Name: fertility preservation in patients with severe ovarian dysfunction
Uploaded: 2021-03-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction at JoVE.com

Мы благодарим Тацудзи Ихану, Сачиё Куримото, Кадзуко Такахасиха, Юки Йошизаву, Махо Араши, Кентаро Фудзиту, Эрину Кудо, Юку Куримото и Маюко Вакацуки за поддержку безмедикаментозной процедуры IVA и профессора Аарона Дж.В. Хсуэ (Медицинская школа Стэнфордского университета, Стэнфорд, Калифорния) за критическое чтение и редактирование рукописи. Мы также благодарим Ребекку Трумэн и Грегори Трумэна за вставку английского повествования. Это исследование было поддержано Японским обществом содействия науке (JSPS), Scientific Research B (19H03801) и Challenging Exploratory Research (18K19624).

Письменное информированное согласие было получено от каждой пациентки POR с уменьшающимся оварианным резервом, которая была включена в лечение IVA без лекарств. Это исследование было одобрено этическим комитетом Международного университета здравоохранения и социального обеспечения (No...

<ol>
	<li>Liang, T., Motan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mature+Oocyte+Cryopreservation+for+Fertility+Preservation.">Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).</li><li>Yoon, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+births+after+vitrification+of+oocytes+in+a+stimulated+in+vitro+fertilization-embryo+transfer+program.">Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization-embryo transfer program.</a> Fertility and Sterility. 79 (6), 1323-1326 (2003).</li><li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Livebirth+after+orthotopic+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue.">Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue.</a> Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).</li><li>Meirow, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+after+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue+in+a+patient+with+ovarian+failure+after+chemotherapy.">Pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a patient with ovarian failure after chemotherapy.</a> New England Journal of Medicine. 353 (3), 318-321 (2005).</li><li>De Vos, M., Devroey, P., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+ovarian+insufficiency.">Primary ovarian insufficiency.</a> Lancet. 376 (9744), 911-921 (2010).</li><li>Scott, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle-stimulating+hormone+levels+on+cycle+day+3+are+predictive+of+in+vitro+fertilization+outcome.">Follicle-stimulating hormone levels on cycle day 3 are predictive of in vitro fertilization outcome.</a> Fertility and Sterility. 51 (4), 651-654 (1989).</li><li>Ferraretti, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+consensus+on+the+definition+of+'poor+response'+to+ovarian+stimulation+for+in+vitro+fertilization:+the+Bologna+criteria.">ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria.</a> Human Reproduction. 26 (7), 1616-1624 (2011).</li><li>Huhtaniemi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+Molecular+Pathophysiology,+Genetics,+and+Treatment+of+Primary+Ovarian+Insufficiency.">Advances in the Molecular Pathophysiology, Genetics, and Treatment of Primary Ovarian Insufficiency.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism. 29 (6), 400-419 (2018).</li><li>M&#281;czekalski, B., Maciejewska-Jeske, M., Podfigurna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproduction+in+premature+ovarian+insufficiency+patients+-+from+latest+studies+to+therapeutic+approach.">Reproduction in premature ovarian insufficiency patients - from latest studies to therapeutic approach.</a> Prz Menopauzalny. 17 (3), 117-119 (2018).</li><li>Baker, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+plans+and+family-building+options+for+women+with+primary+ovarian+insufficiency.">Life plans and family-building options for women with primary ovarian insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 29 (4), 362-372 (2011).</li><li>Englert, Y., Govaerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation:+particular+technical+and+ethical+aspects.">Oocyte donation: particular technical and ethical aspects.</a> Human Reproduction. 13, 90-97 (1998).</li><li>Englert, Y., Rodesch, C., Laruelle, C., Govoerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation:+ethical+aspects+related+to+the+donor.">Oocyte donation: ethical aspects related to the donor.</a> Contraception, Fertilite, Sexualite. 25 (3), 251-257 (1997).</li><li>Storgaard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obstetric+and+neonatal+complications+in+pregnancies+conceived+after+oocyte+donation:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Obstetric and neonatal complications in pregnancies conceived after oocyte donation: a systematic review and meta-analysis.</a> BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 124 (4), 561-572 (2017).</li><li>Storgaard, M., Malchau, S., Loft, A., Larsen, E., Pinborg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation+is+associated+with+an+increased+risk+of+complications+in+the+pregnant+woman+and+the+fetus.">Oocyte donation is associated with an increased risk of complications in the pregnant woman and the fetus.</a> Ugeskrift for Laeger. 