Name: generation of self-assembled vascularized human skin equivalents
Uploaded: 2021-02-12T14:45:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Self-assembled Vascularized Human Skin Equivalents at JoVE.com

المؤلفين أشكر الدكتور جيم راينوالد59 والدكتور إلين H. فان دن بوغارد20 لهدية سخية من خطوط الخلية N / TERT. تم دعم هذا العمل من قبل جمعية القلب الأمريكية (19IPLOI34760636).

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

وقد أظهر هذا البروتوكول طريقة بسيطة وقابلة للتكرار لتوليد VHSEs وتحليلها ثلاثي الأبعاد. والأهم من ذلك، تعتمد هذه الطريقة على عدد قليل من التقنيات المتخصصة أو قطع المعدات، مما يجعلها في متناول مجموعة من المختبرات. علاوة على ذلك، يمكن استبدال أنواع الخلايا بتغييرات محدودة في البروتوكول، مما يسمح للباحثين بتكييف هذا البروتوكول مع احتياجاتهم المحددة.
جيليشن الكولاجين السليم هو خطوة صعبة في تأسيس ثقافة الجلد. خاصة عند استخدام الاستعدادات الخام دون تنقية، يمكن أن تؤثر الملوثات تتبع عملية الهلام. للمساعدة في ضمان الاتساق، يجب إجراء مجموعات من التجارب بنفس مخزون الكولاجين الذي سيتم استخدامه لتوليد VHSE. علاوة على ذلك ، يجب أن يحدث الجليشن بشكل مثالي عند رقم PH من 7-7.4 ، وقد تحول الملوثات النزرة رقمH. قبل استخدام أي مخزون الكولاجين، يجب إجراء هلام الخلية الممارسة في التركيز المطلوب، وينبغي قياس الحموضة قبل هلام. إن إكمال فحص جودة الكولاجين هذا قبل البدء في بذر المكونات الجلدية سيحدد المشاكل المتعلقة بالجيليشن السليم وتجانس الكولاجين قبل إعداد تجربة كاملة. بدلا من بذر الكولاجين اللاخلاياي مباشرة على إدراج الثقافة، قم بزرع بعض الكولاجين على شريط pH الذي يقيم مقياس الحموضة بأكمله وتحقق من رقم الحموضة من 7-7.4. يمكن تقييم الهلام عن طريق تطبيق قطرة من محلول هلام الكولاجين على غطاء أو لوحة بئر بلاستيكية زراعة الأنسجة (يوصى بلوحة بئر لمحاكاة الجوانب المحصورة لإدراج الثقافة). بعد وقت الهلام ، يجب أن يكون الكولاجين صلبا ، أي أنه لا ينبغي أن يتدفق عندما يميل الطبق. تحت المجهر النقيض المرحلة، يجب أن تبدو الكولاجين متجانسة وواضحة. فقاعات عرضية من بذر الكولاجين طبيعية ولكن النقط غير متبلور كبيرة من الكولاجين مبهمة داخل هلام واضح يشير إلى مشكلة المرجح بسبب عدم كفاية الاختلاط، وHH خاطئ، و / أو الفشل في الحفاظ على الكولاجين مبردة أثناء الاختلاط.
قد يتم ضبط كميات البذر الخلية والوسائط. في البروتوكول أعلاه، تم تحسين كميات الخلايا المغلفة لإدراج 12 جيدا في 7.5 × 104 الخلايا الليفية و 7.5 × 105 خلايا البطانية لكل مل من الكولاجين مع 1.7 × 105 الخلايا الكيراتينية المصنفة على رأس بناء الجلد. وقد تم تحسين كثافة الخلايا لهذا البروتوكول VHSE استنادا إلى الدراسات الأولية والبحوث السابقة التحقيق في توليد شبكة الأوعية الدموية 3D في تركيزات الكولاجين المختلفة48 وHSE جيل22،80،81. في أنظمة مماثلة، وكثافات الخلايا البطانية المنشورة هي 1.0 × 106 خلايا / مل الكولاجين48؛ غالبا ما تتراوح تركيزات الخلايا الليفية من 0.4 × 105 خلايا / مل من الكولاجين22،28،82 إلى 1 × 105 خلايا / مل من الكولاجين8،58،83،84،85؛ وتتراوح تركيزات الكيراتينوسيت من 0.5 × 105 [خلايا/سم2]80 إلى 1 × 105 [خلايا/سم2]8. يمكن تحسين كثافات الخلايا لخلايا محددة وسؤال بحثي. يمكن للثقافات ثلاثية الأبعاد مع الخلايا المتقلصة ، مثل الخلايا الليفية ، أن تتقلص مما يؤدي إلى الحد من الجدوى وفقدان الثقافة86،87. يجب إكمال التجارب الأولية لاختبار تقلص المقصورة الجلدية (التي يمكن أن تحدث مع المزيد من الخلايا الجلدية ، والخلايا الجلدية الأكثر انقباضا ، وثقافات الغمر الأطول ، أو المصفوفات الأكثر ليونة) واختبار التغطية السطحية البشرة. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أيضا تخصيص عدد الأيام في الغمر ومعدل خفض محتوى المصل إذا حدث انكماش جلدي مفرط أو كان هناك حاجة إلى معدل مختلف من تغطية الخلايا الكيراتينية. على سبيل المثال، إذا لوحظ انكماش خلال فترة الغمر الجلدي أو في حين أن الخلايا القرنية هي إنشاء طبقة أحادية السطح، والتحرك بسرعة أكبر من خلال عملية خفض المصل ورفع VHSEs إلى ALI يمكن أن تساعد في منع انكماش إضافي. وبالمثل، إذا كانت تغطية الكيراتينوسيت ليست مثالية، فإن تغيير عدد الأيام التي تغمر فيها VHSE دون مصل قد يساعد على زيادة تغطية أحادية البشرة والتخفيف من الانكماش منذ أن تم استبعاد المصل. يجب تحسين التغييرات في كثافة الخلايا أو اقتراحات أخرى أعلاه للثقافات وأهداف البحث المحددة.
