Name: fertility preservation in patients with severe ovarian dysfunction
Uploaded: 2021-03-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction at JoVE.com

Vi takker Tatsuji Ihana, Sachiyo Kurimoto, Kazuko Takahasih, Yuki Yoshizawa, Maho Arashi, Kentaro Fujita, Erina Kudo, Yuka Kurimoto og Mayuko Wakatsuki for at støtte den stoffri IVA-procedure og prof. Aaron J.W. Hsueh (Stanford University School of Medicine, Stanford, CA) for kritisk læsning og redigering af manuskriptet. Vi takker også Rebecca Truman og Gregory Truman for at have indsat engelsk fortælling. Denne undersøgelse blev støttet af The Japan Society for the Promotion of Science (JSPS), Scientific Research B (19H03801) og Challenging Exploratory Research (18K19624).

Skriftligt informeret samtykke blev indhentet fra hver POR patient med faldende æggestokke reserve, der er indskrevet i stoffri IVA behandling. Denne undersøgelse blev godkendt af etisk udvalg fra International University of Health and Welfare (nr. 17-S-21). Klinisk forsøg blev registreret under nummer UMIN000034464 og udført i overensstemmelse med Den Internationale Lægeforenings etiske kodeks (Helsingfors-erklæringen).
1. Ekstraktion af ovariebark
<ol><li>Fjern en del af æggestokken...

