Name: fertility preservation in patients with severe ovarian dysfunction
Uploaded: 2021-03-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction at JoVE.com

Vi takker Tatsuji Ihana, Sachiyo Kurimoto, Kazuko Takahasih, Yuki Yoshizawa, Maho Arashi, Kentaro Fujita, Erina Kudo, Yuka Kurimoto og Mayuko Wakatsuki for å støtte den narkotikafrie IVA-prosedyren og prof. Aaron J.W. Hsueh (Stanford University School of Medicine, Stanford, CA) for kritisk lesing og redigering av manuskriptet. Vi takker også Rebecca Truman og Gregory Truman for å ha satt inn engelsk fortelling. Denne studien ble støttet av The Japan Society for the Promotion of Science (JSPS), Scientific Research B (19H03801) og Challenging Exploratory Research (18K19624).

Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra hver POR-pasient med avtagende ovariereservat som meldte seg på den legemiddelfrie IVA-behandlingen. Denne studien ble godkjent av etisk komité ved International University of Health and Welfare (nr. 17-S-21). Klinisk studie ble registrert under nummer UMIN000034464 og utført i samsvar med Code of Ethics of the World Medical Association (Helsinkideklarasjonen).
1. Ovarian cortex ekstraksjon
<ol><li>Fjern en del av ovarial cortex (10 x 10 mm, ...