لإنشاء التقسيم الطبقي السليم للبشرة خلال فترة واجهة سائل الهواء (ALI) ، من المهم التحقق بانتظام والحفاظ على مستويات السوائل في كل بئر بحيث يتم الاحتفاظ ب ALI والترطيب المناسب لكل بناء طوال طول الثقافة. يجب فحص مستويات الوسائط وتتبعها يوميا حتى يتم تحديد مستويات ALI متسقة. يجب أن تبدو طبقة البشرة رطبة ، وليست جافة ، ولكن لا ينبغي أن تكون هناك برك من الوسائط على البناء. خلال ALI، فإن بناء تطوير لون أبيض / أصفر مبهمة وهو أمر طبيعي. طبقة البشرة من المرجح أن تتطور بشكل غير متساو. عادة، يميل VHSEs بسبب بذر الكولاجين أو انكماش الجلد. ومن الطبيعي أيضا أن نلاحظ أعلى جزء البشرة في منتصف بناء في أصغر البنى (24 حجم البئر) وتشكيل التلال حول محيط VHSE في حجم بئر 12. انكماش البنى13 قد يغير هذه التكوينات الطوبوغرافية، و / أو قد لا يلاحظ على الإطلاق.
تلطيخ وتصوير VHSEs يدخل التلاعب الميكانيكية لVHSEs. من المهم جدا تخطيط والحد من التلاعب بكل ثقافة. عندما يكون التلاعب ضروريا، حافظ على حركات لطيفة عند إزالة VHSEs من أغشية الإدراج، وعند إضافة حلول تلطيخ أو غسل إلى سطح البناء، وعند إزالة واستبدال VHSEs في آبار التخزين / التصوير أثناء إعداد التصوير. على وجه التحديد ، قد تكون الطبقات apical من مكون البشرة هشة معرضة لخطر التخلص من طبقات البشرة القاعدية. الطبقات Apical من البشرة هشة وتذهب من خلال desquamation حتى في الأنسجةالأصلية 4، ولكن لتحليل دقيق لهيكل البشرة من المهم تقليل الضرر أو الخسارة. إذا رفعت طبقات البشرة من البناء ، فيمكن تصويرها بشكل منفصل. الطبقات القاعدية من البشرة هي على الأرجح لا تزال تعلق على الأدمة في حين أن أجزاء من الطبقات apical قد تنفصل. لتصور البشرة ، وصمة عار النووية مفيدة في مراقبة هذا لأن النوى الكثيفة هي سمة من سمات الطبقات الدنيا والمتوسطة من البشرة.
وقد نوقشت التصوير Confocal من VHSE بعد التثبيت في البروتوكول، ولكن من الممكن أيضا لتصوير VHSEs في جميع أنحاء الثقافة عن طريق تستقيم القائم على التماسك البصري التصوير المقطعي (أكتوبر)88،89،90،91،92،93. VHSE مستقرة بما يكفي لتحمل التصوير دون حضانة أو ترطيب لمدة ساعتين على الأقل دون آثار ملحوظة. كما أكتوبر هو التسمية الحرة وغير الباضعة، فمن الممكن لتتبع سمك البشرة أثناء النضج. من المحتمل أن يتم استخدام طرائق تصوير أخرى غير جراحية أيضا.