179 (11), (2017).</li><li>Kawamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippo+signaling+disruption+and+Akt+stimulation+of+ovarian+follicles+for+infertility+treatment.">Hippo signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles for infertility treatment.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (43), 17474-17479 (2013).</li><li>Hsueh, A. J., Kawamura, K., Cheng, Y., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraovarian+control+of+early+folliculogenesis.">Intraovarian control of early folliculogenesis.</a> Endocrine Reviews. 36 (1), 1-24 (2015).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dormant+ovarian+follicles+to+generate+mature+eggs.">Activation of dormant ovarian follicles to generate mature eggs.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (22), 10280-10284 (2010).</li><li>Suzuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+fertility+preservation+following+ovarian+tissue+vitrification+in+patients+with+primary+ovarian+insufficiency.">Successful fertility preservation following ovarian tissue vitrification in patients with primary ovarian insufficiency.</a> Human Reproduction. 30 (3), 608-615 (2015).</li><li>Tanaka, Y., Hsueh, A. J., Kawamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+approaches+of+drug-free+in+activation+and+laparoscopic+ovarian+incision+to+treat+patients+with+ovarian+infertility.">Surgical approaches of drug-free in activation and laparoscopic ovarian incision to treat patients with ovarian infertility.</a> Fertility and Sterility. , (2020).</li><li>Kawamura, K., Ishizuka, B., Hsueh, A. J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-free+in-vitro+activation+of+follicles+for+infertility+treatment+in+poor+ovarian+response+patients+with+decreased+ovarian+reserve.">Drug-free in-vitro activation of follicles for infertility treatment in poor ovarian response patients with decreased ovarian reserve.</a> Reproductive Biomedicine Online. 40 (2), 245-253 (2020).</li><li>Haino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Follicular+Localization+in+Human+Ovarian+Cortex+for+Vitrification.">Determination of Follicular Localization in Human Ovarian Cortex for Vitrification.</a> Journal of Adolescent and Young Adult Oncology. 7 (1), 46-53 (2018).</li><li>Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+ovarian+function+in+sheep+after+ovariectomy+and+transplantation+of+autografts+stored+at+-196+C.">Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at -196 C.</a> Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).</li><li>Qin, Y., Jiao, X., Simpson, J. L., Chen, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+primary+ovarian+insufficiency:+new+developments+and+opportunities.">Genetics of primary ovarian insufficiency: new developments and opportunities.</a> Human Reproduction Update. 21 (6), 787-808 (2015).</li><li>Domniz, N., Meirow, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Premature+ovarian+insufficiency+and+autoimmune+diseases.">Premature ovarian insufficiency and autoimmune diseases.</a> Best Practice &amp; Research: Clinical Obstetrics &amp; Gynaecology. 60, 42-55 (2019).</li><li>Laven, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Ovarian+Insufficiency.">Primary Ovarian Insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 34 (4), 230-234 (2016).</li><li>Grynberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertility+preservation+in+Turner+syndrome.">Fertility preservation in Turner syndrome.</a> Fertility and Sterility. 105 (1), 13-19 (2016).</li><li>Tomao, F., Spinelli, G. P., Panici, P. B., Frati, L., Tomao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+function,+reproduction+and+strategies+for+fertility+preservation+after+breast+cancer.">Ovarian function, reproduction and strategies for fertility preservation after breast cancer.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 76 (1), 1-12 (2010).</li><li>Kim, S., Lee, Y., Lee, S., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+tissue+cryopreservation+and+transplantation+in+patients+with+cancer.">Ovarian tissue cryopreservation and transplantation in patients with cancer.</a> Obstetrics &amp; Gynecology Science. 61 (4), 431-442 (2018).</li><li>Donnez, J., Dolmans, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+tissue+freezing:+current+status.">Ovarian tissue freezing: current status.</a> Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 27 (3), 222-230 (2015).</li><li>Wu, R. C., Kuo, P. L., Lin, S. J., Liu, C. H., Tzeng, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X+chromosome+mosaicism+in+patients+with+recurrent+abortion+or+premature+ovarian+failure.">X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure.</a> Journal of the Formosan Medical Association. 92 (11), 953-956 (1993).</li><li>De Munck, N., Vajta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficiency+of+oocyte+vitrification.">Safety and efficiency of oocyte vitrification.</a> Cryobiology. 78, 119-127 (2017).</li><li>Argyle, C. E., Harper, J. C., Davies, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+cryopreservation:+where+are+we+now.">Oocyte cryopreservation: where are we now.</a> Human Reproduction Update. 22 (4), 440-449 (2016).</li></ol>

