Name: establishment of a rat model of superior sagittal-sinus occlusion via a thread-embolism method
Uploaded: 2021-07-04T14:00:00
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Questo studio è stato supportato dalla Fondazione per la ricerca scientifica per i talenti di alto livello, Fujian University of Traditional Chinese Medicine (talenti X2019002).

Le procedure che coinvolgono soggetti animali sono state approvate dal Comitato per le norme mediche e l'etica dell'Università medica di Wenzhou e sono in conformità con la legislazione cinese sull'uso e la cura degli animali da laboratorio.
1. Preparazione della spina del filo, ratti SD e attrezzature sperimentali
<ol><li>Utilizzare un filo di nylon con un diametro di 0,28 mm come corpo principale della spina del filo. NOTA: La morbidezza e la durezza del filo di nylon dovrebbero esser...

<ol>
	<li>Bousser, M. G., Ferro, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+venous+thrombosis:+an+update.">Cerebral venous thrombosis: an update.</a> Lancet Neurology. 6 (2), 162-170 (2007).</li><li>Guenther, G., Arauz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+venous+thrombosis:+A+diagnostic+and+treatment+update.">Cerebral venous thrombosis: A diagnostic and treatment update.</a> Neurologia. 26 (8), 488-498 (2011).</li><li>Stam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombosis+of+the+cerebral+veins+and+sinuses.">Thrombosis of the cerebral veins and sinuses.</a> New England Journal of Medicine. 352 (17), 1791-1798 (2005).</li><li>Einh&#228;upl, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EFNS+guideline+on+the+treatment+of+cerebral+venous+and+sinus+thrombosis+in+adult+patients.">EFNS guideline on the treatment of cerebral venous and sinus thrombosis in adult patients.</a> European Journal of Neurology. 17 (10), 1229-1235 (2010).</li><li>Coutinho, J. M., Zuurbier, S. M., Stam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Declining+mortality+in+cerebral+venous+thrombosis:+a+systematic+review.">Declining mortality in cerebral venous thrombosis: a systematic review.</a> Stroke. 45 (5), 1338-1341 (2014).</li><li>Gotoh, M., Ohmoto, T., Kuyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+study+of+venous+circulatory+disturbance+by+dural+sinus+occlusion.">Experimental study of venous circulatory disturbance by dural sinus occlusion.</a> Acta Neurochir (Wien). 124 (2-4), 120-126 (1993).</li><li>Miyamoto, K., Heimann, A., Kempski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcirculatory+alterations+in+a+mongolian+gerbil+sinus-vein+thrombosis+model.">Microcirculatory alterations in a mongolian gerbil sinus-vein thrombosis model.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 8 (4), (2001).</li><li>Ungersb&#246;ck, K., Heimann, A., Kempski, a. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+Blood+Flow+Alterations+in+a+Rat+Model+of+Cerebral+Sinus+Thrombosis.">Cerebral Blood Flow Alterations in a Rat Model of Cerebral Sinus Thrombosis.</a> Stroke. 24 (4), (1993).</li><li>R&#246;ttger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+reversible+sinus+sagittalis+superior+thrombosis+in+the+rat:+magnetic+resonance+imaging+changes.">A new model of reversible sinus sagittalis superior thrombosis in the rat: magnetic resonance imaging changes.</a> Neurosurgery. 57 (3), 573-580 (2005).</li><li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photothrombosis+combined+with+thrombin+injection+establishes+a+rat+model+of+cerebral+venous+sinus+thrombosis.">Photothrombosis combined with thrombin injection establishes a rat model of cerebral venous sinus thrombosis.</a> Neuroscience. 306, 39-49 (2015).</li><li>Yang, H., Meng, Z., Zhang, C., Zhang, P., Wang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+a+new+rat+model+of+central+venous+sinus+thrombosis+and+analyzing+its+pathophysiological+and+apoptotic+changes.">Establishing a new rat model of central venous sinus thrombosis and analyzing its pathophysiological and apoptotic changes.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 130-135 (2012).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research.">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Design, Development and Therapy. 9, 3445-3454 (2015).</li><li>Wang, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+tissue+pH+in+an+experimental+model+of+acute+stroke+-+Determination+of+graded+regional+tissue+pH+changes+with+non-invasive+quantitative+amide+proton+transfer+MRI.">Mapping tissue pH in an experimental model of acute stroke - Determination of graded regional tissue pH changes with non-invasive quantitative amide proton transfer MRI.</a> Neuroimage. 191, (2019).</li><li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Vigilin+as+a+Potential+Ischemia+Biomarker+by+Brain+Slice-Based+Systematic+Evolution+of+Ligands+by+Exponential+Enrichment.">Identification of Vigilin as a Potential Ischemia Biomarker by Brain Slice-Based Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment.</a> Analytical Chemistry. 91 (10), 6675-6681 (2019).</li></ol>