<ol>
	<li>Liang, T., Motan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mature+Oocyte+Cryopreservation+for+Fertility+Preservation.">Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).</li><li>Yoon, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+births+after+vitrification+of+oocytes+in+a+stimulated+in+vitro+fertilization-embryo+transfer+program.">Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization-embryo transfer program.</a> Fertility and Sterility. 79 (6), 1323-1326 (2003).</li><li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Livebirth+after+orthotopic+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue.">Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue.</a> Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).</li><li>Meirow, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+after+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue+in+a+patient+with+ovarian+failure+after+chemotherapy.">Pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a patient with ovarian failure after chemotherapy.</a> New England Journal of Medicine. 353 (3), 318-321 (2005).</li><li>De Vos, M., Devroey, P., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+ovarian+insufficiency.">Primary ovarian insufficiency.</a> Lancet. 376 (9744), 911-921 (2010).</li><li>Scott, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle-stimulating+hormone+levels+on+cycle+day+3+are+predictive+of+in+vitro+fertilization+outcome.">Follicle-stimulating hormone levels on cycle day 3 are predictive of in vitro fertilization outcome.</a> Fertility and Sterility. 51 (4), 651-654 (1989).</li><li>Ferraretti, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+consensus+on+the+definition+of+'poor+response'+to+ovarian+stimulation+for+in+vitro+fertilization:+the+Bologna+criteria.">ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria.</a> Human Reproduction. 26 (7), 1616-1624 (2011).</li><li>Huhtaniemi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+Molecular+Pathophysiology,+Genetics,+and+Treatment+of+Primary+Ovarian+Insufficiency.">Advances in the Molecular Pathophysiology, Genetics, and Treatment of Primary Ovarian Insufficiency.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism. 29 (6), 400-419 (2018).</li><li>M&#281;czekalski, B., Maciejewska-Jeske, M., Podfigurna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproduction+in+premature+ovarian+insufficiency+patients+-+from+latest+studies+to+therapeutic+approach.">Reproduction in premature ovarian insufficiency patients - from latest studies to therapeutic approach.</a> Prz Menopauzalny. 17 (3), 117-119 (2018).</li><li>Baker, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+plans+and+family-building+options+for+women+with+primary+ovarian+insufficiency.">Life plans and family-building options for women with primary ovarian insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 29 (4), 362-372 (2011).</li><li>Englert, Y., Govaerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation:+particular+technical+and+ethical+aspects.">Oocyte donation: particular technical and ethical aspects.</a> Human Reproduction. 13, 90-97 (1998).</li><li>Englert, Y., Rodesch, C., Laruelle, C., Govoerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation:+ethical+aspects+related+to+the+donor.">Oocyte donation: ethical aspects related to the donor.</a> Contraception, Fertilite, Sexualite. 25 (3), 251-257 (1997).</li><li>Storgaard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obstetric+and+neonatal+complications+in+pregnancies+conceived+after+oocyte+donation:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Obstetric and neonatal complications in pregnancies conceived after oocyte donation: a systematic review and meta-analysis.</a> BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 124 (4), 561-572 (2017).</li><li>Storgaard, M., Malchau, S., Loft, A., Larsen, E., Pinborg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation+is+associated+with+an+increased+risk+of+complications+in+the+pregnant+woman+and+the+fetus.">Oocyte donation is associated with an increased risk of complications in the pregnant woman and the fetus.</a> Ugeskrift for Laeger. 179 (11), (2017).</li><li>Kawamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippo+signaling+disruption+and+Akt+stimulation+of+ovarian+follicles+for+infertility+treatment.">Hippo signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles for infertility treatment.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (43), 17474-17479 (2013).</li><li>Hsueh, A. J., Kawamura, K., Cheng, Y., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraovarian+control+of+early+folliculogenesis.">Intraovarian control of early folliculogenesis.</a> Endocrine Reviews. 36 (1), 1-24 (2015).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dormant+ovarian+follicles+to+generate+mature+eggs.">Activation of dormant ovarian follicles to generate mature eggs.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (22), 10280-10284 (2010).</li><li>Suzuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+fertility+preservation+following+ovarian+tissue+vitrification+in+patients+with+primary+ovarian+insufficiency.">Successful fertility preservation following ovarian tissue vitrification in patients with primary ovarian insufficiency.</a> Human Reproduction. 30 (3), 608-615 (2015).</li><li>Tanaka, Y., Hsueh, A. J., Kawamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+approaches+of+drug-free+in+activation+and+laparoscopic+ovarian+incision+to+treat+patients+with+ovarian+infertility.">Surgical approaches of drug-free in activation and laparoscopic ovarian incision to treat patients with ovarian infertility.</a> Fertility and Sterility. , (2020).</li><li>Kawamura, K., Ishizuka, B., Hsueh, A. J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-free+in-vitro+activation+of+follicles+for+infertility+treatment+in+poor+ovarian+response+patients+with+decreased+ovarian+reserve.">Drug-free in-vitro activation of follicles for infertility treatment in poor ovarian response patients with decreased ovarian reserve.</a> Reproductive Biomedicine Online. 40 (2), 245-253 (2020).</li><li>Haino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Follicular+Localization+in+Human+Ovarian+Cortex+for+Vitrification.">Determination of Follicular Localization in Human Ovarian Cortex for Vitrification.</a> Journal of Adolescent and Young Adult Oncology. 7 (1), 46-53 (2018).</li><li>Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+ovarian+function+in+sheep+after+ovariectomy+and+transplantation+of+autografts+stored+at+-196+C.">Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at -196 C.</a> Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).</li><li>Qin, Y., Jiao, X., Simpson, J. L., Chen, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+primary+ovarian+insufficiency:+new+developments+and+opportunities.">Genetics of primary ovarian insufficiency: new developments and opportunities.</a> Human Reproduction Update. 21 (6), 787-808 (2015).</li><li>Domniz, N., Meirow, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Premature+ovarian+insufficiency+and+autoimmune+diseases.">Premature ovarian insufficiency and autoimmune diseases.</a> Best Practice &amp; Research: Clinical Obstetrics &amp; Gynaecology. 60, 42-55 (2019).</li><li>Laven, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Ovarian+Insufficiency.">Primary Ovarian Insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 34 (4), 230-234 (2016).</li><li>Grynberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertility+preservation+in+Turner+syndrome.">Fertility preservation in Turner syndrome.</a> Fertility and Sterility. 105 (1), 13-19 (2016).</li><li>Tomao, F., Spinelli, G. P., Panici, P. B., Frati, L., Tomao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+function,+reproduction+and+strategies+for+fertility+preservation+after+breast+cancer.">Ovarian function, reproduction and strategies for fertility preservation after breast cancer.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 76 (1), 1-12 (2010).</li><li>Kim, S., Lee, Y., Lee, S., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+tissue+cryopreservation+and+transplantation+in+patients+with+cancer.">Ovarian tissue cryopreservation and transplantation in patients with cancer.</a> Obstetrics &amp; Gynecology Science. 61 (4), 431-442 (2018).</li><li>Donnez, J., Dolmans, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+tissue+freezing:+current+status.">Ovarian tissue freezing: current status.</a> Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 27 (3), 222-230 (2015).</li><li>Wu, R. C., Kuo, P. L., Lin, S. J., Liu, C. H., Tzeng, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X+chromosome+mosaicism+in+patients+with+recurrent+abortion+or+premature+ovarian+failure.">X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure.</a> Journal of the Formosan Medical Association. 92 (11), 953-956 (1993).</li><li>De Munck, N., Vajta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficiency+of+oocyte+vitrification.">Safety and efficiency of oocyte vitrification.</a> Cryobiology. 78, 119-127 (2017).</li><li>Argyle, C. E., Harper, J. C., Davies, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+cryopreservation:+where+are+we+now.">Oocyte cryopreservation: where are we now.</a> Human Reproduction Update. 22 (4), 440-449 (2016).</li></ol>

