Name: fat-covered islet transplantation using epididymal white adipose tissue
Uploaded: 2021-05-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue at JoVE.com

Denne studien ble finansiert av en Grant-in-Aid for Scientific Research (C) (19K09839, NS) fra departementet for utdanning, kultur, sport, vitenskap og teknologi i Japan.

Følgende prosedyre utføres i tre trinn. Det første trinnet inkluderer induksjon av diabetes hos mottakermusene og isolering av donorøyer. Det andre trinnet innebærer fremstilling av øyer før transplantasjon. I tredje trinn utføres øytransplantasjon på epididymalt fettvev og tildekking av holmene ved bruk av fettvevet. Deretter ble de terapeutiske effektene vurdert. Håndteringen av musene og de eksperimentelle prosedyrene som ble utført i denne studien, er i samsvar med '' Principles of Laboratory Animal Care ...

<ol>
	<li>Barton, F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+in+outcomes+of+clinical+islet+transplantation:+1999-2010.">Improvement in outcomes of clinical islet transplantation: 1999-2010.</a> Diabetes Care. 35 (7), 1436-1445 (2012).</li><li>Balamurugan, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+product+characteristics+and+factors+related+to+successful+human+islet+transplantation+from+the+Collaborative+Islet+Transplant+Registry+(CITR)+1999-2010.">Islet product characteristics and factors related to successful human islet transplantation from the Collaborative Islet Transplant Registry (CITR) 1999-2010.</a> American Journal of Transplantation. 14 (11), 2595-2606 (2014).</li><li>Collaborative Islet Transplant Registry. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Collaborative Islet Transplant Registry. Annual Report. , (2017).</li><li>Rajab, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+Pancreatectomy+and+Islet+Autotransplantation+Following+Treated+Hepatitis+C+Infection.">Total Pancreatectomy and Islet Autotransplantation Following Treated Hepatitis C Infection.</a> Cell Transplantation. 27 (10), 1569-1573 (2018).</li><li>Mellgren, A., Schnell Landstrom, A. H., Petersson, B., Andersson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+renal+subcapsular+site+offers+better+growth+conditions+for+transplanted+mouse+pancreatic+islet+cells+than+the+liver+or+spleen.">The renal subcapsular site offers better growth conditions for transplanted mouse pancreatic islet cells than the liver or spleen.</a> Diabetologia. 29 (9), 670-672 (1986).</li><li>Hiller, W. F., Klempnauer, J., Luck, R., Steiniger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+deterioration+of+endocrine+function+after+intraportal+but+not+kidney+subcapsular+rat+islet+transplantation.">Progressive deterioration of endocrine function after intraportal but not kidney subcapsular rat islet transplantation.</a> Diabetes. 40 (1), 134-140 (1991).</li><li>Yasunami, Y., Lacy, P. E., Finke, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+site+for+islet+transplantation--a+peritoneal-omental+pouch.">A new site for islet transplantation--a peritoneal-omental pouch.</a> Transplantation. 36 (2), 181-182 (1983).</li><li>Kin, T., Korbutt, G. S., Rajotte, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+metabolic+function+of+syngeneic+rat+islet+grafts+transplanted+in+the+omental+pouch.">Survival and metabolic function of syngeneic rat islet grafts transplanted in the omental pouch.</a> American Journal of Transplantation. 3 (3), 281-285 (2003).</li><li>Kasoju, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+a+pre-vascularized+pouch+for+subsequent+islet+transplantation+using+VEGF-loaded+polylactide+capsules.">Bioengineering a pre-vascularized pouch for subsequent islet transplantation using VEGF-loaded polylactide capsules.</a> Biomaterials Science. 8 (2), 631-647 (2020).</li><li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+Adipose+Tissue+as+a+Site+for+Islet+Transplantation.">White Adipose Tissue as a Site for Islet Transplantation.</a> Transplantology. 1 (2), 55-70 (2020).