Name: establishment of a rat model of superior sagittal-sinus occlusion via a thread-embolism method
Uploaded: 2021-07-04T14:00:00
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Cette étude a été soutenue par une subvention de la Fondation de recherche scientifique pour les talents de haut niveau de l’Université de médecine traditionnelle chinoise du Fujian (X2019002-talents).

Les procédures impliquant des sujets animaux ont été approuvées par le Comité des normes médicales et de l’éthique de l’Université médicale de Wenzhou et sont conformes à la législation chinoise sur l’utilisation et les soins des animaux de laboratoire.
1. Préparation du bouchon de fil, des rats SD et de l’équipement expérimental
<ol><li>Utilisez un fil de nylon d’un diamètre de 0,28 mm comme corps principal du bouchon de filetage. REMARQUE: La douceur et la duret...

<ol>
	<li>Bousser, M. G., Ferro, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+venous+thrombosis:+an+update.">Cerebral venous thrombosis: an update.</a> Lancet Neurology. 6 (2), 162-170 (2007).</li><li>Guenther, G., Arauz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+venous+thrombosis:+A+diagnostic+and+treatment+update.">Cerebral venous thrombosis: A diagnostic and treatment update.</a> Neurologia. 26 (8), 488-498 (2011).</li><li>Stam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombosis+of+the+cerebral+veins+and+sinuses.">Thrombosis of the cerebral veins and sinuses.</a> New England Journal of Medicine. 352 (17), 1791-1798 (2005).</li><li>Einh&#228;upl, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EFNS+guideline+on+the+treatment+of+cerebral+venous+and+sinus+thrombosis+in+adult+patients.">EFNS guideline on the treatment of cerebral venous and sinus thrombosis in adult patients.</a> European Journal of Neurology. 17 (10), 1229-1235 (2010).</li><li>Coutinho, J. M., Zuurbier, S. M., Stam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Declining+mortality+in+cerebral+venous+thrombosis:+a+systematic+review.">Declining mortality in cerebral venous thrombosis: a systematic review.</a> Stroke. 45 (5), 1338-1341 (2014).</li><li>Gotoh, M., Ohmoto, T., Kuyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+study+of+venous+circulatory+disturbance+by+dural+sinus+occlusion.">Experimental study of venous circulatory disturbance by dural sinus occlusion.</a> Acta Neurochir (Wien). 124 (2-4), 120-126 (1993).</li><li>Miyamoto, K., Heimann, A., Kempski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcirculatory+alterations+in+a+mongolian+gerbil+sinus-vein+thrombosis+model.">Microcirculatory alterations in a mongolian gerbil sinus-vein thrombosis model.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 8 (4), (2001).</li><li>Ungersb&#246;ck, K., Heimann, A., Kempski, a. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+Blood+Flow+Alterations+in+a+Rat+Model+of+Cerebral+Sinus+Thrombosis.">Cerebral Blood Flow Alterations in a Rat Model of Cerebral Sinus Thrombosis.</a> Stroke. 24 (4), (1993).</li><li>R&#246;ttger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+reversible+sinus+sagittalis+superior+thrombosis+in+the+rat:+magnetic+resonance+imaging+changes.">A new model of reversible sinus sagittalis superior thrombosis in the rat: magnetic resonance imaging changes.</a> Neurosurgery. 57 (3), 573-580 (2005).</li><li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photothrombosis+combined+with+thrombin+injection+establishes+a+rat+model+of+cerebral+venous+sinus+thrombosis.">Photothrombosis combined with thrombin injection establishes a rat model of cerebral venous sinus thrombosis.</a> Neuroscience. 306, 39-49 (2015).</li><li>Yang, H., Meng, Z., Zhang, C., Zhang, P., Wang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+a+new+rat+model+of+central+venous+sinus+thrombosis+and+analyzing+its+pathophysiological+and+apoptotic+changes.">Establishing a new rat model of central venous sinus thrombosis and analyzing its pathophysiological and apoptotic changes.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 130-135 (2012).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research.">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Design, Development and Therapy. 9, 3445-3454 (2015).</li><li>Wang, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+tissue+pH+in+an+experimental+model+of+acute+stroke+-+Determination+of+graded+regional+tissue+pH+changes+with+non-invasive+quantitative+amide+proton+transfer+MRI.">Mapping tissue pH in an experimental model of acute stroke - Determination of graded regional tissue pH changes with non-invasive quantitative amide proton transfer MRI.</a> Neuroimage. 191, (2019).</li><li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Vigilin+as+a+Potential+Ischemia+Biomarker+by+Brain+Slice-Based+Systematic+Evolution+of+Ligands+by+Exponential+Enrichment.">Identification of Vigilin as a Potential Ischemia Biomarker by Brain Slice-Based Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment.</a> Analytical Chemistry. 91 (10), 6675-6681 (2019).</li></ol>

