Name: wide-field, real-time imaging of local and systemic wound signals in arabidopsis
Uploaded: 2021-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de Japan Society for the Promotion of Science (17H05007 en 18H05491) aan MT, de National Science Foundation (IOS1557899 en MCB2016177) en de National Aeronautics and Space Administration (NNX14AT25G en 80NSSC19K0126) aan SG.

1. Voorbereiding van plantaardig materiaal
<ol><li>Steriliseer in een microbuis van 1,5 ml de zaden van de Arabidopsis thaliana (Col-0 toetredings)plant, die GCaMP3 of CHIB-iGluSnFR uitdrukt door 3 minuten met 20% (v/v) NaClO te schudden en vervolgens 5 keer te wassen met steriel gedestilleerd water. OPMERKING: De transgene lijnen van Arabidopsis die GCaMP3 of CHIB-iGluSnFR uitdrukken, zijn eerder beschreven6.</li>
	<li>Zaai in een steriele kap 13 oppervlaktegesteriliseerde ...

Systemische signalering is belangrijk voor planten om te reageren op gelokaliseerde externe omgevingsprikkels en vervolgens hun homeostase op een heel plantniveau te behouden. Hoewel ze niet zijn uitgerust met een geavanceerd zenuwstelsel zoals dieren, maken ze gebruik van snelle communicatie zowel binnen als tussen organen op basis van factoren zoals mobiele elektrische (en mogelijk hydraulische) signalen en voortplantingsgolven van ROS en Ca2+ 46,47...

