Name: fat-covered islet transplantation using epididymal white adipose tissue
Uploaded: 2021-05-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue at JoVE.com

Denna studie finansierades av ett bidrag till vetenskaplig forskning (C) (19K09839, NS) från Japans ministerium för utbildning, kultur, sport, vetenskap och teknik.

Följande procedur utförs i tre steg. Det första steget inkluderar induktion av diabetes hos mottagarmössen och isolering av donatoröar. Det andra steget innebär beredning av öar före transplantation. I det tredje steget utförs ötransplantation på epididymal fettvävnad och täckning av öarna med hjälp av fettvävnaden. Därefter bedömdes de terapeutiska effekterna. Hanteringen av mössen och de experimentella procedurer som utförs i denna studie överensstämmer med '' Principles of Laboratory Animal Care ...

<ol>
	<li>Barton, F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+in+outcomes+of+clinical+islet+transplantation:+1999-2010.">Improvement in outcomes of clinical islet transplantation: 1999-2010.</a> Diabetes Care. 35 (7), 1436-1445 (2012).</li><li>Balamurugan, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+product+characteristics+and+factors+related+to+successful+human+islet+transplantation+from+the+Collaborative+Islet+Transplant+Registry+(CITR)+1999-2010.">Islet product characteristics and factors related to successful human islet transplantation from the Collaborative Islet Transplant Registry (CITR) 1999-2010.</a> American Journal of Transplantation. 14 (11), 2595-2606 (2014).</li><li>Collaborative Islet Transplant Registry. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Collaborative Islet Transplant Registry. Annual Report. , (2017).</li><li>Rajab, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+Pancreatectomy+and+Islet+Autotransplantation+Following+Treated+Hepatitis+C+Infection.">Total Pancreatectomy and Islet Autotransplantation Following Treated Hepatitis C Infection.</a> Cell Transplantation. 27 (10), 1569-1573 (2018).</li><li>Mellgren, A., Schnell Landstrom, A. H., Petersson, B., Andersson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+renal+subcapsular+site+offers+better+growth+conditions+for+transplanted+mouse+pancreatic+islet+cells+than+the+liver+or+spleen.">The renal subcapsular site offers better growth conditions for transplanted mouse pancreatic islet cells than the liver or spleen.</a> Diabetologia. 29 (9), 670-672 (1986).</li><li>Hiller, W. F., Klempnauer, J., Luck, R., Steiniger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+deterioration+of+endocrine+function+after+intraportal+but+not+kidney+subcapsular+rat+islet+transplantation.">Progressive deterioration of endocrine function after intraportal but not kidney subcapsular rat islet transplantation.</a> Diabetes. 40 (1), 134-140 (1991).</li><li>Yasunami, Y., Lacy, P. E., Finke, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+site+for+islet+transplantation--a+peritoneal-omental+pouch.">A new site for islet transplantation--a peritoneal-omental pouch.</a> Transplantation. 36 (2), 181-182 (1983).</li><li>Kin, T., Korbutt, G. S., Rajotte, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+metabolic+function+of+syngeneic+rat+islet+grafts+transplanted+in+the+omental+pouch.">Survival and metabolic function of syngeneic rat islet grafts transplanted in the omental pouch.</a> American Journal of Transplantation. 3 (3), 281-285 (2003).</li><li>Kasoju, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+a+pre-vascularized+pouch+for+subsequent+islet+transplantation+using+VEGF-loaded+polylactide+capsules.">Bioengineering a pre-vascularized pouch for subsequent islet transplantation using VEGF-loaded polylactide capsules.</a> Biomaterials Science. 8 (2), 631-647 (2020).</li><li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+Adipose+Tissue+as+a+Site+for+Islet+Transplantation.">White Adipose Tissue as a Site for Islet Transplantation.</a> Transplantology. 1 (2), 55-70 (2020).