Name: wide-field, real-time imaging of local and systemic wound signals in arabidopsis
Uploaded: 2021-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים של האגודה היפנית לקידום המדע (17H05007 ו 18H05491) ל MT, הקרן הלאומית למדע (IOS1557899 ו MCB2016177) ומינהל האווירונאוטיקה והחלל הלאומי (NNX14AT25G ו 80NSSC19K0126) ל SG.

1. הכנת חומר צמחי
<ol><li>במיקרו-צינורית של 1.5 מ"ל, פני השטח מעקרים את הזרעים של הצמח Arabidopsis thaliana (הצטרפות קול-0) המבטאים GCaMP3 או CHIB-iGluSnFR על ידי טלטול עם 20% (v /v) NaClO במשך 3 דקות ולאחר מכן לשטוף 5 פעמים עם מים מזוקקים סטריליים. הערה: הקווים המהונדסים של Arabidopsis המבטא GCaMP3 או CHIB-iGluSnFR תוארו בעבר<sup ...

איתות מערכתי חשוב לצמחים להגיב לגירויים סביבתיים חיצוניים מקומיים ולאחר מכן לשמור על הומאוסטזיס שלהם ברמת צמח שלמה. למרות שהם אינם מצוידים במערכת עצבים מתקדמת כמו בעלי חיים, הם משתמשים בתקשורת מהירה הן בתוך ובין איברים המבוססים על גורמים כגון אותות חשמליים ניידים (ואולי הידראוליים) וגלי?...

