Name: fertility preservation in patients with severe ovarian dysfunction
Uploaded: 2021-03-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction at JoVE.com

Vi tackar Tatsuji Ihana, Sachiyo Kurimoto, Kazuko Takahasih, Yuki Yoshizawa, Maho Arashi, Kentaro Fujita, Erina Kudo, Yuka Kurimoto och Mayuko Wakatsuki för att de stöder det drogfria IVA-förfarandet och prof. Aaron J.W. Hsueh (Stanford University School of Medicine, Stanford, CA) för kritisk läsning och redigering av manuskriptet. Vi tackar också Rebecca Truman och Gregory Truman för att de infogade engelsk berättelse. Denna studie stöddes av The Japan Society for the Promotion of Science (JSPS), Scientific Research B (19H03801) och Challenging Exploratory Research (18K19624).

Skriftligt informerat samtycke erhölls från varje POR-patient med minskande äggstocksreserv som skrev in sig i den läkemedelsfria IVA-behandlingen. Denna studie godkändes av etikkommittén vid International University of Health and Welfare (nr 17-S-21). Klinisk prövning registrerades under nummer UMIN000034464 och genomfördes i enlighet med Världsmedicinska föreningens etiska kod (Helsingforsdeklarationen).
1. Utvinning av äggstocksbark
<ol><li>Ta bort en del av äggstocksbarken (1...

