Name: fertility preservation in patients with severe ovarian dysfunction
Uploaded: 2021-03-25T13:00:00
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Agradecemos a Tatsuji Ihana, Sachiyo Kurimoto, Kazuko Takahasih, Yuki Yoshizawa, Maho Arashi, Kentaro Fujita, Erina Kudo, Yuka Kurimoto e Mayuko Wakatsuki por apoiarem o procedimento IVA livre de drogas e prof. Aaron J.W. Hsueh (Stanford University School of Medicine, Stanford, CA) pela leitura e edição críticas do manuscrito. Agradecemos também a Rebecca Truman e Gregory Truman por inserirem a narração inglesa. Este estudo foi apoiado pela The Japan Society for the Promotion of Science (JSPS), Scientific Research B (19H03801) e Challenging Exploratory Research (18K19624).

O consentimento informado por escrito foi obtido de cada paciente por com diminuição da reserva ovariana que se inscreveu no tratamento IVA livre de medicamentos. Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade Internacional de Saúde e Bem-Estar (nº 17-S-21). O ensaio clínico foi registrado sob o número UMIN000034464 e realizado de acordo com o Código de Ética da Associação Médica Mundial (Declaração de Helsinque).
1. Extração do córtex ovariano
<ol><li>Remova...

<ol>
	<li>Liang, T., Motan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mature+Oocyte+Cryopreservation+for+Fertility+Preservation.">Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).</li><li>Yoon, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+births+after+vitrification+of+oocytes+in+a+stimulated+in+vitro+fertilization-embryo+transfer+program.">Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization-embryo transfer program.</a> Fertility and Sterility. 79 (6), 1323-1326 (2003).</li><li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Livebirth+after+orthotopic+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue.">Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue.</a> Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).</li><li>Meirow, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+after+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue+in+a+patient+with+ovarian+failure+after+chemotherapy.">Pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a patient with ovarian failure after chemotherapy.</a> New England Journal of Medicine. 353 (3), 318-321 (2005).</li><li>De Vos, M., Devroey, P., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+ovarian+insufficiency.">Primary ovarian insufficiency.</a> Lancet. 376 (9744), 911-921 (2010).</li><li>Scott, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle-stimulating+hormone+levels+on+cycle+day+3+are+predictive+of+in+vitro+fertilization+outcome.">Follicle-stimulating hormone levels on cycle day 3 are predictive of in vitro fertilization outcome.</a> Fertility and Sterility. 51 (4), 651-654 (1989).</li><li>Ferraretti, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+consensus+on+the+definition+of+'poor+response'+to+ovarian+stimulation+for+in+vitro+fertilization:+the+Bologna+criteria.">ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria.</a> Human Reproduction. 26 (7), 1616-1624 (2011).</li><li>Huhtaniemi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+Molecular+Pathophysiology,+Genetics,+and+Treatment+of+Primary+Ovarian+Insufficiency.">Advances in the Molecular Pathophysiology, Genetics, and Treatment of Primary Ovarian Insufficiency.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism. 29 (6), 400-419 (2018).</li><li>M&#281;czekalski, B., Maciejewska-Jeske, M., Podfigurna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproduction+in+premature+ovarian+insufficiency+patients+-+from+latest+studies+to+therapeutic+approach.">Reproduction in premature ovarian insufficiency patients - from latest studies to therapeutic approach.</a> Prz Menopauzalny. 17 (3), 117-119 (2018).</li><li>Baker, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+plans+and+family-building+options+for+women+with+primary+ovarian+insufficiency.">Life plans and family-building options for women with primary ovarian insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 29 (4), 362-372 (2011).</li><li>Englert, Y., Govaerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation:+particular+technical+and+ethical+aspects.">Oocyte donation: particular technical and ethical aspects.</a> Human Reproduction. 13, 90-97 (1998).</li><li>Englert, Y., Rodesch, C., Laruelle, C., Govoerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation:+ethical+aspects+related+to+the+donor.">Oocyte donation: ethical aspects related to the donor.</a> Contraception, Fertilite, Sexualite. 25 (3), 251-257 (1997).</li><li>Storgaard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obstetric+and+neonatal+complications+in+pregnancies+conceived+after+oocyte+donation:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Obstetric and neonatal complications in pregnancies conceived after oocyte donation: a systematic review and meta-analysis.</a> BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 124 (4), 561-572 (2017).</li><li>Storgaard, M., Malchau, S., Loft, A., Larsen, E., Pinborg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation+is+associated+with+an+increased+risk+of+complications+in+the+pregnant+woman+and+the+fetus.">Oocyte donation is associated with an increased risk of complications in the pregnant woman and the fetus.