</li><li>Osama Gaber, A., Chamsuddin, A., Fraga, D., Fisher, J., Lo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+independence+achieved+using+the+transmesenteric+approach+to+the+portal+vein+for+islet+transplantation.">Insulin independence achieved using the transmesenteric approach to the portal vein for islet transplantation.</a> Transplantation. 77 (2), 309-311 (2004).</li><li>Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+endoscopic+biopsy+of+islet+allografts+transplanted+into+the+gastric+submucosal+space+in+pigs.">Technique of endoscopic biopsy of islet allografts transplanted into the gastric submucosal space in pigs.</a> Cell Transplantation. 22 (12), 2335-2344 (2013).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategy+for+clinical+setting+in+intramuscular+and+subcutaneous+islet+transplantation.">Strategy for clinical setting in intramuscular and subcutaneous islet transplantation.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 30 (1), 1-10 (2014).</li><li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplant+Site+Influences+the+Immune+Response+After+Islet+Transplantation:+Bone+Marrow+Versus+Liver.">Transplant Site Influences the Immune Response After Islet Transplantation: Bone Marrow Versus Liver.</a> Transplantation. 101 (5), 1046-1055 (2017).</li><li>White, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risks+of+total+pancreatectomy+and+splenic+islet+autotransplantation.">The risks of total pancreatectomy and splenic islet autotransplantation.</a> Cell Transplantation. 9 (1), 19-24 (2000).</li><li>Itoh, T., Nishinakamura, H., Kumano, K., Takahashi, H., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spleen+Is+an+Ideal+Site+for+Inducing+Transplanted+Islet+Graft+Expansion+in+Mice.">The Spleen Is an Ideal Site for Inducing Transplanted Islet Graft Expansion in Mice.</a> PLoS One. 12 (1), 0170899 (2017).</li><li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spleen+as+an+Optimal+Site+for+Islet+Transplantation+and+a+Source+of+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Spleen as an Optimal Site for Islet Transplantation and a Source of Mesenchymal Stem Cells.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), (2018).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+rat-to-mouse+bioartificial+pancreas+xenotransplantation+on+diabetic+renal+damage+and+survival.">Effect of rat-to-mouse bioartificial pancreas xenotransplantation on diabetic renal damage and survival.</a> Pancreas. 32 (3), 249-257 (2006).</li><li>Nagaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+bioengineered+islet+cell+sheets+for+the+treatment+of+diabetes+mellitus.">Effectiveness of bioengineered islet cell sheets for the treatment of diabetes mellitus.</a> Journal of Surgical Research. 227, 119-129 (2018).</li><li>Weaver, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+hydrogel+enhances+islet+survival,+engraftment,+and+function+in+leading+extrahepatic+sites.">Vasculogenic hydrogel enhances islet survival, engraftment, and function in leading extrahepatic sites.</a> Science Advances. 3 (6), 1700184 (2017).</li><li>Dufour, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+ectopic+site+for+islet+transplantation,+using+biodegradable+scaffolds.">Development of an ectopic site for islet transplantation, using biodegradable scaffolds.</a> Tissue Engineering. 11 (9-10), 1323-1331 (2005).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epididymal+fat+pad+as+a+transplant+site+for+minimal+islet+mass.">The epididymal fat pad as a transplant site for minimal islet mass.</a> Transplantation. 84 (1), 122-125 (2007).</li><li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+Transplanted+Islet+Engraftment+in+Visceral+White+Adipose+Tissue.">Mechanism of Transplanted Islet Engraftment in Visceral White Adipose Tissue.</a> Transplantation. 104 (12), 2516-2527 (2020).</li><li>Navarro-Requena, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PEG+hydrogel+containing+calcium-releasing+particles+and+mesenchymal+stromal+cells+promote+vessel+maturation.">PEG hydrogel containing calcium-releasing particles and mesenchymal stromal cells promote vessel maturation.