التصوير الحجمي للهياكل الجلدية والجلدية مجتمعة يمكن أن يكون تحديا بسبب تخفيف الليزر أعمق في VHSE. ويمكن التخفيف من ذلك عن طريق تصوير بناء في اتجاهين، من الجانب البشرة(الشكل 1)ومن الجانب الجلدي(الشكل 2)،مما يسمح لقرار جيد من هياكل الأوعية الدموية الجلدية و البشرة. بالإضافة إلى ذلك، يمكن مسح العينة، مما يسمح للصور الحجمية للهيكل بأكمله مع الحد الأدنى من التوهين. ومع ذلك، جرت محاولة استخدام عدة طرق للمقاصة، حيث أسفرت طريقة الميثانول/الميثيل الساليسيلات الموصوفة عن أفضل النتائج. يتم توجيه الباحثين المهتمين في تحسين طرق المقاصة الأخرى نحو هذه الاستعراضات49،61،62. إذا كان المقاصة، يقترح أن تصور تماما العينة قبل المقاصة، كما يمكن أن تلحق الضرر الأسلوب الفلوروفوريس و / أو الهيكل. وعلاوة على ذلك، ينبغي الانتهاء من التصوير في أقرب وقت ممكن بعد إزالة، كما قد تتلاشى الفلورسينس في غضون أيام.
للبساطة وسهولة الوصول، استخدم هذا البروتوكول أبسط مزيج من الوسائط الموجودة في الأدب السابق11،80. على الرغم من أن هناك العديد من المزايا لاستخدام وسائل الإعلام يمزج بسيطة، يتم التعرف على القيود المفروضة على هذا الاختيار أيضا. وقد درست مجموعات أخرى آثار مكونات وسائل الإعلام محددة على البشرة والصحة الجلدية ووجدت أن المضافات وسائل الإعلام الأخرى94, مثل الأحماض الدهنية الحرة الخارجية / الدهون, تعزيز الطبقة كورنيوم البشرة وتحسين وظيفة حاجز الجلد. على الرغم من أن علامات المناعة لدينا تظهر التمايز المناسب والتقسيم الطبقي في البشرة ، اعتمادا على الدراسات التي تجري ، قد تكون هناك حاجة إلى تحسين وسائل الإعلام الإضافية. علاوة على ذلك ، لم يتم إجراء تحليل مستفيض ل BM البشرة عند تقييم VHSEs المعروضة هنا. سلامة BM هو مؤشر مهم على ما يعادل الجلد. وقد فعلت مجموعات مختلفة البحوث على مدة الثقافة وتأثيرها على علامات BM95 وكذلك تحليل وجود الخلايا الليفية وأضاف آثار عامل النمو على التعبير BM14. من المهم ملاحظة أنه يجب تقييم تحليل مكون BM وتحسينه عند استخدام هذا البروتوكول.
في هذا البروتوكول يوصف إجراء لتوليد VHSE، مما يدل على النتائج بعد 8 أسابيع في ALI. وقد تم استزراع ثقافات VHSE لمدة تصل إلى 12 أسبوعا في ALI دون تغيير ملحوظ أو فقدان القدرة على البقاء ، ومن الممكن أن تكون قابلة للحياة لفترة أطول. الأهم من ذلك، هذا البروتوكول هو قابل للتكيف بسهولة لأنواع الخلايا المتاحة عادة، كما يتضح من استبدال الخلايا الليفية الجلدية مع الخلايا الليفية الرئة IMR90. اعتمادا على حاجة الباحث والموارد المتاحة، يمكن تعديل أنواع الخلايا والوسائط على الثقافة، على الرغم من أن أنواع الخلايا الأكثر مختلفة قد تتطلب تحسين الوسائط. وباختصار، تهدف هذه الإجراءات إلى توفير الوضوح بشأن ثقافة VHSEs لدراسة بيولوجيا الجلد والمرض. ولتعظيم إمكانية الوصول، تم تطوير البروتوكول بهذه البساطة والقوة باستخدام المعدات المشتركة وخطوط الخلايا والكواشف كنهج فعال بسيط يمكن تكييفه بشكل أكبر مع الاحتياجات المحددة للدراسات البحثية.