В этой рукописи мы показали подробный лабораторный протокол для IVA без лекарств. Безлекарствующий IVA - это новый подход к лечению бесплодия для пациентки POR с уменьшающимся овариалистным резервом для стимулирования роста вторичных фолликулов, что приводит к образованию более зрелых оо?...

Функция яичников постепенно снижается во время старения и некоторых патофизиологических состояний, включая аномалии кариотипа, аутоиммунные заболевания, химио- и лучевую терапию и операции на яичниках. Сохранение фертильности является одним из лучших вариантов для незамужних женщин с тяжелой дисфункцией яичников, чтобы сохранить их потенциал для будущей беременности. Для сохранения плодовитости в настоящее время доступны два метода, в основном в области онко-фертильности. Криоконсервация ооцитов является хорошо отлаженной процедурой сохранения фертильности, и было зарегистрировано много успешных случаев1,2. С другой стороны, криоконсервация ткани яичников также была установлена для сохранения фертильности у больных раком, но это все еще экспериментальная стратегия3,4. В обоих методах для наступления беременности необходимо множественное количество зрелых ооцитов. Как правило, пациентки с преждевременной недостаточностью яичников (POI), у которых аменорея в возрасте до 40 лет, и женщины среднего возраста с низким оварианным резервом показали плохую реакцию яичников (POR) на стимуляцию яичников для получения зрелых ооцитов5,6,7. Кроме того, у молодых пациенток с низким количеством антральных фолликулов также показал POR стимуляции яичников7. Эти пациентки имеют очень ограниченное количество извлекаемых ооцитов даже после правильной гиперстимуляции яичников, что требует нескольких дорогостоящих процедур для обеспечения достаточного количества ооцитов для беременности.
Донорство ооцитов с последующим экстракорпоральное оплодотворением (ЭКО) спермой мужа и переносом эмбрионов (ET) является единственным вариантом для этих пациентов POI и POR, которые испытывают трудности с получением собственных ооцитов8,9,10. Однако донорство ооцитов осложняется этическими проблемами, а также аутоиммунными осложнениями и осложнениями беременности11, 12,13,14. Для решения этих вопросов желательно налаживание лечения бесплодия с использованием собственных ооцитов пациентов. Для пациентов с POI мы разработали подход in vitro activation (IVA), чтобы обеспечить успешный рост фолликулов и генерацию зрелых ооцитов, что привело к ряду беременностей и родов15. В IVA мы фрагментировали кору яичников после удаления яичников под лапароскопической хирургией и культивировали их в течение двух дней, чтобы активировать фолликулы акт-стимулирующими препаратами, а затем выполнили гетеротопическую пересадку обратно в искусственные мешочки, сделанные под серозой фаллопиевых труб при второй лапароскопической операции15. Эта процедура способствовала росту первичных, первичных и вторичных фолликулов после фрагментации коры яичников, чтобы способствовать нарушению передачи сигналов гиппопотамов16,с последующей двухдневной культурой с сигнальными стимуляторами Akt17.
В отличие от тяжелых случаев POI, пациентки POR со сниженным овариалистным резервом имеют множественные вторичные фолликулы. Поскольку нарушение передачи сигналов гиппо гиппоспособникам само по себе эффективно способствует росту вторичного фолликула16,мы недавно продемонстрировали успешную беременность и родов для пациентов с ПОР, используя процедуру IVA без лекарств, включающую кортикальное фрагментирование и ортотопическую трансплантацию без лечения стимулирующими препаратами Akt. Безлекарстванная ИВА стимулирует раннюю стадию фолликулов яичников к развитию до стадии преантрального фолликула уже после одной операции и увеличивает количество извлеченных ооцитов для ЭКО-переноса эмбрионовна 15,18. Безмедикаментозный подход IVA имеет несколько преимуществ по сравнению с нашим оригинальным IVA: 1) избегая потенциальной потери фолликулов во время посева, 2) сводя к минимуму инвазивность и затраты на вторую операцию, 3) включая только краткосрочный послеоперационный постельный режим и 4) потенциал спонтанной беременности из-за ортотопической пересадки. Недавно мы опубликовали видео-статью, показывающую хирургические процедуры безмедикаментозного IVA19 и подробные протоколы стимуляции яичников после операции20. Здесь мы представляем подробную информацию о лабораторных методах, необходимых для безнаркотатической ИВА.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4.5 onz specimen container</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>354013</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60mm dish</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>351007</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 x 50 cm sterile drape</td>
			<td>HOGY Medical</td>
			<td>SR-823</td>
			<td>Any type of sterile produsts may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pippete</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>357575</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors, Curved</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#14224-G</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>TOKAI HIT</td>
			<td>TPiE-SP</td>
			<td>Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin Solution</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td>Medium for handling ovarian tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVA cannule</td>
			<td>KITAZATO</td>
			<td>446030 IVA-6030E</td>
			<td>Specific cannula for tissue autografting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KAI medical Disposable scalpel</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#5 10-A</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors, Curved</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#503364</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium-HEPES</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>Medium for handling ovarian tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Osaki Medical</td>
			<td>15004</td>
			<td>Any type of sterile produsts may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiss Tweezers, Curved Tips</td>
			<td>KAI</td>
			<td>#504505</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation in patients with severe ovarian dysfunction