</a> Acta Biomaterialia. 67, 53-65 (2018).</li><li>Phelps, E. A., Headen, D. M., Taylor, W. R., Thule, P. M., Garcia, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+bio-synthetic+hydrogel+for+enhancement+of+pancreatic+islet+engraftment+and+function+in+type+1+diabetes.">Vasculogenic bio-synthetic hydrogel for enhancement of pancreatic islet engraftment and function in type 1 diabetes.</a> Biomaterials. 34 (19), 4602-4611 (2013).</li><li>Manzoli, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoisolation+of+murine+islet+allografts+in+vascularized+sites+through+conformal+coating+with+polyethylene+glycol.">Immunoisolation of murine islet allografts in vascularized sites through conformal coating with polyethylene glycol.</a> American Journal of Transplantation. 18 (3), 590-603 (2018).</li><li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets.">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li><li>Brandhorst, D., Brandhorst, H., Hering, B. J., Bretzel, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+survival,+morphology+and+in+vitro+function+of+isolated+pig+islets+under+different+culture+conditions.">Long-term survival, morphology and in vitro function of isolated pig islets under different culture conditions.</a> Transplantation. 67 (12), 1533-1541 (1999).</li><li>Noguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+preservation+of+isolated+islets+is+superior+to+conventional+islet+culture+before+islet+transplantation.">Low-temperature preservation of isolated islets is superior to conventional islet culture before islet transplantation.</a> Transplantation. 89 (1), 47-54 (2010).</li><li>Itoh, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+temperature+condition+prevents+hypoxia-induced+islet+cell+damage+and+HMGB1+release+in+a+mouse+model.">Low temperature condition prevents hypoxia-induced islet cell damage and HMGB1 release in a mouse model.</a> Cell Transplantation. 21 (7), 1361-1370 (2012).</li><li>Komatsu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Temperature+and+Oxygen+Supports+Long-term+Culture+of+Human+Islets.">Optimizing Temperature and Oxygen Supports Long-term Culture of Human Islets.</a> Transplantation. 103 (2), 299-306 (2019).</li><li>Unger, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+overload+and+overflow:+metabolic+trauma+and+the+metabolic+syndrome.">Lipid overload and overflow: metabolic trauma and the metabolic syndrome.</a> Trends in Endocrinology, Metabolism. 14 (9), 398-403 (2003).</li><li>Mao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+macroporous+heparin-releasing+silk+fibroin+scaffold+improves+islet+transplantation+outcome+by+promoting+islet+revascularisation+and+survival.">A macroporous heparin-releasing silk fibroin scaffold improves islet transplantation outcome by promoting islet revascularisation and survival.</a> Acta Biomaterialia. 59, 210-220 (2017).</li><li>Wang, K., Wang, X., Han, C. S., Chen, L. Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold-supported+Transplantation+of+Islets+in+the+Epididymal+Fat+Pad+of+Diabetic+Mice.">Scaffold-supported Transplantation of Islets in the Epididymal Fat Pad of Diabetic Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e54995 (2017).</li><li>Wang, X., Wang, K., Zhang, W., Qiang, M., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bilaminated+decellularized+scaffold+for+islet+transplantation:+Structure,+properties+and+functions+in+diabetic+mice.">A bilaminated decellularized scaffold for islet transplantation: Structure, properties and functions in diabetic mice.</a> Biomaterials. 138, 80-90 (2017).</li><li>Rios, P. D., Zhang, X., Luo, X., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mold-casted+non-degradable,+islet+macro-encapsulating+hydrogel+devices+for+restoration+of+normoglycemia+in+diabetic+mice.">Mold-casted non-degradable, islet macro-encapsulating hydrogel devices for restoration of normoglycemia in diabetic mice.</a> Biotechnology and Bioengineering. 113 (11), 2485-2495 (2016).</li></ol>