</li><li>Osama Gaber, A., Chamsuddin, A., Fraga, D., Fisher, J., Lo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+independence+achieved+using+the+transmesenteric+approach+to+the+portal+vein+for+islet+transplantation.">Insulin independence achieved using the transmesenteric approach to the portal vein for islet transplantation.</a> Transplantation. 77 (2), 309-311 (2004).</li><li>Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+endoscopic+biopsy+of+islet+allografts+transplanted+into+the+gastric+submucosal+space+in+pigs.">Technique of endoscopic biopsy of islet allografts transplanted into the gastric submucosal space in pigs.</a> Cell Transplantation. 22 (12), 2335-2344 (2013).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategy+for+clinical+setting+in+intramuscular+and+subcutaneous+islet+transplantation.">Strategy for clinical setting in intramuscular and subcutaneous islet transplantation.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 30 (1), 1-10 (2014).</li><li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplant+Site+Influences+the+Immune+Response+After+Islet+Transplantation:+Bone+Marrow+Versus+Liver.">Transplant Site Influences the Immune Response After Islet Transplantation: Bone Marrow Versus Liver.</a> Transplantation. 101 (5), 1046-1055 (2017).</li><li>White, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risks+of+total+pancreatectomy+and+splenic+islet+autotransplantation.">The risks of total pancreatectomy and splenic islet autotransplantation.</a> Cell Transplantation. 9 (1), 19-24 (2000).</li><li>Itoh, T., Nishinakamura, H., Kumano, K., Takahashi, H., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spleen+Is+an+Ideal+Site+for+Inducing+Transplanted+Islet+Graft+Expansion+in+Mice.">The Spleen Is an Ideal Site for Inducing Transplanted Islet Graft Expansion in Mice.</a> PLoS One. 12 (1), 0170899 (2017).</li><li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spleen+as+an+Optimal+Site+for+Islet+Transplantation+and+a+Source+of+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Spleen as an Optimal Site for Islet Transplantation and a Source of Mesenchymal Stem Cells.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), (2018).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+rat-to-mouse+bioartificial+pancreas+xenotransplantation+on+diabetic+renal+damage+and+survival.">Effect of rat-to-mouse bioartificial pancreas xenotransplantation on diabetic renal damage and survival.</a> Pancreas. 32 (3), 249-257 (2006).</li><li>Nagaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+bioengineered+islet+cell+sheets+for+the+treatment+of+diabetes+mellitus.">Effectiveness of bioengineered islet cell sheets for the treatment of diabetes mellitus.</a> Journal of Surgical Research. 227, 119-129 (2018).</li><li>Weaver, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+hydrogel+enhances+islet+survival,+engraftment,+and+function+in+leading+extrahepatic+sites.">Vasculogenic hydrogel enhances islet survival, engraftment, and function in leading extrahepatic sites.</a> Science Advances. 3 (6), 1700184 (2017).</li><li>Dufour, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+ectopic+site+for+islet+transplantation,+using+biodegradable+scaffolds.">Development of an ectopic site for islet transplantation, using biodegradable scaffolds.</a> Tissue Engineering. 11 (9-10), 1323-1331 (2005).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epididymal+fat+pad+as+a+transplant+site+for+minimal+islet+mass.">The epididymal fat pad as a transplant site for minimal islet mass.</a> Transplantation. 84 (1), 122-125 (2007).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+Transplanted+Islet+Engraftment+in+Visceral+White+Adipose+Tissue.">Mechanism of Transplanted Islet Engraftment in Visceral White Adipose Tissue.</a> Transplantation. 104 (12), 2516-2527 (2020).</li><li>Navarro-Requena, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PEG+hydrogel+containing+calcium-releasing+particles+and+mesenchymal+stromal+cells+promote+vessel+maturation.">PEG hydrogel containing calcium-releasing particles and mesenchymal stromal cells promote vessel maturation.