צמחים אינם יכולים לברוח מלחצים ביוטיים, למשל, חרקים הניזונים מהם, ולכן הם פיתחו חישת מתח מתוחכמת ומערכות העברת אותות כדי לזהות ואז להגן על עצמם מפני אתגרים כגון אוכלי עשב1. עם פציעה או התקפת אוכלי עשב, צמחים ליזום תגובות הגנה מהירה כולל הצטברות של חומצה ג'אסמונית phytohormone (JA) לא רק באתר הפצוע, אלא גם באיברים דיסטליים ניזוק2. JA זה אז הן מפעילה תגובות הגנה ברקמות שנפגעו ישירות וגורם מראש הגנות בחלקים ניזוקו של הצמח. ב Arabidopsis, הצטברות של JA הנגרמת על ידי פציעה זוהתה עלים דיסטליים, שלמים בתוך דקות ספורות של נזק במקומות אחרים במפעל מציע כי אות מהיר למרחקים ארוכים מועבר מן העלה הפצוע3. מספר מועמדים, כגון Ca2 +, מינים חמצן תגובתי (ROS), ואותות חשמליים, הוצעו לשמש אותם פצע למרחקים ארוכים אלה בצמחים4,5.
Ca2+ הוא אחד האלמנטים המגוונים ביותר בכל מקום שליח שני באורגניזמים אוקריוטיים. בצמחים, לעיסת זחל ופציעה מכנית גורמים לעלייה דרסטית בריכוז ציטוזולי Ca2+ ([Ca2+]ציט)הן בעל הפצוע והן בעלים מרוחקים לא מבוססים6,7. אות Ca2+ מערכתי זה מתקבל על ידי חלבונים תאיים Ca2+חישה, אשר מובילים להפעלת מסלולי איתות הגנה במורד הזרם, כולל JA biosynthesis8,9. למרות דיווחים רבים כאלה התומכים בחשיבות של Ca2 + אותות בתגובות פצע הצמח, מידע על המאפיינים המרחביים והטמפורליים של Ca2 + אותות הנגרמים על ידי פציעה מוגבל.
הדמיה בזמן אמת באמצעות מחווני Ca2+ מקודדים גנטית היא כלי רב עוצמה לניטור וכימות הדינמיקה המרחבית והטמפורלית של אותות Ca2+ . עד כה פותחו גרסאות של חיישנים כאלה המאפשרות הדמיה של אותות Ca2+ ברמה של תא יחיד, לרקמות, איברים ואפילו צמחים שלמים10. הביוסנסור הראשון המקודד גנטית עבור Ca2+ המשמש בצמחים היה אקוורין החלבון הביולומינסנטי המופק ממדוזה Aequorea victoria11. למרות חלבון chemiluminescent זה שימש כדי לזהות Ca2 + שינויים בתגובה לחצים שונים בצמחים12,13,14,15,16,17,18, זה לא מתאים היטב עבור הדמיה בזמן אמת בשל אות זוהר נמוך מאוד שהיא מייצרת. Förster תהודה העברת אנרגיה (FRET)מבוסס Ca2 + אינדיקטורים, כגון הגמלים הצהובים, שימשו גם בהצלחה כדי לחקור את הדינמיקה של מגוון של Ca2 + אירועי איתות במפעלים19,20,21,22,23,24. חיישנים אלה תואמים לגישות הדמיה ובדרך כלל מורכבים מ- Ca2 + חלבון מחייב calmodulin (CaM) ופפטיד מחייב CaM (M13) מתוך קינאז שרשרת אור מיוסין, כל התמזגו בין שני חלבוני פלואורופור, בדרך כלל חלבון פלואורסצנטי ציאן (CFP) וגרסה חלבון פלואורסצנטי צהוב (YFP)10. Ca2+ מחייב CaM מקדם את האינטראקציה בין CaM ו M13 המוביל לשינוי קונפורמציה של החיישן. שינוי זה מקדם העברת אנרגיה בין CFP ו- YFP, אשר מגביר את עוצמת הפלואורסצנטיות של YFP תוך הפחתת פליטת הפלואורסצנטיות מן CFP. ניטור מעבר זה מ- CFP לפלואורסצנטיות YFP מספק מדד לעלייה ברמת Ca2+ . בנוסף לחיישני FRET אלה, חלבון פלואורסצנטי יחיד (FP)מבוסס Ca2+ biosensors, כגון GCaMP ו- R-GECO, תואמים גם הם לגישות הדמיה צמחית ומשמשים באופן נרחב לחקר [Ca2+] שינוייםבציט בשל הרגישות הגבוהה שלהם וקלות השימוש25,26,27,28,29,30. GCaMPs מכילים GFP יחיד שעבר מוטציה מעגלית (cp), שוב התמזגו עם CaM ופפטיד M13. האינטראקציה התלויה ב- Ca2+בין CaM ל- M13 גורמת לשינוי קונפורמי בחיישן המקדם שינוי במצב הפרוטונציה של cpGFP, ומשפר את אות הפלואורסצנטי שלו. לכן, כמו Ca2 + רמות עלייה, אות cpGFP עולה.
