Name: establishment of a rat model of superior sagittal-sinus occlusion via a thread-embolism method
Uploaded: 2021-07-04T14:00:00
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Este estudio fue apoyado por la Fundación de Investigación Científica para los Talentos de Alto Nivel de la Universidad de Medicina Tradicional China de Fujian (X2019002-talents).

Los procedimientos que involucran a sujetos animales han sido aprobados por el Comité de Normas Médicas y Ética de la Universidad de Medicina de Wenzhou y están de acuerdo con la legislación de China sobre el uso y cuidado de animales de laboratorio.
1. Preparación del tapón de rosca, ratas SD y equipos experimentales
<ol><li>Utilice una rosca de nylon con un diámetro de 0,28 mm como cuerpo principal del tapón de rosca. NOTA: La suavidad y dureza del hilo de nylon debe ser modera...

<ol>
	<li>Bousser, M. G., Ferro, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+venous+thrombosis:+an+update.">Cerebral venous thrombosis: an update.</a> Lancet Neurology. 6 (2), 162-170 (2007).</li><li>Guenther, G., Arauz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+venous+thrombosis:+A+diagnostic+and+treatment+update.">Cerebral venous thrombosis: A diagnostic and treatment update.</a> Neurologia. 26 (8), 488-498 (2011).</li><li>Stam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombosis+of+the+cerebral+veins+and+sinuses.">Thrombosis of the cerebral veins and sinuses.</a> New England Journal of Medicine. 352 (17), 1791-1798 (2005).</li><li>Einh&#228;upl, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EFNS+guideline+on+the+treatment+of+cerebral+venous+and+sinus+thrombosis+in+adult+patients.">EFNS guideline on the treatment of cerebral venous and sinus thrombosis in adult patients.</a> European Journal of Neurology. 17 (10), 1229-1235 (2010).</li><li>Coutinho, J. M., Zuurbier, S. M., Stam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Declining+mortality+in+cerebral+venous+thrombosis:+a+systematic+review.">Declining mortality in cerebral venous thrombosis: a systematic review.</a> Stroke. 45 (5), 1338-1341 (2014).</li><li>Gotoh, M., Ohmoto, T., Kuyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+study+of+venous+circulatory+disturbance+by+dural+sinus+occlusion.">Experimental study of venous circulatory disturbance by dural sinus occlusion.</a> Acta Neurochir (Wien). 124 (2-4), 120-126 (1993).</li><li>Miyamoto, K., Heimann, A., Kempski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcirculatory+alterations+in+a+mongolian+gerbil+sinus-vein+thrombosis+model.">Microcirculatory alterations in a mongolian gerbil sinus-vein thrombosis model.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 8 (4), (2001).</li><li>Ungersb&#246;ck, K., Heimann, A., Kempski, a. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+Blood+Flow+Alterations+in+a+Rat+Model+of+Cerebral+Sinus+Thrombosis.">Cerebral Blood Flow Alterations in a Rat Model of Cerebral Sinus Thrombosis.</a> Stroke. 24 (4), (1993).</li><li>R&#246;ttger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+reversible+sinus+sagittalis+superior+thrombosis+in+the+rat:+magnetic+resonance+imaging+changes.">A new model of reversible sinus sagittalis superior thrombosis in the rat: magnetic resonance imaging changes.</a> Neurosurgery. 57 (3), 573-580 (2005).</li><li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photothrombosis+combined+with+thrombin+injection+establishes+a+rat+model+of+cerebral+venous+sinus+thrombosis.">Photothrombosis combined with thrombin injection establishes a rat model of cerebral venous sinus thrombosis.</a> Neuroscience. 306, 39-49 (2015).</li><li>Yang, H., Meng, Z., Zhang, C., Zhang, P., Wang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+a+new+rat+model+of+central+venous+sinus+thrombosis+and+analyzing+its+pathophysiological+and+apoptotic+changes.">Establishing a new rat model of central venous sinus thrombosis and analyzing its pathophysiological and apoptotic changes.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 130-135 (2012).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research.">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Design, Development and Therapy. 9, 3445-3454 (2015).</li><li>Wang, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+tissue+pH+in+an+experimental+model+of+acute+stroke+-+Determination+of+graded+regional+tissue+pH+changes+with+non-invasive+quantitative+amide+proton+transfer+MRI.">Mapping tissue pH in an experimental model of acute stroke - Determination of graded regional tissue pH changes with non-invasive quantitative amide proton transfer MRI.</a> Neuroimage. 191, (2019).</li><li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Vigilin+as+a+Potential+Ischemia+Biomarker+by+Brain+Slice-Based+Systematic+Evolution+of+Ligands+by+Exponential+Enrichment.">Identification of Vigilin as a Potential Ischemia Biomarker by Brain Slice-Based Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment.</a> Analytical Chemistry. 91 (10), 6675-6681 (2019).</li></ol>