</a> Acta Biomaterialia. 67, 53-65 (2018).</li><li>Phelps, E. A., Headen, D. M., Taylor, W. R., Thule, P. M., Garcia, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+bio-synthetic+hydrogel+for+enhancement+of+pancreatic+islet+engraftment+and+function+in+type+1+diabetes.">Vasculogenic bio-synthetic hydrogel for enhancement of pancreatic islet engraftment and function in type 1 diabetes.</a> Biomaterials. 34 (19), 4602-4611 (2013).</li><li>Manzoli, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoisolation+of+murine+islet+allografts+in+vascularized+sites+through+conformal+coating+with+polyethylene+glycol.">Immunoisolation of murine islet allografts in vascularized sites through conformal coating with polyethylene glycol.</a> American Journal of Transplantation. 18 (3), 590-603 (2018).</li><li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets.">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li><li>Brandhorst, D., Brandhorst, H., Hering, B. J., Bretzel, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+survival,+morphology+and+in+vitro+function+of+isolated+pig+islets+under+different+culture+conditions.">Long-term survival, morphology and in vitro function of isolated pig islets under different culture conditions.</a> Transplantation. 67 (12), 1533-1541 (1999).</li><li>Noguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+preservation+of+isolated+islets+is+superior+to+conventional+islet+culture+before+islet+transplantation.">Low-temperature preservation of isolated islets is superior to conventional islet culture before islet transplantation.</a> Transplantation. 89 (1), 47-54 (2010).</li><li>Itoh, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+temperature+condition+prevents+hypoxia-induced+islet+cell+damage+and+HMGB1+release+in+a+mouse+model.">Low temperature condition prevents hypoxia-induced islet cell damage and HMGB1 release in a mouse model.</a> Cell Transplantation. 21 (7), 1361-1370 (2012).</li><li>Komatsu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Temperature+and+Oxygen+Supports+Long-term+Culture+of+Human+Islets.">Optimizing Temperature and Oxygen Supports Long-term Culture of Human Islets.</a> Transplantation. 103 (2), 299-306 (2019).</li><li>Unger, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+overload+and+overflow:+metabolic+trauma+and+the+metabolic+syndrome.">Lipid overload and overflow: metabolic trauma and the metabolic syndrome.</a> Trends in Endocrinology, Metabolism. 14 (9), 398-403 (2003).</li><li>Mao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+macroporous+heparin-releasing+silk+fibroin+scaffold+improves+islet+transplantation+outcome+by+promoting+islet+revascularisation+and+survival.">A macroporous heparin-releasing silk fibroin scaffold improves islet transplantation outcome by promoting islet revascularisation and survival.</a> Acta Biomaterialia. 59, 210-220 (2017).</li><li>Wang, K., Wang, X., Han, C. S., Chen, L. Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold-supported+Transplantation+of+Islets+in+the+Epididymal+Fat+Pad+of+Diabetic+Mice.">Scaffold-supported Transplantation of Islets in the Epididymal Fat Pad of Diabetic Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e54995 (2017).</li><li>Wang, X., Wang, K., Zhang, W., Qiang, M., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bilaminated+decellularized+scaffold+for+islet+transplantation:+Structure,+properties+and+functions+in+diabetic+mice.">A bilaminated decellularized scaffold for islet transplantation: Structure, properties and functions in diabetic mice.</a> Biomaterials. 138, 80-90 (2017).</li><li>Rios, P. D., Zhang, X., Luo, X., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mold-casted+non-degradable,+islet+macro-encapsulating+hydrogel+devices+for+restoration+of+normoglycemia+in+diabetic+mice.">Mold-casted non-degradable, islet macro-encapsulating hydrogel devices for restoration of normoglycemia in diabetic mice.</a> Biotechnology and Bioengineering. 113 (11), 2485-2495 (2016).</li></ol>

