Name: wide-field, real-time imaging of local and systemic wound signals in arabidopsis
Uploaded: 2021-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis at JoVE.com

وقد دعم هذا العمل بمنح من الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (17H05007 و 18H05491) إلى MT والمؤسسة الوطنية للعلوم (IOS1557899 وMCB2016177) والإدارة الوطنية للملاحة الجوية والفضاء (NNX14AT25G و 80NSSC19K0126) إلى SG.

1. إعداد المواد النباتية
<ol><li>في 1.5 مل ميكروبتوب، سطح تعقيم بذور أربيدوبسيس تاليانا (كول-0 الانضمام) مصنع التعبير عن إما GCaMP3 أو CHIB-iGluSnFR عن طريق هز مع 20٪ (v/v) NaClO لمدة 3 دقائق ثم يغسل 5 مرات مع الماء المقطر العقيم. ملاحظة: خطوط المعدلة وراثيا من Arabidopsis التعبير عن GCaMP3 أو CHIB-iGluSnFR وقد وصفت س...

الإشارات النظامية مهمة للنباتات للاستجابة للمحفزات البيئية الخارجية المحلية ومن ثم الحفاظ على التوازن على مستوى النبات بأكمله. على الرغم من أنها ليست مجهزة جهاز عصبي متقدم مثل الحيوانات، فإنها تستخدم الاتصالات السريعة داخل وبين الأجهزة على حد سواء على أساس عوامل مثل الكهربائية المتنقل?...