Функция яичников постепенно снижается во время старения и в некоторых патофизиологических условиях, включая аномалии кариотипа, аутоиммунные заболевания, химио- и лучевую терапию, а также операции на яичниках. У незамужних женщин с тяжелой дисфункцией яичников сохранение фертильности важно для будущих беременностей. Хотя криоконсервация ооцитов является признанным методом сохранения фертильности, эти пациенты могут сохранять только ограниченное количество ооцитов даже после гиперстимуляции яичников, что приводит к повторным стимуляциям для обеспечения достаточного количества ооцитов, чтобы гарантировать будущую беременность. Чтобы решить эту проблему, мы недавно разработали процедуру безлекарстванной активации in vitro (IVA), которая позволяет нам стимулировать ранние стадии фолликулов яичников развиваться до стадии преантрального фолликула. Эти преантральные фолликулы могут реагировать на уникальный протокол стимуляции гонадотропином, что приводит к увеличению количества извлеченных ооцитов на стимуляцию яичников для криоконсервации. Безмедикаментозная ИВА состоит из хирургического подхода и стимуляции яичников. Мы удалили часть коры из одного или обоих яичников у пациенток с помощью лапароскопической хирургии. Кортикальные ткани яичников были разрезаны на небольшие кубики, чтобы нарушить сигнальный путь гиппопотама и стимулировать развитие фолликулов на ранней стадии. Эти кубики были привиты ортотропически в оставшиеся яичники, а также под серозу обеих фаллопиевых труб. Мы уже публиковали хирургическую процедуру безмедикаментозной ИВА и протокол последующей стимуляции яичников, но здесь мы представляем подробности лабораторных методов, необходимых для безмедикаментозной ИВА.