כדי לחקור את הדינמיקה של Ca2 + אותות שנוצרו בתגובה לפצעים מכניים או האכלת אוכלי עשב, השתמשנו בצמחי תלתנא ערבידופסיס מהונדסים המבטאים גרסה GCaMP, GCaMP3, ומיקרוסקופ פלואורסצנטי שדה רחב6. גישה זו הצליחה לדמיין העברה מהירה של אות Ca2+ למרחקים ארוכים מאתר הפצע על עלה לצמח כולו. לכן, עלייה [Ca2+]ציט זוהה מיד באתר הפצע אבל זה Ca2 + אות הופץ אז לעלים השכנים דרך כלי הדם בתוך כמה דקות של פציעה. יתר על כן, מצאנו כי העברת אות הפצע המערכתי המהיר הזה מבוטלת בצמחי Arabidopsis עם מוטציות בשני גנים דמויי קולטן גלוטמט, קולטן גלוטמט כמו (GLR), GLR3.3, ו GLR3.66. GLRs מופיעים לתפקד כמו חומצת אמינו מגודר Ca2 + ערוצי מעורבים בתהליכים פיזיולוגיים מגוונים, כולל תגובת פצע3, צמיחת צינור אבקה31, פיתוח שורש32, תגובה קרה33, וחסינות מולדת34. למרות פונקציה פיזיולוגית רחבה ומובנה זו של GLRs, מידע על המאפיינים הפונקציונליים שלהם, כגון הספציפיות שלהם ליגנד, סלקטיביות היונים, לוקליזציה תת תאית, מוגבלים35. עם זאת, מחקרים אחרונים דיווחו כי GLR3.3 ו GLR3.6 הם מקומיים פלום ו xylem, בהתאמה. ל- GLRs של צמחים יש קווי דמיון לקולטני גלוטמט יונוטרופיים (iGluRs)36 ביונקים, המופעלים על ידי חומצות אמינו, כגון גלוטמט, גליצין ו- D-serine במערכת העצבים של היונקים37. אכן, הוכחנו כי היישום של גלוטמט 100 מ"מ, אבל לא חומצות אמינו אחרות, באתר הפצע גורם מהיר, למרחקים ארוכים Ca2 + אות Arabidopsis, המציין כי גלוטמט חוץ תאיים סביר פועל כאות פצע בצמחים6. תגובה זו מבוטלת glr3.3/glr3.6 מוטנט מציע כי גלוטמט עשוי לפעול דרך אחד או שניהם של ערוצים אלה דמויי קולטן ואכן, AtGLR3.6 הוכח לאחרונה להיות מגודר על ידי רמות אלה של גלוטמט38.
בצמחים, בנוסף לתפקידו כחומצת אמינו מבנית, גלוטמט הוצע גם כרגולטור התפתחותי מרכזי39; עם זאת, הדינמיקה המרחבית והטמפורלית שלו מובנת היטב. בדיוק כמו Ca2 +, מספר אינדיקטורים מקודדים גנטית גלוטמט פותחו כדי לפקח על הדינמיקה של חומצת אמינו זו בתאיםחיים 40,41. iGluSnFR הוא ביו-סנסור גלוטמט יחיד מבוסס GFP המורכב מ- cpGFP וחלבון מחייב גלוטמט (GltI) מ Escherichia coli42,43. השינוי הקונפורמי של iGluSnFR, המושרה על ידי גלוטמט מחייב GltI, תוצאות פליטת פלואורסצנטיות GFP משופרת. כדי לחקור אם גלוטמט חוץ-תאי פועל כמולקולה איתות בתגובת פצע הצמח, חיברנו את רצף iGluSnFR עם רצף הפרשת פפטיד אות chitinase בסיסי (CHIB-iGluSnFR) כדי להתאים את biosensor זה בחלל האפופלסטיק6. גישה זו אפשרה הדמיה של כל שינוי בריכוז הגלוטמט האפופלוסי ([Glu]apo) באמצעות צמחי Arabidopsis מהונדסים המבטאים חיישן זה. גילינו עליות מהירות באות iGluSnFR באתר הפציעה. נתונים אלה תומכים ברעיון כי גלוטמט דולף מתוך התאים הפגועים / רקמות כדי apoplast על הפציעה ופועל כאות נזק הפעלת GLRs ומוביל למרחקים ארוכים Ca2 + אות בצמחים6.
כאן, אנו מתארים שיטת הדמיה כלל-צמחית בזמן אמת באמצעות biosensors מקודדים גנטית כדי לפקח ולנתח את הדינמיקה של Ca2+ למרחקים ארוכים אותות גלוטמט חוץ תאיים בתגובה לפציעה6. הזמינות של מיקרוסקופיה פלואורסצנטית רחבת שדה וצמחים מהונדסים המבטאים ביו-סנסורים מקודדים גנטית מספקת גישה רבת עוצמה אך מיושמת בקלות לזיהוי אותות למרחקים ארוכים המועברים במהירות, כגון גלי Ca2+ .

