Name: wide-field, real-time imaging of local and systemic wound signals in arabidopsis
Uploaded: 2021-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis at JoVE.com

Bu çalışma, Japonya Bilimi Destekleme Derneği'nden (17H05007 ve 18H05491) MT'ye, Ulusal Bilim Vakfı'ndan (IOS1557899 ve MCB2016177) ve Ulusal Havacılık ve Uzay İdaresi'nden (NNX14AT25G ve 80NSSC19K0126) SG'ye hibelerle desteklendi.

1. Bitki malzemesi hazırlama
<ol><li>1,5 mL mikrotüpte yüzey, GCaMP3 veya CHIB-iGluSnFR'yi ifade eden Arabidopsis thaliana (Col-0 katılım) bitkisinin tohumlarını% 20 (v/v) NaClO ile 3 dakika çalkalayarak sterilize eder ve ardından steril damıtılmış su ile 5 kez yıkayın. NOT: Arabidopsis'in GCaMP3 veya CHIB-iGluSnFR'yi ifade eden transgenik çizgileri daha öncetanımlanmıştır 6.</li>
	<li>Steril bir kaputta, 30 mL steril (otoklavlı) Murashige ve Skoog (MS)...

Sistemik sinyalizasyon, bitkilerin lokalize dış çevresel uyaranlara yanıt vermesi ve daha sonra homeostazlarını tüm bitki seviyesinde tutması için önemlidir. Hayvanlar gibi gelişmiş bir sinir sistemi ile donatılamasalar da, mobil elektrik (ve muhtemelen hidrolik) sinyalleri ve ROS ve Ca2+ 46,47dalgalarının yayılması gibi faktörlere dayanarak hem organlar içinde hem de organlar arasında hızlı iletişim sağlarlar. Yukarıda açıkl...