In questo studio, è stato stabilito con successo un nuovo tipo di modello CVST inserendo una spina di filettatura autoprodurata nelle SSS dei ratti SD. Inoltre, l'imaging del flusso sanguigno con macchie laser e la risonanza magnetica di piccoli animali sono stati combinati per monitorare i cambiamenti nel flusso sanguigno sulla superficie cerebrale dei ratti SD prima e dopo l'embolizzazione al fine di standardizzare la tempistica e la posizione ischemica.
Nel 1989, Longa et al.<sup class="xr...

La trombosi venosa cerebrale (CVST) è una malattia rara del sistema venoso cerebrale che rappresenta solo lo 0,5-1,0% di tutte le cause di ictus ma ha un tasso di occorrenza relativamente elevato nei bambini e nei giovaniadulti 1. Durante l'autopsia, la CVST è stata trovata come la causa del 10% dei decessi per malattia cerebrovascolare2. La trombosi può verificarsi in qualsiasi parte del sistema venoso intracraniale. Il seno sagittale superiore (SSS) è una delle aree più comunemente colpite in CVST e può coinvolgere più vasi sanguigni. A causa della stenosi o dell'occlusione dei seni venosi, il ritorno venoso intracraniciale è bloccato, che è spesso accompagnato da un aumento della pressione intracranale3. Le manifestazioni cliniche del CVST sono complesse e variano nel tempo; sebbene vi sia una mancanza di specificità dei sintomi, i sintomi più comuni includono mal di testa (77,2%), convulsioni (42,7%) e deficit neurologici (39,9%). Nei casi più gravi, il coma e persino la morte possonoverificarsi 4,5. Negli ultimi anni, a causa del miglioramento generale degli standard medici e sanitari e della consapevolezza della salute pubblica, la proporzione di fattori di rischio correlati è cambiata, la percentuale di traumi e infezioni è diminuita e la percentuale di CVST causata da gravidanza, puerperium, contraccettivi orali e altri motivi è gradualmenteaumentata di 5.
Al momento, la patogenesi del CVST non è ancora ben compresa. Per esplorare in profondità il CVST, è necessaria un'ulteriore ricerca fisiopatica. Tuttavia, la maggior parte di questi metodi di ricerca sono invasivi e quindi difficili da implementare clinicamente. A causa di molti limiti della ricerca clinica, i modelli animali hanno vantaggi insostituibili in termini di ricerca di base e traslazione.
La causa della CVST è complessa, in quanto il suo esordio iniziale è spesso non riconosciuto e la posizione della formazione di trombo è altamente variabile. Fortunatamente, i modelli animali possono ottenere un migliore controllo di questi fattori. Negli ultimi decenni, è stata stabilita una varietà di modelli animali CVST e ogni modello ha i suoi svantaggi. Secondo diversi metodi di produzione, possono essere approssimativamente suddivisi nelle seguenti categorie: il semplice modello di legatura SSS6,7; l'acceleratore di iniezione interna SSS modello8; la trombosi SSS indotta dal cloruro ferrico modello9; la trombosi SSS indotta fotochimica modello10; e l'embolia-occlusione autoprodista modello SSS11. Tuttavia, la maggior parte di questi modelli non è in grado di aggirare i danni invasivi alla corteccia cerebrale dell'animale e non è in grado di controllare con precisione il tempo e la posizione ischemica. In alcuni modelli, il trombo si ricanalizzerà spontaneamente; in altri modelli, l'SSS diventa permanentemente occluso. Inoltre, operazioni complicate e/o lesioni gravi possono influire sui successivi risultati fisiopatologici in questi modelli.
Nel presente studio, una spina di filettatura è stata inserita nel SSS dei ratti Sprague-Dawley (SD) per stabilire con successo un modello CVST che riduceva al minimo i danni, permetteva una controllabilità precisa e produceva una buona stabilità. Inoltre, la risonanza magnetica (MRI) di piccoli animali e l'imaging del flusso sanguigno con macchie laser sono state combinate per verificare l'efficacia del modello. Abbiamo valutato i cambiamenti nel flusso sanguigno cerebrale prima e dopo la definizione del nostro modello, nonché valutato la stabilità del nostro modello, gettando le basi per ulteriori studi che esplorano l'occorrenza, lo sviluppo e i relativi meccanismi fisiopatologici del CVST.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 mL syringe</td>
			<td>Becton,Dickinson and Company</td>
			<td>301940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>brain stereotaxic instrument</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>68025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dissecting microscope</td>
			<td>Wuhan SIM Opto-technology Co.</td>
			<td>SIM BFI-HR PRO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-speed skull drill</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>78046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>laser-speckle blood-flow imaging system</td>
			<td>Wuhan SIM Opto-technology Co.</td>
			<td>SIM BFI-HR PRO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle holder</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F31022-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle thread</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F33303-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>S13029-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silica gel</td>
			<td>Heraeus Kulzer</td>
			<td>302785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small animal anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>R540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small-animal MRI</td>
			<td>Bruker Medical GmbH</td>
			<td>Biospec 94/30 USR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F11029-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vascular forceps</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F22003-09</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a rat model of superior sagittal-sinus occlusion via a thread-embolism method