Den fetttäckta ötransplantationsmetoden innehåller tekniker från två olika transplantationstekniker: intraperitoneal ötransplantation och intrafettvävnadsötransplantation. Eftersom ytmembranet av epididymal vit fettvävnad anses vara den vita fettvävnaden som täcks av bukhinnan och som är fäst vid epididymis, kan den fetttäckta ötransplantationsmetoden anatomiskt kategoriseras som en typ av intraperitoneal ötransplantation. Tekniken genom vilken holmarna levereras till mottagardjuret liknar dock mer de som...

Ötransplantation är en cellulär ersättningsterapi för patienter med svår diabetes mellitus. Nya rapporter har visat att graden av insulinoberoende vid tre år efter transplantation förbättras upp till 44%1 och att cirka 80% av mottagarna som får mer än 600 000 totala ösekvivalenter uppnår insulinoberoende2. Dessutom, i den senaste Collaborative Islet Transplant Registry-rapporten, avslöjades att fastande blodsockernivåer bibehölls vid 60-140 mg / dL under en period av 5 år hos över 70% av patienterna som genomgick ötransplantation ensam. Studien fastställde också att cirka 90% av patienterna som fick ötransplantation ensam eller ö-transplantation efter njurtransplantation inte utvecklade några allvarliga hypoglykemiska händelser på över 5 år3.
Även om de kliniska resultaten av denna behandling har förbättrats måste vissa begränsningar fortfarande åtgärdas, inklusive behovet av att upprätta ett optimalt transplantationsställe. Levern är en typisk transplantationsplats för klinisk ötransplantation eftersom det är det största organet som rymmer en hög volym holmar. Hos vissa patienter är dock levern inte tillgänglig (t.ex. på grund av portalhypertension, hepatit och/eller cirros4) och därför andra ställen, inklusive det renala subkapsulära utrymmet5,6, omental påse 7,8,9,10, mesenteri 11, mag-tarmkanalen 12, skelettmuskulaturen 13, subkutan vävnad 13, benmärg 14 och mjälte 15 ,16,17, har övervägts som alternativa transplantationsställen.
Även om intraperitoneal ötransplantation lätt kan utföras under lokalbedövning, vilket gör det intraperitoneala hålrummet till en tilltalande plats för klinisk ötransplantation, sprids öarna vid transplantation genom hela intraperitonealhålan, vilket gör det svårt att upptäcka ö-engraftment och framgångsrik engraftmentbekräftelse. Därför är det intraperitoneala hålrummet inte allmänt erkänt som en idealisk klinisk transplantationsplats. Istället används det ofta som en kontrollmodell för prekliniska studier för att undersöka effektiviteten hos transplanterade inkapslade18 och biotekniska öar19. En exakt jämförelse mellan biotekniska och kontrollöar är dock svår att uppnå på grund av utmaningarna med att utföra en korrekt engraftmentbedömning.
Däremot har användningen av intraperitoneal vit fettvävnad i omental påse8, mesenteri och andra extrahepatiska platser rapporterats väl 10,20,21,22,23 och många av de studier som undersöker funktionen hos biotekniska öar transplanterade med vit fettvävnad kunde rapportera lovande terapeutiska resultat 20,24,25, 26. Eftersom användningen av epididymal fettvävnad underlättar detekteringen av transplanterade öar, utvecklades den "fetttäckta ötransplantationsmetoden", som använder epididymal fettvävnad, för att övervinna begränsningarna för intraperitoneal ötransplantation. I detta dokument beskrivs fetttäckt ötransplantation med epididymal fettvävnad.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-0 Nylon</td>
			<td>Alfresa</td>
			<td>ER2004NA45-KF2</td>
			<td>Closing abdomen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-conjugated donkey anti-guinea pig</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>706-546-148</td>
			<td>Secondary antibody for insulin antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 647-conjugated donkey anti-rabbit</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>711-606-152</td>
			<td>Secondary antibody for von Willebrand factor antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, low glucose, pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11885084</td>
			<td>Culturing islets, transplanting islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Fujifilm Wako Chemicals</td>
			<td>051-06515</td>
			<td>Using for staining tissue by eosin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120086</td>
			<td>Collecting islets&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 15 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352095</td>
			<td>Collecting islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 40 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352070</td>
			<td>Discarding excessive medium/buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guinea pig anti-insulin</td>
			<td>Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako)</td>
			<td>IR002</td>
			<td>Primary antibody for murine insulin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Muto Pure Chemicals Co., Ltd.</td>
			<td>30002</td>
			<td>Using for staining tissue by hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isodine solution 10%</td>
			<td>Shionogi&#38;Co., Ltd.</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>Using for disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Fujifilm Wako Chemicals</td>
			<td>095-06573</td>
			<td>Using for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labcon 1000 &#181;L ZapSilk Low Retention Pipette Tips</td>
			<td>Labcon</td>
			<td>1177-965-008</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labcon 200 &#181;L ZapSilk Low Retention Pipette Tips</td>
			<td>Labcon</td>
			<td>1179-965-008</td>
			<td>Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mintsensor</td>
			<td>Sanwa Kagaku Kenkyusho Co. Ltd.,</td>
			<td>8AEB02E</td>
			<td>Using for monitoring blood glucose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetteman P-1000</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123602</td>
			<td>Using for separating islets from other pancreatic tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetteman P-200</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-vWF</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6994</td>
			<td>Primary antibody for murine von Willebrand factor</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fat-covered islet transplantation using epididymal white adipose tissue