Bitkiler biyotik streslerden kaçamazlar, örneğin, onları besleyen böcekler, bu nedenle otçul1gibi zorlukları tespit etmek ve daha sonra kendilerini korumak için sofistike stres algılama ve sinyal dönüştürme sistemleri geliştirmişlerdir. Yaralanma veya otçul saldırısı üzerine, bitkiler sadece yaralı bölgede değil, aynı zamanda hasarsız distal organlarda fitohormone jasmonik asit (JA) birikimi de dahil olmak üzere hızlı savunma yanıtları başlatır2. Bu JA daha sonra hem doğrudan hasar görmüş dokularda savunma tepkilerini tetikler hem de bitkinin hasarsız kısımlarında savunmayı önceden tetikler. Arabidopsis'te, yaralanma ile indüklenen JA birikimi, tesisin başka bir yerindeki hasardan sadece birkaç dakika içinde distal, bozulmamış yapraklarda tespit edildi ve yaralı yaprak3'tenhızlı ve uzun mesafeli bir sinyal iletildiğini düşündürdü. Ca2+, reaktif oksijen türleri (ROS) ve elektrik sinyalleri gibi çeşitli adayların,4,5bitkilerinde bu uzun mesafeli yara sinyalleri olarak hizmet etmesi önerilmiştir.
Ca2+, ökaryotik organizmalardaki en çok yönlü ve her yerde bulunan ikinci haberci elementlerden biridir. Bitkilerde, tırtıl çiğneme ve mekanik yaralama, hem yaralı yaprakta hem de çözülmemiş uzak yapraklarda sitozolik Ca2 + konsantrasyonunda ([Ca2+]sitot)sert artışlara neden olur6,7. Bu sistemik Ca2+ sinyali, JA biyosentez 8,9dahil olmak üzere aşağı akış savunma sinyal yollarının aktivasyonuna yol açan hücre içi Ca2+algılama proteinleri tarafından alınır. Ca2+ sinyallerinin bitki yarası yanıtlarındaki önemini destekleyen çok sayıda rapora rağmen, yaranın neden olduğu Ca2+ sinyallerinin mekansal ve zamansal özellikleri hakkında bilgi sınırlıdır.
Genetik olarak kodlanmış Ca2+ göstergeleri kullanılarak gerçek zamanlı görüntüleme, Ca2+ sinyallerinin uzamsal ve zamansal dinamiklerini izlemek ve ölçmek için güçlü bir araçtır. Bugüne kadar, bu tür sensörlerin tek bir hücre düzeyinde Ca2 + sinyallerinin dokulara, organlara ve hatta tüm bitkilere görselleştirilmesini sağlayan versiyonları geliştirilmiştir10. Bitkilerde kullanılan Ca2+ için genetik olarak kodlanmış ilk biyosensör, Aequorea victoria11denizanasından elde edilen biyolüminesan protein aequorin idi. Bu chemiluminescentprotein bitkiler12, 13 ,14 , 15,16,17,18çeşitli streslere yanıt Ca 2 + değişiklikleri tespit etmek için kullanılmış olsa da, ürettiği son derece düşük lüminesan sinyal nedeniyle gerçek zamanlı görüntüleme için uygun değildir. Sarı kameripler gibi Förster Rezonans Enerji Transferi (FRET) tabanlı Ca2+ göstergeleri de19, 20 , 21, 22,23,24 tesislerinde bir dizi Ca2+sinyal olayının dinamiklerini araştırmak için başarıyla kullanılmıştır. Bu sensörler görüntüleme yaklaşımlarıyla uyumludur ve en yaygın olarak, tümü iki florofor proteini, genellikle bir Siyan Floresan Proteini (CFP) ve Sarı Floresan Protein varyantı (YFP)10arasında kaynaşmış bir miyosin ışık zinciri kinazından Ca2+ bağlayıcı protein calmodulin (CaM) ve bir CaM bağlayıcı peptitten (M13) oluşur. Ca2+ bağlama, CaM ve M13 arasındaki etkileşimi teşvik eder ve sensörün konformasyonsal olarak değiştirilmesine neden olabilir. Bu değişiklik CFP ve YFP arasında enerji transferini teşvik eder, bu da CFP'den floresan emisyonunu azaltırken YFP'nin floresan yoğunluğunu arttırır. CfP'den YFP floresansına bu geçişin izlenmesi, Ca2+ seviyesindeki artışın bir ölçüsünü sağlar. Bu FRET sensörlerine ek olarak, GCaMP ve R-GECO gibi tek floresan protein (FP) bazlı Ca2+ biyosensörleri de bitki görüntüleme yaklaşımlarıyla uyumludur ve yüksek hassasiyetleri ve kullanım kolaylığı nedeniyle [Ca2+]cyt değişikliklerini incelemek için yaygın olarak kullanılır25 , 26,27,28,29,30. GCAMP'ler, yine CaM ve M13 peptidi ile kaynaşmış tek bir dairesel permütasyonlu (cp) GFP içerir. CaM ve M13 arasındaki Ca2+bağımlı etkileşim, sensörde cpGFP'nin protonasyon durumunda bir kaymayı teşvik eden ve floresan sinyalini artıran konformasyonsal bir değişikliğe neden olur. Böylece, Ca2+ seviyeleri yükseldikçe, cpGFP sinyali artar.