Planten kunnen niet ontsnappen aan biotische spanningen, bijvoorbeeld insecten die zich ermee voeden, dus hebben ze geavanceerde stressdetectie- en signaaltransductiesystemen ontwikkeld om te detecteren en zichzelf vervolgens te beschermen tegen uitdagingen zoals herbivoren1. Bij een wond- of herbivore aanval initiëren planten snelle afweerreacties, waaronder accumulatie van het fytohormoon jasmonzuur (JA), niet alleen op de gewonde plaats, maar ook in onbeschadigde distale organen2. Deze JA activeert vervolgens beide afweerreacties in de direct beschadigde weefsels en induceert preventief afweer in de onbeschadigde delen van de plant. Bij Arabidopsiswerd de accumulatie van JA veroorzaakt door verwonding gedetecteerd in distale, intacte bladeren binnen slechts een paar minuten na schade elders in de plant, wat suggereert dat een snel en langeafstandssignaal wordt overgedragen van het gewonde blad3. Verschillende kandidaten, zoals Ca2+,reactieve zuurstofsoorten (ROS) en elektrische signalen, zijn voorgesteld om te dienen als deze langeafstandswondsignalen in planten4,5.
Ca2+ is een van de meest veelzijdige en alomtegenwoordige tweede boodschapperelementen in eukaryotische organismen. In planten veroorzaken het kauwen van rupsen en mechanische wond drastische verhogingen van de cytosolische Ca2+ concentratie ([Ca2+]cyt) zowel in het gewonde blad als in ongewikkelde verre bladeren6,7. Dit systemische Ca2+ signaal wordt ontvangen door intracellulaire Ca2+-sensing eiwitten, die leiden tot de activering van downstream verdedigingssignaleringsroutes, waaronder JA-biosynthese8,9. Ondanks talrijke dergelijke rapporten die het belang van Ca2+ signalen in de reacties op plantenwonden ondersteunen, is de informatie over de ruimtelijke en temporele kenmerken van Ca2+ signalen veroorzaakt door verwonding beperkt.
Real-time beeldvorming met behulp van genetisch gecodeerde Ca2+ indicatoren is een krachtig instrument om de ruimtelijke en temporele dynamiek van Ca2+ signalen te monitoren en te kwantificeren. Tot op heden zijn versies van dergelijke sensoren ontwikkeld die de visualisatie van Ca2+ signalen op het niveau van een enkele cel, naar weefsels, organen en zelfs hele planten mogelijk maken10. De eerste genetisch gecodeerde biosensor voor Ca2+ gebruikt in planten was het bioluminescente eiwit aequorin afgeleid van de kwal Aequorea victoria11. Hoewel dit chemiluminescente eiwit is gebruikt om Ca2 + veranderingen te detecteren in reactie op verschillende spanningen in planten12,13,14,15,16,17,18, is het niet goed geschikt voor real-time beeldvorming vanwege het extreem lage luminescente signaal dat het produceert. Förster Resonance Energy Transfer (FRET)-gebaseerde Ca2+ indicatoren, zoals de Gele cameleons, zijn ook met succes gebruikt om de dynamiek van een reeks Ca2+ signaleringsgebeurtenissen in planten19,20,21,22,23,24te onderzoeken . Deze sensoren zijn compatibel met beeldvormingsbenaderingen en bestaan meestal uit het Ca2+ bindende eiwit calmodulin (CaM) en een CaM-bindend peptide (M13) uit een myosine lichtketenkinase, allemaal versmolten tussen twee fluorofooreiwitten, over het algemeen een Cyaan Fluorescerend Eiwit (CFP) en een Gele Fluorescerende Eiwit variant (YFP)10. Ca2+ binding aan CaM bevordert de interactie tussen CaM en M13, wat leidt tot een conformationele verandering van de sensor. Deze verandering bevordert de energieoverdracht tussen het GVB en het GVB, waardoor de fluorescentie-intensiteit van het GVB toeneemt en tegelijkertijd de fluorescentie-emissie van het GVB afneemt. Het monitoren van deze verschuiving van GVB naar YFP fluorescentie geeft dan een maat voor de toename van ca2+ niveau. Naast deze FRET-sensoren zijn single fluorescent protein (FP)-gebaseerde Ca2+ biosensoren, zoals GCaMP en R-GECO, ook compatibel met plant imaging benaderingen en worden ze veel gebruikt om [Ca2+]cytveranderingen te bestuderen vanwege hun hoge gevoeligheid en gebruiksgemak25,26,27,28,29,30. GCaMP's bevatten een enkele circulair gepermuteerde (cp) GFP, opnieuw gefuseerd met CaM en het M13-peptide. De Ca2+-afhankelijke interactie tussen CaM en M13 veroorzaakt een conformationele verandering in de sensor die een verschuiving in de protonatietoestand van de cpGFP bevordert, waardoor het fluorescerende signaal wordt verbeterd. Dus naarmate ca2+ niveaus stijgen, neemt het cpGFP-signaal toe.