لا يمكن للنباتات الهروب من الضغوط الحيوية ، على سبيل المثال ، الحشرات التي تتغذى عليها ، لذلك فقد تطورت أنظمة متطورة لاستشعار الإجهاد ونقل الإشارات للكشف عن ثم حماية نفسها من تحديات مثل عشبي1. عند الجرح أو هجوم عشبي ، تبدأ النباتات استجابات دفاعية سريعة بما في ذلك تراكم حمض الجاسموني النباتي (JA) ليس فقط في موقع الجرحى ولكن أيضا في الأعضاء البعيدة غير التالفة2. هذا JA ثم يؤدي كل من الاستجابات الدفاعية في الأنسجة التالفة مباشرة ويحفز بشكل استباقي الدفاعات في الأجزاء غير التالفة من المصنع. في Arabidopsis، تم الكشف عن تراكم JA الناجم عن الجرح في أوراق بعيدة وسليمة في غضون دقائق قليلة من الضرر في مكان آخر في المصنع مما يشير إلى أن إشارة سريعة وطويلة المدى يتم إرسالها من ورقة الجرحى3. وقد اقترح العديد من المرشحين، مثل Ca2 +، وأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS)، والإشارات الكهربائية، لتكون بمثابة هذه الإشارات الجرح لمسافات طويلة في النباتات4،5.
Ca2 + هي واحدة من العناصر رسول الثاني الأكثر تنوعا وفي كل مكان في الكائنات الحية eukaryotic. في النباتات، مضغ كاتربيلر والميكاميكالية تسبب زيادات كبيرة في تركيز Ca2+ الخلوية ([Ca2+]cyt) سواء في ورقة الجرحى أو في أوراق بعيدة غير مذبذبة6،7. يتم تلقي هذه الإشارة Ca2 + الجهازية بواسطة بروتينات الاستشعار Ca2 +داخل الخلية ، والتي تؤدي إلى تنشيط مسارات إشارات الدفاع المصب ، بما في ذلك التمثيل الحيوي JA8،9. على الرغم من العديد من هذه التقارير التي تدعم أهمية إشارات Ca2 + في استجابات جرح النبات ، فإن المعلومات حول الخصائص المكانية والزمنية لإشارات Ca2 + الناجمة عن الإصابة محدودة.
التصوير في الوقت الحقيقي باستخدام مؤشرات Ca2+ المشفرة وراثيا هو أداة قوية لرصد وقياس الديناميكيات المكانية والزمنية لإشارات Ca2+ . حتى الآن، وقد وضعت إصدارات من أجهزة الاستشعار من هذا القبيل التي تمكن التصور من إشارات Ca2 + على مستوى خلية واحدة، إلى الأنسجة والأعضاء وحتى النباتات كلها10. وكان أول جهاز استشعار حيوي مشفرة وراثيا لCa2 + المستخدمة في النباتات aequorin البروتين الإنارة الحيوية المستمدة من قنديل البحر Aequorea فيكتوريا11. على الرغم من أن هذا البروتين chemiluminescent قد استخدمت للكشف عن Ca2 + التغييرات استجابة لضغوط مختلفة في النباتات12،13،14،15،16،17،18، فإنه ليس مناسبا تماما للتصوير في الوقت الحقيقي بسبب إشارة الإنارة منخفضة للغاية التي تنتجها. Förster الرنين نقل الطاقة (FRET) المستندة إلى Ca2 + المؤشرات، مثل cameleons الأصفر، كما استخدمت بنجاح للتحقيق في ديناميات مجموعة من Ca2+ إشارات الأحداث في محطات19،20،21،22،23،24. تتوافق أجهزة الاستشعار هذه مع نهج التصوير وتتكون الأكثر شيوعا من كالمودولين بروتين Ca2 + الملزم (CaM) والببتيد الملزم ل CaM (M13) من سلسلة كيناز ضوء الميوسين ، وكلها تنصهر بين اثنين من بروتينات الفلوروفور ، وعموما بروتين الفلورسنت السماوي (CFP) ومتغير البروتين الفلوري الأصفر (YFP)10. Ca2 + ملزمة لCAM يعزز التفاعل بين CaM و M13 مما يؤدي إلى تغيير تشكيلي للمستشعر. ويعزز هذا التغيير نقل الطاقة بين CFP وYFP، مما يزيد من كثافة الفلورسينس في YFP مع تقليل انبعاثات الفلورسينس من CFP. رصد هذا التحول من CFP إلى فلورية YFP ثم يوفر مقياسا للزيادة في مستوى Ca2 + . بالإضافة إلى أجهزة الاستشعار FRET هذه، فإن أجهزة الاستشعار الحيوية Ca2+ المستندة إلى البروتين الفلوري الواحد (FP)، مثل GCaMP و R-GECO، تتوافق أيضا مع نهج التصوير النباتي وتستخدم على نطاق واسع لدراسة [Ca2+] تغييراتالسيت بسبب حساسيتها العالية وسهولة استخدامها25و26و27و28و29و30. تحتوي GCaMPs على GFP واحد معتبدل بشكل دائري (cp) ، ومرة أخرى تنصهر في CaM والببتيد M13. يؤدي التفاعل المعتمد على Ca2+بين CaM و M13 إلى تغيير تشكيلي في المستشعر يعزز التحول في حالة البروتونات في cpGFP ، مما يعزز إشارة الفلورسنت. وهكذا، مع ارتفاع مستويات Ca2+ ، تزداد إشارة cpGFP.