الجلد البشري يؤدي العديد من الوظائف البيولوجية الأساسية بما في ذلك العمل كحاجز المناعة / الميكانيكية، وتنظيم درجة حرارة الجسم، والمشاركة في احتباس الماء والأدوار الحسية1،2،3،4. تشريحيا، والجلد هو أكبر جهاز في جسم الإنسان و تتكون من ثلاث طبقات رئيسية (البشرة والأدمة، ونقص الدم) وتمتلك نظام معقد من سترومال والأوعية الدموية والغدة، ومكونات الجهاز المناعي / العصبي بالإضافة إلى خلايا البشرة. وتتكون البشرة نفسها من أربع طبقات من الخلايا التي يتم تجديدها باستمرار للحفاظ على وظيفة الحاجز وغيرها من هياكل الجلد الأصلي (أي العرق والغدد الدهنية والأظافر)3. فسيولوجيا الجلد مهم في وظيفة المناعة، التئام الجروح، بيولوجيا السرطان، وغيرها من المجالات، مما يؤدي الباحثين إلى استخدام مجموعة واسعة من النماذج، من الثقافات الأحادية في المختبر إلى نماذج الحيوانات في الجسم الحي. نماذج الحيوانات توفر القدرة على دراسة التعقيد الكامل لعلم وظائف الأعضاء الجلد، ومع ذلك، النماذج الحيوانية المستخدمة عادة مثل الفئران لديها اختلافات فسيولوجية كبيرة بالمقارنة مع البشر5. وقد أدت هذه القيود، وزيادة تكلفة النماذج الحيوانية، العديد من الباحثين إلى التركيز على تطوير نماذج في المختبر التي تعكس عن كثب فسيولوجيا الجلد البشري1،6. من هذه, واحدة من أبسط أنواع النموذج هو ما يعادل البشرة البشرية (HEE; يشار إليها أيضا باسم نماذج الجلد نصف سمك) التي تتكون من الخلايا القرنية البشرة فقط على مصفوفة جلدية الخلية, ولكن التقاط التمايز البشرة والتقسيم الطبقي ينظر في الجسم الحي. وبناء على ذلك، غالبا ما يشار إلى النماذج التي تحتوي على مكونات الجلد والجلد (الخلايا الكيراتينية والخلايا الليفية) على أنها مكافئات للبشرة البشرية (HSE)، أو نماذج الجلد كاملة السمك، أو بنيات الجلد العضوي (OSC). لفترة وجيزة، يتم إنشاء هذه النماذج عن طريق تغليف الخلايا الجلدية داخل المصفوفات هلام وبذر خلايا البشرة على القمة. ويمكن بعد ذلك التمييز البشرة والتقسيم الطبقي يمكن أن يتحقق عن طريق وسائل الإعلام المتخصصة والتعرض للهواء7. وقد ولدت في معظم الأحيان مكافئات الجلد من خلال تقنيات التجميع الذاتي باستخدام المواد الهلامية الجلدية المصنوعة من نوع الكولاجين الأول (إما من ذيل الفئران أو أصل الجلد البقري)1،8، ولكن نماذج مماثلة أدرجت مكونات مصفوفة أخرى مثل الفيبرين9،10، الخلايا الليفية المستمدة11،12، أغشية غير البشرة13،14،15،16، المواد الهلامية المتاحة تجاريا وغيرها1،12،13،17،18،19. حاليا، هناك ما يعادل الجلد المتاحة تجاريا (كما استعرضت سابقا1،2). ومع ذلك ، يتم تطوير هذه في المقام الأول لأغراض علاجية ولا يمكن تخصيصها بسهولة لأسئلة بحثية محددة.
وقد تم تطبيق HSEs في دراسات التئام الجروح، والتطعيم، والسموم، والأمراض الجلدية / التطور11،12،13،16،8،20،21،22،23. على الرغم من أن الثقافة 3D نماذج أكثر شمولا وظائف الأنسجة البشرية مقارنة مع الثقافات 2D24, إدراج أنواع الخلايا المتنوعة التي تعكس بدقة أكبر في السكان في الجسم الحي تمكن دراسات تنسيق الخلية الخلية في الأنسجة المعقدة24,25,26. معظم HSEs تشمل فقط الخلايا الليفية الجلدية وخلايا القرنية البشرة27، على الرغم من أن بيئة الجلد في الجسم الحي تشمل العديد من أنواع الخلايا الأخرى. وقد بدأت الدراسات الحديثة بما في ذلك عدد أكبر من الخلايا السكانية; وتشمل هذه الخلايا البطانية في الأوعيةالدموية 10،28،29،30،31،32،33،34، الخلايا الدهنية في الأنسجة الجلدية الفرعية35،36، المكونات العصبية19،21، الخلاياالجذعية27،37،38، الخلايا المناعية10،39،40،41،42، وغيرها من الأمراض / السرطان نماذج محددة16،40،43،44،45،46،47. ومن المهم بشكل خاص بين هذه الأوعية الدموية; في حين أن بعض HSEs تشمل خلايا الأوعية الدموية، عموما أنها لا تزال تفتقر إلى عناصر شعرية شاملة مع الاتصال عبر الأدمة كامل10،29، تمديد الاستقرار في المختبر28،وكثافة السفينة المناسبة. وعلاوة على ذلك، عادة ما يتم تقييم نماذج HSE من خلال قسم النسيج ما بعد الثقافة الذي يحد من تحليل الهيكل ثلاثي الأبعاد ل HSEs. تحليل ثلاثي الأبعاد يسمح لتقييم الحجمي كثافة الأوعية الدموية48،49 ، فضلا عن الاختلاف الإقليمي لسمك البشرة والتمايز.