<ol>
	<li>Liang, T., Motan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mature+Oocyte+Cryopreservation+for+Fertility+Preservation.">Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).</li><li>Yoon, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+births+after+vitrification+of+oocytes+in+a+stimulated+in+vitro+fertilization-embryo+transfer+program.">Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization-embryo transfer program.</a> Fertility and Sterility. 79 (6), 1323-1326 (2003).</li><li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Livebirth+after+orthotopic+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue.">Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue.</a> Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).</li><li>Meirow, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+after+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue+in+a+patient+with+ovarian+failure+after+chemotherapy.">Pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a patient with ovarian failure after chemotherapy.</a> New England Journal of Medicine. 353 (3), 318-321 (2005).</li><li>De Vos, M., Devroey, P., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+ovarian+insufficiency.">Primary ovarian insufficiency.</a> Lancet. 376 (9744), 911-921 (2010).</li><li>Scott, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle-stimulating+hormone+levels+on+cycle+day+3+are+predictive+of+in+vitro+fertilization+outcome.">Follicle-stimulating hormone levels on cycle day 3 are predictive of in vitro fertilization outcome.</a> Fertility and Sterility. 51 (4), 651-654 (1989).</li><li>Ferraretti, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+consensus+on+the+definition+of+'poor+response'+to+ovarian+stimulation+for+in+vitro+fertilization:+the+Bologna+criteria.">ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria.</a> Human Reproduction. 26 (7), 1616-1624 (2011).</li><li>Huhtaniemi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+Molecular+Pathophysiology,+Genetics,+and+Treatment+of+Primary+Ovarian+Insufficiency.">Advances in the Molecular Pathophysiology, Genetics, and Treatment of Primary Ovarian Insufficiency.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism. 29 (6), 400-419 (2018).</li><li>M&#281;czekalski, B., Maciejewska-Jeske, M., Podfigurna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproduction+in+premature+ovarian+insufficiency+patients+-+from+latest+studies+to+therapeutic+approach.">Reproduction in premature ovarian insufficiency patients - from latest studies to therapeutic approach.</a> Prz Menopauzalny. 17 (3), 117-119 (2018).</li><li>Baker, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+plans+and+family-building+options+for+women+with+primary+ovarian+insufficiency.">Life plans and family-building options for women with primary ovarian insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 29 (4), 362-372 (2011).</li><li>Englert, Y., Govaerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation:+particular+technical+and+ethical+aspects.">Oocyte donation: particular technical and ethical aspects.</a> Human Reproduction. 13, 90-97 (1998).</li><li>Englert, Y., Rodesch, C., Laruelle, C., Govoerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation:+ethical+aspects+related+to+the+donor.">Oocyte donation: ethical aspects related to the donor.</a> Contraception, Fertilite, Sexualite. 25 (3), 251-257 (1997).</li><li>Storgaard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obstetric+and+neonatal+complications+in+pregnancies+conceived+after+oocyte+donation:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Obstetric and neonatal complications in pregnancies conceived after oocyte donation: a systematic review and meta-analysis.</a> BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 124 (4), 561-572 (2017).</li><li>Storgaard, M., Malchau, S., Loft, A., Larsen, E., Pinborg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation+is+associated+with+an+increased+risk+of+complications+in+the+pregnant+woman+and+the+fetus.">Oocyte donation is associated with an increased risk of complications in the pregnant woman and the fetus.</a> Ugeskrift for Laeger. 179 (11), (2017).</li><li>Kawamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippo+signaling+disruption+and+Akt+stimulation+of+ovarian+follicles+for+infertility+treatment.">Hippo signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles for infertility treatment.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (43), 17474-17479 (2013).</li><li>Hsueh, A. J., Kawamura, K., Cheng, Y., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraovarian+control+of+early+folliculogenesis.">Intraovarian control of early folliculogenesis.