<ol>
	<li>Liang, T., Motan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mature+Oocyte+Cryopreservation+for+Fertility+Preservation.">Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).</li><li>Yoon, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+births+after+vitrification+of+oocytes+in+a+stimulated+in+vitro+fertilization-embryo+transfer+program.">Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization-embryo transfer program.</a> Fertility and Sterility. 79 (6), 1323-1326 (2003).</li><li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Livebirth+after+orthotopic+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue.">Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue.</a> Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).</li><li>Meirow, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+after+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue+in+a+patient+with+ovarian+failure+after+chemotherapy.">Pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a patient with ovarian failure after chemotherapy.</a> New England Journal of Medicine. 353 (3), 318-321 (2005).</li><li>De Vos, M., Devroey, P., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+ovarian+insufficiency.">Primary ovarian insufficiency.</a> Lancet. 376 (9744), 911-921 (2010).</li><li>Scott, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle-stimulating+hormone+levels+on+cycle+day+3+are+predictive+of+in+vitro+fertilization+outcome.">Follicle-stimulating hormone levels on cycle day 3 are predictive of in vitro fertilization outcome.</a> Fertility and Sterility. 51 (4), 651-654 (1989).</li><li>Ferraretti, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+consensus+on+the+definition+of+'poor+response'+to+ovarian+stimulation+for+in+vitro+fertilization:+the+Bologna+criteria.">ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria.</a> Human Reproduction. 26 (7), 1616-1624 (2011).</li><li>Huhtaniemi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+Molecular+Pathophysiology,+Genetics,+and+Treatment+of+Primary+Ovarian+Insufficiency.">Advances in the Molecular Pathophysiology, Genetics, and Treatment of Primary Ovarian Insufficiency.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism. 29 (6), 400-419 (2018).</li><li>M&#281;czekalski, B., Maciejewska-Jeske, M., Podfigurna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproduction+in+premature+ovarian+insufficiency+patients+-+from+latest+studies+to+therapeutic+approach.">Reproduction in premature ovarian insufficiency patients - from latest studies to therapeutic approach.</a> Prz Menopauzalny. 17 (3), 117-119 (2018).</li><li>Baker, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+plans+and+family-building+options+for+women+with+primary+ovarian+insufficiency.">Life plans and family-building options for women with primary ovarian insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 29 (4), 362-372 (2011).</li><li>Englert, Y., Govaerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation:+particular+technical+and+ethical+aspects.">Oocyte donation: particular technical and ethical aspects.</a> Human Reproduction. 13, 90-97 (1998).</li><li>Englert, Y., Rodesch, C., Laruelle, C., Govoerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation:+ethical+aspects+related+to+the+donor.">Oocyte donation: ethical aspects related to the donor.</a> Contraception, Fertilite, Sexualite. 25 (3), 251-257 (1997).</li><li>Storgaard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obstetric+and+neonatal+complications+in+pregnancies+conceived+after+oocyte+donation:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Obstetric and neonatal complications in pregnancies conceived after oocyte donation: a systematic review and meta-analysis.</a> BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 124 (4), 561-572 (2017).</li><li>Storgaard, M., Malchau, S., Loft, A., Larsen, E., Pinborg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+donation+is+associated+with+an+increased+risk+of+complications+in+the+pregnant+woman+and+the+fetus.">Oocyte donation is associated with an increased risk of complications in the pregnant woman and the fetus.</a> Ugeskrift for Laeger. 179 (11), (2017).</li><li>Kawamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippo+signaling+disruption+and+Akt+stimulation+of+ovarian+follicles+for+infertility+treatment.">Hippo signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles for infertility treatment.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (43), 17474-17479 (2013).</li><li>Hsueh, A. J., Kawamura, K., Cheng, Y., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraovarian+control+of+early+folliculogenesis.">Intraovarian control of early folliculogenesis.