Den fettdekkede holmetransplantasjonsmetoden inkorporerer teknikker fra to forskjellige transplantasjonsteknikker: intraperitoneal øytransplantasjon og intrafettvevsøytransplantasjon. Siden overflatemembranen i epididymalt hvitt fettvev anses å være det hvite fettvevet som er dekket av bukhinnen og som er festet til bitestikkelen, kan den fettdekkede øytransplantasjonsmetoden anatomisk kategoriseres som en type intraperitoneal øytransplantasjon. Teknikken der holmene leveres til mottakerdyret, er imidlertid mer lik...

Holmetransplantasjon er en cellulær erstatningsterapi for pasienter med alvorlig diabetes mellitus. Nylige rapporter har vist at frekvensen av insulinuavhengighet tre år etter transplantasjon forbedres opp til 44%1 , og at omtrent 80% av mottakerne som mottar mer enn 600 000 totale øyekvivalenter, oppnår insulinuavhengighet2. Videre ble det i den siste Collaborative Islet Transplant Registry-rapporten avslørt at fastende blodsukkernivåer ble opprettholdt på 60-140 mg / dL i over en periode på 5 år hos over 70% av pasientene som gjennomgikk holmetransplantasjon alene. Studien fastslo også at rundt 90% av pasientene som fikk øytransplantasjon alene eller øytransplantasjon etter nyretransplantasjon ikke utviklet noen alvorlige hypoglykemiske hendelser i over 5 år3.
Selv om de kliniske resultatene av denne behandlingen har blitt bedre, må noen begrensninger fortsatt tas opp, inkludert nødvendigheten av å etablere et optimalt transplantasjonssted. Leveren er et typisk transplantasjonssted for klinisk øytransplantasjon fordi det er det største organet som har plass til et høyt volum av øyer. Hos noen pasienter er imidlertid leveren utilgjengelig (f.eks. på grunn av portal hypertensjon, hepatitt og/eller cirrhose4) og derfor andre steder, inkludert det renale subkapsulære rommet 5,6, omental pose 7,8,9,10, mesenteri 11, gastrointestinaltraktus 12, skjelettmuskulatur 13, subkutant vev 13, benmarg14 og milt 15 ,16,17, har vært vurdert som alternative transplantasjonssteder.
Selv om intraperitoneal øytransplantasjon lett kan utføres under lokalbedøvelse, noe som gjør det intraperitoneale hulrommet til et tiltalende sted for klinisk øytransplantasjon, blir øyene ved transplantasjon spredt over hele intraperitonealhulen, noe som gjør det vanskelig å oppdage holmetransplantasjon og vellykket engraftmentbekreftelse. Derfor er det intraperitoneale hulrommet ikke allment anerkjent som et ideelt klinisk transplantasjonssted. I stedet brukes det ofte som en kontrollmodell for prekliniske studier for å undersøke effektiviteten av transplanterte innkapslede18 og bioengineerte øyer19. En nøyaktig sammenligning mellom bioengineered og control islets er imidlertid vanskelig å oppnå på grunn av utfordringene med å utføre en nøyaktig engraftment vurdering.
I motsetning til dette har bruken av intraperitonealt hvitt fettvev i omental pose8, mesenteri og andre ekstrahepatiske steder blitt godt rapportert 10,20,21,22,23, og mange av studiene som undersøkte funksjonen til bioengineerte øyer transplantert ved hjelp av hvitt fettvev, var i stand til å rapportere lovende terapeutiske resultater20,24,25, 26. Da bruken av epididymalt fettvev letter påvisning av transplanterte øyer, ble den "fettdekkede holmetransplantasjonsmetoden", ved bruk av epididymalt fettvev, utviklet for å overvinne begrensningene ved intraperitoneal øytransplantasjon. I denne artikkelen beskrives fettdekket øytransplantasjon ved bruk av epididymalt fettvev.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-0 Nylon</td>
			<td>Alfresa</td>
			<td>ER2004NA45-KF2</td>
			<td>Closing abdomen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-conjugated donkey anti-guinea pig</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>706-546-148</td>
			<td>Secondary antibody for insulin antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 647-conjugated donkey anti-rabbit</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>711-606-152</td>
			<td>Secondary antibody for von Willebrand factor antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, low glucose, pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11885084</td>
			<td>Culturing islets, transplanting islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Fujifilm Wako Chemicals</td>
			<td>051-06515</td>
			<td>Using for staining tissue by eosin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120086</td>
			<td>Collecting islets&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 15 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352095</td>
			<td>Collecting islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 40 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352070</td>
			<td>Discarding excessive medium/buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guinea pig anti-insulin</td>
			<td>Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako)</td>
			<td>IR002</td>
			<td>Primary antibody for murine insulin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Muto Pure Chemicals Co., Ltd.</td>
			<td>30002</td>
			<td>Using for staining tissue by hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isodine solution 10%</td>
			<td>Shionogi&#38;Co., Ltd.</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>Using for disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Fujifilm Wako Chemicals</td>
			<td>095-06573</td>
			<td>Using for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labcon 1000 &#181;L ZapSilk Low Retention Pipette Tips</td>
			<td>Labcon</td>
			<td>1177-965-008</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labcon 200 &#181;L ZapSilk Low Retention Pipette Tips</td>
			<td>Labcon</td>
			<td>1179-965-008</td>
			<td>Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mintsensor</td>
			<td>Sanwa Kagaku Kenkyusho Co. Ltd.,</td>
			<td>8AEB02E</td>
			<td>Using for monitoring blood glucose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetteman P-1000</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123602</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetteman P-200</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-vWF</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6994</td>
			<td>Primary antibody for murine von Willebrand factor</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fat-covered islet transplantation using epididymal white adipose tissue