</a> Ugeskrift for Laeger. 179 (11), (2017).</li><li>Kawamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippo+signaling+disruption+and+Akt+stimulation+of+ovarian+follicles+for+infertility+treatment.">Hippo signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles for infertility treatment.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (43), 17474-17479 (2013).</li><li>Hsueh, A. J., Kawamura, K., Cheng, Y., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraovarian+control+of+early+folliculogenesis.">Intraovarian control of early folliculogenesis.</a> Endocrine Reviews. 36 (1), 1-24 (2015).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dormant+ovarian+follicles+to+generate+mature+eggs.">Activation of dormant ovarian follicles to generate mature eggs.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (22), 10280-10284 (2010).</li><li>Suzuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+fertility+preservation+following+ovarian+tissue+vitrification+in+patients+with+primary+ovarian+insufficiency.">Successful fertility preservation following ovarian tissue vitrification in patients with primary ovarian insufficiency.</a> Human Reproduction. 30 (3), 608-615 (2015).</li><li>Tanaka, Y., Hsueh, A. J., Kawamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+approaches+of+drug-free+in+activation+and+laparoscopic+ovarian+incision+to+treat+patients+with+ovarian+infertility.">Surgical approaches of drug-free in activation and laparoscopic ovarian incision to treat patients with ovarian infertility.</a> Fertility and Sterility. , (2020).</li><li>Kawamura, K., Ishizuka, B., Hsueh, A. J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-free+in-vitro+activation+of+follicles+for+infertility+treatment+in+poor+ovarian+response+patients+with+decreased+ovarian+reserve.">Drug-free in-vitro activation of follicles for infertility treatment in poor ovarian response patients with decreased ovarian reserve.</a> Reproductive Biomedicine Online. 40 (2), 245-253 (2020).</li><li>Haino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Follicular+Localization+in+Human+Ovarian+Cortex+for+Vitrification.">Determination of Follicular Localization in Human Ovarian Cortex for Vitrification.</a> Journal of Adolescent and Young Adult Oncology. 7 (1), 46-53 (2018).</li><li>Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+ovarian+function+in+sheep+after+ovariectomy+and+transplantation+of+autografts+stored+at+-196+C.">Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at -196 C.</a> Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).</li><li>Qin, Y., Jiao, X., Simpson, J. L., Chen, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+primary+ovarian+insufficiency:+new+developments+and+opportunities.">Genetics of primary ovarian insufficiency: new developments and opportunities.</a> Human Reproduction Update. 21 (6), 787-808 (2015).</li><li>Domniz, N., Meirow, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Premature+ovarian+insufficiency+and+autoimmune+diseases.">Premature ovarian insufficiency and autoimmune diseases.</a> Best Practice &amp; Research: Clinical Obstetrics &amp; Gynaecology. 60, 42-55 (2019).</li><li>Laven, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Ovarian+Insufficiency.">Primary Ovarian Insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 34 (4), 230-234 (2016).</li><li>Grynberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertility+preservation+in+Turner+syndrome.">Fertility preservation in Turner syndrome.</a> Fertility and Sterility. 105 (1), 13-19 (2016).</li><li>Tomao, F., Spinelli, G. P., Panici, P. B., Frati, L., Tomao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+function,+reproduction+and+strategies+for+fertility+preservation+after+breast+cancer.">Ovarian function, reproduction and strategies for fertility preservation after breast cancer.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 76 (1), 1-12 (2010).</li><li>Kim, S., Lee, Y., Lee, S., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+tissue+cryopreservation+and+transplantation+in+patients+with+cancer.">Ovarian tissue cryopreservation and transplantation in patients with cancer.</a> Obstetrics &amp; Gynecology Science. 61 (4), 431-442 (2018).</li><li>Donnez, J., Dolmans, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+tissue+freezing:+current+status.">Ovarian tissue freezing: current status.</a> Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 27 (3), 222-230 (2015).</li><li>Wu, R. C., Kuo, P. L., Lin, S. J., Liu, C. H., Tzeng, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X+chromosome+mosaicism+in+patients+with+recurrent+abortion+or+premature+ovarian+failure.">X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure.</a> Journal of the Formosan Medical Association. 92 (11), 953-956 (1993).</li><li>De Munck, N., Vajta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficiency+of+oocyte+vitrification.">Safety and efficiency of oocyte vitrification.</a> Cryobiology. 78, 119-127 (2017).</li><li>Argyle, C. E., Harper, J. C., Davies, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+cryopreservation:+where+are+we+now.">Oocyte cryopreservation: where are we now.</a> Human Reproduction Update. 22 (4), 440-449 (2016).</li></ol>