I dette manuskriptet viste vi en detaljert laboratorieprotokoll for legemiddelfri IVA. Den legemiddelfrie IVA er en ny tilnærming til ufruktbarhet behandling for POR pasient med avtagende ovarie reserve for å fremme sekundære follikler vekst, noe som resulterer i å gi mer modne oocytter etter ovarial stimulering og økende i vellykket graviditet20. I 15 POR-pasienter med avtagende ovariereservat oppnådde denne tilnærmingen en spontan graviditet, in vitro befruktning-embryooverføring tillot ...

Ovariefunksjonen avtar gradvis under aldring og noen patofysiologiske tilstander, inkludert karyotype abnormitet, autoimmune sykdommer, kjemo- og strålingsterapier og eggstokkoperasjoner. Ufrivillig bevaring er en av de beste alternativene for ugifte kvinner med alvorlig ovarial dysfunksjon for å bevare sitt potensial for fremtidig graviditet. For fruktbarhet bevaring, for tiden to metoder er tilgjengelig for det meste i onco-fruktbarhet feltet. Oocyte kryopreservering er en veletablert prosedyre for fertilitet bevaring og mange vellykkede tilfeller har blitt rapportert1,2. På den annen side ble ovarian vev kryopreservering også etablert for fruktbarhet bevaring hos kreftpasienter, men det er fortsatt en eksperimentell strategi3,4. I begge metoder er flere antall modne oocytter nødvendig for at graviditet skal oppstå. Generelt viste pasienter med for tidlig ovarialinsuffisiens (POI), som blir amenoré før 40 år, og middelaldrende kvinner med lav eggstokkreserve dårlig eggstokkrespons (POR) til eggstokkstimulering for å gi modne oocytter5,6,7. Videre viste unge pasienter med et lavt antall antralsekkene også POR til eggstokkstimulering7. Disse pasientene har svært begrenset antall gjenvinnbare oocytter selv etter riktig ovarial hyperstimulering, og krever dermed flere dyre prosedyrer for å sikre et tilstrekkelig antall oocytter for graviditet.
Oocyttdonasjon etterfulgt av in vitro befruktning (IVF) med mannens sæd- og embryooverføring (ET) er det eneste alternativet for disse POI- og POR-pasientene som har problemer med å skaffe sine egne oocytter8,9,10. Oocyttdonasjon er imidlertid komplisert av etiske problemer samt autoimmune og graviditetskomplikasjoner11,12,13,14. For å løse disse problemene, etableringen av ufruktbarhet behandling ved hjelp av pasientens egne oocytter er ønsket. For POI-pasienter har vi utviklet in vitro aktivering (IVA) tilnærming for å tillate vellykket follikkel vekst og generering av modne oocytter, fører en rekke svangerskap og leveranser15. I IVA fragmenterte vi ovariebarker etter fjerning av eggstokkene under laparoskopisk kirurgi og dyrket dem i to dager for å aktivere follikler av Akt-stimulerende stoffer og deretter utføre heterotoptransplantasjon tilbake i kunstige poser laget under serosa av fallopiske rør under andre laparoskopisk kirurgi15. Denne prosedyren fremmet vekst av primordiale, primære og sekundære follikler etter ovarial cortex fragmentering for å fremme Hippo signalforstyrrelser16, etterfulgt av to dagers kultur med Akt signalstimulatorer17.
I motsetning til alvorlige POI-tilfeller har POR-pasienter med redusert eggstokkreserve flere sekundære follikler. Fordi Hippo signalisering forstyrrelser alene er effektiv i å fremme sekundær follikkel vekst16, vi nylig demonstrert vellykket svangerskap og leveranser for POR pasienter ved hjelp av den legemiddelfrie IVA prosedyren involverer kortikale fragmentering og ortopedisk podning uten behandling av Akt stimulerende legemidler. Legemiddelfri IVA stimulerer tidlig stadium av eggstokksekkene til å utvikle seg til preantral follikkelstadium etter bare en operasjon og økte antall gjenvunne oocytter for IVF-embryooverføring15,18. Den legemiddelfrie IVA-tilnærmingen har flere fordeler sammenlignet med vår opprinnelige IVA med 1) å unngå potensielt follikkeltap under kultur, 2) minimere invasivitet og kostnader ved den andre operasjonen, 3) som bare involverer kortsiktig sengestøtte etter operasjonen og 4) potensial for spontan graviditet på grunn av ortotopisk podning. Vi publiserte nylig en videoartikkel som viser kirurgiske prosedyrer for legemiddelfri IVA19 og detaljerte protokoller for eggstokkstimulering etter operasjonen20. Her presenterer vi detaljer om laboratoriemetoder som kreves for legemiddelfri IVA.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4.5 onz specimen container</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>354013</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60mm dish</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>351007</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 x 50 cm sterile drape</td>
			<td>HOGY Medical</td>
			<td>SR-823</td>
			<td>Any type of sterile produsts may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pippete</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>357575</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors, Curved</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#14224-G</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>TOKAI HIT</td>
			<td>TPiE-SP</td>
			<td>Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin Solution</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td>Medium for handling ovarian tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVA cannule</td>
			<td>KITAZATO</td>
			<td>446030 IVA-6030E</td>
			<td>Specific cannula for tissue autografting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KAI medical Disposable scalpel</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#5 10-A</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors, Curved</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#503364</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium-HEPES</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>Medium for handling ovarian tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Osaki Medical</td>
			<td>15004</td>
			<td>Any type of sterile produsts may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiss Tweezers, Curved Tips</td>
			<td>KAI</td>
			<td>#504505</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation in patients with severe ovarian dysfunction