Om de dynamiek van Ca2+ signalen te onderzoeken die worden gegenereerd als reactie op mechanische wond- of herbivore voeding, hebben we transgene Arabidopsis thaliana-planten gebruikt die een GCaMP-variant, GCaMP3 en een fluorescentiemicroscoop in het breed veld uitdrukken6. Deze aanpak is erin geslaagd om een snelle overdracht van een ca2+ signaal over lange afstand van de wondplaats op een blad naar de hele plant te visualiseren. Zo werd een toename van [Ca2+]cyt onmiddellijk gedetecteerd op de wondplaats, maar dit Ca2 + signaal werd vervolgens binnen een paar minuten na het verwonden doorgegeven aan de naburige bladeren door de vasculatuur. Bovendien ontdekten we dat de overdracht van dit snelle systemische wondsignaal wordt afgeschaft in Arabidopsis-planten met mutaties in twee glutamaatreceptorachtige genen, Glutamaatreceptor Zoals (GLR), GLR3.3 en GLR3.66. De GLR's lijken te functioneren als aminozuur gated Ca2+ kanalen die betrokken zijn bij diverse fysiologische processen, waaronder wondrespons3, pollenbuisgroei31, wortelontwikkeling32, koude respons33, en aangeboren immuniteit34. Ondanks deze goed begrepen, brede fysiologische functie van de GLR's, is informatie over hun functionele eigenschappen, zoals hun ligand specificiteit, ion selectiviteit en subcellulaire lokalisatie, beperkt35. Recente studies meldden echter dat GLR3.3 en GLR3.6 gelokaliseerd zijn in respectievelijk het floëem en xyleem. Planten-GLR's vertonen overeenkomsten met ionotrope glutamaatreceptoren (iGluRs)36 bij zoogdieren, die worden geactiveerd door aminozuren, zoals glutamaat, glycine en D-serine in het zenuwstelsel van zoogdieren37. We hebben inderdaad aangetoond dat de toepassing van 100 mM glutamaat, maar niet van andere aminozuren, op de wondplaats een snel Ca2+ signaal op lange afstand induceert in Arabidopsis, wat aangeeft dat extracellulair glutamaat waarschijnlijk fungeert als een wondsignaal in planten6. Deze reactie wordt afgeschaft in de glr3.3/glr3.6 mutant wat suggereert dat glutamaat kan werken via een of beide van deze receptor-achtige kanalen en inderdaad, AtGLR3.6 werd onlangs aangetoond te worden gated door deze niveaus van glutamaat38.
In planten is, naast zijn rol als structureel aminozuur, ook glutamaat voorgesteld als een belangrijke ontwikkelingsregulator39; de ruimtelijke en temporele dynamiek worden echter slecht begrepen. Net als voor Ca2+zijn er verschillende genetisch gecodeerde indicatoren voor glutamaat ontwikkeld om de dynamiek van dit aminozuur in levende cellen40,41te monitoren . iGluSnFR is een GFP-gebaseerde single-FP glutamaat biosensor bestaande uit cpGFP en een glutamaatbindend eiwit (GltI) uit Escherichia coli42,43. De conformationele verandering van iGluSnFR, die wordt veroorzaakt door glutamaatbinding aan GltI, resulteert in een verbeterde GFP-fluorescentie-emissie. Om te onderzoeken of extracellulair glutamaat fungeert als een signaalmolecuul in de reactie van plantenwonden, hebben we de iGluSnFR-sequentie verbonden met de basis chitinase signaalpeptide secretiesequentie (CHIB-iGluSnFR) om deze biosensor in de apoplastische ruimte te lokaliseren6. Deze aanpak maakte beeldvorming mogelijk van eventuele veranderingen in de apoplastische glutamaatconcentratie ([Glu]apo) met behulp van transgene Arabidopsis-planten die deze sensor uitdrukken. We ontdekten snelle toenames van het iGluSnFR-signaal op de wondplaats. Deze gegevens ondersteunen het idee dat glutamaat uit de beschadigde cellen / weefsels naar de apoplast lekt bij het verwonden en fungeert als een schadesignaal dat de GLR's activeert en leidt tot het ca2 + -signaal over lange afstand in planten6.
Hier beschrijven we een plantbrede real-time beeldvormingsmethode met behulp van genetisch gecodeerde biosensoren om de dynamiek van langeafstandssignalen ca2+ en extracellulair glutamaat te monitoren en te analyseren als reactie opwondvorming 6. De beschikbaarheid van breedveldfluorescentiemicroscopie en transgene planten die genetisch gecodeerde biosensoren uitdrukken, biedt een krachtige, maar gemakkelijk te implementeren aanpak om snel overgedragen langeafstandssignalen, zoals Ca2+ golven, te detecteren.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Arabidopsis expressing GCaMP3</td>
			<td>Saitama University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arabidopsis expressing CHIB-iGluSnFR</td>
			<td>Saitama University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 7</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamate</td>
			<td>FUJIFILM Wako</td>
			<td>072-00501</td>
			<td>Dissolved in a liquid growth medium [1/2x MS salts, 1% (w/v) sucrose, and 0.05% (w/v) MES; pH 5.1 adjusted with 1N KOH].</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murashige and Skoog (MS) medium</td>
			<td>FUJIFILM Wako</td>
			<td>392-00591</td>
			<td>composition: 1x MS salts, 1% (w/v) sucrose, 0.01% (w/v) myoinositol, 0.05% (w/v) MES, and 0.5% (w/v) gellan gum; pH 5.7 adjusted with 1N KOH.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon SMZ25 stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements AR analysis</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x objective lens (P2-SHR PLAN APO)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sCMOS camera (ORCA-Flash4.0 V2)</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td>C11440-22CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square plastic Petri dish</td>
			<td>Simport</td>
			<td>D210-16</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