Dans cette étude, un nouveau type de modèle CVST a été établi avec succès en insérant un bouchon de fil auto-fabriqué dans le SSS des rats SD. En plus, la formation image de flux sanguin de laser-moucheture et le petit-animal MRI ont été combinés pour surveiller des changements du flux sanguin sur la surface de cerveau des rats d’écart-type avant et après l’embolization afin de normaliser la synchronisation et l’emplacement ischémiques.
En 1989, Longa et al. ont réalisé u...

La thrombose cérébrale des sinus veineux (CVST) est une maladie rare du système veineux cérébral qui ne représente que 0,5 à 1,0% de toutes les causes d’AVC, mais a un taux d’occurrence relativement élevé chez les enfants et les jeunes adultes1. Au cours de l’autopsie, le CVST s’est avéré être la cause de 10% des décès par maladie cérébrovasculaire2. La thrombose peut se produire dans n’importe quelle partie du système veineux intracrânien. Le sinus sagittal supérieur (SSS) est l’un des secteurs les plus généralement affectés dans CVST et peut impliquer de multiples vaisseaux sanguins. En raison de la sténose ou de l’occlusion des sinus veineux, le retour veineux intracrânien est bloqué, ce qui s’accompagne souvent d’une augmentation de la pression intracrânienne3. Les manifestations cliniques du CVST sont complexes et varient au fil du temps; bien qu’il y ait un manque de spécificité des symptômes, les symptômes les plus communs incluent le mal de tête (77.2%), les saisies (42.7%), et les déficits neurologiques (39.9%). Dans les cas graves, le coma et même la mort peuvent survenir4,5. Au cours des dernières années, en raison de l’amélioration globale des normes médicales et sanitaires et de la sensibilisation à la santé publique, la proportion de facteurs de risque connexes a changé, la proportion de traumatismes et d’infections a diminué, et la proportion de CVST causée par la grossesse, la période puerpérale, les contraceptifs oraux et d’autres raisons a progressivement augmentéde 5.
Actuellement, la pathogénie de CVST n’est toujours pas bien comprise. Pour explorer le CVST en profondeur, d’autres recherches physiopathologiques sont nécessaires. Cependant, la plupart de ces méthodes de recherche sont invasives et donc difficiles à mettre en œuvre cliniquement. En raison de nombreuses limites de la recherche clinique, les modèles animaux présentent des avantages irremplaçables en termes de recherche fondamentale et translationnelle.
La cause de CVST est complexe, car son début initial est souvent non reconnu et l’endroit de la formation de thrombus est fortement variable. Heureusement, les modèles animaux peuvent obtenir un meilleur contrôle de ces facteurs. Au cours des dernières décennies, une variété de modèles animaux CVST ont été établis, et chaque modèle a ses propres inconvénients. Selon les différentes méthodes de production, ils peuvent être grossièrement divisés en catégories suivantes: le modèle simple de ligature SSS6,7; le modèle d’accélérateur d’injection interneSSS 8; le modèle9de thrombose SSS induite par le chlorure ferrique ; le modèle photochimique-induit de thrombose SSS10; et le modèle SSS d’embolie-occlusion auto-fabriquée11. Cependant, la plupart de ces modèles sont incapables de contourner les dommages invasifs au cortex cérébral de l’animal et ne sont pas en mesure de contrôler avec précision l’heure et l’emplacement ischémiques. Dans certains modèles, le thrombus va se recanaliser spontanément ; dans d’autres modèles, le SSS devient définitivement occlu. En outre, des opérations compliquées et/ou des dommages sérieux peuvent affecter des résultats pathophysiologiques suivants dans ces modèles.
Dans la présente étude, un bouchon de fil a été inséré dans le SSS des rats de Sprague-Dawley (écart-type) pour établir avec succès un modèle CVST qui a réduit au minimum des dommages, a permis le contrôle précis, et a donné la bonne stabilité. De plus, l’imagerie par résonance magnétique (IRM) pour les petits animaux et l’imagerie du flux sanguin par moucheture laser ont été combinées pour vérifier l’efficacité du modèle. Nous avons évalué des changements du flux sanguin cérébral avant et après l’établissement de notre modèle, aussi bien que nous avons évalué la stabilité de notre modèle, posant une base pour d’autres études explorant l’occurrence, le développement, et les mécanismes pathophysiologiques relatifs de CVST.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 mL syringe</td>
			<td>Becton,Dickinson and Company</td>
			<td>301940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>brain stereotaxic instrument</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>68025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dissecting microscope</td>
			<td>Wuhan SIM Opto-technology Co.</td>
			<td>SIM BFI-HR PRO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-speed skull drill</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>78046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>laser-speckle blood-flow imaging system</td>
			<td>Wuhan SIM Opto-technology Co.</td>
			<td>SIM BFI-HR PRO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle holder</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F31022-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle thread</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F33303-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>S13029-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silica gel</td>
			<td>Heraeus Kulzer</td>
			<td>302785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small animal anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>R540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small-animal MRI</td>
			<td>Bruker Medical GmbH</td>
			<td>Biospec 94/30 USR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F11029-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vascular forceps</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F22003-09</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a rat model of superior sagittal-sinus occlusion via a thread-embolism method

