의 개선과 이식편 제거 가능성을 포함하여 지방 내 조직 췌도 이식보다 더 강력한 치료 효과를 보여줍니다. 백색 지방 조직으로의 췌도 생착 메커니즘과 생체 공학 섬의 치료 효과를 평가하기 위해이 방법을 채택하는 것이 좋습니다.

지방으로 덮인 췌도 이식의 이식 효능을 복강 내 췌도 이식 후의 이식 효능과 비교하기 위해, 대조군 수용자 당뇨병 동물의 왼쪽 paracolic 공간에서 동일한 수의 췌도를 복막에 이식하였다. 지방으로 덮인 췌도 이식 마우스의 혈당 수치는 복강 내 췌도 이식 마우스에 비해 점진적으로 유의하게 감소하는 것으로 관찰되었다 (p = 0.0023; 그림 3A). 이식 1개월 후, 지방으로 덮인 췌도...

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Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

이 지방으로 덮인 췌도 이식 방법은 복강 내 이식 된 섬의 검출에 적합합니다. 특히, 생체 결합제의 사용 또는 봉합이 필요하지 않습니다.

부고환 백색 지방 조직을 이용한 지방으로 덮인 췌도 이식

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...

이 프로토콜은 백색 지방 조직으로의 섬 생착 메커니즘을 평가하는 것을 가능하게합니다. 이 지방으로 덮인 췌도 이식 방법의 주요 장점은 기술적으로 복제하기 쉽다는 것입니다. 상기 방법은 다른 질병 모델에 적용될 수 있다.예를 들어 암의 마우스 모델을 만드는 데 사용할 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 후쿠오카 대학의 부교수 인 나오아키 사카타 (Naoaki Sakata)가 될 것입니다. 해부 현미경에서 P 200 마이크로 피펫을 사용하여 acinar 및 섬유질 조직을 포함한 췌장 소화에서 여분의 섬 성분을 제거합니다.그런 다음 세포 여과기를 사용하여 단일 acinar 세포를 걸러냅니다. 여과된 췌도를 소 혈청 또는 알부민이 보충된 적절한 배양 배지 또는 완충 용액이 포함된 새로운 배양 접시에 옮기고 접시를 소용돌이치게 하여 섬을 중앙에 위치시킵니다. P 200 마이크로 피펫을 사용하여 개별 섬을 적절한 수집 튜브에 넣습니다.50 밀리리터 플라스틱 튜브 위에 새로운 40 마이크로 미터 셀 스트레이너를 놓습니다. 1000 마이크로 리터 피펫을 사용하여 섬을 여과기에 추가하여 섬과 단일 acinar 세포를 분리합니다. 집게를 사용하여 소 혈청 또는 알부민이 보충 된 배양 배지 또는 적절한 완충 용액이 포함 된 새로운 60 또는 100 밀리리터 크기의 비 처리 배양 접시에 여과기를 뒤집습니다.신선한 배지 또는 완충액을 사용하여 섬을 새로운 배양 접시로 플러시한 다음 배양 접시에 총 부피가 약 20밀리리터에 도달하도록 충분한 배지 또는 완충액을 추가합니다. 현미경으로 섬을 세고 기증자 동물의 수에 따라 개별 1.5 밀리리터 플라스틱 원심 분리기 튜브간에 섬의 수를 균등하게 나눕니다. 췌도를 실온에서 1분 동안 2, 100 G에서 원심분리하고 상층액을 버린다.약 20-30 마이크로 리터의 잔류 용액이 일반적으로 튜브에 남아 있습니다. 감염을 방지하기 위해 복부에서 머리카락을 제거한 후 마우스를 앙와위 자세로 두십시오. 복부와 사타구니 부위를 소독한 후 중간 부위가 낮은 부위의 피부를 절개하여 약 2cm 길이의 피부 절개를 만듭니다.집게 또는 견인기로 왼쪽 복벽을 고정하고 조직을 마우스의 왼쪽으로 당겨 수술 부위를 고정합니다. 면봉을 사용하여 소장과 대장을 마우스 오른쪽으로 움직입니다. 복강의 왼쪽 표피 백색 지방 조직은 왼쪽 사타구니 영역에 있습니다.표피 백색 지방 조직과 왼쪽 고환을 복부 바깥쪽으로 동원하고 조직을 펴십시오. P 200 마이크로 피펫을 사용하여 하나의 1.5 밀리리터 튜브에서 췌도의 전체 부피를 수집하고 수집 시 튜브에 췌도가 남아 있지 않도록 주의하십시오. 수집 된 섬이 중력에 의해 피펫 끝에 정착하도록하십시오.마이크로 피펫 팁을 팽창된 지방 조직에 가볍게 놓고 팁의 배지 또는 완충액이 과도하게 플러싱되지 않도록 주의하십시오. 조심스럽게 섬을 조직에 씨를 뿌립니다. 파종 후 해부 현미경으로 섬의 올바른 위치를 확인하십시오.표피 백색 지방 조직으로 섬을 덮은 다음 왼쪽 고환을 상피 백색 지방 조직 아래에 놓고 조직을 복강 내로 되돌립니다. 4-o 봉합사를 사용하여 피부를 두 층으로 닫습니다. 완료되면 마우스를 열 램프 아래에 놓고 완전히 회복 될 때까지 모니터링하십시오.지방피복췌도 이식의 이식 효능을 복강내 췌도 이식 후의 이식효능과 비교하기 위해, 대조군 수용자 당뇨동물의 좌측 부산균 공간에 있는 복막에 동일한 수의 췌도를 이식하였다. 지방이 덮인 췌도 이식 마우스의 혈당 수치는 복강 내 췌도 이식 마우스에 비해 점진적으로 현저히 감소하는 것으로 관찰되었다. 복강 내 포도당 내성 검사는 이식 1 개월 후에 수행되었다.지방으로 덮인 췌도 이식을 받은 마우스의 혈당은 복강내 췌도 이식 마우스에서 관찰된 것보다 낮은 수준으로 유지되었다. 조직학적 검사는 표피 백색 지방 조직으로의 췌도 생착을 평가하기 위해 사용되었다. 지방으로 덮인 췌도 이식 수용자 동물에서, 헤마톡실린 에오센 염색은 표피 백색 지방 조직 내에 췌도의 존재를 밝혀냈다.또한, 인슐린 양성 섬들의 형광 접합 항체 염색은 모든 수용자 마우스의 표피 백색 지방 조직 내의 폰 빌레브란트 인자 양성 미세 혈관의 검출을 용이하게 하였다. 이 절차를 성공적으로 수행하려면 췌도가 피펫 끝에 완전히 정착하고 엎지르지 않고 지방 조직에 씨를 뿌려야 합니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Murine 아일릿 절연 및 Subcapsular 신장 이식을위한 방법

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

연구

의학

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

이소성 심장 이식 마우스 모델을 사용하여 폐동맥 판막 이식

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

견갑골 갈색 지방 조직의 Cerenkov 발광 이미징

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

지방 조직의 종점에 이식 캡슐화 열 발생 Preadipocytes

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

생성 및 당뇨병 치유 하는 부상을 모델에서 줄기 세포 지방이 많은 파생 (ASC) 시트의 이식

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

인간 지방 조직 Microvascular 함수 Videomicroscopy를 사용 하 여 평가

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

쥐 모델에 부분 Colectomy 후 누설을 줄이기 위해 지방 조직 유래 줄기 세포의 이식

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Cytometry 사용 하 여 인간 지방 조직에서 면역 세포의 특성

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

뮤린 아일렛의 인과 피하 백색 지방 조직 (ISWAT) 이식 모형

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...