للتحقيق في ديناميات إشارات Ca2 + المتولدة استجابة للجرح الميكانيكي أو التغذية آكلة الأعشاب ، استخدمنا نباتات أرابيدوسيس ثاليانا المعدلة وراثيا التي تعبر عن متغير GCaMP ، GCaMP3 ، ومجهر مضان واسع المجال6. وقد نجح هذا النهج في تصور انتقال سريع لإشارة Ca2 + لمسافات طويلة من موقع الجرح على ورقة إلى النبات بأكمله. وهكذا، تم الكشف عن زيادة في [Ca2+]cyt على الفور في موقع الجرح ولكن تم نشر هذه الإشارة Ca2+ بعد ذلك إلى الأوراق المجاورة من خلال الأوعية الدموية في غضون بضع دقائق من الجرح. وعلاوة على ذلك، وجدنا أن انتقال هذه الإشارة الجرح الجهازية السريعة يتم إلغاؤها في النباتات Arabidopsis مع الطفرات في اثنين من الجينات مثل مستقبلات الغلوتامات، ومستقبلات الغلوتامات مثل (GLR)، GLR3.3، وGLR3.66. وGLRs يبدو أن تعمل كأحماض أمينية مسور Ca2 + قنوات المشاركة في العمليات الفسيولوجية المتنوعة, بما في ذلك استجابة الجرح3, نمو أنبوب حبوب اللقاح31, تطوير الجذر32, استجابة الباردة33, والمناعة الفطرية34. على الرغم من هذه الوظيفة الفسيولوجية الواسعة المفهومة جيدا ل GLRs ، فإن المعلومات حول خصائصها الوظيفية ، مثل خصوصية الليغند ، والانتقائية الأيونية ، والتوطين دون الخلوي ، محدودة35. ومع ذلك، ذكرت الدراسات الحديثة أن GLR3.3 و GLR3.6 مترجمة في phloem وxylem، على التوالي. GLRs النباتية لها أوجه تشابه مع مستقبلات الغلوتامات الأيونية (iGluRs)36 في الثدييات ، والتي يتم تنشيطها عن طريق الأحماض الأمينية ، مثل الغلوتامات والجليسين وD-سيرين في الجهاز العصبي للثدييات37. في الواقع، أثبتنا أن تطبيق الغلوتامات 100 mM، ولكن ليس غيرها من الأحماض الأمينية، في موقع الجرح يحفز سريعة، لمسافات طويلة Ca2+ إشارة في Arabidopsis،مما يشير إلى أن الغلوتامات خارج الخلية من المرجح أن يكون بمثابة إشارة الجرح في النباتات6. يتم إلغاء هذا الرد في glr3.3/glr3.6 متحولة مما يوحي بأن الغلوتامات قد يكون يتصرف من خلال واحدة أو كل من هذه القنوات مثل مستقبلات وبالفعل, AtGLR3.6 وقد تبين مؤخرا أن بوابات من قبل هذه المستويات من الغلوتامات38.
في النباتات، بالإضافة إلى دورها كحامض أميني هيكلي، كما اقترح الغلوتامات كمنظم التنمية الرئيسية39؛ ومع ذلك، فإن دينامياتها المكانية والزمنية غير مفهومة بشكل جيد. تماما كما لCa2 +, وقد وضعت العديد من المؤشرات المشفرة وراثيا للغلوتامات لرصد ديناميات هذه الأحماض الأمينية في الخلاياالحية 40,41. iGluSnFR هو GFP القائم على واحد FP الجلوتامات الاستشعار الحيوي تتألف من cpGFP وبروتين ملزم الغلوتامات (GltI) من الإشريكية القولونية42،43. التغيير التوافقي ل iGluSnFR ، الذي يسببه ربط الغلوتامات ب GltI ، يؤدي إلى انبعاث فلوري GFP معزز. للتحقيق في ما إذا كان الغلوتامات خارج الخلية بمثابة جزيء إشارة في استجابة جرح النبات ، قمنا بتوصيل تسلسل iGluSnFR مع تسلسل إفراز الببتيد الأساسي للإشارة الشيتاتينية (CHIB-iGluSnFR) لتعريب هذا الاستشعار الحيوي في الفضاء المبرمج6. مكن هذا النهج التصوير من أي تغييرات في تركيز الغلوتامات المبرمج ([غلو]آبو) باستخدام النباتات أربيدوبسيس المعدلة وراثيا التعبير عن هذا الاستشعار. اكتشفنا زيادات سريعة في إشارة iGluSnFR في موقع الجرح. هذه البيانات تدعم فكرة أن تسرب الغلوتامات من الخلايا التالفة / الأنسجة إلى أبوبلاست عند الجرح ويعمل كإشارة ضرر تفعيل GLRs ويؤدي إلى إشارة Ca2 + لمسافات طويلة في النباتات6.
هنا، ونحن نصف طريقة التصوير في الوقت الحقيقي على نطاق النبات باستخدام أجهزة الاستشعار الحيوية المشفرة وراثيا لرصد وتحليل ديناميات إشارات Ca2 + بعيدة المدى والجلوتامات خارج الخلية ردا على الجرح6. يوفر توافر المجهر الفلوري واسع المجال والنباتات المعدلة وراثيا التي تعبر عن أجهزة الاستشعار الحيوية المشفرة وراثيا نهجا قويا ، ولكن يسهل تنفيذه للكشف عن الإشارات البعيدة المدى التي تنتقل بسرعة ، مثل موجات Ca2 + .