Mekanik yaralama veya otçul beslemeye yanıt olarak üretilen Ca2+ sinyallerinin dinamiklerini araştırmak için, bir GCaMP varyantı olan GCaMP3 ve geniş alan floresan mikroskobu6'yıifade eden transgenik Arabidopsis thaliana bitkilerini kullandık. Bu yaklaşım, bir yapraktaki yara bölgesinden tüm bitkiye uzun mesafeli bir Ca2+ sinyalinin hızlı iletimini görselleştirmeyi başarmıştır. Böylece, yara bölgesinde hemen [Ca2+cyt'de bir artış tespit edildi, ancak bu Ca2+ sinyali daha sonra yaralandıktan birkaç dakika sonra damar yoluyla komşu yapraklara yayılmıştır. Ayrıca, bu hızlı sistemik yara sinyalinin iletiminin Arabidopsis tesislerinde glutamat reseptör benzeri iki gen, Glutamat Reseptör Gibi (GLR ), GLR3.3ve GLR3.6 6mutasyonları ile kaldırıldığını bulduk. GSR'ler, yara yanıtı 3 , polen tüpü büyümesi 31 , kök gelişimi32, soğuk tepki 33 ve doğuştan gelen bağışıklık34dahil olmak üzere çeşitli fizyolojik süreçlerde yer alan amino asit kapılı Ca2+kanalları olarak işlev görür. BGLR'ların bu iyi anlaşılan, geniş fizyolojik işlevine rağmen, ligand özgüllükleri, iyon seçicilikleri ve hücre altı lokalizasyonları gibi işlevsel özellikleri hakkında bilgiler sınırlıdır35. Bununla birlikte, son çalışmalar sırasıyla phloem ve ksilenm'de GLR3.3 ve GLR3.6'nın lokalize olduğunu bildirmektedir. Bitki GSR'leri, memeli sinir sisteminde glutamat, glisin ve D-serine gibi amino asitler tarafından aktive edilenmemelilerde iyonotropik glutamat reseptörleri (iGluR) 36 ile benzerliklere sahiptir37. Gerçekten de, yara bölgesinde 100 mM glutamat uygulanmasının, ancak diğer amino asitlerin, Arabidopsis'tehızlı, uzun mesafeli bir Ca2 + sinyaline neden olduğunu gösterdik Hücre dışı glutamatın muhtemelen bitkilerde bir yara sinyali görevi aldığını gösteren6. Bu yanıt,glutamatın bu reseptör benzeri kanallardan biri veya her ikisinde de etki ediyor olabileceğini öne sürenglr3.3 / glr3.6 mutantında kaldırılmıştır ve gerçekten de, AtGLR3.6'nın yakın zamanda bu glutamat seviyeleri tarafından kapılı olduğu gösterilmiştir38.
Bitkilerde, yapısal bir amino asit olarak rolüne ek olarak, glutamat da önemli bir gelişim düzenleyici olarak önerilmiştir39; ancak mekansal ve zamansal dinamikleri yeneksin anlaşılamamıştır. Tıpkı Ca2+için olduğu gibi, bu amino asidin canlı hücrelerdeki dinamiklerini izlemek için glutamat için genetik olarak kodlanmış birkaç gösterge geliştirilmiştir40,41. iGluSnFR, cpGFP ve Escherichia coli 42,43'tenbir glutamat bağlayıcı proteinden (GltI) oluşan GFP tabanlı tek FP glutamat biyosensördür. GltI'ye glutamat bağlanmasıyla indüklenen iGluSnFR'nin konformasyonsal değişimi, gelişmiş bir GFP floresan emisyonu ile sonuçlanır. Hücre dışı glutamatın bitki yarası yanıtında bir sinyal molekülü olarak etki edip etmediğini araştırmak için, bu biyosensörü apoplastik alanda lokalize etmek için iGluSnFR dizisini temel kitine sinyal peptid salgılama dizisi (CHIB-iGluSnFR) ile bağladık6. Bu yaklaşım, bu sensörü ifade eden transgenik Arabidopsis bitkileri kullanılarak apoplastik glutamat konsantrasyonundaki ([Glu]apo)herhangi bir değişikliğin görüntülenmesini sağladı. Yara sahasında iGluSnFR sinyalinde hızlı artışlar tespit ettik. Bu veriler, glutamanın hasarlı hücrelerden/ dokulardan yaralanarak apoplast'a sızdırdığı ve GGLR'leri aktive eden ve bitkilerde uzun mesafeli Ca2+ sinyaline yol açan bir hasar sinyali görevi gördüğü fikrini destekler6.
Burada, uzun mesafeli Ca2+ ve hücre dışı glutamat sinyallerinin dinamiklerini izlemek ve analiz etmek için genetik olarak kodlanmış biyosensörler kullanarak bitki çapında gerçek zamanlı görüntüleme yöntemini açıklıyoruz6. Genetik olarak kodlanmış biyosensörleri ifade eden geniş alan floresan mikroskopisi ve transgenik bitkilerin mevcudiyeti, Ca2+ dalgaları gibi hızla iletilen uzun mesafe sinyallerini tespit etmek için güçlü, ancak kolayca uygulanan bir yaklaşım sağlar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Arabidopsis expressing GCaMP3</td>
			<td>Saitama University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arabidopsis expressing CHIB-iGluSnFR</td>
			<td>Saitama University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 7</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamate</td>
			<td>FUJIFILM Wako</td>
			<td>072-00501</td>
			<td>Dissolved in a liquid growth medium [1/2x MS salts, 1% (w/v) sucrose, and 0.05% (w/v) MES; pH 5.1 adjusted with 1N KOH].</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murashige and Skoog (MS) medium</td>
			<td>FUJIFILM Wako</td>
			<td>392-00591</td>
			<td>composition: 1x MS salts, 1% (w/v) sucrose, 0.01% (w/v) myoinositol, 0.05% (w/v) MES, and 0.5% (w/v) gellan gum; pH 5.7 adjusted with 1N KOH.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon SMZ25 stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements AR analysis</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x objective lens (P2-SHR PLAN APO)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sCMOS camera (ORCA-Flash4.0 V2)</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td>C11440-22CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square plastic Petri dish</td>
			<td>Simport</td>
			<td>D210-16</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