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Arabidopsis expressing GCaMP3</td>
			<td>Saitama University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arabidopsis expressing CHIB-iGluSnFR</td>
			<td>Saitama University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 7</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamate</td>
			<td>FUJIFILM Wako</td>
			<td>072-00501</td>
			<td>Dissolved in a liquid growth medium [1/2x MS salts, 1% (w/v) sucrose, and 0.05% (w/v) MES; pH 5.1 adjusted with 1N KOH].</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murashige and Skoog (MS) medium</td>
			<td>FUJIFILM Wako</td>
			<td>392-00591</td>
			<td>composition: 1x MS salts, 1% (w/v) sucrose, 0.01% (w/v) myoinositol, 0.05% (w/v) MES, and 0.5% (w/v) gellan gum; pH 5.7 adjusted with 1N KOH.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon SMZ25 stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements AR analysis</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x objective lens (P2-SHR PLAN APO)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sCMOS camera (ORCA-Flash4.0 V2)</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td>C11440-22CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square plastic Petri dish</td>
			<td>Simport</td>
			<td>D210-16</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

wide-field, real-time imaging of local and systemic wound signals in arabidopsis

צמחים מגיבים ללחצים מכניים כגון פצעים ואוכלי עשב על ידי גרימת תגובות הגנה הן בחלקים הפגועים והן בחלקים הלא פגומים. עם פציעת עלה, מתרחשת עלייה בריכוז יון הסידן הציטוזולי (Ca2+ אות) באתר הפצע. אות זה מועבר במהירות לעלים לא פגומים, שם מופעלות תגובות ההגנה. המחקר האחרון שלנו גילה כי גלוטמט דולף מהתאים הפצועים של העלה לתוך apoplast סביבם משמש אות פצע. גלוטמט זה מפעיל ערוצים חדירים דמויי קולטן גלוטמט Ca2+ , מה שמוביל להפצת אותות Ca2+ למרחקים ארוכים ברחבי הצמח. המאפיינים המרחביים והטמפורליים של אירועים אלה ניתן ללכוד עם הדמיה בזמן אמת של צמחים חיים המבטאים biosensors פלואורסצנטי מקודד גנטית. כאן אנו מציגים שיטת הדמיה כלל-צמחית בזמן אמת כדי לנטר את הדינמיקה של אותות Ca2+ ושינויים בגלוטמט אפופלסטי המתרחשים בתגובה לפציעה. גישה זו משתמשת במיקרוסקופ פלואורסצנטי רחב שדה ובצמחי Arabidopsis מהונדסים המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) המבוסס על Ca2+ וביו-סנסורים גלוטמטים. בנוסף, אנו מציגים מתודולוגיה כדי לעורר בקלות פצע-induced, גלוטמט מופעלות מהירות למרחקים ארוכים Ca2 + התפשטות אות. פרוטוקול זה יכול להיות מיושם גם על מחקרים על לחצים צמחיים אחרים כדי לעזור לחקור כיצד איתות מערכתי צמח עשוי להיות מעורב ברשתות האיתות והתגובה שלהם.

הפצת אותות של [Ca2+]ct ו- [Glu]apo בתגובה לפציעה מוצגת באיור 3, איור 4, סרט S1וסרט S2. חיתוך פטיולה של העלה 1 בצמחים המבטאים GCaMP3 (ב 0 s) הוביל לעלייה משמעותית [Ca2+]ציט כי היה במהירות המושרה באופן מקומי דרך כל?...

Watch this Scientific Journal Video about Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis at JoVE.com

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

איתות סידן מערכתי המופעל על ידי גלוטמט חוץ-תאי הוא קריטי לגיוס תגובות הגנת הצמח לפצעים מכניים ולתקפת אוכלי עשב בצמחים. מאמר זה מתאר שיטה לדמיין את הדינמיקה המרחבית והטמפורלית של שני גורמים אלה באמצעות צמחי תאליאנה ערבידופסיס המבטאים ביוסנסורים פלואורסצנטיים רגישים לסידן וגלוטמט.

שדה רחב, הדמיה בזמן אמת של אותות פצע מקומיים ומערכתיים ב Arabidopsis

Plants respond to mechanical stresses such as wounding and herbivory by inducing defense responses both in the damaged and in the distal undamaged parts. ...