على الرغم من أن HSEs هي واحدة من النماذج العضوية الأكثر شيوعا ، إلا أن هناك العديد من التحديات التقنية في توليد هذه البنى بما في ذلك تحديد المصفوفة المناسبة خارج الخلية وكثافات الخلايا ، وصفات الوسائط ، وإجراءات واجهة سائل الهواء المناسبة ، وتحليل ما بعد الثقافة. وعلاوة على ذلك، في حين نشرت نماذج HEE وHSE بروتوكولات، لا يوجد بروتوكول مفصل يتضمن الأوعية الدموية الجلدية والتصوير الحجمي بدلا من التحليل النسيجي. يقدم هذا العمل بروتوكولا يمكن الوصول إليه لثقافة مكافئات الجلد البشري الوعائية (VHSE) من خطوط الخلايا التجارية بشكل رئيسي. تمت كتابة هذا البروتوكول ليكون قابلا للتخصيص بسهولة ، مما يسمح بالتكيف المباشر مع أنواع الخلايا المختلفة واحتياجات البحث. ومن أجل سهولة الوصول والتوافر والتكلفة، أعطيت الأولوية لاستخدام المنتجات البسيطة وتقنيات التوليد على استخدام المنتجات المتاحة تجاريا. وعلاوة على ذلك، يتم وصف طرق التصوير الحجمي المباشرة والتحديد الكمي التي تسمح بتقييم البنية ثلاثية الأبعاد ل VHSE. ترجمة هذا الإجراء إلى بروتوكول قوي ويمكن الوصول إليه يمكن الباحثين غير المتخصصين من تطبيق هذه النماذج الهامة في الطب الشخصي ، وهندسة الأنسجة الوعائية ، وتطوير الكسب غير المشروع ، وتقييم الأدوية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 N NaOH</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S318-100</td>
			<td>(Dilute from Lab stock)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% Paraformaldehyde</td>
			<td>ACROS Organics</td>
			<td>#41678-5000, Lot # B0143461</td>
			<td>Made up using solid Paraformaldehyde in PBS, pH adjusted to 6.9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclaved forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>#11295-00</td>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher bioreagents</td>
			<td>Cat # BP510-250, Lot # 190231</td>
			<td>Rnase, Dnase, Protease-Free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell line, Endothelial: Microvascular Endothelial Cell (HMEC1)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3243</td>
			<td>SV40 Immortalized microvascular endothelial cell. Note that 750,000 cells/mL of collagen were used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell line, Fibroblasts: dermal Human fibroblast, adult</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>PCS-201-012</td>
			<td>Primary dermal cells. Note that 75,000 cells/mL of collagen were used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell line, Fibroblasts: human lung firbroblast (IMR90)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-186</td>
			<td>Primary embryonic cells. Note that 75,000 cells/mL of collagen were used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell line, Keratinocyte: N/TERT-1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Immortalized via hTERT expression. N/TERT-1 was made using a retroviral vector conferring hygromycin resistance. Cell line established by Dickson et al. 2000. Can be replaced with ATCC PCS-200-010 or PCS-200-011. Note that 170,000 cells were used per construct; N/TERT1 cells must be used from plates that are 30% confluent- two 30% confluent 90 mm tissue culture dishes give more than enough cells.The authors thank Dr. Jim Rheinwald and Dr. Ellen H. van den Bogaard for their generous gift of N/TERT cell lines.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific; Sorvall Legend X1R</td>
			<td></td>
			<td>(standard lab equipment)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computational Software</td>
			<td>MATLAB</td>
			<td>MATLAB 2020a</td>
			<td>MathWorks, Natick, MA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope</td>
			<td>Leica TCS SPEII confocal</td>
			<td></td>
			<td>Laser scanning confocal. Can be replaced with other confocals or deconvolution microscopy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Glass (22 x 22)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-545F</td>
			<td>0.13-0.17 mm No.1 Thickness</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate super glue or silicone grease</td>
			<td>Glue Masters</td>
			<td>#THI0102</td>
			<td>Glue Masters, THICK, Instant Glue, Cyanoacrylate; super glue is preferred</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM media base</td>
			<td>Corning; Mediatech, Inc</td>
			<td>REF # 10-013-CM; Lot # 26119007</td>
			<td>DMEM, 1X (Dulbecco&#39;s Modification of Eagle&#39;s Medium) with 4.5 g/L glucose, L-glutamine &#38; sodium pyruvate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12 50/50</td>
			<td>Corning; Mediatech, Inc</td>
			<td>REF # 10-090-CV; Lot # 21119006</td>
			<td>DMEM/F-12 50/50, 1X (Dulbecco&#39;s Mod. Of Eagle&#39;s Medium/Ham&#39;s F12 50/50 Mix) with L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>#V1101</td>
			<td>(standard lab reagent)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat # FB12999102, Lot # AE29451050</td>