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Arabidopsis expressing GCaMP3</td>
			<td>Saitama University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arabidopsis expressing CHIB-iGluSnFR</td>
			<td>Saitama University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 7</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamate</td>
			<td>FUJIFILM Wako</td>
			<td>072-00501</td>
			<td>Dissolved in a liquid growth medium [1/2x MS salts, 1% (w/v) sucrose, and 0.05% (w/v) MES; pH 5.1 adjusted with 1N KOH].</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murashige and Skoog (MS) medium</td>
			<td>FUJIFILM Wako</td>
			<td>392-00591</td>
			<td>composition: 1x MS salts, 1% (w/v) sucrose, 0.01% (w/v) myoinositol, 0.05% (w/v) MES, and 0.5% (w/v) gellan gum; pH 5.7 adjusted with 1N KOH.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon SMZ25 stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements AR analysis</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x objective lens (P2-SHR PLAN APO)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sCMOS camera (ORCA-Flash4.0 V2)</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td>C11440-22CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square plastic Petri dish</td>
			<td>Simport</td>
			<td>D210-16</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

wide-field, real-time imaging of local and systemic wound signals in arabidopsis

تستجيب النباتات للضغوط الميكانيكية مثل الجرح وآكلي الأعشاب من خلال تحفيز الاستجابات الدفاعية سواء في الأجزاء التالفة أو البعيدة. عند جرح ورقة، تحدث زيادة في تركيز أيونات الكالسيوم الخلوية (Ca2+ إشارة) في موقع الجرح. يتم إرسال هذه الإشارة بسرعة إلى الأوراق غير التالفة ، حيث يتم تنشيط الاستجابات الدفاعية. كشفت أبحاثنا الأخيرة أن الغلوتامات المتسربة من الخلايا المصابة من الورقة إلى الأبوبلاست من حولهم بمثابة إشارة جرح. هذا الغلوتامات ينشط مستقبلات الغلوتامات مثل قنوات Ca2+ نفاذية، مما يؤدي بعد ذلك إلى انتشار إشارة Ca2+ لمسافات طويلة في جميع أنحاء المصنع. ويمكن التقاط الخصائص المكانية والزمانية لهذه الأحداث من خلال التصوير في الوقت الحقيقي للنباتات الحية التي تعبر عن أجهزة الاستشعار البيولوجية الفلورية المشفرة وراثيا. هنا نقدم طريقة تصوير على مستوى النبات في الوقت الحقيقي لمراقبة ديناميكيات كل من إشارات Ca2 + والتغيرات في الغلوتامات المبرمج التي تحدث استجابة للإصابة. يستخدم هذا النهج مجهر مضان واسع المجال ونباتات أربيدوبسي المعدلة وراثيا تعبر عن بروتين الفلورسنت الأخضر (GFP) القائم على Ca2+ و أجهزة الاستشعار الحيوية الغلوتامات. بالإضافة إلى ذلك، نقدم منهجية للحصول بسهولة على انتشار إشارة Ca2+ الناجم عن الجروح والغلوتامات. ويمكن تطبيق هذا البروتوكول أيضا على الدراسات المتعلقة بضغوط النباتات الأخرى للمساعدة في التحقيق في كيفية مشاركة الإشارات النظامية النباتية في شبكات الإشارات والاستجابة الخاصة بها.

يتم عرض نشر إشارة [Ca2 +]cyt و [Glu] apo ردا على الجرح في الشكل 3، الشكل 4، فيلم S1، والفيلم S2. قطع petiole من ورقة 1 في النباتات التي تعبر عن GCaMP3 (في 0 ق) أدى إلى زيادة كبيرة في [Ca2 +]cyt التي تم حثها بسرعة محليا م?...

Watch this Scientific Journal Video about Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis at JoVE.com

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

إن إشارات الكالسيوم الجهازية التي تسببها الغلوتامات خارج الخلية أمر بالغ الأهمية لتحريض استجابات الدفاع النباتي على الجرح الميكانيكي وهجوم الحيوانات العاشبة في النباتات. توضح هذه المقالة طريقة لتصور الديناميكيات المكانية والزمنية لكل من هذين العاملين باستخدام نباتات Arabidopsis thaliana التي تعبر عن أجهزة الاستشعار الحيوية الفلورية الحساسة للكالسيوم والغلوتامات.

تصوير واسع المجال وفي الوقت الحقيقي للإشارات الجرح المحلية والجهازية في Arabidopsis

Plants respond to mechanical stresses such as wounding and herbivory by inducing defense responses both in the damaged and in the distal undamaged parts. ...