</a> Endocrine Reviews. 36 (1), 1-24 (2015).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dormant+ovarian+follicles+to+generate+mature+eggs.">Activation of dormant ovarian follicles to generate mature eggs.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (22), 10280-10284 (2010).</li><li>Suzuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+fertility+preservation+following+ovarian+tissue+vitrification+in+patients+with+primary+ovarian+insufficiency.">Successful fertility preservation following ovarian tissue vitrification in patients with primary ovarian insufficiency.</a> Human Reproduction. 30 (3), 608-615 (2015).</li><li>Tanaka, Y., Hsueh, A. J., Kawamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+approaches+of+drug-free+in+activation+and+laparoscopic+ovarian+incision+to+treat+patients+with+ovarian+infertility.">Surgical approaches of drug-free in activation and laparoscopic ovarian incision to treat patients with ovarian infertility.</a> Fertility and Sterility. , (2020).</li><li>Kawamura, K., Ishizuka, B., Hsueh, A. J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-free+in-vitro+activation+of+follicles+for+infertility+treatment+in+poor+ovarian+response+patients+with+decreased+ovarian+reserve.">Drug-free in-vitro activation of follicles for infertility treatment in poor ovarian response patients with decreased ovarian reserve.</a> Reproductive Biomedicine Online. 40 (2), 245-253 (2020).</li><li>Haino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Follicular+Localization+in+Human+Ovarian+Cortex+for+Vitrification.">Determination of Follicular Localization in Human Ovarian Cortex for Vitrification.</a> Journal of Adolescent and Young Adult Oncology. 7 (1), 46-53 (2018).</li><li>Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+ovarian+function+in+sheep+after+ovariectomy+and+transplantation+of+autografts+stored+at+-196+C.">Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at -196 C.</a> Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).</li><li>Qin, Y., Jiao, X., Simpson, J. L., Chen, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+primary+ovarian+insufficiency:+new+developments+and+opportunities.">Genetics of primary ovarian insufficiency: new developments and opportunities.</a> Human Reproduction Update. 21 (6), 787-808 (2015).</li><li>Domniz, N., Meirow, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Premature+ovarian+insufficiency+and+autoimmune+diseases.">Premature ovarian insufficiency and autoimmune diseases.</a> Best Practice &amp; Research: Clinical Obstetrics &amp; Gynaecology. 60, 42-55 (2019).</li><li>Laven, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Ovarian+Insufficiency.">Primary Ovarian Insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 34 (4), 230-234 (2016).</li><li>Grynberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertility+preservation+in+Turner+syndrome.">Fertility preservation in Turner syndrome.</a> Fertility and Sterility. 105 (1), 13-19 (2016).</li><li>Tomao, F., Spinelli, G. P., Panici, P. B., Frati, L., Tomao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+function,+reproduction+and+strategies+for+fertility+preservation+after+breast+cancer.">Ovarian function, reproduction and strategies for fertility preservation after breast cancer.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 76 (1), 1-12 (2010).</li><li>Kim, S., Lee, Y., Lee, S., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+tissue+cryopreservation+and+transplantation+in+patients+with+cancer.">Ovarian tissue cryopreservation and transplantation in patients with cancer.</a> Obstetrics &amp; Gynecology Science. 61 (4), 431-442 (2018).</li><li>Donnez, J., Dolmans, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+tissue+freezing:+current+status.">Ovarian tissue freezing: current status.</a> Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 27 (3), 222-230 (2015).</li><li>Wu, R. C., Kuo, P. L., Lin, S. J., Liu, C. H., Tzeng, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X+chromosome+mosaicism+in+patients+with+recurrent+abortion+or+premature+ovarian+failure.">X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure.</a> Journal of the Formosan Medical Association. 92 (11), 953-956 (1993).</li><li>De Munck, N., Vajta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficiency+of+oocyte+vitrification.">Safety and efficiency of oocyte vitrification.</a> Cryobiology. 78, 119-127 (2017).</li><li>Argyle, C. E., Harper, J. C., Davies, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+cryopreservation:+where+are+we+now.">Oocyte cryopreservation: where are we now.</a> Human Reproduction Update. 22 (4), 440-449 (2016).</li></ol>