Ovariefunksjonen avtar gradvis under aldring og i noen patofysiologiske tilstander, inkludert karyotype abnormitet, autoimmune sykdommer, kjemo- og strålebehandlinger, samt eggstokkoperasjoner. Hos ugifte kvinner med alvorlig ovarial dysfunksjon, fruktbarhet bevaring er viktig for fremtidige svangerskap. Selv om oocytt kryopreservering er en etablert metode for bevaring av fruktbarhet, disse pasientene kunne bare bevare et begrenset antall oocytter selv etter ovarial hyperstimulering, noe som fører til gjentatte stimuleringer for å sikre tilstrekkelig oocytter for å garantere fremtidig graviditet. For å løse dette problemet har vi nylig utviklet en legemiddelfri in vitro-aktiveringsprosedyre (IVA), som gjør det mulig for oss å stimulere tidlige stadier av eggstokksekkene til å utvikle seg til preantral follikkelstadiet. Disse preantrale folliklene kan reagere på den unike protokollen for gonadotropinstimulering, noe som resulterer i økt antall gjenvunne oocytter per ovarialstimulering for kryopreservering. Den legemiddelfrie IVA besto av kirurgisk tilnærming og eggstokkstimulering. Vi fjernet en del av cortex fra en eller begge eggstokkene fra pasienter under laparoskopisk kirurgi. Eggstokkens kortikale vev ble kuttet i små terninger for å forstyrre Hippo-signalveien og stimulere utviklingen av tidlige follikler. Disse kubene ble podet ortopedisk inn i gjenværende eggstokkene så vel som under serosa av begge fallopiske rør. Vi har allerede publisert den kirurgiske prosedyren for den legemiddelfrie IVA og protokollen for påfølgende eggstokkstimulering, men her presenterer vi detaljene i laboratoriemetoder som kreves for legemiddelfri IVA.