			<td>Research Grade Fetal Bovine Serum, Triple 0.1 um sterile filtered</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine tip forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>#11295-00</td>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Epidermal Growth Factor (EGF)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>Cat # AF-100-15-1MG, Lot # 0318AFC05 D0218</td>
			<td>Made up in 0.1% BSA in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Alpha Easar</td>
			<td>Lot # 5002F2A</td>
			<td>made up in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin (human)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>Lot # 9352621</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Light/Phase Contrast Microscope</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76317-470</td>
			<td>(standard lab equipment)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoproterenol</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>#AAJ6178806</td>
			<td>DL-Isoproterenol hydrochloride, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Keratinocyte-SFM (1x) media base</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>REF #: 10724-011; Lot # 2085518</td>
			<td>Keratinocyte-SFM (1X); serum free medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic Acid</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>Cat # A61-100, Lot # 181977, CAS # 50-81-7</td>
			<td>Crystalline. L-Ascorbic acid can also be purchased as a salt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine (solid)</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>CAT # BP379-100, LOT # 172183, CAS # 56-85-9</td>
			<td>L-Glutamine, white crystals or Crystalline powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCDB 131 media base</td>
			<td>Gen Depot</td>
			<td>CM034-050, Lot # 03062021</td>
			<td>MCDB 131 Medium Base, No L-Glutamine, sterile filtered</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal punches</td>
			<td>Sona Enterprises (SE)</td>
			<td>791LP, 12PC</td>
			<td>Hollow Leather Punch Set, High Carbon Steel, Hardness: 48HRC; (various sizes including): 1/8&#34;, 5/32&#34;, 3/16&#34;, 7/32&#34;, 1/4&#34;, 9/32&#34;, 5/16&#34;, 3/4&#34;, 7/16&#34;, 1/2&#34;, 5/8:, 3/4&#34;. This punch set is helpful, but x-acto knife can work as well. Size of metal punch that works well for 12 well transwell VHSE is 3/8&#34; or 1/2&#34;.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>CAS # 67-56-1</td>
			<td>(optional). For clearing dehydration step.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl Salicylate</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>O3695-500; Lot # 164535; CAS # 119-36-8</td>
			<td>(optional). For clearing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes, 1.7 mL</td>
			<td>Genesee Scientific Corporation; Olympus Plastics</td>
			<td>Cat # 24-282; Lot # 19467</td>
			<td>1.7 ml Microtubes, Clear; Boilproof, Polypropulene, Certified Rnase, Dnase, DNA, PCR inhibitor and endotoxin-Free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 10x Culture grade or autoclaved</td>
			<td>APEX Bioresearch Products</td>
			<td>Cat # 20-134, Lot # 202237</td>
			<td>PBS Buffer, 10x Dry Pack; add contents of pack into container and add water to 1 liter to produce 10x concentrated.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1x Culture grade, (-) Calcium, (-) magnesium</td>
			<td>Genesee Scientific Corporation</td>
			<td>Ref # 25-508; Lot # 07171015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1x non-Culture grade</td>
			<td>APEX Bioresearch Products</td>
			<td>Cat # 20-134, Lot # 202237</td>
			<td>PBS Buffer, 10x Dry Pack; add contents of pack into container and add water to 1 liter to produce 10x concentrated. Dilute to 1x with water.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>Ref # 15140-122, Lot # 2199839</td>
			<td>Pen Strep (10,000 Units/mL Penicillin; 10,000 ug/mL Streptomycin)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish, glass, small</td>
			<td>Corning</td>
			<td>PYREX 316060</td>
			<td>(optional). To be used as a clearing container</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes, 100 mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713</td>
			<td>Use for making up PDMS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydimethylsiloxane (PDMS)</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>GMID 02065622, Batch # H04719H035</td>
			<td>Sylgard 184 Silicone Elastomer Base, Dow Corning, Midland, MI)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>GMID 02065622, Batch # H047JC4003</td>