Neste manuscrito, mostramos um protocolo laboratorial detalhado para IVA livre de drogas. O IVA sem medicamentos é uma nova abordagem do tratamento da infertilidade para pacientes com POR com diminuição da reserva ovariana para promover o crescimento de folículos secundários, resultando em produzir oócitos mais maduros após a estimulação ovariana e aumentando na gravidez bem sucedida20. Em 15 pacientes por com diminuição da reserva ovariana, essa abordagem alcançou uma gravidez espont?...

A função ovariana diminui progressivamente durante o envelhecimento e algumas condições fisioterológicas, incluindo anormalidade do karyótipo, doenças autoimunes, terapias de quimioterapia e radiação e cirurgias ovarianas. A preservação da fertilidade é uma das melhores opções para mulheres solteiras com disfunção ovariana severa para preservar seu potencial para futura gravidez. Para a preservação da fertilidade, atualmente dois métodos estão disponíveis principalmente no campo onco-fertilidade. A criopreservação oócito é um procedimento bem estabelecido para a preservação da fertilidade e muitos casos de sucesso foram relatados1,2. Por outro lado, a criopreservação do tecido ovariano também foi estabelecida para preservação da fertilidade em pacientes com câncer, mas ainda é uma estratégia experimental3,4. Em ambos os métodos, são necessários múltiplos números de oócitos maduros para que a gravidez ocorra. Geralmente, pacientes com insuficiência ovariana prematura (POI), que se tornam amorréia antes dos 40 anos de idade, e mulheres de meia-idade com baixa reserva ovariana apresentaram baixa resposta ovariana (POR) à estimulação ovariana por produzir oócitos maduros5,6,7. Além disso, pacientes jovens com baixo número de folículos antral também mostraram POR para a estimulação ovariana7. Esses pacientes têm oócitos muito limitados mesmo após a hiperestimulação ovariana adequada, exigindo assim múltiplos procedimentos caros para garantir um número suficiente de oócitos para a gravidez.
A doação de oócitos seguida de fertilização in vitro (FIV) com a transferência de espermatozoides e embriões do marido (ET) é a única opção para esses pacientes POI e POR que têm dificuldades para obter seus próprios oócitos8,9,10. No entanto, a doação de oócitos é complicada por questões éticas, bem como complicações autoimunes e de gravidez11,12,13,14. Para resolver essas questões, deseja-se o estabelecimento do tratamento de infertilidade utilizando o próprio oócito dos pacientes. Para pacientes com POI, desenvolvemos a abordagem de ativação in vitro (IVA) para permitir o crescimento bem-sucedido do folículo e a geração de oócitos maduros, liderando uma série de gestações e partos15. No IVA, fragmentamos córtex ovariano após a remoção de ovários sob cirurgia laparoscópica e os cultivaram por dois dias para ativar folículos por drogas estimulantes de Akt e, em seguida, realizar enxerto heterotópico de volta em bolsas artificiais feitas sob a serosa de tubos de Falópio sob a segunda cirurgia laparoscópica15. Este procedimento promoveu o crescimento de folículos primordiais, primários e secundários após a fragmentação do córtex ovariano para promover a interrupção da sinalização de Hipopótamo16,seguido por dois dias de cultura com estimuladores de sinalização Akt17.
Em contraste com os casos graves de POI, os pacientes com reserva ovariana reduzida têm múltiplos folículos secundários. Como a interrupção da sinalização de Hipopótamo por si só é eficaz na promoção do crescimento secundário do folículo16,recentemente demonstramos gestações e entregas bem sucedidas para pacientes por usando o procedimento IVA livre de drogas envolvendo fragmentação cortical e enxerto ortotópico sem tratamento das drogas estimulantes Akt. IVA livre de drogas estimula o estágio inicial dos folículos ovarianos a se desenvolverem para o estágio do folículo pré-cirúrgico após apenas uma cirurgia e aumentou o número de oócitos recuperados para transferência de embriões de FIV15,18. A abordagem IVA livre de medicamentos tem várias vantagens em comparação com o nosso IVA original por 1) evitar a perda potencial de folículo durante a cultura, 2) minimizar a invasividade e os custos da segunda cirurgia, 3) envolvendo apenas repouso pós-cirurgia de curto prazo e 4) potencial de gravidez espontânea devido ao enxerto ortotópico. Recentemente publicamos um artigo em vídeo mostrando os procedimentos cirúrgicos do IVA19 sem drogas e protocolos detalhados de estimulação ovariana após a cirurgia20. Aqui, apresentamos detalhes dos métodos laboratoriais necessários para o IVA livre de drogas.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4.5 onz specimen container</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>354013</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60mm dish</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>351007</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 x 50 cm sterile drape</td>
			<td>HOGY Medical</td>
			<td>SR-823</td>
			<td>Any type of sterile produsts may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pippete</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>357575</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors, Curved</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#14224-G</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>TOKAI HIT</td>
			<td>TPiE-SP</td>
			<td>Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin Solution</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td>Medium for handling ovarian tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVA cannule</td>
			<td>KITAZATO</td>
			<td>446030 IVA-6030E</td>
			<td>Specific cannula for tissue autografting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KAI medical Disposable scalpel</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#5 10-A</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors, Curved</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#503364</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium-HEPES</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>Medium for handling ovarian tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Osaki Medical</td>
			<td>15004</td>
			<td>Any type of sterile produsts may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiss Tweezers, Curved Tips</td>
			<td>KAI</td>
			<td>#504505</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation in patients with severe ovarian dysfunction