En este estudio, un nuevo tipo de modelo de CVST fue establecido con éxito insertando un enchufe de rosca hecho a sí mismo en el SSS de ratas SD. Además, la proyección de imagen laser-manchada del sangre-flujo y el pequeño-animal MRI fueron combinados para supervisar cambios en flujo de sangre en la superficie del cerebro de ratas del SD antes y después del embolization para estandardizar la sincronización y la localización isquémicas.
En 1989, Longa et al. hicieron un modelo reversib...

La trombosis del seno venoso cerebral (CVST) es una enfermedad rara del sistema venoso cerebral que representa sólo el 0,5-1,0% de todas las causas de accidente cerebrovascular, pero tiene una tasa de ocurrencia relativamente alta en niños y adultos jóvenes1. Durante la autopsia, cvst fue encontrado para ser la causa del 10% de muertes de la enfermedad cerebrovascular2. La trombosis puede ocurrir en cualquier parte del sistema venoso intracraneal. El sino sagital superior (SSS) es una de las áreas lo más comúnmente posible afectadas de CVST y puede implicar los vasos sanguíneos múltiples. Debido a la estenosis u oclusión de los senos venosos, se bloquea el retorno venoso intracraneal, lo que a menudo se acompaña de un aumento de la presión intracraneal3. Las manifestaciones clínicas de CVST son complejas y varían en un plazo determinado; aunque hay una falta de especificidad de los síntomas, los síntomas más comunes incluyen dolor de cabeza (77,2%), convulsiones (42,7%), y déficits neurológicos (39,9%). En casos graves, puede ocurrir coma e incluso la muerte4,5. En los últimos años, debido a la mejora general de las normas médicas y de salud y a la concienciación sobre la salud pública, la proporción de factores de riesgo relacionados ha cambiado, la proporción de traumatismos e infecciones ha disminuido, y la proporción de CVST causada por el embarazo, el puerperio, los anticonceptivos orales y otras razones ha aumentado gradualmente5.
Actualmente, la patogenesia de CVST todavía no se entiende bien. Para explorar CVST en profundidad, se necesita más investigación fisiopatológica. Sin embargo, la mayoría de estos métodos de investigación son invasivos y, por lo tanto, difíciles de implementar clínicamente. Debido a muchas limitaciones de la investigación clínica, los modelos animales tienen ventajas insustituibles en términos de investigación básica y traslacional.
La causa de CVST es compleja, pues su inicio es a menudo desconocido y la localización de la formación del trombo es altamente variable. Afortunadamente, los modelos animales pueden lograr un mejor control de estos factores. En las últimas décadas, se ha establecido una variedad de modelos animales CVST, y cada modelo tiene sus propias desventajas. De acuerdo con los diferentes métodos de producción, se pueden dividir aproximadamente en las siguientes categorías: el modelo simple de ligadura SSS6,7; el acelerador de inyección interna SSS modelo8; la trombosis SSS inducida por cloruro férrico modelo9; la trombosis del SSS fotoquímica inducida por el modelo10; y la embolia-oclusión de auto-oclusión SSS modelo11. Sin embargo, la mayoría de estos modelos son incapaces de evitar el daño invasivo a la corteza cerebral del animal y no son capaces de controlar con precisión el tiempo isquémico y la ubicación. En algunos modelos, el trombo se recanalizará espontáneamente; en otros modelos, el SSS se ocluye permanentemente. Además, las operaciones complicadas y/o lesiones serias pueden afectar a resultados patofisiológicos subsecuentes en estos modelos.
En el actual estudio, un enchufe del hilo fue insertado en el SSS de las ratas de Sprague-Dawley (SD) para establecer con éxito un modelo de CVST que minimizara daño, permitió controlabilidad exacta, y rindió buena estabilidad. Además, la proyección de imagen de resonancia magnética del pequeño-animal (MRI) y la proyección de imagen laser-manchada del sangre-flujo fueron combinadas para verificar la eficacia del modelo. Evaluamos cambios en flujo de sangre cerebral antes y después del establecimiento de nuestro modelo, así como evaluamos la estabilidad de nuestro modelo, sentando una base para otros estudios que exploraban el acontecimiento, el desarrollo, y los mecanismos patofisiológicos relacionados de CVST.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 mL syringe</td>
			<td>Becton,Dickinson and Company</td>
			<td>301940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>brain stereotaxic instrument</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>68025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dissecting microscope</td>
			<td>Wuhan SIM Opto-technology Co.</td>
			<td>SIM BFI-HR PRO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-speed skull drill</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>78046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>laser-speckle blood-flow imaging system</td>
			<td>Wuhan SIM Opto-technology Co.</td>
			<td>SIM BFI-HR PRO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle holder</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F31022-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle thread</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F33303-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>S13029-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silica gel</td>
			<td>Heraeus Kulzer</td>
			<td>302785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small animal anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>R540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small-animal MRI</td>
			<td>Bruker Medical GmbH</td>
			<td>Biospec 94/30 USR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F11029-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vascular forceps</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>F22003-09</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a rat model of superior sagittal-sinus occlusion via a thread-embolism method