</a> Endocrine Reviews. 36 (1), 1-24 (2015).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dormant+ovarian+follicles+to+generate+mature+eggs.">Activation of dormant ovarian follicles to generate mature eggs.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (22), 10280-10284 (2010).</li><li>Suzuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+fertility+preservation+following+ovarian+tissue+vitrification+in+patients+with+primary+ovarian+insufficiency.">Successful fertility preservation following ovarian tissue vitrification in patients with primary ovarian insufficiency.</a> Human Reproduction. 30 (3), 608-615 (2015).</li><li>Tanaka, Y., Hsueh, A. J., Kawamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+approaches+of+drug-free+in+activation+and+laparoscopic+ovarian+incision+to+treat+patients+with+ovarian+infertility.">Surgical approaches of drug-free in activation and laparoscopic ovarian incision to treat patients with ovarian infertility.</a> Fertility and Sterility. , (2020).</li><li>Kawamura, K., Ishizuka, B., Hsueh, A. J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-free+in-vitro+activation+of+follicles+for+infertility+treatment+in+poor+ovarian+response+patients+with+decreased+ovarian+reserve.">Drug-free in-vitro activation of follicles for infertility treatment in poor ovarian response patients with decreased ovarian reserve.</a> Reproductive Biomedicine Online. 40 (2), 245-253 (2020).</li><li>Haino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Follicular+Localization+in+Human+Ovarian+Cortex+for+Vitrification.">Determination of Follicular Localization in Human Ovarian Cortex for Vitrification.</a> Journal of Adolescent and Young Adult Oncology. 7 (1), 46-53 (2018).</li><li>Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+ovarian+function+in+sheep+after+ovariectomy+and+transplantation+of+autografts+stored+at+-196+C.">Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at -196 C.</a> Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).</li><li>Qin, Y., Jiao, X., Simpson, J. L., Chen, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+primary+ovarian+insufficiency:+new+developments+and+opportunities.">Genetics of primary ovarian insufficiency: new developments and opportunities.</a> Human Reproduction Update. 21 (6), 787-808 (2015).</li><li>Domniz, N., Meirow, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Premature+ovarian+insufficiency+and+autoimmune+diseases.">Premature ovarian insufficiency and autoimmune diseases.</a> Best Practice &amp; Research: Clinical Obstetrics &amp; Gynaecology. 60, 42-55 (2019).</li><li>Laven, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Ovarian+Insufficiency.">Primary Ovarian Insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 34 (4), 230-234 (2016).</li><li>Grynberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertility+preservation+in+Turner+syndrome.">Fertility preservation in Turner syndrome.</a> Fertility and Sterility. 105 (1), 13-19 (2016).</li><li>Tomao, F., Spinelli, G. P., Panici, P. B., Frati, L., Tomao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+function,+reproduction+and+strategies+for+fertility+preservation+after+breast+cancer.">Ovarian function, reproduction and strategies for fertility preservation after breast cancer.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 76 (1), 1-12 (2010).</li><li>Kim, S., Lee, Y., Lee, S., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+tissue+cryopreservation+and+transplantation+in+patients+with+cancer.">Ovarian tissue cryopreservation and transplantation in patients with cancer.</a> Obstetrics &amp; Gynecology Science. 61 (4), 431-442 (2018).</li><li>Donnez, J., Dolmans, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+tissue+freezing:+current+status.">Ovarian tissue freezing: current status.</a> Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 27 (3), 222-230 (2015).</li><li>Wu, R. C., Kuo, P. L., Lin, S. J., Liu, C. H., Tzeng, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X+chromosome+mosaicism+in+patients+with+recurrent+abortion+or+premature+ovarian+failure.">X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure.</a> Journal of the Formosan Medical Association. 92 (11), 953-956 (1993).</li><li>De Munck, N., Vajta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficiency+of+oocyte+vitrification.">Safety and efficiency of oocyte vitrification.</a> Cryobiology. 78, 119-127 (2017).</li><li>Argyle, C. E., Harper, J. C., Davies, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+cryopreservation:+where+are+we+now.">Oocyte cryopreservation: where are we now.</a> Human Reproduction Update. 22 (4), 440-449 (2016).</li></ol>