A função ovariana diminui progressivamente durante o envelhecimento e em algumas condições fisioterológicas, incluindo anormalidade do karyótipo, doenças autoimunes, quimioterapia e radioterapia, bem como cirurgias ovarianas. Em mulheres solteiras com disfunção ovariana grave, a preservação da fertilidade é importante para futuras gestações. Embora a criopreservação de oócito seja um método estabelecido para a preservação da fertilidade, esses pacientes só poderiam preservar um número limitado de oócitos mesmo após a hiperestimulação ovariana, levando a estimulações repetidas para garantir oócitos suficientes para garantir a gravidez futura. Para resolver esse problema, desenvolvemos recentemente um procedimento de ativação in vitro (IVA) livre de drogas, que nos permite estimular estágios iniciais de folículos ovarianos a se desenvolverem até a fase do folículo pré-natural. Estes folículos pré-orais podem responder ao protocolo único de estimulação da gonadotropina, resultando em um aumento do número de oócitos recuperados por estimulação ovariana para criopreservação. O IVA livre de drogas compreendeu-se da abordagem cirúrgica e estimulação ovariana. Removemos uma parte do córtex de um ou ambos os ovários de pacientes sob cirurgia laparoscópica. Os tecidos cortical ovarianos foram cortados em pequenos cubos para interromper a via de sinalização do Hipopótamo e estimular o desenvolvimento de folículos em estágio inicial. Estes cubos foram enxertados ortotropicamente em ovários remanescentes, bem como sob a serosa de ambos os tubos de Falópio. Já publicamos o procedimento cirúrgico da IVA livre de drogas e o protocolo de estimulação ovariana subsequente, mas aqui apresentamos os detalhes dos métodos laboratoriais necessários para a IVA livre de drogas.

Na primeira publicação da abordagem IVA15,transplantamos os cubos cortical ovariano um a um nos locais de enxerto sob cirurgia laparoscópica(Figura 1A). Como 100-150 cubos ovarianos foram usados, levou de 3 a 4 horas para enxerto de tecido sob cirurgia laparoscópica. Além disso, alguns cubos ovarianos foram perdidos antes do enxerto. Como a cânula IVA poderia transferir 20-30 cubos para um local de enxerto de uma só vez(Figura 1B),...

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Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Apresentamos detalhes de procedimentos laboratoriais para ativação in vitro livre de drogas (IVA) de folículos ovarianos para pacientes com disfunção ovariana grave. Este método poderia aumentar o número de oócitos recuperáveis por hiperestimulação ovariana e beneficiar a preservação da fertilidade para esses pacientes.