Los mecanismos que contribuyen al inicio natural de la trombosis cerebral del sino venoso (CVST) son sobre todo desconocidos, y una variedad de factores incontrolables están implicados en el curso de la enfermedad, dando por resultado grandes limitaciones en la investigación clínica. Por lo tanto, el establecimiento de modelos animales CVST estables que pueden estandarizar una variedad de factores de confusión incontrolables han ayudado a evitar las deficiencias en la investigación clínica. En las últimas décadas, se han construido una variedad de modelos animales CVST, pero los resultados basados en estos modelos han sido inconsistentes e incompletos. Por lo tanto, para explorar más lejos los mecanismos patofisiológicos de CVST, es necesario establecer un modelo animal nuevo y altamente compatible, que tenga valor práctico importante y significación científica para la diagnosis y el tratamiento de CVST. En el actual estudio, un modelo nuevo de la rata de Sprague-Dawley (SD) de la trombosis sagital superior del sino (SSS) fue establecido vía un método del hilo-embolization, y la estabilidad y la confiabilidad del modelo fueron verificadas. Además, evaluamos cambios en flujo de sangre venoso cerebral en ratas después de la formación de CVST. Colectivamente, el modelo de la SSS-trombosis de la SD-rata representa un modelo animal nuevo de CVST que se establezca fácilmente, minimice trauma, rinde buena estabilidad, y permite controlar exactamente la sincronización y la localización isquémicas.

Para establecer el modelo de trombosis SSS sd-rata a través del método de sutura, la sutura debe prepararse de antemano (Figura 1A), y el equipo necesario para el experimento (Figura 1B) debe ser preparado. Debido a la naturaleza delicada de la operación, la preparación del modelo debe completarse bajo un microscopio de disección. Los pasos principales se muestran en la Figura 2. Para facilitar la descripción de los detalles e...

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Establishment of a Rat Model of Superior Sagittal-Sinus Occlusion via a Thread-Embolism Method

Aquí, establecemos un modelo nuevo de la rata de Sprague-Dawley (SD) de la trombosis sagital superior del sino (SSS) vía un método del hilo-embolization, y la estabilidad y la confiabilidad del modelo fueron verificadas.

Establecimiento De Un Modelo De Rata De La Oclusión Superior Sagital-Seno A Través De Un Método De Hilo-Embolia

The mechanisms contributing to the natural onset of cerebral venous sinus thrombosis (CVST) are mostly unknown, and a variety of uncontrollable factors ...