يسمح هذا البروتوكول بالتصوير في الوقت الحقيقي على مستوى النبات لنشاط نظام الإشارات الجهازية النباتية من خلال مراقبة ديناميكيات الغلوتامات الكالسيوم والأبوبلاستي استجابة للإصابة. توفر طريقة التصوير في الوقت الحقيقي على نطاق النبات هذه أداة قوية لفهم ديناميكيات الإشارات السريعة والطويلة المسافة في النباتات ، والجمع بين الدقة الزمنية المكانية العالية وسهولة الاستخدام. يوفر هذا البروتوكول إمكانية تقديم نظرة جديدة على الخصائص المكانية والزمنية للإشارات الكالسيوم النظام في كل من الاستجابات الإجهاد الحيوي والأحيائي في الأنواع الأخرى من النباتات.إثبات الإجراء سيكون تاكويا أويمورا، زميل ما بعد الدكتوراه من مختبري. ابدأ بتشغيل مجهر ستيريو فلوري مزود بعدسة 1X الهدف وكاميرا sCMOS. تكوين إعدادات الجهاز لتشعيع مع ضوء الإثارة تركزت على 470 نانومتر، التي تم اختيارها باستخدام مرشح ينقل الضوء بين 450 و 490 نانومتر.الحصول على ضوء الانبعاثات باستخدام مرشح ينقل ما بين 510 و 560 نانومتر. إزالة الغطاء من الطبق الذي يحتوي على النبات ووضعه تحت العدسة الهدف. تحقق من إشارة الفلورسنت من المصنع.ثم انتظر لمدة 30 دقيقة تقريبا في الظلام حتى يتم تكييف النباتات مع الظروف البيئية الجديدة. ضبط التركيز والتكبير لرؤية المصنع كله في مجال الرؤية. ثم تعيين معلمات الاستحواذ للكشف عن إشارات الفلورسنت باستخدام برنامج التصوير المجاهر.تعيين وقت التسجيل إلى 11 دقيقة. صورة لمدة خمس دقائق قبل بدء التجربة لتأقلم النبات مع تشعيع الضوء الأزرق من المجهر ، ثم بدء التسجيل. لتحديد متوسط سجل مضان خط الأساس على الأقل 10 إطارات قبل الجرح أو تطبيق الغلوتامات.للتصوير في الوقت الحقيقي من الجرح الناجم عن أيون الكالسيوم الخلوية وتغيرات تركيز الغلوتامات المبرمج، وقطع بيتيول أو المنطقة الوسطى من ورقة L1 مع مقص. للتصوير في الوقت الحقيقي من الغلوتامات أثار تغييرات الكالسيوم السيتوسوليك، وقطع ما يقرب من ملليمتر واحد من غيض من ورقة L1 عبر الوريد الرئيسي مع مقص. بعد 20 دقيقة على الأقل تطبيق 10 ميكرولتر من الغلوتامات 100 ملليمولار على سطح ورقة قطع.لتحليل كثافة الفلورية مع مرور الوقت، حدد منطقة الاهتمام في المكان الذي سيتم فيه تحليل كثافة الفلورسينس. حدد اثنين من ROIs لحساب سرعة موجة الكالسيوم. في برنامج التصوير انقر على قياس الوقت، وتحديد ودائرة.قياس المسافة بين المنطقتين من خلال النقر على الشروح والقياس والطول والخط البسيط. قياس قيم فلوريسينس الخام في كل عائد الاستثمار مع مرور الوقت عن طريق النقر على قياس، ثم تصدير البيانات الخام إلى برنامج جدول البيانات، لتحويل إشارة الفلورسنت إلى أرقام في كل نقطة زمنية. حدد قيمة الفلورسينس الأساسية، التي تم تحديدها ك F صفر، عن طريق حساب متوسط F على الإطارات العشرة الأولى في البيانات المسجلة، ثم تطبيع بيانات F كما هو موضح في مخطوطة النص.لتحليل موجة سرعة الكالسيوم، حدد نقطة ارتفاع إشارة كبيرة فوق القيم المحفزة مسبقا على أنها تمثل اكتشاف زيادة الكالسيوم في كل عائد استثمار. حساب الفرق الزمني في زيادة الكالسيوم بين اثنين من ROIs والمسافة بينهما لتحديد سرعات أي موجة الكالسيوم. يظهر هنا انتشار التغير الناجم عن الجرح في تركيزات أيون الكالسيوم الخلوي والغلوتامات المبرمج.قطع petiole من ورقة في النباتات التي تعبر عن GCaMP-3 أدى إلى زيادة كبيرة في الكالسيوم. تم تحريضه محليا ثم انتشر في جميع أنحاء الأوعية الدموية. تم نشر الإشارة بسرعة إلى الأوراق المجاورة في غضون بضع دقائق.عند قطع ورقة والنباتات التي تعبر عن الشتيناسي الأساسية أنا شم الغراء، لوحظت زيادة الغلوتامات المبرمج السريع في جميع أنحاء منطقة القطع. في غضون بضع دقائق، انتشرت الإشارة أيضا من خلال الأوعية الدموية. للتصوير في الوقت الحقيقي لنشر إشارة الكالسيوم الناجمة عن تطبيق الغلوتامات، تم قطع حافة ورقة في النباتات التي تعبر عن CCaMP-3.تسبب هذا في زيادة تركيز أيونات الكالسيوم الخلوية المحلية ، ولكن الإشارة اختفت في غضون بضع دقائق. بعد ما يقرب من 10 دقائق، تم تطبيق الغلوتامات على سطح القطع، مما تسبب في زيادة محلية سريعة في تركيز الكالسيوم الخلوي ومن ثم نشر هذه الإشارة إلى أوراق القاصد. لقياس التغيرات داخل تركيز الكالسيوم الصلب الناجم عن الجرح في ورقة الجهازية، تم قياس تغيير المسار الزمني لكثافة إشارة GCaMP-3 في منطقتين من المناطق ذات الاهتمام.تم قياس تغيرات تركيز الغلوتامات المبرمج استجابة للتلف الميكانيكي أيضا. أظهر توقيع الغلوتامات ذروة واحدة في حوالي 100 ثانية بعد الإصابة. وينبغي إجراء هذه التجربة في ظل ظروف يتم التحكم فيها في درجات الحرارة والرطوبة لأنها مرتفعة بسبب التغيرات في هذه الظروف البيئية.يوفر هذا البروتوكول إمكانية توفير رؤى حول الآليات الجزيئية الكامنة وراء إشارات لمسافات طويلة من خلال استخدام المسوخ التي العناصر المعيبة والم المفترضة لنظام الإشارات المختبرية.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