wide-field, real-time imaging of local and systemic wound signals in arabidopsis

Bitkiler, hem hasarlı hem de distal hasarsız kısımlarda savunma tepkileri vererek yaralama ve otçulluk gibi mekanik streslere yanıt verir. Bir yaprağın yaralanması üzerine, yara bölgesinde sitozolik kalsiyum iyon konsantrasyonunda (Ca2+ sinyali) bir artış meydana gelir. Bu sinyal, savunma yanıtlarının etkinleştirildiği hasarsız yapraklara hızla iletilir. Son araştırmalarımız, yaprağın yaralı hücrelerinden etrafdaki apoplast içine sızan glutamatın yara sinyali görevi aldığını ortaya koydu. Bu glutamat glutamat reseptörü benzeri Ca2+ geçirgen kanalları aktive eder ve bu da bitki genelinde uzun mesafeli Ca2+ sinyal yayılmasına yol açar. Bu olayların mekansal ve zamansal özellikleri, genetik olarak kodlanmış floresan biyosensörleri ifade eden canlı bitkilerin gerçek zamanlı görüntülenmesiyle yakalanabilir. Burada, hem Ca2+ sinyallerinin dinamiklerini hem de yara almaya yanıt olarak meydana gelen apoplastik glutamazdaki değişiklikleri izlemek için bitki çapında, gerçek zamanlı bir görüntüleme yöntemi sunuyoruz. Bu yaklaşım, Yeşil Floresan Protein (GFP) bazlı Ca2+ ve glutamat biyosensörlerini ifade eden geniş alan floresan mikroskobu ve transgenik Arabidopsis bitkilerini kullanır. Buna ek olarak, yara kaynaklı, glutamat tetiklenen hızlı ve uzun mesafeli Ca2+ sinyal yayılımını kolayca ortaya çıkarmak için metodoloji sunuyoruz. Bu protokol, tesis sistemik sinyalinin sinyal ve yanıt ağlarında nasıl yer aldığını araştırmaya yardımcı olmak için diğer bitki stresleri üzerindeki çalışmalara da uygulanabilir.

[Ca2+]cyt ve [Glu]apo'nun yaralamaya yanıt olarak sinyal yayılması Şekil 3, Şekil 4, Film S1ve Film S2'de sunulmuştur. GCaMP3'i ifade eden bitkilerde yaprak 1'in yaprak sapını kesmek (0 s'de), vaskültür (40 s'de)(Şekil 3 ve Film S1)yoluyla lokal olarak hızla indüklenen [Ca2+]sitosunda</sub...

Watch this Scientific Journal Video about Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis at JoVE.com

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

Hücre dışı glutamat tetiklenen sistemik kalsiyum sinyali, bitkilerde mekanik yaralama ve otobur saldırısına karşı bitki savunma yanıtlarının indüksiyonu için kritik öneme sahiptir. Bu makalede, kalsiyum ve glutamaca duyarlı floresan biyosensörleri ifade eden Arabidopsis thaliana bitkilerini kullanarak her iki faktörün de mekansal ve zamansal dinamiklerini görselleştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Arabidopsis'te Lokal ve Sistemik Yara Sinyallerinin Geniş Alan, Gerçek Zamanlı Görüntülenmesi

Plants respond to mechanical stresses such as wounding and herbivory by inducing defense responses both in the damaged and in the distal undamaged parts. ...

