Name: fat-covered islet transplantation using epididymal white adipose tissue
Uploaded: 2021-05-25T14:00:00
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Este estudo foi financiado por um Grant-in-Aid for Scientific Research (C) (19K09839, NS) do Ministério da Educação, Cultura, Esportes, Ciência e Tecnologia do Japão.

O procedimento a seguir é executado em três etapas. O primeiro passo inclui a indução de diabetes nos camundongos receptores e o isolamento das ilhotas doadoras. A segunda etapa envolve a preparação de ilhotas antes do transplante. Na terceira etapa, é realizado o transplante de ilhotas no tecido adiposo epididimal e a cobertura das ilhotas utilizando o tecido adiposo. Em seguida, os efeitos terapêuticos foram avaliados. O manuseio dos camundongos e os procedimentos experimentais realizados neste estudo estão em...

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	<li>Barton, F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+in+outcomes+of+clinical+islet+transplantation:+1999-2010.">Improvement in outcomes of clinical islet transplantation: 1999-2010.</a> Diabetes Care. 35 (7), 1436-1445 (2012).</li><li>Balamurugan, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+product+characteristics+and+factors+related+to+successful+human+islet+transplantation+from+the+Collaborative+Islet+Transplant+Registry+(CITR)+1999-2010.">Islet product characteristics and factors related to successful human islet transplantation from the Collaborative Islet Transplant Registry (CITR) 1999-2010.</a> American Journal of Transplantation. 14 (11), 2595-2606 (2014).</li><li>Collaborative Islet Transplant Registry. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Collaborative Islet Transplant Registry. 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F., Klempnauer, J., Luck, R., Steiniger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+deterioration+of+endocrine+function+after+intraportal+but+not+kidney+subcapsular+rat+islet+transplantation.">Progressive deterioration of endocrine function after intraportal but not kidney subcapsular rat islet transplantation.</a> Diabetes. 40 (1), 134-140 (1991).</li><li>Yasunami, Y., Lacy, P. E., Finke, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+site+for+islet+transplantation--a+peritoneal-omental+pouch.">A new site for islet transplantation--a peritoneal-omental pouch.</a> Transplantation. 36 (2), 181-182 (1983).</li><li>Kin, T., Korbutt, G. S., Rajotte, R. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risks+of+total+pancreatectomy+and+splenic+islet+autotransplantation.">The risks of total pancreatectomy and splenic islet autotransplantation.</a> Cell Transplantation. 9 (1), 19-24 (2000).</li><li>Itoh, T., Nishinakamura, H., Kumano, K., Takahashi, H., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spleen+Is+an+Ideal+Site+for+Inducing+Transplanted+Islet+Graft+Expansion+in+Mice.">The Spleen Is an Ideal Site for Inducing Transplanted Islet Graft Expansion in Mice.</a> PLoS One. 12 (1), 0170899 (2017).</li><li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spleen+as+an+Optimal+Site+for+Islet+Transplantation+and+a+Source+of+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Spleen as an Optimal Site for Islet Transplantation and a Source of Mesenchymal Stem Cells.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), (2018).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+rat-to-mouse+bioartificial+pancreas+xenotransplantation+on+diabetic+renal+damage+and+survival.">Effect of rat-to-mouse bioartificial pancreas xenotransplantation on diabetic renal damage and survival.</a> Pancreas. 32 (3), 249-257 (2006).