I dette manuskript viste vi en detaljeret laboratorieprotokol for stoffri IVA. Den stoffri IVA er en ny tilgang til infertilitet behandling for POR patient med faldende æggestokkene reserve til at fremme sekundære follikler vækst, hvilket resulterer i at give mere modne oocytter efter æggestokkene stimulation og stigende i vellykket graviditet20. Hos 15 POR-patienter med faldende æggestokkereservat opnåede denne tilgang en spontan graviditet, in vitro-befrugtning-embryooverførsel tillod fir...

Æggestokkene funktion falder gradvist under aldring og nogle patofysilogiske tilstande, herunder karyotype abnormitet, autoimmune sygdomme, kemo-og stråling-behandlinger, og æggestokkene operationer. Fertilitetsbevarelse er en af de bedste muligheder for ugifte kvinder med svær ovarie dysfunktion for at bevare deres potentiale for fremtidig graviditet. For fertilitetsbevarelse er der i øjeblikket to metoder, der for det meste er tilgængelige inden for onco-fertilitet. Oocyte cryopreservation er en veletableret procedure for fertilitetsbevarelse , og mange vellykkede tilfælde er blevet rapporteret1,2. På den anden side blev der også etableret kryopræservering af æggestokkene til fertilitetsbevarelse hos kræftpatienter, men det er stadig en eksperimentel strategi3,4. I begge metoder er flere antal modne oocytter nødvendige for at graviditeten kan forekomme. Generelt patienter med for tidlig æggestokke utilstrækkelighed (POI), der bliver amenoré før 40 år, og midaldrende kvinder med lav æggestokkene reserve viste dårlig æggestokkene respons (POR) til æggestokkene stimulation for at give modne oocytter5,6,7. Desuden viste unge patienter med et lavt antal antral follikler også POR til æggestokkene stimulation7. Disse patienter har et meget begrænset antal hentes oocytter selv efter korrekt ovarie hyperstimulation, hvilket kræver flere dyre procedurer for at sikre et tilstrækkeligt antal oocytter til graviditet.
Oocyte donation efterfulgt af in vitro befrugtning (IVF) med mands sæd og embryo overførsel (ET) er den eneste mulighed for disse POI og POR patienter, der har svært ved at få deres egne oocytter8,9,10. Oocytdonation kompliceres dog af etiske spørgsmål samt autoimmune og graviditetskomplikationer11,12,13,14. For at løse disse problemer ønskes etablering af infertilitetsbehandling ved hjælp af patienternes egne oocytter. For POI-patienter har vi udviklet in vitro-aktiveringsmetoden (IVA) for at muliggøre vellykket follikelvækst og generering af modne oocytter, der fører en række graviditeter og leverancer15. I IVA, fragmenterede vi æggestokkene cortexes efter fjernelse af æggestokkene under laparoskopisk kirurgi og dyrkede dem i to dage for at aktivere follikler ved Akt-stimulerende medicin og derefter udføre heterotopisk podning tilbage i kunstige poser lavet under serosa af æggeledere under anden laparoskopisk kirurgi15. Denne procedure fremmet vækst af ur- og primærsække efter fragmentering af æggestokkene for at fremme Hippo signalering disruption16, efterfulgt af to dages kultur med Akt signalering stimulatorer17.
I modsætning til alvorlige POI tilfælde, POR patienter med nedsat æggestokkene reserve har flere sekundære follikler. Fordi Hippo signalering forstyrrelser alene er effektiv til at fremme sekundære follikel vækst16, vi for nylig demonstreret vellykkede graviditeter og leverancer til POR patienter ved hjælp af narkotika-fri IVA procedure, der involverer kortikale fragmentering og ortopisk podning uden behandling af Akt stimulerende lægemidler. Stoffri IVA stimulerer tidlige stadier af æggestokkene follikler til at udvikle sig til preantral follikel fase efter kun én operation og øget antallet af hentede oocytter til IVF-embryo overførsel15,18. Den stoffri IVA tilgang har flere fordele i forhold til vores oprindelige IVA med 1) undgå potentielle follikel tab under kultur, 2) minimere invasivitet og omkostninger ved den anden operation, 3) involverer kun kortsigtede post-kirurgi sengeleje og 4) potentiale spontan graviditet på grund af ortopisk podning. Vi har for nylig offentliggjort en videoartikel, der viser de kirurgiske procedurer for stoffri IVA19 og detaljerede protokoller for ovariestimulation efter operationen20. Her præsenterer vi detaljer om laboratoriemetoder, der kræves til lægemiddelfri IVA.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4.5 onz specimen container</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>354013</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60mm dish</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>351007</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 x 50 cm sterile drape</td>
			<td>HOGY Medical</td>
			<td>SR-823</td>
			<td>Any type of sterile produsts may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pippete</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>357575</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors, Curved</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#14224-G</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>TOKAI HIT</td>
			<td>TPiE-SP</td>
			<td>Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin Solution</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td>Medium for handling ovarian tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVA cannule</td>
			<td>KITAZATO</td>
			<td>446030 IVA-6030E</td>
			<td>Specific cannula for tissue autografting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KAI medical Disposable scalpel</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#5 10-A</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors, Curved</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#503364</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium-HEPES</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>Medium for handling ovarian tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Osaki Medical</td>
			<td>15004</td>
			<td>Any type of sterile produsts may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiss Tweezers, Curved Tips</td>
			<td>KAI</td>
			<td>#504505</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation in patients with severe ovarian dysfunction

Æggestokkene funktion gradvist falder under aldring og i nogle patofysilogiske tilstande, herunder karyotype abnormitet, autoimmune sygdomme, kemo-og stråling-behandlinger, samt æggestokkene operationer. Hos ugifte kvinder med svær ovarie dysfunktion, fertilitet bevarelse er vigtig for fremtidige graviditeter. Selv oocyt cryopreservation er en etableret metode til fertilitetsbevarelse, disse patienter kunne kun bevare et begrænset antal oocytter, selv efter æggestokkene hyperstimulation, hvilket fører til gentagne stimuleringer for at sikre tilstrækkelig oocytter til at garantere fremtidige graviditet. For at løse dette problem har vi for nylig udviklet en lægemiddelfri in vitro-aktiveringsprocedure (IVA), som gør det muligt for os at stimulere tidlige stadier af æggestokkenes follikler til at udvikle sig til den præantrale follikelfase. Disse præantral follikler kan reagere på den unikke protokol af gonadotropin stimulation, hvilket resulterer i øget antal hentede oocytter pr æggestokkene stimulation for kryopræservering. Den stoffri IVA bestod af den kirurgiske tilgang og æggestokkene stimulation. Vi fjernede en del af cortex fra en eller begge æggestokke fra patienter under laparoskopisk kirurgi. Æggestokkene kortikale væv blev skåret i små terninger for at forstyrre Hippo signalering vej og stimulere udviklingen af tidlige stadier follikler. Disse terninger blev podet ortotropisk i de resterende æggestokke samt under serosa af begge æggeledere. Vi har allerede offentliggjort den kirurgiske procedure for den stoffri IVA og protokollen for efterfølgende ovariestimulering, men heri præsenterer vi detaljerne i laboratoriemetoder, der kræves til lægemiddelfri IVA.