wide-field, real-time imaging of local and systemic wound signals in arabidopsis

Planten reageren op mechanische spanningen zoals wond- en herbivoren door afweerreacties op te wekken, zowel in de beschadigde als in de distale onbeschadigde delen. Bij het verwonden van een blad treedt een toename van de cytosolische calciumionconcentratie (Ca2+ signaal) op de wondplaats op. Dit signaal wordt snel doorgegeven aan onbeschadigde bladeren, waar verdedigingsreacties worden geactiveerd. Ons recente onderzoek onthulde dat glutamaat dat uit de gewonde cellen van het blad lekt in de apoplast om hen heen dient als wondsignaal. Dit glutamaat activeert glutamaatreceptor-achtige Ca 2+ doorlaatbare kanalen, wat vervolgens leidt tot lange afstand Ca2+ signaal propagatie door de hele plant. De ruimtelijke en temporele kenmerken van deze gebeurtenissen kunnen worden vastgelegd met real-time beeldvorming van levende planten die genetisch gecodeerde fluorescerende biosensoren uitdrukken. Hier introduceren we een plantbrede, real-time beeldvormingsmethode om de dynamiek van zowel de Ca2+ signalen als veranderingen in apoplastisch glutamaat die optreden als reactie op wondvorming te monitoren. Deze aanpak maakt gebruik van een breedveldfluorescentiemicroscoop en transgene Arabidopsis-planten die op groen fluorescerend eiwit (GFP) gebaseerde Ca2+ en glutamaatbiosensoren uitdrukken. Daarnaast presenteren we methodologie om gemakkelijk wondgeïnduceerde, glutamaat-geactiveerde snelle en lange afstand Ca2 + signaalvoortplanting uit te lokken. Dit protocol kan ook worden toegepast op studies over andere plantenspanningen om te helpen onderzoeken hoe systemische signalering van planten betrokken kan zijn bij hun signalerings- en responsnetwerken.

Signaalvoortplanting van [Ca2+]cyt en [Glu]apo als reactie op verwondingen wordt weergegeven in figuur 3, figuur 4, film S1en film S2. Het snijden van de bladsteel van blad 1 in planten die GCaMP3 uitdrukken (bij 0 s) leidde tot een significante toename van [Ca2+]cyt die lokaal snel werd geïnduceerd door de vasculatuur (bij 40 s) (<strong cl...

Watch this Scientific Journal Video about Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis at JoVE.com

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

Extracellulaire glutamaat-geactiveerde systemische calcium signalering is van cruciaal belang voor de inductie van plantenverdedigingsreacties op mechanische wond- en herbivore-aanval in planten. Dit artikel beschrijft een methode om de ruimtelijke en temporele dynamiek van beide factoren te visualiseren met behulp van Arabidopsis thaliana-planten die calcium- en glutamaatgevoelige fluorescerende biosensoren uitdrukken.

Wide-Field, Real-Time Beeldvorming van lokale en systemische wondsignalen bij Arabidopsis

Plants respond to mechanical stresses such as wounding and herbivory by inducing defense responses both in the damaged and in the distal undamaged parts. ...