</li><li>Nagaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+bioengineered+islet+cell+sheets+for+the+treatment+of+diabetes+mellitus.">Effectiveness of bioengineered islet cell sheets for the treatment of diabetes mellitus.</a> Journal of Surgical Research. 227, 119-129 (2018).</li><li>Weaver, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+hydrogel+enhances+islet+survival,+engraftment,+and+function+in+leading+extrahepatic+sites.">Vasculogenic hydrogel enhances islet survival, engraftment, and function in leading extrahepatic sites.</a> Science Advances. 3 (6), 1700184 (2017).</li><li>Dufour, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+ectopic+site+for+islet+transplantation,+using+biodegradable+scaffolds.">Development of an ectopic site for islet transplantation, using biodegradable scaffolds.</a> Tissue Engineering. 11 (9-10), 1323-1331 (2005).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epididymal+fat+pad+as+a+transplant+site+for+minimal+islet+mass.">The epididymal fat pad as a transplant site for minimal islet mass.</a> Transplantation. 84 (1), 122-125 (2007).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+Transplanted+Islet+Engraftment+in+Visceral+White+Adipose+Tissue.">Mechanism of Transplanted Islet Engraftment in Visceral White Adipose Tissue.</a> Transplantation. 104 (12), 2516-2527 (2020).</li><li>Navarro-Requena, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PEG+hydrogel+containing+calcium-releasing+particles+and+mesenchymal+stromal+cells+promote+vessel+maturation.">PEG hydrogel containing calcium-releasing particles and mesenchymal stromal cells promote vessel maturation.</a> Acta Biomaterialia. 67, 53-65 (2018).</li><li>Phelps, E. A., Headen, D. M., Taylor, W. R., Thule, P. M., Garcia, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+bio-synthetic+hydrogel+for+enhancement+of+pancreatic+islet+engraftment+and+function+in+type+1+diabetes.">Vasculogenic bio-synthetic hydrogel for enhancement of pancreatic islet engraftment and function in type 1 diabetes.</a> Biomaterials. 34 (19), 4602-4611 (2013).</li><li>Manzoli, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoisolation+of+murine+islet+allografts+in+vascularized+sites+through+conformal+coating+with+polyethylene+glycol.">Immunoisolation of murine islet allografts in vascularized sites through conformal coating with polyethylene glycol.</a> American Journal of Transplantation. 18 (3), 590-603 (2018).</li><li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets.">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li><li>Brandhorst, D., Brandhorst, H., Hering, B. J., Bretzel, R. 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Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold-supported+Transplantation+of+Islets+in+the+Epididymal+Fat+Pad+of+Diabetic+Mice.">Scaffold-supported Transplantation of Islets in the Epididymal Fat Pad of Diabetic Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e54995 (2017).</li><li>Wang, X., Wang, K., Zhang, W., Qiang, M., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bilaminated+decellularized+scaffold+for+islet+transplantation:+Structure,+properties+and+functions+in+diabetic+mice.">A bilaminated decellularized scaffold for islet transplantation: Structure, properties and functions in diabetic mice.</a> Biomaterials. 138, 80-90 (2017).</li><li>Rios, P. D., Zhang, X., Luo, X., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mold-casted+non-degradable,+islet+macro-encapsulating+hydrogel+devices+for+restoration+of+normoglycemia+in+diabetic+mice.">Mold-casted non-degradable, islet macro-encapsulating hydrogel devices for restoration of normoglycemia in diabetic mice.</a> Biotechnology and Bioengineering. 113 (11), 2485-2495 (2016).</li></ol>