I detta manuskript visade vi ett detaljerat laboratorieprotokoll för drogfri IVA. Den läkemedelsfria IVA är ett nytt tillvägagångssätt för infertilitetsbehandling för POR- patient med minskande äggstocksreserv för att främja sekundär folliklar tillväxt, vilket resulterar i att ge mer mogna äggstockscancer stimulering och öka i framgångsrikgraviditet 20. Hos 15 POR patienter med minskande äggstockscancer reserv, uppnådde detta tillvägagångssätt en spontan graviditet, in vitro b...

Äggstocksfunktionen minskar gradvis under åldrande och vissa patofysiologiska tillstånd inklusive karyotyp onormala tillstånd, autoimmuna sjukdomar, cellgifts- och strålning-terapier och äggstocksoperationer. Fertilitet bevarande är ett av de bästa alternativen för ogifta kvinnor med svår äggstockscancer dysfunktion för att bevara sin potential för framtida graviditet. För fertilitetsbevarande är för närvarande två metoder tillgängliga mestadels i onko-fertilitetsfältet. Oocyte cryopreservation är ett väletablerat förfarande för fertilitet bevarande och många framgångsrika fall harrapporterats 1,2. Å andra sidan inrättades äggstocksvävnads cryopreservation också för fertilitetsbevarande hos cancerpatienter men det är fortfarande en experimentell strategi3,4. I båda metoderna behövs flera antal mogna äggceller för att graviditet ska inträffa. I allmänhet visade patienter med för tidig äggstocksbrist (POI), som blir amenorré före 40 års ålder, och medelålders kvinnor med låg äggstocksreserv dålig äggstockssvar (POR) på äggstocksstimulering för att ge mogna äggceller5,6,7. Dessutom visade unga patienter med ett lågt antal antral folliklar också POR till äggstocksstimulering7. Dessa patienter har mycket begränsat antal återvinningsbara äggceller även efter korrekt äggstockscancer hyperstimulering, vilket kräver flera dyra förfaranden för att säkerställa ett tillräckligt antal äggceller för graviditet.
Oocyt donation följt av in vitro befruktning (IVF) med makens spermier och embryo överföring (ET) är det enda alternativet för dessa POI och POR patienter som har svårt att få sina egna äggceller8,9,10. Oocyte donation kompliceras dock av etiska frågor samt autoimmuna och graviditet komplikationer11,12,13,14. För att lösa dessa problem önskas etablering av infertilitetsbehandling med patienternas egna äggceller. För POI-patienter har vi utvecklat in vitro aktivering (IVA) strategi för att möjliggöra framgångsrik follikel tillväxt och generering av mogna äggceller, leder ett antal graviditeter och leveranser15. I IVA fragmenterade vi äggstocksbarkar efter avlägsnande av äggstockar under laparoskopisk kirurgi och odlade dem i två dagar för att aktivera folliklar av Akt-stimulerande läkemedel och sedan utföra heterotopisk ympning tillbaka till konstgjorda påsar gjorda under serosa av äggledare under andra laparoskopisk kirurgi15. Detta förfarande främjade tillväxt av ursprungliga, primära och sekundära folliklar efter äggstockscancer cortex fragmentering för att främja Hippo signalering störningar16, följt av två dagar kultur med Akt signalering stimulatorer17.
Till skillnad från allvarliga POI fall, POR patienter med minskad äggstockscancer reserv har flera sekundära folliklar. Eftersom Hippo signalering störningar ensam är effektivt för att främja sekundär follikeltillväxt 16, visade vi nyligen framgångsrika graviditeter och leveranser för POR patienter med hjälp av den läkemedelsfria IVA förfarande som omfattar när fragmentering och ortopic ympning utan behandling av Akt stimulerande läkemedel. Läkemedelsfri IVA stimulerar tidigt stadium av äggstockssäckar att utvecklas till preantral follikelstadiet efter endast en operation och ökade antalet hämtade äggceller för IVF-embryoöverföring15,18. Den läkemedelsfria IVA-metoden har flera fördelar jämfört med vår ursprungliga IVA med 1) undvika potentiella follikel förlust under kultur, 2) minimera invasivitet och kostnader för den andra kirurgi, 3) omfattar endast kortsiktiga post-surgery säng vila och 4) potential av spontana graviditet på grund av att ortopic ympning. Vi publicerade nyligen en videoartikel som visar kirurgiska ingrepp av läkemedelsfri IVA19 och detaljerade protokoll av äggstocksstimulering efter operationen20. Här presenterar vi detaljer om laboratoriemetoder som krävs för läkemedelsfri IVA.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4.5 onz specimen container</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>354013</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60mm dish</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>351007</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 x 50 cm sterile drape</td>
			<td>HOGY Medical</td>
			<td>SR-823</td>
			<td>Any type of sterile produsts may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pippete</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>357575</td>
			<td>Other products may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors, Curved</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#14224-G</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>TOKAI HIT</td>
			<td>TPiE-SP</td>
			<td>Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin Solution</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td>Medium for handling ovarian tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVA cannule</td>
			<td>KITAZATO</td>
			<td>446030 IVA-6030E</td>
			<td>Specific cannula for tissue autografting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KAI medical Disposable scalpel</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#5 10-A</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors, Curved</td>
			<td>WPI</td>
			<td>#503364</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium-HEPES</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>Medium for handling ovarian tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Osaki Medical</td>
			<td>15004</td>
			<td>Any type of sterile produsts may also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiss Tweezers, Curved Tips</td>
			<td>KAI</td>
			<td>#504505</td>
			<td>Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation in patients with severe ovarian dysfunction

Äggstocksfunktionen minskar gradvis under åldrande och i vissa patofysiologiska tillstånd inklusive karyotyp onormala tillstånd, autoimmuna sjukdomar, cellgifts- och strålningsbehandlingar, samt äggstocksoperationer. Hos ogifta kvinnor med svår äggstocksdysfunktion är fertilitetsbevarande viktigt för framtida graviditeter. Även om oocyte cryopreservation är en etablerad metod för fertilitet bevarande, dessa patienter kunde endast bevara ett begränsat antal äggceller även efter äggstockscancer överstimulering, vilket leder till upprepade stimuleringar för att säkerställa tillräckliga äggceller för att garantera framtida graviditet. För att lösa detta problem har vi nyligen utvecklat ett läkemedelsfritt in vitro-aktiveringsförfarande (IVA), som gör det möjligt för oss att stimulera tidiga stadier av äggstockssäckar att utvecklas till preantral follikelstadiet. Dessa preantrala folliklar kan svara på det unika protokollet av gonadotropin stimulering, vilket resulterar i ökat antal hämtade äggceller per äggstockscancer stimulering för cryopreservation. Den läkemedelsfria IVA består av kirurgiska tillvägagångssätt och äggstocksstimulering. Vi tog bort en del av cortex från en eller båda äggstockarna från patienter under laparoscopic kirurgi. Äggstockscancer när vävnader skars i små kuber för att störa Hippo signalering utbildningsavsnitt och stimulera utvecklingen av tidiga skede folliklar. Dessa kuber ympades orthotropically i återstående äggstockar samt under serosa av båda äggledare. Vi har redan publicerat det kirurgiska ingreppet i den läkemedelsfria IVA och protokollet om efterföljande äggstocksstimulering, men häri presenterar vi detaljerna i laboratoriemetoder som krävs för läkemedelsfri IVA.