			<td>DOWSIL 184, Silicone Elastomer Curing Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>note: PDMS is usually sold as a kit that includes both the base and curing agent components.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Positive Displacement Pipettes (1000 &#38; 250 uL)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>1000 uL: HM05136, M1000. 250 uL: T12269L</td>
			<td>M1000 pipette capacity (100-1000 uL); M250 pipette capacity to 250 uL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Positive Displacement Tips/Pistons (1000 &#38; 250 uL)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>1000 uL: CAT # F148180, BATCH # B01292902S; 250 uL: CAT # F148114, BATCH # B05549718S</td>
			<td>Sterilized capillaries and pistons</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round tipped scoopula</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>(optional; standard lab equipment) For manipulation of VHSEs prior to imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplements for Keratinocyte-SFM media</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>Ref # 37000-015, Lot # 2154180</td>
			<td>Contains EGF Human Recombinant (Cat # 10450-013), Bovine Pituitary Extract (Cat # 13028-014)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Plate Inserts, 12 well size, 3 &#181;m pore size</td>
			<td>Corning; Costar</td>
			<td>REF # 3462 - Clear; Lot # 14919057</td>
			<td>Transwell; 12 mm Diameter Inserts, 3.0 um pore size, tissue culture treated, polyester membrane, polystyrene plates,&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Plates, 12 well size</td>
			<td>Greiner Bio-one; CellStar</td>
			<td>Cat # 665 180; Lot # E18103QT</td>
			<td>12 well cell culture plate; sterile, with lid; products are sterile, free of detectable Dnase, Rnase, human DNA and pyrogens. Contents non-cytotoxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Plates, 60.8cm^2 growth area</td>
			<td>Genesee Scientific Corporation</td>
			<td>Cat # 25-202; Lot No: 191218-177B</td>
			<td>Tissue culture dishes; treated, growth area 60.8 cm^2; sterile, Dnase, Rnase, Pyrogen Free; virgin polystyrene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton x 100</td>
			<td>Ricca Chemical Company</td>
			<td>Cat # 8698.5-16, Lot # 4708R34</td>
			<td>Wetting agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 0.25%</td>
			<td>Corning; Mediatech, Inc</td>
			<td>Ref # 25-053-CI</td>
			<td>0.25% Trypsin, 2.21 mM EDTA, 1x [-] sodium bicarbonate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Type 1 Collagen isolated from Rat tail</td>
			<td>Pel-Freez Biologicals</td>
			<td>56054-1</td>
			<td>Sprauge-Dawley rat tails can be purchased frozen from Pel-Freez or other suppliers. Collagen can be isolated from the tail tendons. Isolation Protocol references [Cross et al.,2010; Rajan et al.,2007; Bornstein, 1958] .Alternatively, high concentration rat-tail collagen can be purchased from suppliers including Corning (Catalog Number: 354249)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaccum chamber, benchtop</td>
			<td>Bel-Art</td>
			<td>F42010-0000</td>
			<td>(standard lab equipment)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handheld Precision knife</td>
			<td>X-Acto</td>
			<td>X3311</td>
			<td>(X-Acto knife optional if purchased steel punches)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of self-assembled vascularized human skin equivalents

مكافئات الجلد البشري (HSEs) هي أنسجة مصممة لبنائها نموذج البشرة والمكونات الجلدية للبشرة البشرية. وقد استخدمت هذه النماذج لدراسة تطوير الجلد، وتضميد الجراح، وتقنيات التطعيم. ولا يزال العديد من HSEs يفتقر إلى الأوعية الدموية ويتم تحليله بالإضافة إلى ذلك من خلال قسم النسيج ما بعد الثقافة الذي يحد من التقييم الحجمي للهيكل. يقدم هنا بروتوكول مباشر يستخدم مواد يمكن الوصول إليها لتوليد مكافئات الجلد البشري الوعائي (VHSE)؛ كذلك وصفها هي التصوير الحجمي وتقنيات القياس الكمي لهذه البنى. لفترة وجيزة، يتم بناء VHSEs في 12 إدراج ثقافة البئر التي تزرع الخلايا الجلدية والجلدية في هلام الكولاجين ذيل الفئران الأول. تتكون المقصورة الجلدية من خلايا ليفية وخلايا بطانة منتشرة في جميع أنحاء هلام الكولاجين. تتكون مقصورة البشرة من خلايا القرنية (خلايا البشرة الظهارية) التي تفرق في واجهة الهواء السائل. الأهم من ذلك، هذه الأساليب قابلة للتخصيص على أساس احتياجات الباحث، مع نتائج تثبت جيل VHSE مع نوعين مختلفين من الخلايا الليفية الليفية: الخلايا الليفية الجلدية البشرية (hDF) والخلايا الليفية الرئة البشرية (IMR90s). تم تطوير VHSEs ، وتصويرها من خلال المجهر confocal ، وتحليلها حجميا باستخدام البرامج الحاسوبية في 4 - و 8 أسابيع timepoints. يتم وصف عملية محسنة لإصلاح وصمة عار وصورة و VHSEs واضحة للفحص الحجمي. هذا النموذج الشامل، والتصوير، وتقنيات التحليل قابلة للتخصيص بسهولة لتلبية الاحتياجات البحثية المحددة للمختبرات الفردية مع أو بدون خبرة HSE السابقة.