O método de transplante de ilhotas cobertas de gordura incorpora técnicas de duas técnicas de transplante diferentes: transplante de ilhotas intraperitoneais e transplante de ilhotas de tecido adiposo. Como a membrana superficial do tecido adiposo branco epididimal é considerada o tecido adiposo branco que é coberto pelo peritônio e que está ligado ao epidídimo, o método de transplante de ilhotas cobertas de gordura pode ser anatomicamente categorizado como um tipo de transplante de ilhotas intraperitoneais. A t...

O transplante de ilhotas é uma terapia de reposição celular para pacientes com diabetes mellitus grave. Relatórios recentes têm mostrado que as taxas de independência de insulina em três anos após o transplante melhoram até 44%1 e que aproximadamente 80% dos receptores que recebem mais de 600.000 equivalentes totais de ilhotas atingem a independência da insulina2. Além disso, no mais recente relatório do Registro Colaborativo de Transplante de Ilhotas, foi revelado que os níveis de glicose no sangue em jejum foram mantidos em 60-140 mg / dL por um período de 5 anos em mais de 70% dos pacientes que foram submetidos apenas ao transplante de ilhotas. O estudo também determinou que cerca de 90% dos pacientes que receberam transplante de ilhotas isoladamente ou transplante de ilhotas após o transplante renal não desenvolveram nenhum evento hipoglicêmico grave por mais de 5 anos3.
Embora os desfechos clínicos desse tratamento tenham melhorado, algumas limitações ainda devem ser abordadas, incluindo a necessidade de estabelecer um local ideal para o transplante. O fígado é um local de transplante típico para o transplante clínico de ilhotas porque é o maior órgão que pode acomodar um alto volume de ilhotas. No entanto, em alguns pacientes, o fígado não está disponível (por exemplo, devido à hipertensão portal, hepatite e/ou cirrose4) e, portanto, a outros locais, incluindo o espaço subcapsular renal5,6, bolsa omental 7,8,9,10, mesentério 11, trato gastrointestinal 12, músculo esquelético 13, tecido subcutâneo13, medula óssea 14 e baço 15 ,16,17, têm sido considerados como locais alternativos de transplante.
Embora o transplante intraperitoneal de ilhotas possa ser realizado facilmente sob anestesia local, tornando a cavidade intraperitoneal um local atraente para o transplante clínico de ilhotas, após o transplante, as ilhotas são dispersas por toda a cavidade intraperitoneal, dificultando a detecção do enxerto de ilhotas e a confirmação bem-sucedida do enxerto. Portanto, a cavidade intraperitoneal não é amplamente reconhecida como um local ideal de transplante clínico. Em vez disso, é frequentemente utilizado como um modelo de controle para estudos pré-clínicos para investigar a eficácia de ilhotas encapsuladastransplantadas 18 e de ilhotas de bioengenharia19. No entanto, uma comparação exata entre a bioengenharia e as ilhotas de controle é difícil de alcançar devido aos desafios na realização de uma avaliação precisa do enxerto.
Em contraste, o uso de tecido adiposo branco intraperitoneal na bolsa omental8, mesentério e outras localizações extra-hepáticas tem sido bem relatado 10,20,21,22,23 e muitos dos estudos que investigaram a função de ilhotas de bioengenharia transplantadas com tecido adiposo branco foram capazes de relatar resultados terapêuticos promissores 20,24,25, 26. Como o uso de tecido adiposo epididimal facilita a detecção de ilhotas transplantadas, o "método de transplante de ilhotas cobertas de gordura", utilizando tecido adiposo epididimal, foi desenvolvido para superar as limitações do transplante de ilhotas intraperitoneais. Neste trabalho, o transplante de ilhotas cobertas de gordura usando tecido adiposo epididimal é descrito.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>4-0 Nylon</td>
			<td>Alfresa</td>
			<td>ER2004NA45-KF2</td>
			<td>Closing abdomen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-conjugated donkey anti-guinea pig</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>706-546-148</td>
			<td>Secondary antibody for insulin antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 647-conjugated donkey anti-rabbit</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>711-606-152</td>
			<td>Secondary antibody for von Willebrand factor antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, low glucose, pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11885084</td>
			<td>Culturing islets, transplanting islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Fujifilm Wako Chemicals</td>
			<td>051-06515</td>
			<td>Using for staining tissue by eosin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120086</td>
			<td>Collecting islets&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 15 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352095</td>
			<td>Collecting islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 40 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352070</td>
			<td>Discarding excessive medium/buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guinea pig anti-insulin</td>
			<td>Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako)</td>
			<td>IR002</td>
			<td>Primary antibody for murine insulin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Muto Pure Chemicals Co., Ltd.</td>
			<td>30002</td>
			<td>Using for staining tissue by hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isodine solution 10%</td>
			<td>Shionogi&#38;Co., Ltd.</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>Using for disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Fujifilm Wako Chemicals</td>
			<td>095-06573</td>
			<td>Using for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labcon 1000 &#181;L ZapSilk Low Retention Pipette Tips</td>
			<td>Labcon</td>
			<td>1177-965-008</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labcon 200 &#181;L ZapSilk Low Retention Pipette Tips</td>
			<td>Labcon</td>
			<td>1179-965-008</td>
			<td>Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mintsensor</td>
			<td>Sanwa Kagaku Kenkyusho Co. Ltd.,</td>
			<td>8AEB02E</td>
			<td>Using for monitoring blood glucose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetteman P-1000</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123602</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetteman P-200</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-vWF</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6994</td>
			<td>Primary antibody for murine von Willebrand factor</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fat-covered islet transplantation using epididymal white adipose tissue