В первой публикации подхода IVA15мы пересадили корковые кубики яичников один за другим в места пересадки при лапароскопической хирургии(рисунок 1A). Поскольку было использовано 100-150 кубиков яичников, для пересадки тканей при лапароскопической операции потре?...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction at JoVE.com

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Представлены подробные сведения о лабораторных процедурах безмедикаментозной активации in vitro (IVA) фолликулов яичников у пациенток с тяжелой дисфункцией яичников. Этот метод может увеличить количество извлекаемых ооцитов на гиперстимуляцию яичников и принести пользу сохранению фертильности для этих пациентов.

Сохранение фертильности у пациенток с тяжелой дисфункцией яичников

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Цель этого фильма – продемонстрировать процедуру нашего нового подхода к пациентам с дисфункцией яичников. Функция яичников постепенно снижается во время старения и некоторых патофизиологических состояний, включая аномалию кариотипа, аутоиммунные заболевания, химио- и лучевую терапию и операции на яичниках. Большинство женщин среднего возраста с низким оварианским резервом показали плохую реакцию яичников на стимуляцию яичников для получения зрелых ооцитов.Кроме того, молодые пациентки с низким количеством антральных фолликулов также показали плохую реакцию яичников на стимуляцию яичников. Сохранение фертильности важно для сохранения потенциального OCS для будущей беременности. Для сохранения фертильности была установлена криоконсервация ооцитов.Тем не менее, эти пациенты с плохим ответом яичников могли извлекать очень ограниченное количество ооцитов даже после надлежащей стимуляции яичников, что приводило к необходимости повторных дорогостоящих процедур для обеспечения достаточного количества ооцитов, чтобы гарантировать одного ребенка. Для решения этих проблем мы недавно разработали процедуру активации in vitro, IVA, которая позволяет нам стимулировать раннюю стадию фолликулов яичников к развитию до преантральной стадии фолликула. Оригинальная процедура IVA может способствовать росту первичного, первичного и вторичного фолликула путем фрагментации коры яичников, что приводит к нарушению передачи сигналов гиппопотамом.Затем следует два дня культивирования с помощью сигнального стимулятора Akt. Эта процедура подходит для пациентов с POI с небольшим количеством остаточных фолликулов. Тем не менее, эта процедура является чрезмерным лечением для пациентов, которые имеют несколько вторичных фолликулов.Для пациентов, у которых есть некоторые остаточные вторичные фолликулы, мы установили метод, называемый IVA без лекарств, и уже проверили возможность стимулирования роста вторичного фолликула только путем нарушения сигнального пути бегемота. У нас также было несколько успешных случаев доставки без лекарств IVA. Мы уже публиковали хирургическую процедуру препарата без препарата IVA и протокол последующей стимуляции яичников.В этом видео мы представляем подробную информацию о лабораторных методах, необходимых для безнаркотатической ИВА. Мы набрали пациентов для безнаркотатической IVA на основе Болонских критериев. У пациентов может быть несколько вторичных фолликулов.Сначала часть коры удаляли из одного или обоих яичников путем лапароскопии. Пациенты POR - это те, у кого были яичники среднего размера. У большинства пациенток мы извлекли только часть кортикальной ткани из яичников с одной или обеих сторон.Извлеченные критические ткани немедленно переносились в культурную чашку, содержащую культурную среду с буфером HEPES, и рассекали эту маленькую ткань на мелкие кубики для нарушения сигнализации гиппопотама. Подробности процедуры будут показаны в этом видео. Сигнальный путь гиппопотама необходим для поддержания оптимального размера органа.Этот путь состоит из нескольких отрицательных регуляторов роста. Как только передача сигналов гиппопотама нарушается, уровни фосфорилирования YAP, одного из отрицательных регуляторов роста, действующих в каскаде киназы, снижаются, а ядерные уровни YAP увеличиваются. YAP действует в согласии с транскрипционными факторами TEAD для увеличения фактора роста CCN.С другой стороны, актиновая полимеризация глобулярного действия, G-актина, до нитевидной формы, F-актина, важна для поддержания формы клеток и передвижения. Ранее сообщалось, что индукция образования F-актина нарушает передачу сигналов гиппопотамом и вызывает чрезмерный рост в клетках HeLa человека. Ранее мы сообщали об усилении фрагментации яичников, увеличивающей образование F-актина, и это приводит к снижению уровня фосфорилирования YAP.Это приводит к повышенной экспрессии фактора роста CCN. После разрезания эти кубики прививаются в оставшийся яичник. Эта процедура может способствовать остаточному росту вторичного фолликула и привести к увеличению количества зрелых яйцеклеток.Непрекативная ИВА состоит из четырех этапов. Мы уже опубликовали хирургическую процедуру для безнаркотационной ИВА. Пожалуйста, обратитесь к этой литературе по извлечению коры яичников и аутоплантажности.