I den første offentliggørelse af IVA-tilgangen15transplanterede vi æggestokkene kortikale terninger en efter en i podningsstederne under laparoskopisk kirurgi (Figur 1A). Fordi 100-150 æggestokkene terninger blev brugt, det tog 3-4 timer for væv podning under laparoskopisk kirurgi. Også nogle æggestokkene terninger gik tabt før podning. Fordi IVA-kanylen kunne overføre 20-30 terninger til et podningssted på én gang (Figur 1B), ...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction at JoVE.com

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Vi præsenterer oplysninger om laboratorieprocedurer for stoffri in vitro-aktivering (IVA) af æggestokkenes follikler til patienter med svær ovariedysfunktion. Denne metode kan øge antallet af hentes oocytter pr æggestokke hyperstimulation og gavn fertilitet bevarelse for disse patienter.

Fertilitetsbevarelse hos patienter med svær dysfunktion i æggestokkene

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Målet med denne film er at demonstrere proceduren for vores nye tilgang til patienter med ovarie dysfunktion. Æggestokkene funktion falder gradvist under aldring og nogle patofysilogiske tilstande, herunder karyotype abnormitet, auto immunsygdomme, kemo og stråling behandlinger, og æggestokkene operationer. De fleste af midaldrende kvinder med en lav æggestokkene reserve viste dårlig æggestokkene reaktion på æggestokkene stimulation for at give modne oocytter.Desuden viste unge patienter med et lavt antal antral follikler også dårlig ovarierespons på æggestokkene stimulation. Fertilitetsbevarelse er vigtig for at redde den potentielle OCS til fremtidig graviditet. For frugtbarhedsbevarelse blev oocyt kryopræservering etableret.Men disse dårlige æggestokkene respons patienter kunne hente et meget begrænset antal oocytter selv efter korrekt æggestokkene stimulation, hvilket fører til kravet om gentagne dyre procedurer for at sikre et tilstrækkeligt antal oocytter til at garantere en baby. For at løse disse problemer har vi for nylig udviklet in vitro-aktiveringen, IVA-proceduren, som gør det muligt for os at stimulere den tidlige fase af æggestokkene follikler til at udvikle sig til præ-antral follikelfasen. Den oprindelige IVA procedure kan fremme ur, primær og sekundær follikel vækst ved æggestokkene cortex fragmentering, fører til flodhest signalering forstyrrelser.Dette efterfølges derefter af to dages dyrkning med Akt signalering stimulator. Denne procedure er velegnet til POI-patienter med få resterende follikler. Men denne procedure er en overdreven behandling for de patienter, der har flere sekundære follikler.For de patienter, der har nogle resterende sekundære follikler, etablerede vi metoden kaldet stoffri IVA og har allerede testet muligheden for at fremme sekundær follikelvækst ved kun at forstyrre flodhestens signalvej. Vi har også haft nogle vellykkede tilfælde af levering af stoffri IVA. Vi har allerede offentliggjort den kirurgiske procedure af lægemidlet gratis IVA og protokollen for følgende æggestokkene stimulation.I denne video præsenterer vi detaljerne om laboratoriemetoder, der kræves til stoffri IVA. Vi rekrutterede patienterne til lægemiddelfri IVA baseret på Bolognakriterierne. Patienterne kunne have flere sekundære follikler.I første omgang blev en del af cortex fjernet fra en eller begge æggestokke ved laparoskopi. POR patienter er dem, der havde mellemstørrelse æggestokke. Hos de fleste af patienterne ekstraherede vi kun en del af det kortikale væv fra æggestokkene på den ene eller begge sider.Udvundet kritisk væv blev straks overført til en kultur parabol indeholder kultur medium med HEPES buffer, og dissekeret denne lille væv i små terninger for flodhest signalering forstyrrelser. Nærmere oplysninger om proceduren vil blive vist i denne video. Hippo signalering vej er afgørende for at opretholde optimal organstørrelse.Denne vej består af flere negative vækstregulatorer. Når flodhestesignaleringen er forstyrret, reduceres fosforyleringsniveauerne for YAP, en af de negative vækstregulatorer, der virker i en kinasekaskade, og nukleare niveauer af YAP øges. YAP handler i samråd med TEAD transskriptionelle faktorer for at øge downstream CCN vækstfaktor.På den anden side er actin polymerisering af kugleformet virke, G-actin, til den filamentøse form, F-actin, vigtig for celleformvedligeholdelse og bevægelse. Tidligere rapporteret induktion af F-actin dannelse forstyrrer flodhest signalering og inducerer overvækst i menneskelige HeLa celler. Vi har tidligere rapporteret æggestokkene fragmentering øge F-actin dannelse, og det fører til et fald i niveauet af fosforylering af YAP.Det fører til øget udtryk for CCN vækstfaktor. Efter skæring podes disse terninger i den resterende æggestok. Denne procedure kan fremme den resterende sekundære follikelvækst og føre til et øget antal modnet oocyt.Stoffri IVA består af fire trin. Vi har allerede offentliggjort den kirurgiske procedure for stoffri IVA. Der henvises til, at litteraturen for æggestokkene cortex ekstraktion og auto-podning.Her viser