I den første utgivelsen av IVA-tilnærmingen15transplanterte vi eggstokkkortikale kuber en etter en inn i podningsstedene under laparoskopisk kirurgi (Figur 1A). Fordi 100-150 eggstokkkuber ble brukt, tok det 3-4 timer for vevtransplantasjon under laparoskopisk kirurgi. Også noen eggstokk kuber gikk tapt før podning. Fordi IVA-kanylen kan overføre 20-30 kuber til et podningssted på en gang (figur 1B), kan vi forkorte operasjonstiden ...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction at JoVE.com

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Vi presenterer detaljer om laboratorieprosedyrer for legemiddelfri in vitro-aktivering (IVA) av eggstokksekkene for pasienter med alvorlig ovarial dysfunksjon. Denne metoden kan øke antall gjenvinnbare oocytter per ovarial hyperstimulering og dra nytte fruktbarhet bevaring for disse pasientene.

Ufrivillig bevaring hos pasienter med alvorlig ovarial dysfunksjon

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Målet med denne filmen er å demonstrere prosedyren for vår nye tilnærming til pasienter med ovarial dysfunksjon. Ovariefunksjonen avtar gradvis under aldring og noen patofysiologiske tilstander, inkludert karyotype abnormitet, autoimmune sykdommer, kjemo- og strålebehandlinger og eggstokkoperasjoner. De fleste middelaldrende kvinner med lavt eggstokkreservat viste dårlig ovarial respons på eggstokkstimulering for å gi modne oocytter.Videre viste unge pasienter med et lavt antall antralsekkene også dårlig eggstokkrespons på eggstokkstimulering. Ufrivillig bevaring er viktig for å redde den potensielle OCS for fremtidig graviditet. For fruktbarhet bevaring, oocyte kryopreservering ble etablert.Imidlertid kan disse dårlige ovarieresponspasientene hente et svært begrenset antall oocytter selv etter riktig eggstokkstimulering, noe som fører til kravet om gjentatte dyre prosedyrer for å sikre et tilstrekkelig antall oocytter for å garantere en baby. For å løse disse problemene har vi nylig utviklet in vitro-aktiveringen, IVA-prosedyren, som gjør det mulig for oss å stimulere den tidlige fasen av eggstokksekkene til å utvikle seg til pre-antral follikkelstadium. Den opprinnelige IVA-prosedyren kan fremme primordial, primær og sekundær follikkelvekst ved ovarial cortex fragmentering, noe som fører til flodhestsignalforstyrrelse.Dette etterfølges deretter av to dager med kultivering med Akt signalstimulator. Denne prosedyren er egnet for POI-pasienter med få gjenværende follikler. Denne prosedyren er imidlertid en overdreven behandling for pasienter som har flere sekundære follikler.For pasientene som har noen gjenværende sekundære follikler, etablerte vi metoden som kalles legemiddelfri IVA og har allerede testet muligheten for å fremme sekundær follikkelvekst ved bare å forstyrre flodhestsignaleringsveien. Vi har også hatt noen vellykkede tilfeller av levering av stofffri IVA. Vi har allerede publisert den kirurgiske prosedyren for stoffet fri IVA og protokollen for å følge ovarial stimulering.I denne videoen presenterer vi detaljene i laboratoriemetoder som kreves for legemiddelfri IVA. Vi rekrutterte pasientene til legemiddelfri IVA basert på Bologna-kriteriene. Pasientene kan ha flere sekundære follikler.Først ble en del av cortex fjernet fra en eller begge eggstokkene ved laparoskopi. POR-pasienter er de som hadde mellomstor eggstokk. Hos de fleste pasientene hentet vi bare ut en del av kortikale vev fra eggstokkene på en eller begge sider.Ekstrahert kritisk vev ble umiddelbart overført til en kulturrett som inneholder kulturmedium med HEPES-buffer, og dissekerte dette lille vevet i små terninger for flodhestsignaleringsforstyrrelser. Detaljer om prosedyren vises i denne videoen. Hippo signalvei er viktig for å opprettholde optimal organstørrelse.Denne banen består av flere negative vekstregulatorer. Når flodhestsignaleringen er forstyrret, reduseres fosforyleringsnivåene til YAP, en av de negative vekstregulatorene som virker i en kinase-kaskade, og atomnivåene til YAP økes. YAP opptrer sammen med TEAD-transkripsjonsfaktorer for å øke nedstrøms CCN-vekstfaktor.På den annen side er aktinpolymerisering av kuleformvirkende, G-aktin, til den filamentøse formen, F-actin, viktig for vedlikehold og bevegelse av celleform. Tidligere rapportert induksjon av F-aktindannelse forstyrrer signalering og induserer overvekst i menneskelige HeLa celler. Vi har tidligere rapportert ovarial fragmentering øke F-aktin formasjon, og det fører til reduksjon av nivået av fosforylering av YAP.Det fører til økt uttrykk for CCN vekstfaktor. Etter kutting blir disse kubene podet inn i den gjenværende eggstokken. Denne prosedyren kan fremme den gjenværende sekundære follikkelveksten og føre til et økt antall modnet oocytt.Legemiddelfri IVA består av fire trinn. Vi har allerede publisert den kirurgiske prosedyren for legemiddelfri IVA. Vennligst referer til den litteraturen for ovarial cortex ekstraksjon og