פרוטוקול זה מאפשר הדמיה בזמן אמת של פעילות מערכת האיתות המערכתית של הצמח באמצעות ניטור הדינמיקה של הסידן והגלוטמט האפופלסטי בתגובה לפציעה. שיטת הדמיה זו בזמן אמת מספקת כלי חזק להבנת הדינמיקה של האותות המהירים והינעירוניים בצמחים, המשלבים רזולוציה זמנית מרחבית גבוהה וקלות שימוש. פרוטוקול זה מציע את הפוטנציאל לספק תובנה חדשה על המאפיינים המרחביים והטמפורליים של המערכת סידן איתות הן תגובות מתח ביוטי ו abiotic במינים אחרים של צמחים.הדגמת ההליך תהיה טאקויה אומורה, פוסט דוקטורנט מהמעבדה שלי. התחל על ידי הפעלת מיקרוסקופ סטריאו פלואורסצנטי ממונע, מצויד בעדשה אובייקטיבית פי 1 ומצלמת sCMOS. קבע את תצורת הגדרות ההתקן כך שיוקרנו עם אור עירור שבמרכזו 470 ננומטר, שנבחר באמצעות מסנן המשדר אור בין 450 ל- 490 ננומטר.להשיג אור פליטה באמצעות מסנן המשדר בין 510 ל 560 ננומטר. מוציאים את המכסה מהתבשיל המכיל את הצמח ומניחים אותו מתחת לעדשה האובייקטיבית. בדוק את אות הפלואורסצנט מהצמח.לאחר מכן המתינו כ-30 דקות בחושך עד שהצמחים יתאימו את עצמם לתנאים הסביבתיים החדשים. התאם את המיקוד וההגדלה כדי לראות את הצמח כולו בשדה הראייה. לאחר מכן הגדר את פרמטרי הרכישה כדי לזהות את אותות הפלואורסצנט באמצעות תוכנת ההדמיה של המיקרוסקופים.הגדר את זמן ההקלטה ל- 11 דקות. תמונה במשך חמש דקות לפני תחילת הניסוי כדי להסתגל הצמח להקרין אור כחול מן המיקרוסקופ, ואז להתחיל להקליט. כדי לקבוע את רשומת הפלואורסצנטיות הבסיסית הממוצעת לפחות 10 מסגרות לפני יישום פציעה או גלוטמט.להדמיה בזמן אמת של יון סידן ציטוזולי המושרה על ידי פצע ושינויי ריכוז גלוטמט אפופלסטיים, חותכים את הפטיולה או את האזור האמצעי של עלה L1 עם מספריים. להדמיה בזמן אמת של גלוטמט עוררה שינויים בסידן ציטוזולי, חותכים כמילימטר אחד מקצה העלה L1 על פני הווריד הראשי עם מספריים. לאחר 20 דקות לפחות יש למרוח 10 מיקרוליטרים של 100 גלוטמט מילימולארי על פני השטח החתוכים של העלה.לניתוח עוצמת הפלואורסצנטיות לאורך זמן, הגדר אזור מעניין במקום שבו יש לנתח את עוצמת הפלואורסצנטיות. הגדר שני ROIs לחישוב המהירות של גל הסידן. בתוכנת ההדמיה לחץ על מדידת זמן, הגדרה ועיגול.למדוד את המרחק בין שני האזורים על ידי לחיצה על ביאורים ומדידה, אורך וקו פשוט. למדוד את ערכי פלורסנט גלם בכל החזר על ההשקעה לאורך זמן על ידי לחיצה על מידה, ולאחר מכן לייצא את הנתונים הגולמיים לתוכנת גיליון אלקטרוני, כדי להמיר את האות פלואורסצנטי למספרים בכל נקודת זמן. קבע את ערך הפלואורסצנטיות הבסיסית, הנוי אלוהי כ- F אפס, על-ידי חישוב ה- F הממוצע ב- 10 המסגרות הראשונות בנתונים המוקלטים ולאחר מכן נרמל את נתוני F כמתואר בכתב היד של הטקסט.לניתוח גל מהירות הסידן, הגדירו נקודת עלייה משמעותית מעל הערכים המעוררים מראש כמייצגים זיהוי של עלייה בסידן בכל החזר השקעה. לחשב את הפרש הזמן בהגדלת הסידן בין שני ROIs ואת המרחק ביניהם כדי לקבוע את המהירות של כל גל סידן. התפשטות של שינוי מופעל פצע בריכוזים של יון סידן ציטוזולי גלוטמט אפופלסטי מוצג כאן.חיתוך פטיולה של עלה בצמחים המבטאים GCaMP-3 הוביל לעלייה משמעותית בסידן. זה היה המושרה באופן מקומי ולאחר מכן התפשט ברחבי כלי הדם. האות הופץ במהירות לעלים שכנים תוך דקות ספורות.עם חיתוך עלה וצמחים המבטאים צ'יטינז בסיסי אני מדביק רחרחן, עלייה מהירה גלוטמט אפופלסטי נצפתה סביב האזור לחתוך. בתוך כמה דקות, האות גם הופץ דרך כלי הדם. להדמיה בזמן אמת של התפשטות אות סידן המופעלת על ידי יישום של גלוטמט, קצה של עלה בצמחים המבטאים CCaMP-3 נחתך.זה גרם לעלייה מקומית בריכוז יון הסידן הציטוזולי, אבל האות נעלם תוך מספר דקות. לאחר כ -10 דקות, גלוטמט הוחל על פני השטח החתוכים, מה שגרם לעלייה מקומית מהירה בריכוז הסידן הציטוזולי ולאחר מכן להפצת אות זה לעלים דיסטליים. כדי למדוד את השינויים בתוך ריכוז סידן מוצק המושרה על ידי פציעה בעלה המערכתי, שינוי מסלול הזמן של עוצמת האות GCaMP-3 נמדד בשני אזורי עניין.כמו כן נמדדו שינויים בריכוז הגלוטמט האפופלסטי בתגובה לנזק מכני. חתימת הגלוטמט הגיעה לשיא אחד כ-100 שניות לאחר הפציעה. ניסוי זה צריך להתבצע בתנאים מבוקרים טמפרטורה ולחות כי הם גבוהים על ידי שינויים בתנאים סביבתיים אלה.פרוטוקול זה מציע פוטנציאל לספק תובנות על המנגנונים המולקולריים שבבסיס איתות למרחקים ארוכים באמצעות מוטנטים כי האלמנטים הפגומים והפוטטיביים של מערכת האיתות במעבדה.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