Здесь мы покажем подробные процедуры лабораторных методов, необходимых для безнаркотатической ИВА. На шаге первый мы покажем, как выполняется фрагментация коры яичников. На этапе два мы покажем, как загрузить коркальные кубики яичника в устройство для трансплантации, Здесь я покажу фрагментацию коры яичников.Данное исследование было одобрено этическим комитетом нашего института, и все процедуры были проведены в соответствии с Кодексом этики Всемирной медицинской ассоциации. Фрагментация коры яичников. Для этого шага необходимы следующие инструменты: блюдо, стерильная марля, мелкие ножницы, тонкие щипцы и скальпель.Мы обычно используем этот тип тарелки и стерильной марли, но другие продукты, такие как пластиковая чашка Петри, стеклянная тарелка и т. Д., Также могут быть подходящими для этой процедуры, и любой тип стерильной марли также подходит. Однако мы настоятельно рекомендуем использовать эту форму щипцов и скальпелей. Кроме того, используйте конфорку для поддержания температуры посуды, содержащей салфетки, поместите под стерильную драпировку.Кортикальные ткани сразу же переносятся в блюдо, содержащее мХТФ. Сделайте снимок с именем пациента для корреляции с данными пациента. Запишите размер, толщину и состояние ткани.Удалить остаточную ткань продолговатого мозга. Перед фрагментацией ткани удаляют ткань продолговатого мозга. Положите кору на стерильную марлю.Как показано на видео, марлю смазчат средой. Во время этой процедуры нанесите среду с одноразовой пипеткой до того, как поверхность коры высохнет. Удалите остатки тканей микроципницами до тех пор, пока толщина не достигнет одного-двух миллиметров.У пациентов с ПОР вторичные фолликулы расположены глубже одного миллиметра от поверхности коры, поэтому не делайте ткани толщиной менее одного миллиметра. Разрезать одну сторону коры каждой ткани на полоску размером один за другом на пять миллиметров для гистологического анализа для определения наличия остаточных фолликулов. Поместите эту полоску в 1,5-миллилитровую трубку с питательной средой и держите при четырех градусах Цельсия до фиксации.Подготовка кортикальных кубиков яичника. После удаления ткани продолговатого мозга кора яичника фрагментируется для нарушения передачи сигналов гиппопотамом. Сначала разрезайте кору на одну за одной по 10 миллиметров полоски с помощью скальпеля.Затем нарежьте эти полоски на один миллиметр кубиками небольших кубиков. В среде ткань скользкая и трудно поддался разрезанной. Для легкой резки нарежьте полоски, надавливая на скальпель, а не натягивая его.После обрезки подсчитайте количество кубиков и подготовьте автокроплантаж. Чтобы избежать изменения осмотического давления в среде, добавьте среду в умеренных количествах перед аутоплантацией тканей. Для аутоплантата яичников использование устройства в форме канюли позволяет облегчить загрузку.Этот шаг содержит два шага. Ранее фрагменты яичников пересаживали один за другом с помощью щипцов под лапароскопией. Тем не менее, потребовалось около трех-четырех часов, чтобы операция была завершена.В этой процедуре мы используем устройство канюлярной формы, изготовленное из внутреннего шприца и наружного цилиндра. Это простая форма и легкий вес. Кроме того, наконечник этого устройства имеет круглую форму.Нет острых точек, которые избегают повреждения места пересадки. Использование этого типа устройства позволяет одновременно довести до места имплантации до 20-30 кубов. Это приводит к эффективной трансплантации и сокращению времени операции.Загрузка корковых фрагментов яичников. Приготовление канюли IVA. Подготовьте канюлю IVA и промыть это устройство в mHTF.Повторить аспират и разгрузочную среду несколько раз. Заполните кончик канюляра, аспирируя около 100 микролитров среды. Это необходимо для того, чтобы кубики не вытягиваются во время загрузки фрагментов ткани.Загрузка кортикальные кубики. Соберите куб мелкими щипцами и вставьте его в кончик каннуля. Количество самоквитых кубиков зависит от размера участка пересадки.Повторяйте загрузку кубов один за другом, пока не достигнете целевого номера. После загрузки кубиков осторожно передайте канюлю хирургу. Если участок прививки не готов, часть канюляра, содержащую кубики яичника, следует удерживать пальцами, чтобы избежать снижения температуры кубиков.Мы уже сообщали о клинических результатах безапрезивной ИВА. Пожалуйста, обратитесь к опубликованной статье о клинических результатах. Этот лабораторный протокол требовал от 30 до 50 минут для одного пациента.Среднее время составляет от 10 до 20 минут для фрагментации коры яичников и от 20 до 30 минут для загрузки этих фрагментов в канюлю IVA. Это зависит от размера ткани, но почти все пациенты могут быть закончены в это среднее время. Выводы. Безмедикаментозная IVA - это новый подход к лечению бесплодия для пациентов с ПОР с уменьшающимся овариалистным резервом.Этот лабораторный протокол приводит к сокращению как времени, необходимого для операции, так и потери фрагментов во время трансплантации. Лабораторная методика безмедикаментозной ИВА может стать основой будущего применения культуры ткани яичников для получения зрелых ооцитов без прививки.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