vi de detaljerede procedurer for laboratoriemetoder, der kræves for stoffri IVA. I første trin viser vi, hvordan ovariebarkfragmentering udføres. I trin to viser vi, hvordan man indlæser æggestokkene kortikale terninger i enheden til transplantation, Her vil jeg vise ovariebark fragmentering.Denne undersøgelse blev godkendt af etisk udvalg på vores institut, og alle procedurer blev udført i overensstemmelse med kodekset for etik i World Medical Association. Opsplitning af æggestokkene. Følgende værktøjer, der kræves til dette trin:en skål, steril gaze, fin saks, fine pincet og skalpel.Vi bruger normalt denne type skål og steril gaze, men andre produkter som plast petriskål, glasskål osv. kan også være egnet til denne procedure, og enhver form for steril gasbind er også egnet. Vi anbefaler dog på det kraftigste brugen af denne form for pincet og skalpel. Derudover skal du bruge kogepladen til at opretholde temperaturen på de retter, der indeholder væv Placer under den sterile drapering.Kortikale væv overføres straks til skålen, der indeholder mHTF. Tag et billede med patientens navn for korrelering med patientens data. Registrer vævets størrelse, tykkelse og tilstand.Fjern resterende medulla væv. Før vævsfragmentering fjernes medullavævet. Sæt cortex på den sterile gaze.Som vist i videoen fugtes gasbindet med medium. Under denne procedure skal du anvende medium med en engangspipette, før overfladen af cortex tørres ud. Fjern resterende væv med mikro saks, indtil tykkelsen når en til to millimeter.Hos POR-patienter er sekundære follikler placeret dybere end en millimeter fra cortexoverfladen, så gør ikke vævene mindre end en millimeter i tykkelse. Skær den ene side af cortex af hvert væv i en strimmel måler en efter en af fem millimeter for histologiske analyse for at bestemme tilstedeværelsen af resterende follikler. Sæt denne strimmel i 1,5 milliliter rør med kultur medium og holde på fire grader Celsius indtil fastsættelse.Forberedelse af æggestokkene kortikale terninger. Efter fjernelse af medulla væv, æggestokkene kortikale er fragmenteret for flodhest signalering forstyrrelser. Skær først cortex i en efter en med 10 millimeter strimler ved hjælp af skalpel.Skær derefter disse strimler i en millimeter kubik små terninger. I mediet er vævet glat og svært at skære. For nem skæring, skære strimler ved at trykke ned på skalpellen i stedet for ved at trække på den.Efter skæring skal du tælle antallet af terninger og forberede auto-podning. For at undgå ændringer i osmotisk tryk i mediet, tilsæt mediet i moderation før væv auto-podning. Til autotransplantation i æggestokkene giver brugen af en kanyleformet enhed mulighed for lettere belastning.Dette trin indeholder to trin. Tidligere blev ovariefragmenter transplanteret en efter en ved hjælp af pincet under laparoskopi. Men det tog omkring tre til fire timer for kirurgi, der skal udfyldes.I denne procedure bruger vi en kanykulær enhed lavet af en indre sprøjte og en ydre cylinder. Dette er en enkel form og let. Derudover er spidsen af denne enhed af en rund form.Der er ingen skarpe punkter, der undgår skader på transplantationsstedet. Brug af denne type enhed gør det muligt at bringe op til 20 til 30 terninger til implantationsstedet på én gang. Dette fører til effektiv transplantation og reduktion i operationstiden.Lastning æggestokkene kortikale fragmenter. Forberedelse af IVA kanyle. Forbered IVA-kanylen og vask denne enhed i mHTF.Gentag aspirat og udledning medium flere gange. Fyld spidsen af en kanyle ved at aspirere omkring 100 mikroliter af mediet. Dette er for at undgå terninger fra at trække ud under væv fragment lastning.Indlæser kortikale kuber. Vælg en terning med fine pincet og læg den i spidsen af kanylen. Antallet af automatisk podede terninger afhænger af størrelsen af transplantationsstedet.Gentag indlæsningen af kuberne en efter en, indtil du når målnummeret. Efter lastning af terningerne skal du forsigtigt overføre kanylen til kirurgen. Hvis podningsstedet ikke er klar, skal den del af kanylen, der indeholder æggestokkene, holdes af fingrene for at undgå et fald i terningernes temperatur.Vi har allerede rapporteret de kliniske resultater af lægemiddelfri IVA. Der henvises til det offentliggjorte papir om kliniske resultater. Denne laboratorieprotokol krævede 30 til 50 minutter for en patient.Den gennemsnitlige tid er i 10 til 20 minutter for ovariebark fragmentering, og 20 til 30 minutter for lastning af disse fragmenter til IVA kanyle. Dette afhænger af vævsstørrelsen, men næsten alle patienter kan være færdige i denne gennemsnitlige tid. Konklusioner. Drug-fri IVA er en ny tilgang til infertilitet behandling for POR patienter med faldende æggestokkene reserve.Disse laboratorieprotokol fører til reduktion af både den tid, der kræves til kirurgi og tab af fragmenter under transplantationen. Laboratorieteknikken af stoffri IVA kunne blive grundlaget for fremtidig anvendelse af æggestokkene væv kultur for at opnå modne oocytter uden podning.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