Ötransplantation är en cellulär ersättningsterapi för svår diabetes mellitus. Den intraperitoneala håligheten är vanligtvis transplantationsstället för denna procedur. Intraperitoneal ötransplantation har dock vissa begränsningar, inklusive dålig transplantationseffekt, svår transplantatdetekteringsförmåga och brist på graftektomiförmåga för analys efter transplantation. I detta dokument används "fetttäckt ötransplantation", en intraperitoneal ötransplantationsmetod som använder epididymal vit fettvävnad, för att bedöma de terapeutiska effekterna av biotekniska öar. Metodens enkelhet ligger i sådd av holmar på epididymal vit fettvävnad och användning av vävnaden för att täcka holmarna. Även om denna metod kan kategoriseras som en intraperitoneal ötransplantationsteknik, delar den egenskaper med intra-fettvävnadsötransplantation. Den fetttäckta ötransplantationsmetoden visar dock mer robusta terapeutiska effekter än vävnadstransplantation inom fettvävnad, inklusive förbättring av blodsocker- och plasmainsulinnivåer och potentialen för borttagning av transplantat. Vi rekommenderar antagandet av denna metod för att bedöma mekanismerna för ö-engraftment i vit fettvävnad och de terapeutiska effekterna av biotekniska öar.

För att jämföra transplantationseffekten av fetttäckt ötransplantation med den efter intraperitoneal ötransplantation implanterades samma antal öar på bukhinnan vid det vänstra parakoliska utrymmet hos kontrollmottagarens diabetesdjur. Blodsockernivåerna hos möss med fetttäckt ötransplantation observerades gradvis och signifikant minska jämfört med intraperitoneala ötransplanterade möss (p = 0,0023; Figur 3A). En månad efter transplantationen bibehölls blodsockret hos mös...

Watch this Scientific Journal Video about Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue at JoVE.com

Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

Denna fetttäckta ötransplantationsmetod är lämplig för detektering av engraferade öar i intraperitonealhålan. I synnerhet kräver det inte användning av biobindande medel eller suturering.

Fetttäckt ötransplantation med epididymal vit fettvävnad

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...