Контузия Модель тяжелого повреждения спинного мозга у крыс

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Компьютерный Динамический постурография по оценке управления постуральной у больных с перемежающейся хромотой

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Оценка функции сосудов у больных с хронической болезнью почек

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Функциональная печени человека Сохранение и восстановление с помощью Subnormothermic машины перфузии

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Введение процедур Внутрикапсульный Ротари cut (IRCP): A изменение Hysteromyomectomy процедуры, облегчающие сохранение плодородия

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Частично количественная оценка с помощью FDG Tracer [18F] у больных с тяжелой черепно-мозговой травмы

Patients with severe traumatic brain injury (sTBI) have difficulty knowing whether they are accurately expressing their thoughts and emotions because of ...

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Вызванный таурохолатом натрия тяжелый острый панкреатит у мышей C57BL/6

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Digital Handwriting Analysis of Characters in Chinese Patients with Mild Cognitive Impairment

Цифровой анализ почерка персонажей у китайских пациентов с легкими когнитивными нарушениями

An increasing amount of evidence shows that cognitive deficits and movement dysfunctions are not separated. Patients with mild cognitive impairment (MCI) ...

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Сохранение фертильности посредством витрификации ооцитов: клинические и лабораторные перспективы

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Fertility Sparing Procedure using Carbon Dioxide Fiber Laser Vaporization of Ovarian Endometrioma

Щадящая процедура фертильности с использованием углекислотного волокна лазерной вапоризации эндометриомы яичников

The surgical management of endometrioma is still a matter of debate. Cystectomy, which is recognized as the standard technique, seems to be associated ...