I den första publiceringen av IVA-metoden15transplanterade vi äggstockscancer kortikala kuber en efter en till ympningsplatserna under laparoskopisk kirurgi (Figur 1A). Eftersom 100-150 äggstockscancer kuber användes, tog det 3-4 timmar för vävnad ympning under laparoscopic kirurgi. Dessutom förlorades några äggstockskuber innan ympning. Eftersom IVA-kanylen kan överföra 20-30 kuber till en ympningsplats på en gång (figur 1B)...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction at JoVE.com

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Vi presenterar detaljer om laboratorieförfaranden för läkemedelsfri in vitro aktivering (IVA) av äggstockssäckar för patienter med allvarliga äggstockscancer dysfunktion. Denna metod kan öka antalet återvinningsbara äggceller per äggstockscancer hyperstimulering och gynna fertilitet bevarande för dessa patienter.

Fertilitetsbevarande hos patienter med svår äggstocksdysfunktion

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Målet med denna film är att visa proceduren för vår nya strategi för patienter med äggstockscancer dysfunktion. Äggstocksfunktionen minskar gradvis under åldrande och vissa patofysiologiska tillstånd inklusive karyotyp onormala tillstånd, auto immunsjukdomar, cellgifter och strålning terapier och äggstocksoperationer. De flesta medelålders kvinnor med låg äggstocksreserv visade dålig äggstockscancer svar på äggstockscancer stimulering för att ge mogna äggstockscancer.Dessutom visade unga patienter med ett lågt antal antral folliklar också dålig äggstockscancer svar på äggstockscancer stimulering. Fertilitet bevarande är viktigt för att rädda den potentiella OCS för framtida graviditet. För fertilitet bevarande fastställdes oocyte cryopreservation.Dessa fattiga äggstockscancer svar patienter kunde dock hämta ett mycket begränsat antal äggceller även efter korrekt äggstockscancer stimulering, vilket leder till kravet på upprepade dyra förfaranden för att säkerställa ett tillräckligt antal äggceller för att garantera ett barn. För att lösa dessa problem har vi nyligen utvecklat in vitro-aktiveringen, IVA-förfarandet, vilket gör det möjligt för oss att stimulera det tidiga skedet av äggstockssäckar att utvecklas till pre-antral follikelstadiet. Den ursprungliga IVA förfarandet kan främja primordial, primära och sekundära follikel tillväxt av äggstockscancer cortex fragmentering, vilket leder till hippo signalering störningar.Detta följs sedan av två dagars odling med Akt som signalerar stimulator. Denna procedur är lämplig för POI patienter med få kvarvarande folliklar. Detta förfarande är dock en överdriven behandling för de patienter som har flera sekundära folliklar.För de patienter som har några kvarvarande sekundära folliklar etablerade vi metoden som kallas läkemedelsfri IVA och har redan testat möjligheten att främja sekundär follikeltillväxt genom att bara störa flodhästens signalväg. Vi har också haft några framgångsrika fall av leverans via drogfri IVA. Vi har redan publicerat kirurgiska ingreppet av drogfria IVA och protokollet för följande äggstockscancer stimulering.I den här videon presenterar vi detaljerna om laboratoriemetoder som krävs för läkemedelsfri IVA. Vi rekryterade patienterna för läkemedelsfri IVA baserat på Bolognakriterierna. Patienterna kan ha flera sekundära folliklar.Först togs en del av cortex bort från en eller båda äggstockarna genom laparoskopi. POR patienter är de som hade medelstora äggstockar. I de flesta av patienterna extraherade vi endast en del av de när vävnaderna från äggstockarna på en eller båda sidor.Extraherade kritiska vävnader överfördes omedelbart till en kultur skål som innehåller kultur medium med HEPES buffert, och dissekerade denna lilla vävnad i små kuber för hippo signalering störningar. Detaljer om proceduren visas i den här videon. Hippo signaleringsväg är avgörande för att upprätthålla optimal organstorlek.Denna väg består av flera negativa tillväxtreglerare. När flodhästsignalering störs, fosforylering nivåer av YAP, en av de negativa tillväxt regulatorer som verkar i en kinas kaskad, minskas och kärntekniska nivåer av YAP ökas. YAP agerar i samförstånd med TEAD transkriptionsfaktorer för att öka nedströms CCN tillväxtfaktor.Å andra sidan är aktinpolymerisering av klotformigt verkande, G-aktin, till den filamentösa formen, F-aktin, viktig för cellformsunderhåll och rörelse. Tidigare rapporterade induktion av F-aktin bildas stör flodhäst signalering och inducerar överväxt i mänskliga HeLa celler. Vi rapporterade tidigare äggstocksfragmentering öka F-aktin bildas, och det leder till minskningen av nivån av fosforylering av YAP.Det leder till ett ökat uttryck för CCN:s tillväxtfaktor. Efter skärning ympas dessa kuber i den återstående äggstocken. Detta förfarande kan främja den återstående sekundära follikel tillväxt och leda till ett ökat antal mogna oocyte.Drogfri IVA består av fyra steg. Vi har redan publicerat det kirurgiska ingreppet för läkemedelsfri IVA. Se den litteraturen för äggstockscancer cortex extraktion