auto-podning.Her viser vi detaljprosedyrene for laboratoriemetoder som kreves for legemiddelfri IVA. I trinn en viser vi hvordan ovarian cortex fragmentering utføres. I trinn to viser vi hvordan du laster eggstokkkortikale kuber inn i enheten for transplantasjon, Her vil jeg vise ovarian cortex fragmentering.Denne studien ble godkjent av etisk komité for vårt institutt, og alle prosedyrer ble utført i samsvar med Code of Ethics of World Medical Association. Ovarian cortex fragmentering. Følgende verktøy kreves for dette trinnet: en tallerken, steril gasbind, fin saks, fine tang og skalpell.Vi bruker vanligvis denne typen tallerken og steril gasbind, men andre produkter som plast Petri-tallerken, glassfat, et cetera, kan også være egnet for denne prosedyren, og alle typer steril gasbind er også egnet. Vi anbefaler imidlertid sterkt bruk av denne formen av tang og skalpell. I tillegg, bruk varmeplaten for å opprettholde temperaturen på oppvasken som inneholder vev Plasser under den sterile gardinen.Kortikale vev overføres umiddelbart til parabolen som inneholder mHTF. Ta et bilde med pasientens navn for korrelering med pasientens data. Registrer størrelsen, tykkelsen og tilstanden til vevet.Fjern gjenværende medullavev. Før vevsfragmentering, fjern medullavevet. Sett cortex på den sterile gasbindet.Som vist i videoen, er gasbindet fuktet med medium. Under denne prosedyren, bruk medium med en engangspipette før overflaten av cortex tørkes ut. Fjern restvev med mikrosaks til tykkelsen når en til to millimeter.Hos POR-pasienter ligger sekundære follikler dypere enn en millimeter fra cortex overflate, så ikke gjør vevet mindre enn en millimeter i tykkelse. Klipp den ene siden av cortex av hvert vev i en stripe som måler en etter en etter fem millimeter for histologisk analyse for å bestemme tilstedeværelsen av gjenværende follikler. Sett denne stripen i 1,5 milliliterrør med kulturmedium og hold på fire grader Celsius til festing.Forberedelse av eggstokkkortikale kuber. Etter fjerning av medulla vev, er ovarial kortikale fragmentert for signalforstyrrelse. Først kutt cortex i en etter en med 10 millimeter strimler ved hjelp av skalpell.Klipp deretter disse strimlene i en millimeter kubet små terninger. I mediet er vevet glatt og vanskelig å kutte. For enkel kutting, kutt strimlene ved å trykke ned på skalpellen i stedet for ved å trekke på den.Etter kutting teller du antall kuber og forbereder automatisk podning. For å unngå endringer av osmotisk trykk i mediet, legg til mediet i moderasjon før vev automatisk podning. For eggstokk automatisk podning gir bruk av en kanyleformet enhet enklere lasting.Dette trinnet inneholder to trinn. Tidligere ble eggstokkfragmenter transplantert en etter en ved hjelp av tang under laparoskopi. Det tok imidlertid omtrent tre til fire timer før operasjonen ble fullført.I denne prosedyren bruker vi en kanyleformet enhet laget av en indre sprøyte og en ytre sylinder. Dette er en enkel form og lett. I tillegg er spissen av denne enheten av rund form.Det er ingen skarpe punkter som unngår skade på transplantasjonsstedet. Ved hjelp av denne typen enhet kan du få opptil 20 til 30 kuber til implantasjonsstedet samtidig. Dette fører til effektiv transplantasjon og reduksjon i operasjonstiden.Lasting av eggstokkkortikale fragmenter. Tilberedning av IVA-kanyle. Forbered IVA-kanylen og vask denne enheten i mHTF.Gjenta aspirat og utslippsmedium flere ganger. Fyll spissen av en kannular ved å aspirere ca 100 mikroliter av mediet. Dette er for å unngå at kubene trekker ut under vevsfragmentbelastning.Laster kortikale kuber. Velg en terning med fine tang og legg den i spissen av kannen. Antall automatisk podede kuber avhenger av størrelsen på transplantasjonsstedet.Gjenta innlastingen av kubene én etter én til du når målnummeret. Etter å ha lastet kubene, send kanylen forsiktig til kirurgen. Hvis podningsstedet ikke er klart, skal den delen av kannularet som inneholder eggstokkkuber holdes av fingrene for å unngå en reduksjon i temperaturen på kuber.Vi har allerede rapportert de kliniske resultatene av legemiddelfri IVA. Se den publiserte artikkelen om kliniske resultater. Denne laboratorieprotokollen krevde 30 til 50 minutter for en pasient.Gjennomsnittstiden er i 10 til 20 minutter for eggstokk cortex fragmentering, og 20 til 30 minutter for lasting av disse fragmentene til IVA-kanyle. Dette avhenger av vevsstørrelsen, men nesten alle pasienter kan fullføres i denne gjennomsnittlige tiden. Konklusjoner. Legemiddelfri IVA er en ny tilnærming til ufruktbarhet behandling for POR pasienter med avtagende ovariereservat.Disse laboratorieprotokollene fører til reduksjon av både tid som kreves for kirurgi og tap av fragmenter under transplantasjon. Laboratorieteknikken til legemiddelfri IVA kan bli grunnlaget for fremtidig anvendelse av eggstokkvevskultur for å oppnå modne oocytter uten podning.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