Les mécanismes contribuant au début naturel de la thrombose cérébrale de sinus veineux (CVST) sont la plupart du temps inconnus, et une série de facteurs incontrôlables sont impliqués dans le cours de la maladie, ayant pour résultat de grandes limitations dans la recherche clinique. Par conséquent, l’établissement de modèles animaux CVST stables qui peuvent normaliser une variété de facteurs de confusion incontrôlables a aidé à contourner les lacunes de la recherche clinique. Au cours des dernières décennies, divers modèles animaux CVST ont été construits, mais les résultats basés sur ces modèles ont été incohérents et incomplets. Par conséquent, afin d’explorer plus loin les mécanismes pathophysiologiques de CVST, il est nécessaire d’établir un modèle animal nouveau et fortement compatible, qui a la valeur pratique importante et la signification scientifique pour le diagnostic et le traitement de CVST. Dans la présente étude, un modèle original de rat de Sprague-Dawley (écart-type) de la thrombose supérieure du sinus sagittal (SSS) a été établi par l’intermédiaire d’une méthode de fil-embolization, et la stabilité et la fiabilité du modèle ont été vérifiées. En plus, nous avons évalué des changements du flux sanguin veineux cérébral chez les rats après la formation de CVST. Collectivement, le modèle de SD-rat SSS-thrombose représente un modèle animal original de CVST qui est facilement établi, réduit au minimum le trauma, donne la bonne stabilité, et tient compte de contrôler avec précision la synchronisation et l’emplacement ischémiques.

Pour établir le modèle SD-RAT SSS-thrombose au moyen de la méthode de suture, la suture doit être préparée à l’avance (figure 1A), et l’équipement requis pour l’expérience (Figure 1B) doit être préparé. En raison de la nature délicate de l’opération, la préparation du modèle doit être effectuée sous un microscope de dissection. Les principales étapes sont illustrées à la figure 2. Pour faciliter la descr...

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Establishment of a Rat Model of Superior Sagittal-Sinus Occlusion via a Thread-Embolism Method

Ici, nous établissons un modèle original de rat de Sprague-Dawley (écart-type) de la thrombose supérieure du sinus sagittal (SSS) par l’intermédiaire d’une méthode de fil-embolization, et la stabilité et la fiabilité du modèle ont été vérifiées.

Établissement d’un modèle de rat d’occlusion sagittale-sinus supérieure par l’intermédiaire d’une méthode d’embolie filimatique

The mechanisms contributing to the natural onset of cerebral venous sinus thrombosis (CVST) are mostly unknown, and a variety of uncontrollable factors ...