och auto-ympning.Här visar vi de detaljerade rutinerna för laboratoriemetoder som krävs för läkemedelsfri IVA. I steg ett visar vi hur äggstocksbarkens fragmentering utförs. I steg två visar vi hur man laddar äggstockscancer kortikala kuber i enheten för transplantation, Här ska jag visa äggstocksbarkens cortexfragmentering.Denna studie godkändes av etikkommittén vid vårt institut, och alla procedurer utfördes i enlighet med Världsmedicinska föreningens etiska kod. Äggstocksbarken fragmentering. Följande verktyg som krävs för detta steg: en maträtt, steril gasväv, fin sax, fina tång och skalpell.Vi använder vanligtvis denna typ av maträtt och steril gasväv men andra produkter som plast Petri skål, glas skål, etcetera, kan också vara lämplig för denna procedur, och alla typer av steril gasväv är också lämplig. Vi rekommenderar dock starkt användningen av denna form av tång och skalpell. Använd dessutom värmeplattan för att bibehålla temperaturen på disken som innehåller vävnader Placera under det sterila draperiet.Närvävnader överförs omedelbart till skålen som innehåller mHTF. Ta en bild med patientens namn för att korrelera med patientens data. Registrera vävnadens storlek, tjocklek och tillstånd.Ta bort rester av medullavävnad. Innan vävnadsfragmenteringen, ta bort medullavävnaden. Sätt cortex på den sterila gasväven.Som visas i videon fuktas gasväven med medium. Under denna procedur, applicera medium med en engångspipett innan cortexytan torkas ut. Ta bort restvävnader med mikrosax tills tjockleken når en till två millimeter.Hos POR-patienter ligger sekundära folliklar djupare än en millimeter från cortexytan, så gör inte vävnaderna mindre än en millimeter i tjocklek. Skär ena sidan av cortex av varje vävnad i en remsa som mäter en efter en med fem millimeter för histologisk analys för att bestämma närvaron av kvarvarande folliklar. Sätt denna remsa i 1,5 milliliter rör med odlingsmedium och håll vid fyra grader Celsius tills fixering.Beredning av äggstockscancer när kuber. Efter avlägsnande av medulla vävnad, äggstockscancer när är fragmenterad för hippo signalering störningar. Först skär cortex i en efter en med 10 millimeters remsor med skalpell.Skär sedan dessa remsor i en millimeter kubiserade små kuber. I mediet är vävnaden hal och svår att skära. För enkel skärning, skär remsorna genom att trycka ner på skalpellen snarare än genom att dra i den.Efter skärning, räkna antalet kuber och förbered automatisk ympning. För att undvika förändringar av osmotiskt tryck i mediet, tillsätt mediet med måtta före automatisk ympning av vävnaden. För äggstockscancer automatisk ympning möjliggör användning av en kanylformad enhet enklare lastning.Det här steget innehåller två steg. Tidigare transplanterades äggstocksfragment en efter en med hjälp av tång under laparoskopi. Det tog dock cirka tre till fyra timmar för operationen att slutföras.I denna procedur använder vi en kanylformad enhet gjord av en inre spruta och en yttre cylinder. Detta är en enkel form och lättviktare. Dessutom är spetsen på denna enhet av en rund form.Det finns inga vassa punkter som undviker skador på transplantationsstället. Genom att använda den här typen av enhet kan du ta upp till 20 till 30 kuber till implantationsplatsen samtidigt. Detta leder till effektiv transplantation och minskning av operationstiden.Laddar äggstockscancer när fragment. Förberedelse av IVA kanyl. Förbered IVA-kanylen och tvätta denna enhet i mHTF.Upprepa aspirat och urladdningsmedium flera gånger. Fyll spetsen på en kannular genom att aspirera ca 100 mikroliter av mediet. Detta för att undvika att kuberna drar ut under vävnadsfragmentbelastning.Läser in kortikala kuber. Välj en kub med fina tångar och lägg den i kannans spets. Antalet automatiskt ympade kuber beror på transplantationsplatsens storlek.Upprepa inläsningen av kuberna en efter en tills du når målnumret. Efter att ha laddat kuberna, skicka kanylen till kirurgen noggrant. Om ympningsstället inte är klart ska den del av kanylet som innehåller äggstockskuber hållas med fingrarna för att undvika en minskning av kubens temperatur.Vi har redan rapporterat de kliniska resultaten av läkemedelsfri IVA. Se publicerad artikel om kliniska resultat. Detta laboratorieprotokoll krävs 30 till 50 minuter för en patient.Den genomsnittliga tiden är i 10 till 20 minuter för äggstockscancer cortex fragmentering och 20 till 30 minuter för att ladda dessa fragment till IVA kanyl. Detta beror på vävnadsstorleken, men nästan alla patienter kan vara färdiga under denna genomsnittliga tid. Slutsatser. Läkemedelsfri IVA är ett nytt tillvägagångssätt för infertilitetsbehandling för POR-patienter med minskande äggstocksreserv.Dessa laboratorieprotokoll leder till minskning av både tid som krävs för kirurgi och förlust av fragment under transplantation. Laboratorietekniken för läkemedelsfri IVA kan bli grunden för framtida tillämpning av äggstocksvävnadskultur för att erhålla mogna äggceller utan ympning.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