Unit 1

Principles of Cell Signaling

SCIENTISTS IN ACTION

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

לטווח ארוך הדמיה בתאי יונקים באמצעות מיקרוסקופית שדה רחב

Combining QD-FRET and Microfluidics to Monitor DNA Nanocomplex Self-Assembly in Real-Time

שילוב QD-סריג ו מיקרופלואידיקה לפקח Nanocomplex DNA הרכבה עצמית בזמן אמת

Advances in genomics continue to fuel the development of therapeutics that can target pathogenesis at the cellular and molecular level. Typically ...

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

קביעת פרופילים ביטוי גנטיים ג elegans שימוש microarray בזמן אמת PCR

Synapses are composed of a presynaptic active zone in the signaling cell and a postsynaptic terminal in the target cell. In the case of chemical synapses, ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

הדמיה בזמן אמת של יחיד תכנון הנדסי RNA תמלילים בתאים חיים באמצעות משואות bimolecular רציומטרי

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

מדידת מרחב ובזמן Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; אותות בצמחים ארבידופסיס

Developmental and environmental cues induce Ca2+ fluctuations in plant cells. Stimulus-specific spatial-temporal Ca2+ patterns are sensed by cellular Ca2+ ...

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

ההדמיה המקומית Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; אותות בתאי יונקים בתרבית

Cytosolic Ca2+ ions regulate numerous aspects of cellular activity in almost all cell types, controlling processes as wide-ranging as gene transcription, ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

בזמן אמת המבוסס על הבדיקה PCR גישות למדידת כמותית של מיקרו-רנ&quot;א

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Real-time Imaging of Plant Cell Surface Dynamics with Variable-angle Epifluorescence Microscopy

הדמיה של Dynamics שטח תא הצמח עם זווית משתנה epifluorescence מיקרוסקופית בזמן אמת

A plant&#8217;s cell surface is its interface for perceiving environmental cues; it responds with cell biological changes such as membrane trafficking and ...

Local Field Fluorescence Microscopy: Imaging Cellular Signals in Intact Hearts

בשדה מקומי מיקרוסקופ פלואורסצנטי: הדמיה איתותי הסלולר לבבות שלמים

In the heart, molecular signaling studies are usually performed in isolated myocytes. However, many pathological situations such as ischemia and ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

יישום של תחמוצת החנקן פלורסנט מקודדים גנטית (NO •) בדיקות, את geNOps, הדמיה בזמן אמת של אותות NO • ב תאים בודדים

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...