Bu protokol, yara almaya yanıt olarak kalsiyum ve apoplastik glutamanın dinamiklerini izleyerek bitki sistemik sinyal sisteminin aktivitesinin bitki çapında gerçek zamanlı görüntülenmesini sağlar. Bu tesis çapında gerçek zamanlı görüntüleme yöntemi, bitkilerdeki hızlı ve uzun mesafe sinyallerinin dinamiklerini anlamak için sağlam bir araç sunarak yüksek uzamsal zamansal çözünürlüğü ve kullanım kolaylığını birleştirir. Bu protokol, diğer bitki türlerinde hem biyotik hem de abiyotik stres yanıtlarında sistem kalsiyum sinyalinin mekansal ve zamansal özellikleri hakkında yeni bir fikir verme potansiyeli sunmaktadır.Prosedürü gösteren takuya Uemura olacak, laboratuvarımdan doktora sonrası. 1X objektif lens ve sCMOS kamera ile donatılmış motorlu floresan stereo mikroskobu açarak başlayın. Cihaz ayarlarını, 450 ila 490 nanometre arasında ışık ileten bir filtre kullanılarak seçilen 470 nanometre merkezli uyarım ışığıyla ışınlamak için yapılandırın.510 ila 560 nanometre arasında iletim yapan bir filtre kullanarak emisyon ışığı alın. Kapağı bitkiyi içeren tabaktan çıkarın ve objektif merceğin altına yerleştirin. Bitkiden gelen floresan sinyalini kontrol edin.Daha sonra bitkiler yeni çevre koşullarına adapte olana kadar karanlıkta yaklaşık 30 dakika bekleyin. Tüm bitkiyi görüş alanında görmek için odağı ve büyütmeyi ayarlayın. Ardından, mikroskop görüntüleme yazılımını kullanarak floresan sinyallerini algılamak için alma parametrelerini ayarlayın.Kayıt süresini 11 dakika olarak ayarlayın. Bitkiyi mikroskoptan mavi ışık ışınlaması için alıştırmaya başlamadan önce beş dakika boyunca görüntü, sonra kayda başlayın. Ortalama taban çizgisi floresan kaydını, yara veya glutamat uygulamasından en az 10 kare önce belirlemek.Yara kaynaklı sitozolitik kalsiyum iyonunun ve apoplastik glutamat konsantrasyon değişikliklerinin gerçek zamanlı görüntülenmesi için, yaprak L1'in petiole veya orta bölgesini makasla kesin. Glutamatın gerçek zamanlı görüntülenmesi için sitozolitik kalsiyum değişikliklerini tetikledi, ana damar boyunca L1 yaprağının ucundan makasla yaklaşık bir milimetre kesin. En az 20 dakika sonra yaprağın kesilmiş yüzeyine 10 milimolar glutamat 10 mikrolitre uygulayın.Zaman içinde floresan yoğunluğu analizi için, floresan yoğunluğunun analiz edilmesi gereken yerde ilgi çekici bir bölge tanımlayın. Kalsiyum dalgasının hız hesaplaması için iki ROI tanımlayın. Görüntüleme yazılımında zaman ölçümüne tıklayın, tanımlayın ve daire içine edin.Ek açıklamalar ve ölçüm, uzunluk ve basit çizgiye tıklayarak iki bölge arasındaki mesafeyi ölçün. Ölçüye tıklayarak zaman içinde her yatırım getirislerindeki ham floresan değerlerini ölçün, ardından floresan sinyalini her zaman noktasında sayılara dönüştürmek için ham verileri elektronik tablo yazılımına dışa aktarın. Kaydedilen verilerdeki ilk 10 karenin ortalama F değerini hesaplayarak F sıfır olarak ilahi olan temel floresan değerini belirleyin, ardından metin el yazmasında açıklandığı gibi F verilerini normalleştirin.Kalsiyum hızı dalga analizi için, önceden uyarılmış değerlerin üzerinde önemli bir sinyal yükselme noktasını, her yatırım getirisinde bir kalsiyum artışının tespitini temsil eden olarak tanımlayın. Herhangi bir kalsiyum dalgasının hızlarını belirlemek için iki ROI arasındaki kalsiyum artışındaki zaman farkını ve aralarındaki mesafeyi hesaplayın. Sitozolitik kalsiyum iyon ve apoplastik glutamat konsantrasyonlarında yara ile tetiklenen bir değişikliğin yayılması burada gösterilmiştir.GCaMP-3'i ifade eden bitkilerde bir yaprağın yaprak sapını kesmek kalsiyumda önemli bir artışa yol açtı. Lokal olarak indüklendi ve daha sonra vaskülat boyunca yayıldı. Sinyal birkaç dakika içinde komşu yapraklara hızla yayılmış.Bir yaprak ve temel chitinase I tutkal koklayıcı ifade eden bitkiler kesildikten sonra, kesilen bölge çevresinde hızlı bir apoplastik glutamat artışı gözlendi. Birkaç dakika içinde, sinyal de vaskülatörden yayılır. Glutamat uygulaması ile tetiklenen kalsiyum sinyal yayılımının gerçek zamanlı görüntülenmesi için, CCaMP-3'ü ifade eden bitkilerdeki bir yaprağın kenarı kesildi.Bu, lokal sitosoleik kalsiyum iyon konsantrasyonu artışına neden oldu, ancak sinyal birkaç dakika içinde kayboldu. Yaklaşık 10 dakika sonra, kesilen yüzeye glutamat uygulandı ve sitosolik kalsiyum konsantrasyonunda hızlı bir lokal artışa ve daha sonra bu sinyalin distal yapraklara yayılmasına neden oldu. Sistemik yapraktaki yaranın neden olduğu katı kalsiyum konsantrasyonu içindeki değişiklikleri ölçmek için, GCaMP-3 sinyal yoğunluğunun zaman seyri değişimi iki ilgi çekici bölgede ölçüldü.Mekanik hasara yanıt olarak apoplastik glutamat konsantrasyon değişiklikleri de ölçüldü. Glutamat izi, yaralandıktan yaklaşık 100 saniye sonra tek bir tepe noktası sergiledi. Bu deney sıcaklık ve nem kontrollü koşullar altında yapılmalıdır, çünkü bu çevre koşullarındaki değişikliklerle yükselmektedir.Bu protokol, laboratuvar sinyal sisteminin arızalı ve putatif elemanlarının mutantlar kullanarak uzun mesafeli sinyalizasyonun altında kalan moleküler mekanizmalar hakkında içgörüler sağlama potansiyeli sunar.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