Dit protocol maakt plantbrede real-time beeldvorming van de activiteit van het plant systemische signaleringssysteem mogelijk door de dynamiek van het calcium- en apoplastische glutamaat te monitoren als reactie op verwondingen. Deze plantbrede real-time beeldvormingsmethode biedt een robuust hulpmiddel om de dynamiek van de snelle en langeafstandssignalen in planten te begrijpen, waarbij een hoge ruimtelijke tijdresolutie en gebruiksgemak worden gecombineerd. Dit protocol biedt het potentieel om een nieuw inzicht te geven in de ruimtelijke en temporele kenmerken van het systeem calciumsignalering in zowel biotische als abiotische stressreacties bij andere plantensoorten.Takuya Uemura, een postdoctoraal fellow van mijn laboratorium, demonstreert de procedure. Begin met het inschakelen van de gemotoriseerde fluorescerende stereomicroscoop, uitgerust met een 1X objectieve lens en een sCMOS-camera. Configureer de apparaatinstellingen om te bestralen met excitatielicht gecentreerd op 470 nanometer, geselecteerd met behulp van een filter dat licht uitzendt tussen 450 en 490 nanometer.Verkrijg emissielicht met behulp van een filter dat tussen de 510 en 560 nanometer uitzendt. Verwijder het deksel van de schaal met de plant en plaats deze onder de objectieve lens. Controleer het fluorescerende signaal van de installatie.Wacht dan ongeveer 30 minuten in het donker tot de planten zijn aangepast aan de nieuwe omgevingsomstandigheden. Pas de focus en vergroting aan om de hele plant in het gezichtsveld te zien. Stel vervolgens de acquisitieparameters in om de fluorescerende signalen te detecteren met behulp van de beeldvormingssoftware voor microscopen.Stel de opnametijd in op 11 minuten. Beeld gedurende vijf minuten voorafgaand aan het starten van het experiment om de plant te laten wennen aan de blauwlichtbestraling van de microscoop en begin vervolgens met opnemen. Om de gemiddelde basislijn fluorescentie te bepalen, registreert u ten minste 10 frames voordat u verwondt of glutamaat aanbrengt.Voor real-time beeldvorming van wond geïnduceerde cytosolische calciumion en apoplastische glutamaat concentratie veranderingen, snijd de bladsteel of het middelste gebied van blad L1 met een schaar. Voor real-time beeldvorming van glutamaat geactiveerd cytosolic calcium veranderingen, snijd ongeveer een millimeter van de punt van blad L1 over de hoofdader met een schaar. Breng na ten minste 20 minuten 10 microliter van 100 millimolar glutamaat aan op het snijoppervlak van het blad.Definieer voor fluorescentie-intensiteitsanalyse in de loop van de tijd een interessegebied op de plaats waar fluorescentie-intensiteit moet worden geanalyseerd. Definieer twee ROIs voor de snelheidsberekening van de calciumgolf. Klik in de beeldvormingssoftware op tijdmeting, definiëren en cirkelen.Meet de afstand tussen de twee regio's door te klikken op annotaties en meting, lengte en eenvoudige lijn. Meet de ruwe florescentiewaarden in elke ROI in de loop van de tijd door op meten te klikken en exporteer vervolgens de onbewerkte gegevens naar spreadsheetsoftware om het fluorescerende signaal op elk tijdstip in getallen om te zetten. Bepaal de fluorescentiewaarde van de basislijn, die wordt vergoddelijkt als F nul, door de gemiddelde F over de eerste 10 frames in de opgenomen gegevens te berekenen en vervolgens de F-gegevens te normaliseren zoals beschreven in het teksthandschrift.Definieer voor calciumsnelheidsgolfanalyse een significant signaalstijgingspunt boven de vooraf gestimuleerde waarden als een detectie van een calciumverhoging in elke ROI. Bereken het tijdsverschil in de calciumtoename tussen de twee ROI's en de afstand daartussen om de snelheden van een calciumgolf te bepalen. De voortplanting van een wondgeriggereerde verandering in de concentraties van het cytosolische calciumion en apoplastisch glutamaat wordt hier getoond.Het snijden van de bladsteel van een blad in planten die GCaMP-3 uitdrukken, leidde tot een aanzienlijke toename van calcium. Het werd lokaal geïnduceerd en vervolgens verspreid over de vasculatuur. Het signaal werd snel doorgegeven aan naburige bladeren binnen een paar minuten.Bij het snijden van een blad en planten die basis chitinase uitdrukken, lijm ik lijm sniffer, werd een snelle apoplastische glutamaat toename waargenomen rond het snijgebied. Binnen een paar minuten verspreidde het signaal zich ook door de vasculatuur. Voor real-time beeldvorming van calciumsignaalvoortplanting die door de toepassing van glutamaat wordt veroorzaakt, werd de rand van een blad in installaties die CCaMP-3 uitdrukken gesneden.Dit veroorzaakte een lokale cytosolische calciumionenconcentratiestijging, maar het signaal verdween binnen een paar minuten. Na ongeveer 10 minuten werd glutamaat op het snijoppervlak aangebracht, waardoor de concentratie cytosolisch calcium snel lokaal steeg en dit signaal vervolgens werd doorgegeven aan distale bladeren. Om de veranderingen in een vaste calciumconcentratie te meten die werden veroorzaakt door wond in het systemische blad, werd de tijdsverandering van de GCaMP-3-signaalintensiteit gemeten in twee interessegebieden.Apoplastische glutamaatconcentratieveranderingen als reactie op mechanische schade werden ook gemeten. De glutamaatsignatuur vertoonde een enkele piek op ongeveer 100 seconden na het verwonden. Dit experiment moet worden uitgevoerd onder temperatuur- en vochtigheidsgecontroleerde omstandigheden, omdat deze worden verhoogd door veranderingen in deze omgevingsomstandigheden.Dit protocol biedt een potentieel om inzicht te geven in de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan langeafstandssignalering door mutanten te gebruiken die de defecte en putatieve elementen van het labsignaleringssysteem.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