En Kontusion Model of Svær Rygmarvsskader i rotter

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Vurdering af vaskulære funktion hos patienter med kronisk nyresygdom

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Funktionel Human Liver Beskyttelse og inddrivelse af beløb ved Subnormothermic Machine Perfusion

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Indførelsen af Intracapsular Rotary-cut procedurer (IRCP): en modificeret Hysteromyomectomy procedurer at lette fertilitet bevarelse

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Semi-kvantitative vurdering ved hjælp af [18F] FDG Tracer hos patienter med svær hjerneskade

Patients with severe traumatic brain injury (sTBI) have difficulty knowing whether they are accurately expressing their thoughts and emotions because of ...

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Natrium taurocholat induceret svær akut pancreatitis i C57BL/6 Mus

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Digital Handwriting Analysis of Characters in Chinese Patients with Mild Cognitive Impairment

Digital håndskriftsanalyse af tegn hos kinesiske patienter med mild kognitiv svækkelse

An increasing amount of evidence shows that cognitive deficits and movement dysfunctions are not separated. Patients with mild cognitive impairment (MCI) ...

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Fertilitetsbevarelse gennem Oocyte Vitrification: Kliniske og laboratorieperspektiver

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Fertility Sparing Procedure using Carbon Dioxide Fiber Laser Vaporization of Ovarian Endometrioma

Fertilitetsbesparende procedure ved hjælp af kuldioxidfiberlaserfordampning af ovarieendometriom

The surgical management of endometrioma is still a matter of debate. Cystectomy, which is recognized as the standard technique, seems to be associated ...