Detta protokoll gör det möjligt att bedöma mekanismen för ö-engraftment i vit fettvävnad. Den största fördelen med denna fetttäckta ötransplantationsmetod är att den är tekniskt lätt att replikera. Metoden kan tillämpas på andra sjukdomsmodeller.Det kan till exempel användas för att skapa en musmodell av cancer. Demonstrerar proceduren kommer att vara Naoaki Sakata, docent vid Fukuoka University. Under ett dissekerande mikroskop, använd en P 200 mikropipett för att ta bort eventuella extra ökomponenter från bukspottkörteln matsmältningar inklusive acinar och fibrösa vävnader.Använd sedan en cellsil för att filtrera bort enstaka acinarceller. Överför de filtrerade öarna till en ny odlingsskål som innehåller lämpligt odlingsmedium eller buffertlösning kompletterad med bovint serum eller albumin och virvla skålen för att placera öarna i mitten. Använd en P 200 mikropipett och välj de enskilda holmarna i ett lämpligt uppsamlingsrör.Placera en ny 40 mikrometer cellsil ovanpå ett 50 ml plaströr. Använd en 1000 mikroliter pipett för att lägga till öarna i silen för att separera öarna och de enskilda acinarcellerna. Använd pincett för att invertera silen på en ny icke-behandlad odlingsskål med storleken 60 eller 100 ml som innehåller odlingsmedium eller en lämplig buffertlösning, kompletterad med bovint serum eller albumin.Använd färskt medium eller buffert för att spola holmarna i en ny odlingsskål, tillsätt sedan tillräckligt med medium eller buffert till odlingsskålen för att nå en total volym på cirka 20 ml. Räkna holmarna under ett mikroskop och dela antalet holmar lika mellan enskilda 1,5 ml plastcentrifugrör beroende på antalet donatordjur. Centrifugera holmarna vid 2 100 G i en minut vid rumstemperatur och kassera supernatanten.Cirka 20 till 30 mikroliter restlösning kommer vanligtvis att finnas kvar i röret. När du har tagit bort håret från buken för att förhindra infektion placera musen i ryggläge. Efter desinfektion av buken och inguinalregionen skär huden vid nedre medianområdet, vilket skapar ett hudsnitt som är ungefär två centimeter långt.Kläm fast den vänstra bukväggen med pincett eller retraktorer och dra vävnaden till vänster om musen för att säkra operationsfältet. Använd en bomullspinne för att mobilisera tunn- och tjocktarmen till höger om musen. Den vänstra epidermala vita fettvävnaden i bukhålan ligger i det vänstra inguinalområdet.Mobilisera den epidermala vita fettvävnaden och de vänstra testiklarna till utsidan av buken och sträck ut vävnaden. Använd en P 200 mikropipett för att samla hela volymen av holmar från ett 1,5 ml rör, se till att inga holmar finns kvar i röret vid uppsamling. Låt de uppsamlade holmarna sätta sig i pipettens spets genom tyngdkraften.Placera mikropipettspetsen lätt på den utspända fettvävnaden, var noga med att förhindra överdriven spolning av mediet eller bufferten i spetsen. Frö försiktigt öarna på vävnaden. Efter sådd, bekräfta korrekt placering av öarna under ett dissekerande mikroskop.Täck öarna med den epidermala vita fettvävnaden, placera sedan de vänstra testiklarna under den episomala vita fettvävnaden och återför vävnaderna till intraperitonealhålan. Stäng huden i två lager med en 4-o sutur. När du är klar placerar du musen under en värmelampa och övervakar den tills den är helt återställd.För att jämföra transplantationseffekten av fetttäckt ötransplantation med den efter intraperitoneal ötransplantation implanterades samma antal öar på bukhinnan vid det vänstra parakoliska utrymmet hos kontrollmottagarens diabetesdjur. Blodsockernivåerna hos möss med fetttäckt ötransplantation observerades gradvis och signifikant minska jämfört med intraperitoneala ötransplanterade möss. Intraperitoneal glukostoleranstestning utfördes en månad efter transplantation.Blodsockret hos möss med fetttäckt ötransplantation bibehölls på lägre nivåer än det som observerades hos intraperitoneala ötransplanterade möss. Histologisk undersökning användes för att bedöma ö-engraftment i den epidermala vita fettvävnaden. I fetttäckta ötransplantationsmottagardjur avslöjade hematoxylineocenfärgning närvaron av öar i den epidermala vita fettvävnaden.Dessutom underlättade fluorescenskonjugerad antikroppsfärgning av insulinpositiva öar detektionen av von Willebrand-faktorpositiva mikrokärl i den epidermala vita fettvävnaden hos alla mottagarmöss. För att lyckas med denna procedur, se till att låta holmarna sätta sig helt vid pipettens spets och så dem på fettvävnaden utan att spilla.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

En metod för Murine Islet Isolering och subkapsulär Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Transplantation av pulmonell ventil med hjälp av en musmodell av Heterotopisk hjärttransplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Cerenkov Luminiscens avbildning av interscapular Brun fettvävnad

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Inkapslings Thermogenic preadipocyter för transplantation till fettvävnad Depåer

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Skapande och Transplantation av en Adipose-derived Stem Cell (ASC) blad i en diabetiker sårläkning modell

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

Bedömning av Human fettväv mikrovaskulära funktion med hjälp av Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Transplantation av fettvävnad-Derived stamceller blad att minska läckage efter partiell kolektomi i en råtta modell

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Karakterisering av immunceller i mänsklig fettvävnad med hjälp av flödescytometri

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Hela kroppen och regionala kvantifiering av aktiva mänskliga brun fettvävnad använda 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

Inguinal Subkutan vit fettvävnad (ISWAT) Transplantation modell av murinholmskulter

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...