Unit 1

Principles of Cell Signaling

SCIENTISTS IN ACTION

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Op lange termijn Imaging zoogdiercellen met behulp van Wide-Field Microscopie

Combining QD-FRET and Microfluidics to Monitor DNA Nanocomplex Self-Assembly in Real-Time

De combinatie van QD-FRET en Microfluidics aan DNA Nanocomplex zelf-assemblage Monitor in Real-Time

Advances in genomics continue to fuel the development of therapeutics that can target pathogenesis at the cellular and molecular level. Typically ...

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Het bepalen van genetische expressie profielen in C. elegans Met behulp van microarray en real-time PCR

Synapses are composed of a presynaptic active zone in the signaling cell and a postsynaptic terminal in the target cell. In the case of chemical synapses, ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

Real-time beeldvorming van Single Engineered RNA-transcripten in levende cellen door gebruik Ratiometrische Bimoleculaire Beacons

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Meten Ruimtelijke en temporele Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Signalen in Arabidopsis Planten

Developmental and environmental cues induce Ca2+ fluctuations in plant cells. Stimulus-specific spatial-temporal Ca2+ patterns are sensed by cellular Ca2+ ...

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

Imaging Lokale Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Signalen in gekweekte zoogdiercellen

Cytosolic Ca2+ ions regulate numerous aspects of cellular activity in almost all cell types, controlling processes as wide-ranging as gene transcription, ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

Probe-gebaseerde real-time PCR Benaderingen voor kwantitatieve meting van microRNAs

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Real-time Imaging of Plant Cell Surface Dynamics with Variable-angle Epifluorescence Microscopy

Real-time beeldvorming van Plant Cell Surface Dynamics met variabele hoek epifluorescentiemicroscopie

A plant&#8217;s cell surface is its interface for perceiving environmental cues; it responds with cell biological changes such as membrane trafficking and ...

Local Field Fluorescence Microscopy: Imaging Cellular Signals in Intact Hearts

Lokale Field fluorescentiemicroscopie: Beeldvorming van cellulaire signalen in Intact Hearts

In the heart, molecular signaling studies are usually performed in isolated myocytes. However, many pathological situations such as ischemia and ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Toepassing van genetisch gecodeerde Fluorescent stikstofoxide (NO •) Probes, de geNOps, voor real-time beeldvorming van NO • Signalen in afzonderlijke cellen

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...