I meccanismi che contribuiscono all'insorgenza naturale della trombosi venosa cerebrale del seno (CVST) sono per lo più sconosciuti e una varietà di fattori incontrollabili sono coinvolti nel decorso della malattia, con conseguenti grandi limitazioni nella ricerca clinica. Pertanto, la creazione di modelli animali CVST stabili in grado di standardizzare una varietà di fattori confondenti incontrollabili ha contribuito ad aggirare le carenze nella ricerca clinica. Negli ultimi decenni sono stati costruiti diversi modelli animali CVST, ma i risultati basati su questi modelli sono stati incoerenti e incompleti. Pertanto, al fine di esplorare ulteriormente i meccanismi fisiopatologici della CVST, è necessario stabilire un modello animale nuovo e altamente compatibile, che abbia un importante valore pratico e significato scientifico per la diagnosi e il trattamento del CVST. Nel presente studio, è stato stabilito un nuovo modello di ratto Sprague-Dawley (SD) di trombosi superiore del seno sagittale (SSS) attraverso un metodo di embolizzazione del filo e la stabilità e l'affidabilità del modello sono state verificate. Inoltre, abbiamo valutato i cambiamenti nel flusso sanguigno venoso cerebrale nei ratti dopo la formazione di CVST. Collettivamente, il modello SSS-trombosi del ratto SD rappresenta un nuovo modello animale CVST che è facilmente stabilibile, riduce al minimo i traumi, produce una buona stabilità e consente di controllare con precisione la tempistica e la posizione ischemica.

Per stabilire il modello SSS-trombosi del ratto SD tramite il metodo di sutura, la sutura deve essere preparata in anticipo(figura 1A)e devono essere preparate le attrezzature necessarie per l'esperimento(figura 1B). A causa della delicatezza dell'operazione, la preparazione del modello deve essere completata al microscopio di sezionamento. I passaggi principali sono riportati nella figura 2. Per facilitare la descrizione dei dettag...

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Establishment of a Rat Model of Superior Sagittal-Sinus Occlusion via a Thread-Embolism Method

Qui, stabiliamo un nuovo modello di ratto Sprague-Dawley (SD) di trombosi sagittale superiore (SSS) tramite un metodo di embolizzazione del filo e la stabilità e l'affidabilità del modello sono state verificate.

Istituzione di un modello di ratto di occlusione sagittale-seno superiore tramite un metodo thread-embolismo

The mechanisms contributing to the natural onset of cerebral venous sinus thrombosis (CVST) are mostly unknown, and a variety of uncontrollable factors ...