Unit 1

Principles of Cell Signaling

SCIENTISTS IN ACTION

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

التصوير خلايا الثدييات على المدى الطويل باستخدام الميكروسكوب واسعة الميدانية

Combining QD-FRET and Microfluidics to Monitor DNA Nanocomplex Self-Assembly in Real-Time

الجمع بين QD - الحنق و microfluidics الحمض النووي لرصد Nanocomplex الذاتي الجمعية في الوقت الحقيقي

Advances in genomics continue to fuel the development of therapeutics that can target pathogenesis at the cellular and molecular level. Typically ...

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

تحديد ملامح التعبير الجيني في C. ايليجانس استخدام ميكروأري وPCR الوقت الحقيقي

Synapses are composed of a presynaptic active zone in the signaling cell and a postsynaptic terminal in the target cell. In the case of chemical synapses, ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

التصوير في الوقت الحقيقي من واحدة المهندسة رنا النصوص في الخلايا الحية عن طريق Ratiometric ثنائي الجزيء منارات

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

قياس المكانية والزمانية كاليفورنيا<sup&gt; 2+</sup&gt; إشارات في النباتات نبات الأرابيدوبسيس

Developmental and environmental cues induce Ca2+ fluctuations in plant cells. Stimulus-specific spatial-temporal Ca2+ patterns are sensed by cellular Ca2+ ...

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

التصوير المحلية الكالسيوم<sup&gt; 2+</sup&gt; الإشارات في خلايا الثدييات مثقف

Cytosolic Ca2+ ions regulate numerous aspects of cellular activity in almost all cell types, controlling processes as wide-ranging as gene transcription, ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

يستند التحقيق، في الوقت الحقيقي PCR مقاربات للقياس الكمي من microRNAs

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Real-time Imaging of Plant Cell Surface Dynamics with Variable-angle Epifluorescence Microscopy

التصوير في الوقت الحقيقي من النبات خلية سطح حيوية مع زاوية المتغير المجهر epifluorescence

A plant&#8217;s cell surface is its interface for perceiving environmental cues; it responds with cell biological changes such as membrane trafficking and ...

Local Field Fluorescence Microscopy: Imaging Cellular Signals in Intact Hearts

محلي الميدان مضان المجهر: التصوير الإشارات الخلوية في قلوب سليمة

In the heart, molecular signaling studies are usually performed in isolated myocytes. However, many pathological situations such as ischemia and ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

تطبيق مشفرة وراثيا نيون اكسيد النيتريك (NO •) تحقيقات، وgeNOps، التصوير في الوقت الحقيقي من NO • إشارات في زنازين انفرادية

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...