Debido a la falta de un modelo animal ideal, el estudio de CVST es muy limitado. Ahora, un nuevo tipo de modelo de SD-Rata CVST fue establecido con éxito insertando uno mismo hilo-embolization centrípetamente en el sitio inicial de SSS que estandardizó varios o factores de interferencia incontrolables en condiciones clínicas. Después de que la rata fuera anestesiada con éxito por la inyección peritoneal intra, aplique el lubricante oftálmico del ojo del gel después de que la rata se ponga en el marco stereotaxic para proteger las córneas contra la sequedad durante anestesia.Retire el vello en la parte superior de la cabeza de la rata. Con el fin de realizar este proceso de manera más efectiva, el paso anterior se puede realizar antes en la sala de preparación. Después de que la rata fue anestesiada con éxito por la máquina anestésica, también aplique el lubricante oftálmico estéril del ojo.Esterilizar la superficie en la parte superior de la cabeza de la rata con 5% de povidona yodo. Alterna esto tres veces con etanol al 75%. Haga una incisión en la piel de unos dos centímetros de largo en el centro de la cabeza.La fascia se abre con un bisturí. Y luego, desprenda cuidadosamente la fascia superior y el periostio para exponer completamente el cráneo. Confirme la posición de la fontanela anterior, A y la fontanela posterior, B.Use el área entre la sutura coronal y la sutura del codo, como el área de observación del flujo sanguíneo.Para evitar que el cráneo afecte la observación durante las imágenes de flujo sanguíneo con manchas láser, adelgace el cráneo en el área de observación hasta que los vasos sanguíneos sean claramente visibles. Durante la molienda del cráneo, use una jeringa de temperatura normal para enjuagar la duramadre repetidamente, para evitar una explosión de alta temperatura a la corteza cerebral. Este paso y los siguientes se realizan bajo un microscopio de disección.En esta figura, el área rectangular bordeada de rojo es el área de observación del flujo sanguíneo. El tamaño del cráneo adelgazado debe ser de aproximadamente un centímetro multiplicado por un centímetro. Y el área rectangular forrada de azul es la ventana de hueso.Unos seis milímetros multiplicados por cuatro milímetros. El área circular roja es la articulación parietal y la flecha apunta al SSS. Cuando el cráneo se puede ver utilizar pinzas para cuidadosamente las piezas de hueso restantes de la ventana ósea.Elija una sonda de rosca adecuada, utilice el punto frontal o como punto de enchufe. Puncione cuidadosamente con una aguja de jeringa de 2 milímetros e inserte rápidamente una sonda de hilo en el punto de preparación. En este momento, el ángulo entre el extremo del extremo de la sonda de rosca y el SSS debe ser de aproximadamente 30 a 45 grados.A continuación, ajuste el ángulo entre el extremo de la sonda de rosca y la SS a cero a 10 grados. E inserte lentamente el SSS en la estructura hasta que la cabeza llegue al extremo posteria de la confluencia sinusal. La respiración rápida puede ocurrir cuando se pincha el SSS.Si el extremo de la sonda de rosca no se puede insertar rápidamente en el punto de preparación a la vez, use una pequeña gasa o bola de algodón para presionar suavemente el punto de la sonda mientras se desliza lentamente hacia abajo para exponer el punto de preparación con cuidado. Eso se hace, insertar rápidamente en el extremo del cable introducido en el SSS. La flecha azul muestra el estado de la inserción de la sonda en el SSS desde el punto de conexión.La flecha blanca muestra el cuerpo de la sonda y la flecha roja muestra que es la cabeza. A partir de entonces cortar la parte sobrante de la cola. Suturar la piel de la rata.Desinfecte la piel tres veces y retire la rata del marco estereotáxico. Utilice la fuente de luz láser para iluminar uniformemente el área de observación del flujo sanguíneo. La imagen registra el proceso dinámico del sondeo de subproceso en el SSS.En esta figura A y B se muestra una comparación del flujo sanguíneo antes y después de la inserción de embolización de hilos. C muestra que el flujo de sangre en el SSS y las venas del cerebro fueron disminuidos perceptiblemente comparados con ambos en la arteria cerebral media y los tubos capilares. Fije el animal en la mesa de resonancia magnética.Calibre la posición del cerebro colocando la exploración y realice la exploración de la secuencia de T2WI y mri después de confirmar la posición. Para observar el estado de la punta de prueba del hilo de rosca en el SSS el método montado en la cabeza C2 fue utilizado para visualizar la imagen de T2WI del cerebro de la rata. En esta figura, A, B y C muestran la sonda de rosca en el SSS desde la posición horizontal, la posición sagital y la posición craneal.La imagen muestra que la sonda de rosca está en su lugar, lo que confirma la embolización del SSS. Como el modelo de trombosis SSS de rata se establece fácilmente minimizando el trauma, ofrece buena estabilidad y permite controlar con precisión el momento químico y la ubicación, es un nuevo tipo ideal de modelo CVST.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Modelo de isquemia cerebral focal por oclusión endovascular de sutura de la arteria cerebral media en la rata

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Investigación

Neurociencias

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In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

La electroporación en el útero métodos para estudiar la excitabilidad de las subpoblaciones neuronales y Conectividad Una sola célula

The nervous system is composed of an enormous range of distinct neuronal types. These neuronal subpopulations are characterized by, among other features, ...

A Protocol for Measuring Cue Reactivity in a Rat Model of Cocaine Use Disorder

Un protocolo para medir la reactividad de Cue en un modelo de rata de trastorno de uso de cocaína

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue ...

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Un modelo de rata de hipoperfusión leve intrauterina con microcoil de transcatheter estenosis

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

Modelo de una rata de la fatiga Central mediante la método de plataforma múltiple

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