O transplante de ilhotas é uma terapia de reposição celular para diabetes mellitus grave. A cavidade intraperitoneal é tipicamente o local de transplante para este procedimento. No entanto, o transplante de ilhotas intraperitoneais tem algumas limitações, incluindo baixa eficácia do transplante, difícil capacidade de detecção do enxerto e falta de capacidade de enxertectomia para análise pós-transplante. Neste artigo, o "transplante de ilhotas cobertas de gordura", um método de transplante de ilhotas intraperitoneais que utiliza tecido adiposo branco epididimal, é usado para avaliar os efeitos terapêuticos de ilhotas de bioengenharia. A simplicidade do método reside na semeadura de ilhotas no tecido adiposo branco epididimal e no uso do tecido para cobrir as ilhotas. Embora este método possa ser categorizado como uma técnica de transplante de ilhotas intraperitoneais, ele compartilha características com o transplante de ilhotas de tecido adiposo. O método de transplante de ilhotas cobertas de gordura demonstra efeitos terapêuticos mais robustos do que o transplante de ilhotas de tecido adiposo, no entanto, incluindo a melhoria dos níveis de glicose no sangue e insulina plasmática e o potencial para a remoção do enxerto. Recomenda-se a adoção deste método para avaliar os mecanismos de enxerto de ilhotas em tecido adiposo branco e os efeitos terapêuticos de ilhotas de bioengenharia.

Para comparar a eficácia do transplante do transplante de ilhotas cobertas de gordura com a do transplante de ilhotas intraperitoneais, o mesmo número de ilhotas foi implantado no peritônio no espaço paracólico esquerdo dos animais diabéticos receptores de controle. Observou-se que os níveis de glicose no sangue de camundongos com transplante de ilhotas cobertas de gordura diminuíram gradual e significativamente em comparação com camundongos transplantados de ilhotas intraperitoneais (p = 0,0023; <strong class=...

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Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

Este método de transplante de ilhotas cobertas de gordura é adequado para a detecção de ilhotas enxertadas na cavidade intraperitoneal. Notavelmente, não requer o uso de agentes bioligantes ou sutura.

Transplante de ilhotas cobertas de gordura usando tecido adiposo branco epididimal

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...