En Contusion modell av alvorlig ryggmargsskade i rotter

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Vurdering av vaskulær funksjon hos pasienter med kronisk nyresykdom

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Funksjonell Menneskelig Liver Bevaring og gjenoppretting ved hjelp av Subnormothermic Machine Perfusjons

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Innføring av Intracapsular Rotary-kutt prosedyrer (IRCP): en endret Hysteromyomectomy prosedyrer tilrettelegge fertilitet bevaring

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Semi kvantitativ vurdering bruker [18F] FDG Tracer hos pasienter med alvorlig hjerneskade

Patients with severe traumatic brain injury (sTBI) have difficulty knowing whether they are accurately expressing their thoughts and emotions because of ...

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Natrium taurocholat indusert alvorlig akutt pankreatitt hos C57BL/6 mus

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Digital Handwriting Analysis of Characters in Chinese Patients with Mild Cognitive Impairment

Digital håndskriftanalyse av tegn hos kinesiske pasienter med mild kognitiv svekkelse

An increasing amount of evidence shows that cognitive deficits and movement dysfunctions are not separated. Patients with mild cognitive impairment (MCI) ...

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Ufrivillig bevaring gjennom Oocyte Vitrification: Kliniske og laboratorieperspektiver

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Fertility Sparing Procedure using Carbon Dioxide Fiber Laser Vaporization of Ovarian Endometrioma

Ufrivillig Sparing Prosedyre ved hjelp av Karbondioksid Fiber Laser Fordampning av Ovarie Endometrioma

The surgical management of endometrioma is still a matter of debate. Cystectomy, which is recognized as the standard technique, seems to be associated ...