En Contusion Modell av svår ryggmärgsskada hos råttor

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Datoriserad Dynamic Posturography för postural kontroll Bedömning i patienter med fönstertittarsjuka

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Bedömning av kärlfunktionen hos patienter med kronisk njursjukdom

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Funktionell Human Liver Bevarande och inkassering av belopp genom Subnormothermic Machine Perfusion

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Införandet av intrakapsulära Rotary-cut förfaranden (IRCP): A modifierade Hysteromyomectomy förfaranden för att underlätta fertilitet bevarande

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Semikvantitativ bedömning använda [18F] FDG Tracer hos patienter med svår hjärnskada

Patients with severe traumatic brain injury (sTBI) have difficulty knowing whether they are accurately expressing their thoughts and emotions because of ...

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Natriumtaurokolat inducerad svår akut pankreatit hos C57BL/6 möss

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Digital Handwriting Analysis of Characters in Chinese Patients with Mild Cognitive Impairment

Digital handskriftsanalys av karaktärer hos kinesiska patienter med mild kognitiv försämring

An increasing amount of evidence shows that cognitive deficits and movement dysfunctions are not separated. Patients with mild cognitive impairment (MCI) ...

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Fertilitetsbevarande genom oocytevitrifiering: Kliniska perspektiv och laboratorieperspektiv

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Fertility Sparing Procedure using Carbon Dioxide Fiber Laser Vaporization of Ovarian Endometrioma

Fertilitetssparande förfarande med användning av koldioxidfiberlaserförångning av ovarieendometriom

The surgical management of endometrioma is still a matter of debate. Cystectomy, which is recognized as the standard technique, seems to be associated ...