Este protocolo permite avaliar o mecanismo de enxerto de ilhotas no tecido adiposo branco. A principal vantagem deste método de transplante de ilhotas cobertas de gordura é que é tecnicamente fácil de replicar. O método pode ser aplicado a outros modelos de doenças.Por exemplo, ele pode ser usado para criar um modelo de rato de câncer. Demonstrando o procedimento estará Naoaki Sakata, professor associado da Universidade de Fukuoka. Sob um microscópio de dissecação, use uma micropipeta P 200 para remover quaisquer componentes extras das ilhotas das digestão do pâncreas, incluindo tecidos acinares e fibrosos.Em seguida, use um filtro de células para filtrar células acinares únicas. Transfira as ilhotas filtradas para uma nova placa de cultura contendo o meio de cultura apropriado ou solução tampão suplementada com soro bovino ou albumina, e gire o prato para posicionar as ilhotas no centro. Usando uma micropipeta P 200, escolha as ilhotas individuais em um tubo de coleta apropriado.Coloque um novo filtro de células de 40 micrômetros em cima de um tubo de plástico de 50 mililitros. Use uma pipeta de 1000 microlitros para adicionar as ilhotas ao filtro para separar as ilhotas e as células acinares únicas. Use fórceps para inverter o filtro em um novo prato de cultura não tratado de 60 ou 100 mililitros contendo meio de cultura ou uma solução tampão apropriada, suplementada com soro bovino ou albumina.Use meio fresco, ou tampão para lavar as ilhotas em um novo prato de cultura, em seguida, adicione meio ou tampão suficiente ao prato de cultura para atingir um volume total de aproximadamente 20 mililitros. Conte as ilhotas sob um microscópio e divida o número de ilhotas igualmente entre tubos de centrífuga de plástico individuais de 1,5 mililitro de acordo com o número de animais doadores. Centrifugar as ilhotas a 2, 100 G durante um minuto à temperatura ambiente e eliminar o sobrenadante.Cerca de 20 a 30 microlitros de solução residual normalmente permanecerão no tubo. Depois de remover o cabelo do abdômen para evitar a infecção, coloque o rato em decúbito dorsal. Depois de desinfetar o abdômen e a região inguinal incidem a pele na área mediana inferior, criando uma incisão na pele com aproximadamente dois centímetros de comprimento.Campe a parede abdominal esquerda com pinça ou afastadores e puxe o tecido para o lado esquerdo do rato para fixar o campo cirúrgico. Use um cotonete para mobilizar o intestino delgado e grosso para o lado direito do rato. O tecido adiposo branco epidérmico esquerdo na cavidade abdominal está localizado na área inguinal esquerda.Mobilize o tecido adiposo branco epidérmico e o testículo esquerdo para o exterior do abdómen e estique o tecido. Use uma micropipeta P 200 para coletar todo o volume de ilhotas de um tubo de 1,5 mililitro, tomando cuidado para que nenhuma ilhota seja deixada no tubo após a coleta. Permita que as ilhotas coletadas se depositem na ponta da pipeta por gravidade.Coloque a ponta da micropipeta levemente sobre o tecido adiposo distendido, tomando cuidado para evitar a lavagem excessiva do meio ou tampão na ponta. Semeia cuidadosamente as ilhotas no tecido. Após a semeadura, confirme a colocação correta das ilhotas sob um microscópio de dissecação.Cubra as ilhotas com o tecido adiposo branco epidérmico, em seguida, coloque o testículo esquerdo sob o tecido adiposo branco episómico e devolva os tecidos à cavidade intraperitoneal. Feche a pele em duas camadas usando uma sutura 4-o. Quando terminar, coloque o mouse sob uma lâmpada de calor e monitore-o até a recuperação completa.Para comparar a eficácia do transplante de ilhotas cobertas de gordura com a do transplante de ilhotas intraperitoneais, o mesmo número de ilhotas foi implantado no peritônio no espaço paracólico esquerdo dos animais diabéticos receptores de controle. Observou-se que os níveis de glicose no sangue de camundongos com transplante de ilhotas cobertas de gordura diminuem gradualmente e significativamente em comparação com camundongos transplantados de ilhotas intraperitoneais. O teste intraperitoneal de tolerância à glicose foi realizado um mês após o transplante.A glicemia em camundongos com transplante de ilhotas cobertas de gordura foi mantida em níveis mais baixos do que os observados em camundongos transplantados de ilhotas intraperitoneais. O exame histológico foi utilizado para avaliar o enxerto de ilhotas no tecido adiposo branco epidérmico. Em animais receptores de transplante de ilhotas cobertas de gordura, a coloração de hematoxilina eoceno revelou a presença de ilhotas dentro do tecido adiposo branco epidérmico.Além disso, a coloração por anticorpos conjugados por fluorescência de ilhotas de insulina positiva facilitou a detecção de microvasos positivos para o fator de von Willebrand dentro do tecido adiposo branco epidérmico de todos os camundongos receptores. Para ter sucesso com este procedimento, certifique-se de permitir que as ilhotas se estabeleçam completamente na ponta da pipeta e semeie-as no tecido adiposo sem derramar.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Um método para isolamento de ilhotas murino e transplante renal subcapsular

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Medicina

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

O transplante de válvula pulmonar Usando um modelo do rato de Heterotópica Transplante de Coração

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Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

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Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

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While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

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Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

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Todo o corpo e quantificação Regional de ativo humano marrom tecido adiposo usando 18F-FDG PET-CT

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