Holmetransplantasjon er en cellulær erstatningsterapi for alvorlig diabetes mellitus. Det intraperitoneale hulrommet er vanligvis transplantasjonsstedet for denne prosedyren. Imidlertid har intraperitoneal øytransplantasjon noen begrensninger, inkludert dårlig transplantasjonseffekt, vanskelig transplantatdeteksjonsevne og mangel på graftektomi-evne for analyse etter transplantasjon. I dette papiret brukes "fettdekket øytransplantasjon", en intraperitoneal øytransplantasjonsmetode som benytter epididymalt hvitt fettvev, til å vurdere de terapeutiske effektene av bioengineerte øyer. Enkelheten i metoden ligger i såing av holmer på epididymalt hvitt fettvev og bruk av vevet til å dekke holmene. Selv om denne metoden kan kategoriseres som en intraperitoneal øytransplantasjonsteknikk, deler den egenskaper med intra-fettvevsøytransplantasjon. Den fettdekkede holmetransplantasjonsmetoden viser imidlertid mer robuste terapeutiske effekter enn intrafettvevstransplantasjon, inkludert forbedring av blodsukker- og plasmainsulinnivåer og potensialet for fjerning av transplantat. Vi anbefaler å ta i bruk denne metoden for å vurdere mekanismene for holmetransplantasjon i hvitt fettvev og de terapeutiske effektene av bioengineerte øyer.

For å sammenligne transplantasjonseffekten av fettdekket øytransplantasjon med transplantasjon etter intraperitoneal øytransplantasjon, ble samme antall øyer implantert på bukhinnen i venstre parakoliske rom hos kontrollmottakerens diabetiske dyr. Blodsukkernivået hos mus med fettdekket øytransplantasjon ble observert å gradvis og signifikant reduseres sammenlignet med intraperitoneale øytransplanterte mus (p = 0,0023; Figur 3A). En måned etter transplantasjonen ble blodsukkeret ho...

Watch this Scientific Journal Video about Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue at JoVE.com

Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

Denne fettdekkede holmetransplantasjonsmetoden er egnet for påvisning av podede øyer i det intraperitoneale hulrommet. Spesielt krever det ikke bruk av biobindende midler eller suturering.

Fettdekket holmetransplantasjon ved bruk av epididymalt hvitt fettvev

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...