A causa della mancanza di un modello animale ideale, lo studio del CVST è notevolmente limitato. Ora, un nuovo tipo di modello CVST SD-Rat è stato stabilito con successo inserendo centripetamente l'embolizzazione del filo autoprodato nel sito iniziale di SSS che ha standardizzato vari o incontrollabili fattori di interferenza in condizioni cliniche. Dopo che il ratto è stato anestetizzato con successo per iniezione intra peritoneale, applicare il lubrificante per gli occhi oftalmico gel dopo che il ratto è stato messo su una struttura stereotassica per proteggere le cornee dall'essiccazione durante l'anestesia.Rimuovere i capelli sulla parte superiore della testa del topo. Per eseguire questo processo in modo più efficace, il passaggio precedente può essere eseguito in precedenza nella sala di preparazione. Dopo che il ratto è stato anestetizzato con successo da una macchina anestetica, applicare anche lubrificante oculistico oftalmico sterile.Sterilizzare la superficie sopra la testa del topo con iodio al 5%povidone. Alternare questo tre volte con il 75% di etanolo. Fai un'incisione cutanea lunga circa due centimetri nel mezzo della testa.La fascia è tagliata con un bisturi. E poi, staccare con cura la fascia superiore e il periostio per esporre completamente il cranio. Confermare la posizione delle fontanelle anteriori, A e delle fontanelle posteriori, B.Utilizzare l'area compresa tra la sutura coronale e la sutura del gomito, come area osservante del flusso sanguigno.Per evitare che il cranio influenzi l'osservazione durante l'imaging del flusso sanguigno con macchie laser, assottigliare il cranio nell'area di osservazione fino a quando i vasi sanguigni non sono chiaramente visibili. Durante la macinazione del cranio utilizzare una siringa a temperatura normale per risciacquare ripetutamente la dura, per evitare uno scoppio ad alta temperatura alla corteccia cerebrale. Questo passaggio e quanto segue vengono tutti eseguiti al microscopio di sezionamento.In questa figura, l'area rettangolare rivestita di rosso è l'area di osservazione del flusso sanguigno. La dimensione del cranio assottigliato dovrebbe essere di circa un centimetro moltiplicato per un centimetro. E l'area rettangolare rivestita di blu è la finestra ossea.Circa sei millimetri moltiplicati per quattro millimetri. L'area circolare rossa è l'articolazione parietale e la freccia punta al SSS. Quando il cranio può essere visto utilizzare una pinzetta per accuratamente i restanti pezzi ossei della finestra ossea.Scegliere una sonda di filettatura adatta, utilizzare il punto anteriore o come punto di spina. Forare con cura con un ago da 2 millimetri e inserire rapidamente una sonda filettata nel punto di preparazione. In questo momento, l'angolo tra l'estremità dell'estremità della sonda del filetto e l'SSS dovrebbe essere di circa 30-45 gradi.Quindi regolare l'angolo tra l'estremità della sonda del filetto e l'SS su zero a 10 gradi. E inserire lentamente le SSS nella struttura fino a quando la testa raggiunge l'estremità posteria della confluenza del seno. La respirazione rapida può verificarsi quando l'SSS viene perforato.Se l'estremità della sonda del filo non può essere inserita rapidamente nel punto di preparazione contemporaneamente, utilizzare una piccola garza o un batuffolo di cotone per premere delicatamente il punto della sonda mentre si scivola lentamente verso il basso per esporre attentamente il punto di preparazione. Questo viene fatto, inserire rapidamente all'estremità del filo portato nella SSS. La freccia blu mostra lo stato dell'inserto della sonda nell'SSS dal punto della spina.La freccia bianca mostra il corpo della sonda e la freccia rossa mostra che è la testa. Successivamente tagliare la parte in eccesso della coda. Sutura la pelle del topo.Disinfettare la pelle tre volte e rimuovere il ratto dal telaio stereotassico. Utilizzare la sorgente luminosa laser per illuminare uniformemente l'area osservazionale del flusso sanguigno. L'immagine registra il processo dinamico del probe del thread nell'SSS.In questa figura A e B mostra un confronto del flusso sanguigno prima e dopo l'inserimento dell'embolizzazione del filo. C mostra che il flusso sanguigno nelle SSS e nelle vene cerebrali è diminuito significativamente rispetto sia all'arteria cerebrale media che ai capillari. Fissare l'animale sul tavolo di scansione della risonanza prima.Calibrare la posizione del cervello posizionando la scansione ed eseguire la scansione della sequenza T2WI e MRI dopo aver confermato la posizione. Al fine di osservare lo stato della sonda del filo nell'SSS più chiaramente, è stato utilizzato il metodo montato sulla testa C2 per visualizzare l'immagine T2WI del cervello del topo. In questa figura, A, B e C mostrano la sonda del filo nell'SSS dalla posizione orizzontale, dalla posizione sagittale e dalla posizione cranale.L'immagine mostra che la sonda del filetto è in posizione che conferma l'embolizzazione del SSS. Poiché il modello di trombosi SSS del ratto è facilmente riconoscibile riducendo al minimo il trauma, offerto una buona stabilità e permesso di controllare con precisione la tempistica chimica e la posizione, è un nuovo tipo ideale di modello CVST.

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