Unit 1

Principles of Cell Signaling

SCIENTISTS IN ACTION

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Geniş Alan Mikroskop kullanarak Uzun vadeli Görüntüleme Memeli Hücreleri

Combining QD-FRET and Microfluidics to Monitor DNA Nanocomplex Self-Assembly in Real-Time

Birleştiren QD FRET Mikroakiskan Real-Time DNA Nanocomplex Self-Meclis Monitör

Advances in genomics continue to fuel the development of therapeutics that can target pathogenesis at the cellular and molecular level. Typically ...

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Genetik İfade Profilleri Belirlenmesi C. elegans Mikroarray ve Real-time PCR

Synapses are composed of a presynaptic active zone in the signaling cell and a postsynaptic terminal in the target cell. In the case of chemical synapses, ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

Oranlı metrik Bimoleküler Fenerleri kullanma Yaşam Hücrelerde Tek Engineered RNA Transkriptlerinin Gerçek zamanlı Görüntüleme

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Ölçme Mekansal ve zamansal Ca<sup&gt; 2+</supArabidopsis Bitkilerde&gt; Sinyalleri

Developmental and environmental cues induce Ca2+ fluctuations in plant cells. Stimulus-specific spatial-temporal Ca2+ patterns are sensed by cellular Ca2+ ...

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

Görüntüleme Yerel Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Kültürlenmiş memeli hücrelerinde sinyaller

Cytosolic Ca2+ ions regulate numerous aspects of cellular activity in almost all cell types, controlling processes as wide-ranging as gene transcription, ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

Probe-tabanlı Real-time PCR microRNA Kantitatif Ölçüm Yaklaşımları

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Real-time Imaging of Plant Cell Surface Dynamics with Variable-angle Epifluorescence Microscopy

Değişken açılı Epifloresans Mikroskopi ile Bitki Hücre Yüzey Dynamics Gerçek zamanlı Görüntüleme

A plant&#8217;s cell surface is its interface for perceiving environmental cues; it responds with cell biological changes such as membrane trafficking and ...

Local Field Fluorescence Microscopy: Imaging Cellular Signals in Intact Hearts

Yerel Alan Floresan Mikroskopi: Bozulmamış Kalpler Hücresel Sinyalleri Görüntüleme

In the heart, molecular signaling studies are usually performed in isolated myocytes. However, many pathological situations such as ischemia and ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Genetik Kodlanmış Floresan Nitrik Oksit Uygulama (• NO) Tek Hücrelerde YOK • Sinyallerin Gerçek zamanlı Görüntüleme için sondalar, geNOps,

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...