En raison de l’absence d’un modèle animal idéal, l’étude du CVST est grandement limitée. Maintenant, un nouveau type de modèle CVST de SD-Rat a été avec succès établi en insérant le fil-embolization self-made centripetally à l’emplacement initial de SSS qui a normalisé de divers facteurs d’interférence ou incontrôlables en condition clinique. Après que le rat ait été avec succès anesthésié par injection intra-péritonéale, appliquez le lubrifiant ophtalmique d’oeil de gel après que le rat soit mis sur l’image stereotaxic pour protéger les cornées du séchage pendant l’anesthésie.Retirez les poils sur le dessus de la tête du rat. Afin d’effectuer ce processus plus efficacement, l’étape précédente peut être effectuée plus tôt dans la salle de préparation. Après que le rat ait été anesthésié avec succès par la machine anesthésique, appliquez également un lubrifiant ophtalmique stérile pour les yeux.Stériliser la surface sur le dessus de la tête du rat avec 5% d’iode povidone. Alternez cela trois fois avec de l’éthanol à 75%. Faites une incision cutanée d’environ deux centimètres de long au milieu de la tête.Le fascia est ouvert avec un scalpel. Et puis, décollez soigneusement le fascia supérieur et le périoste pour exposer complètement le crâne. Confirmer la position de la fontanelle antérieure, A et la fontanelle postérieure, B.Utilisez la zone entre la suture coronale et la suture du coude, comme zone d’observation du flux sanguin.Pour empêcher le crâne d’affecter l’observation pendant l’imagerie du flux sanguin moucheté au laser, amincir le crâne dans la zone d’observation jusqu’à ce que les vaisseaux sanguins soient clairement visibles. Pendant le broyage du crâne, utilisez une seringue à température normale pour rincer la dura à plusieurs reprises, afin d’éviter un éclatement à haute température dans le cortex cérébral. Cette étape et ce qui suit sont tous réalisés sous un microscope de dissection.Dans cette figure, la zone rectangulaire bordée de rouge est la zone d’observation du flux sanguin. La taille du crâne aminci devrait être d’environ un centimètre multiplié par un centimètre. Et la zone rectangulaire bordée de bleu est la fenêtre en os.Environ six millimètres multipliés par quatre millimètres. La zone circulaire rouge est l’articulation pariétale et la flèche pointe vers le SSS. Lorsque le crâne peut être vu, utilisez une pince à épiler pour soigneusement les morceaux d’os restants de la fenêtre osseuse.Choisissez une sonde de filetage appropriée, utilisez le point avant ou comme point de bouchon. Perforez-le soigneusement avec une aiguille de seringue de 2 millimètres et insérez rapidement une sonde de fil dans le point de préparation. À ce stade, l’angle entre l’extrémité de la sonde filetage et le SSS doit être d’environ 30 à 45 degrés.Ajustez ensuite l’angle entre l’extrémité de la sonde de filetage et le SS à zéro à 10 degrés. Et insérez lentement le SSS dans la structure jusqu’à ce que la tête atteigne l’extrémité de la posteria de la confluence sinusale. La respiration rapide peut se produire quand le SSS est perforé.Si l’extrémité de la sonde de fil ne peut pas être rapidement insérée dans le point de préparation en même temps, utilisez une petite gaze ou une boule de coton pour appuyer doucement sur le point de sonde tout en glissant lentement vers le bas pour exposer soigneusement le point de préparation. Cela est fait, insérez rapidement à l’extrémité du fil introduit dans le SSS. La flèche bleue indique l’état de l’insertion de la sonde dans le SSS à partir du point de prise.La flèche blanche montre le corps de la sonde et la flèche rouge montre qu’il s’agit de la tête. Ensuite, coupez la partie excédentaire de la queue. Suturer la peau du rat.Désinfectez la peau trois fois et retirez le rat du cadre stéréotaxique. Utilisez la source de lumière laser pour éclairer uniformément la zone d’observation du flux sanguin. L’image enregistre le processus dynamique de la sonde de thread dans le SSS.Dans cette figure A et B montre une comparaison du flux sanguin avant et après l’insertion d’embolisation de fil. C prouve que le flux sanguin dans le SSS et les veines de cerveau ont été diminués de manière significative comparés à la fois dans l’artère cérébrale moyenne et les capillaires. Fixez l’animal sur la table de balayage IRM.Calibrer la position du cerveau en positionnant le balayage et effectuer le balayage de séquence T2WI et MRI après avoir confirmé la position. Afin d’observer plus clairement l’état de la sonde de fil dans le SSS, la méthode montée sur la tête C2 a été utilisée pour afficher l’image T2WI du cerveau du rat. Sur cette figure, A, B et C montrent la sonde de fil dans le SSS à partir de la position horizontale, de la position sagittale et de la position crânienne.L’image montre que la sonde de fil est en place, ce qui confirme l’embolisation du SSS. Comme le modèle de thrombose SSS du rat est facilement établi minimisant le traumatisme, offrant une bonne stabilité et permettant de contrôler avec précision le moment chimique et l’emplacement, c’est un nouveau type idéal de modèle CVST.

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