Preservação da fertilidade em pacientes com disfunção ovariana grave

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

O objetivo deste filme é demonstrar o procedimento de nossa nova abordagem para pacientes com disfunção ovariana. A função ovariana diminui progressivamente durante o envelhecimento e algumas condições fisiofisiológicas, incluindo anormalidade do karyótipo, doenças autoimunes, terapias de quimioterapia e radiação e cirurgias ovarianas. A maioria das mulheres de meia-idade com baixa reserva ovariana mostrou baixa resposta ovariana à estimulação ovariana por produzir oócitos maduros.Além disso, pacientes jovens com baixo número de folículos antral também apresentaram baixa resposta ovariana à estimulação ovariana. A preservação da fertilidade é importante para salvar o potencial OCS para futura gravidez. Para preservação da fertilidade, foi estabelecida criopreservação oócida.No entanto, esses pacientes de resposta ovariana pobres poderiam recuperar um número muito limitado de oócitos mesmo após a estimulação ovariana adequada, levando à exigência de procedimentos caros repetidos para garantir um número suficiente de oócitos para garantir um bebê. Para resolver essas questões, desenvolvemos recentemente a ativação in vitro, procedimento IVA, que nos permite estimular o estágio inicial dos folículos ovarianos a se desenvolverem até o estágio folículo pré-antral. O procedimento original de IVA pode promover o crescimento primordial, primário e secundário do folículo por fragmentação do córtex ovariano, levando à interrupção da sinalização do hipopótamo.Isso é então seguido por dois dias de cultivo com estimulador de sinalização Akt. Este procedimento é adequado para pacientes poi com poucos folículos residuais. No entanto, este procedimento é um tratamento excessivo para os pacientes que possuem múltiplos folículos secundários.Para os pacientes que possuem alguns folículos secundários residuais, estabelecemos o método chamado IVA livre de drogas e já testamos a possibilidade de promover o crescimento secundário do folículo, interrompendo apenas a via de sinalização do hipopótamo. Também tivemos alguns casos bem sucedidos de entrega por IVA sem drogas. Já publicamos o procedimento cirúrgico da IVA livre de drogas e o protocolo de seguir a estimulação ovariana.Neste vídeo, apresentamos os detalhes dos métodos laboratoriais necessários para o IVA livre de drogas. Recrutamos os pacientes para IVA sem drogas com base nos critérios de Bolonha. Os pacientes podem ter múltiplos folículos secundários.No início, parte do córtex foi removida de um ou ambos os ovários por laparoscopia. Os pacientes por são aqueles que tinham ovários de médio porte. Na maioria dos pacientes, extraímos apenas parte dos tecidos cortical dos ovários em um ou ambos os lados.Tecidos críticos extraídos foram imediatamente transferidos para um prato de cultura contendo meio de cultura com tampão HEPES, e dissecado este pequeno tecido em pequenos cubos para interrupção da sinalização de hipopótamo. Detalhes do procedimento serão mostrados neste vídeo. A via de sinalização do hipopótamo é essencial para manter o tamanho ideal do órgão.Esse caminho consiste em vários reguladores de crescimento negativos. Uma vez que a sinalização do hipopótamo é interrompida, os níveis de fosforilação do YAP, um dos reguladores de crescimento negativo que atuam em uma cascata de quinase, é diminuído e os níveis nucleares de YAP são aumentados. A YAP atua em conjunto com fatores transcricionais TEAD para aumentar o fator de crescimento da CCN a jusante.Por outro lado, a polimerização atuarina da atuação globular, G-actin, à forma filamentosa, F-actin, é importante para a manutenção e locomoção da forma celular. A indução relatada anteriormente da formação de F-actin interrompe a sinalização do hipopótamo e induz o crescimento excessivo em células hela humanas. Anteriormente, relatamos que a fragmentação ovariana aumenta a formação de F-actin, e isso leva à diminuição do nível de fosforilação do YAP.Leva ao aumento da expressão do fator de crescimento da CCN. Após o corte, esses cubos são enxertados no ovário restante. Este procedimento pode promover o crescimento residual secundário do folículo e levar a um aumento do número de oócitos maduros.IVA livre de drogas consiste em quatro passos. Já publicamos o procedimento cirúrgico para IVA livre de drogas. Por favor, consulte essa literatura para extração do córtex ovariano e enxerto automático.Aqui mostramos os procedimentos detalhados dos métodos laboratoriais necessários para o IVA livre de drogas. No primeiro passo, mostramos como a fragmentação do córtex ovariano é realizada. Na segunda etapa, mostramos como carregar os cubos corticais ovarianos no dispositivo para transplante, aqui, vou mostrar a fragmentação do córtex ovariano.Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do nosso instituto, e todos os procedimentos foram realizados de acordo com o Código de Ética da Associação Médica Mundial. Fragmentação do córtex ovariano. As seguintes ferramentas necessárias para esta etapa: um prato, gaze estéril, tesoura fina, fórceps finos e bisturi.Geralmente usamos esse tipo de prato e gaze estéril, mas outros produtos como placa de petri de plástico, placa de vidro, etc, também podem ser adequados para este procedimento, e qualquer tipo de gaze estéril também é adequado. No entanto, recomendamos fortemente o uso desta forma de fórceps e bisturi. Além disso, use a placa quente para manter a temperatura dos pratos contendo tecidos Coloque sob a cortina estéril.Os tecidos cortical são imediatamente transferidos para o prato contendo mHTF. Tire uma foto com o nome do paciente por se correlacionar com os dados do paciente. Regisso tamanho, espessura e condição do tecido.Remova tecido de medula residual. Antes da fragmentação do tecido, remova o tecido medular. Coloque o córtex na gaze estéril.Como mostrado no vídeo, a gaze é umedeçada com meio. Durante este procedimento, aplique o meio com uma pipeta descartável antes que a superfície do córtex seja seca. Remova tecidos residuais com micro tesouras até que a espessura atinja de um a dois milímetros.Em pacientes com POR, os folículos secundários estão localizados mais fundo do que um milímetro da superfície do córtex, por isso não fazem com que os tecidos fiquem a menos de um milímetro de espessura. Corte um lado do córtex de cada tecido em uma tira medindo um por um por cinco milímetros para análise histológica para determinar a presença de folículos residuais. Coloque esta tira em tubo de 1,5 mililitro com meio de cultura e mantenha a quatro graus Celsius até a fixação.Preparação de cubos cortical ovarianos. Após a remoção do tecido medular, o cortical ovariano é fragmentado para interrupção da sinalização do hipopótamo. No início, corte o córtex em tiras de um por 10 milímetros usando bisturi.Em seguida, corte essas tiras em um milímetro cubos pequenos. No meio, o tecido é escorregadio e difícil de cortar. Para um corte fácil, corte as tiras pressionando o bisturi em vez de puxando-o.Após o corte, conte o número de cubos e prepare o enxerto automático. Para evitar as alterações da pressão osmótica no meio, adicione o meio com moderação antes do enxerto automático do tecido. Para enxerto automático ovariano, o uso de um dispositivo em forma de cânula permite um carregamento mais fácil.Esta etapa contém dois passos. Anteriormente, fragmentos ovarianos eram transplantados um a um usando fórceps sob laparoscopia. No entanto, levou cerca de três a quatro horas para a cirurgia ser concluída.Neste procedimento, usamos um dispositivo em forma de cannular feito de uma seringa interna e um cilindro externo. Esta é uma forma simples e leve. Além disso, a ponta deste dispositivo é de uma forma redonda.Não há pontos afiados que evitem danos ao local do transplante. O uso deste tipo de dispositivo permite levar de 20 a 30 cubos para o local de implantação ao mesmo tempo. Isso leva a um transplante eficiente e à redução do tempo de cirurgia.Carregando fragmentos cortical ovarianos. Preparação da cânula IVA. Prepare a cânula IVA e lave este dispositivo em mHTF.Repita aspirar e descarregar o meio várias vezes. Encha a ponta de um cannular aspirando cerca de 100 microliters do meio. Isto é para evitar que os cubos se retirem durante o carregamento do fragmento de tecido.Carregando cubos corticais. Escolha um cubo por fórceps finos e coloque-o na ponta do cannular. O número de cubos auto-enxertados depende do tamanho do local do transplante.Repita carregar os cubos um a um até atingir o número de destino. Depois de carregar os cubos, passe a cânula para o cirurgião cuidadosamente. Se o local de enxerto não estiver pronto, a parte do cannular que contém cubos ovarianos deve ser mantida pelos dedos para evitar uma diminuição na temperatura dos cubos.Já reportamos os resultados clínicos da IVA livre de drogas. Consulte o artigo publicado sobre resultados clínicos. Este protocolo de laboratório exigiu de 30 a 50 minutos para um paciente.O tempo médio é de 10 a 20 minutos para fragmentação do córtex ovariano, e de 20 a 30 minutos para carregar esses fragmentos na cânula IVA. Isso depende do tamanho do tecido, mas quase todos os pacientes podem ser concluídos neste tempo médio. Conclusões. IVA sem drogas é uma nova abordagem do tratamento da infertilidade para pacientes com POR com diminuição da reserva ovariana.Estes protocolos laboratoriais levam à redução do tempo necessário para a cirurgia e à perda de fragmentos durante o transplante. A técnica laboratorial de IVA livre de drogas pode se tornar a base da aplicação futura da cultura do tecido ovariano para obter oócitos maduros sem enxerto.

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