Denne protokollen gjør det mulig å vurdere mekanismen for holmetransplantasjon i hvitt fettvev. Den største fordelen med denne fettdekkede holmetransplantasjonsmetoden er at den er teknisk enkel å replikere. Metoden kan brukes på andre sykdomsmodeller.For eksempel kan den brukes til å lage en musemodell av kreft. Demonstrere prosedyren vil være Naoaki Sakata, en lektor ved Fukuoka University. Under et dissekeringsmikroskop, bruk en P 200 mikropipette for å fjerne eventuelle ekstra øykomponenter fra bukspyttkjertelen, inkludert acinar og fibrøst vev.Bruk deretter en cellesil til å filtrere ut enkle acinarceller. Overfør de filtrerte holmene til en ny kulturskål som inneholder riktig kulturmedium eller bufferløsning supplert med storfeserum eller albumin, og virvle parabolen for å plassere holmene i midten. Ved hjelp av en P 200 mikropipette plukker du de enkelte holmene inn i et passende oppsamlingsrør.Plasser en ny 40 mikrometer cellesil på toppen av et 50 milliliter plastrør. Bruk en 1000 mikroliter pipette for å legge holmene til silen for å skille øyene og de enkle acinarcellene. Bruk tang for å invertere silen på en ny 60 eller 100 milliliter størrelse ikke-behandlet kulturskål som inneholder kulturmedium eller en passende bufferløsning, supplert med storfeserum eller albumin.Bruk ferskt medium, eller buffer for å skylle holmene inn i en ny kulturrett, og tilsett deretter nok medium eller buffer til kulturretten for å nå et totalt volum på omtrent 20 milliliter. Tell holmene under et mikroskop og del antall holmer likt mellom individuelle 1,5 milliliter plastsentrifugerør i henhold til antall donordyr. Sentrifuger øyene ved 2.100 G i ett minutt ved romtemperatur og kast supernatanten.Rundt 20 til 30 mikroliter gjenværende løsning vil vanligvis forbli i røret. Etter å ha fjernet håret fra magen for å forhindre infeksjon, plasser musen i en liggende stilling. Etter desinfisering av magen og inngangsregionen snitter huden ved lavere medianområde, og skaper et hudinnsnitt som er omtrent to centimeter langt.Klem venstre bukvegg med tang eller retractors og trekk vevet til venstre side av musen for å sikre det kirurgiske feltet. Bruk en bomullspinne for å mobilisere tynn- og tyktarmen til høyre side av musen. Det venstre epidermale hvite fettvevet i bukhulen ligger i venstre inngangsområde.Mobiliser det epidermale hvite fettvevet og venstre testis til utsiden av magen og strekk ut vevet. Bruk en P 200 mikropipette til å samle hele volumet av holmer fra ett 1,5 milliliter rør, og pass på at ingen holmer blir igjen i røret ved oppsamling. La de oppsamlede holmene slå seg ned i pipettens spiss etter tyngdekraften.Plasser mikropipettespissen lett på det oppblåste fettvevet, og pass på å unngå overdreven spyling av mediet eller bufferen i spissen. Frø øyene forsiktig på vevet. Etter sådd, bekreft riktig plassering av øyene under et dissekeringsmikroskop.Dekk øyene med det epidermale hvite fettvevet, plasser deretter venstre testis under episomalt hvitt fettvev og returner vevet til intraperitonealhulen. Lukk huden i to lag ved hjelp av en 4-o sutur. Når du er ferdig, plasser musen under en varmelampe og overvåk den til full gjenoppretting.For å sammenligne transplantasjonseffekten av fettdekket øytransplantasjon med den etter intraperitoneal øytransplantasjon, ble samme antall øyer implantert på bukhinnen i venstre parakoliske rom av kontrollmottakerens diabetiske dyr. Blodsukkernivået hos mus med fettdekket øytransplantasjon ble observert å gradvis og signifikant reduseres sammenlignet med intraperitoneale øytransplanterte mus. Intraperitoneal glukosetoleranseundersøkelse ble utført én måned etter transplantasjonen.Blodglukosen hos mus med fettdekket øytransplantasjon ble opprettholdt på lavere nivåer enn det som ble observert hos intraperitoneale øytransplanterte mus. Histologisk undersøkelse ble brukt for å vurdere holmetransplantasjon i epidermalt hvitt fettvev. Hos fettdekkede øytransplanterte mottakerdyr viste hematoksylin-eocenfarging tilstedeværelse av øyer i det epidermale hvite fettvevet.I tillegg gjorde fluorescenskonjugert antistofffarging av insulinpositive øyer det mulig å påvise von Willebrand faktorpositive mikrokar i det epidermale hvite fettvevet til alle mottakermus. For å lykkes med denne prosedyren, sørg for at øyene kan slå seg helt ned på pipettens spiss, og frø dem på fettvevet uten å søle.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Transplantasjon av Pulmonary Valve Bruke en mus modell av Heterotop hjertetransplantasjon

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Cerenkov Luminescence Imaging av interscapular brunt fettvev

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Innkapsling Thermogenic preadipocytes for Transplantasjon inn fettvev depoter

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Opprettelse og transplantasjon av en liggende under Adipose-avledet stilk cellen (ASC) ark i en diabetiker sårhelende modell

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

Vurdering av menneskelig fettvev mikrovaskulær funksjon med Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Transplantasjon av fettvev-avledet stilk cellen ark å redusere lekkasje etter delvis Colectomy i en rotte modell

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Karakteristikk av immunceller i menneskelig fettvev ved hjelp av flowcytometri

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Hele kroppen og regionale kvantifisering av aktiv person brune fettvev med 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

Inguinal Subkutan hvit fettvev (ISWAT) Transplantasjon Modell av Murine Holmer

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...