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Self-assembled Vascularized Human Skin Equivalents at JoVE.com

Generation of Self-assembled Vascularized Human Skin Equivalents

الهدف من هذا البروتوكول هو وصف توليد وتحليل حجمي لمكافئات الجلد البشري الوعائي باستخدام تقنيات سهلة المنال وبسيطة للثقافة على المدى الطويل. وإلى أقصى حد ممكن، يوصف الأساس المنطقي للخطوات للسماح للباحثين بالقدرة على التخصيص على أساس احتياجاتهم البحثية.

جيل من مكافئات الجلد البشري الوعائية ذاتية التجميع

Human skin equivalents (HSEs) are tissue engineered constructs that model epidermal and dermal components of human skin. These models have been used to ...

التفاصيل الواردة في هذا البروتوكول، ويتناول جيل الجلد البشري المكافئ، الذي غالبا ما يكون تحديا من الناحية الفنية. يتم تضمين عناصر بروتوكول مكافئ الجلد البشرية الجديدة ، مثل الأوعية الدموية والتصوير الحجمي. تمكن هذه التقنية من البناء المباشر لنموذج الجلد الذي يطابق بشكل وثيق الأنسجة في الجسم الحي لدراسة الأمراض والشيخوخة والطب الشخصي.الجزء الأكثر تحديا من هذا البروتوكول هو الانتقال بين الغمر وواجهة الهواء السائل. من المرجح أن يستغرق الأمر بضع تجارب لتحسين التوقيت ومستويات الوسائط لتحقيق نتائج متسقة. للبدء، أضف 516 ميكرولتر من الوسائط إلى أنبوب بارد، وأضف على الفور 375 ميكرولتر من الكولاجين البارد باستخدام ماصة الإزاحة الإيجابية 1000 ميكرولتر.إزالة تلميح ماصة فارغة والتحول إلى ماصة النزوح الإيجابية 250 ميكرولتر المعدة لخلط. تخلط بسرعة، ولكن بلطف لمنع تشكيل فقاعة الزائدة. الحفاظ على طرف في الحل، مزيج موحد من مواقف مختلفة من الأنبوب حتى الحل هو من لون متجانس، والذي يستغرق عادة حوالي خمس دورات ماصة أو 10 ثانية.تفريق فورا 125 ميكرولتر من الكولاجين acellular على غشاء إدراج ثقافة 12 جيدا. لضمان تغطية موحدة، إمالة لوحة واستخدام طرف ماصة لطلاء الغشاء عن طريق نشر الكولاجين بلطف حولها. على الفور نقل لوحة 12 جيدا إلى حاضنة ثقافة الخلية 37 درجة مئوية للسماح لها هلام لمدة 20 دقيقة على الأقل.بعد فترة الهلام، أخرج طبق الكولاجين الخلوي البالغ 12 بئرا من الحاضنة. إزالة أنبوب 1.7 ملليلتر توج من الجليد الرطب، ثم إزالة الكولاجين الأسهم من التبريد ووضعه على الجليد الرطب مع غطاء مفتوح. أضف 516 ميكرولتر من تعليق الخلايا المبردة إلى الأنبوب البارد المغطى.استخدام ماصة 1000 ميكرولتر على الفور ماصة 375 ميكرولتر من محلول الكولاجين البارد مباشرة في الحل داخل أنبوب توج. طرد كل الكولاجين من ماصة في الأنبوب والتخلص من تلميح ماصة النزوح الإيجابية. قم على الفور بالتحول إلى ماصة 250 ميكرولتر ومزج محلول الكولاجين بمجرد خلطه ، ونقل 250 ميكرولتر من محلول الكولاجين الخلوي إلى دعامات الكولاجين الخلوية في إدراج ثقافة 12 بئرا ، ثم نقل لوحة 12 جيدا إلى حاضنة ثقافة الخلية 37 درجة مئوية.بعد 30 دقيقة هلام الوقت، إمالة بلطف لوحة لتقييم هلام وتأكد من أن الكولاجين قد وطدت. إضافة 500 ميكرولتر و 1000 ميكرولتر من مزيج وسائل الإعلام إلى الغرفة العليا والغرفة السفلى من إدراج، على التوالي. تأكد من أن جل الكولاجين مغمور، مع إضافة المزيد من الوسائط إذا لزم الأمر.ضع لوحة البئر في حاضنة ثقافة الخلية للحضانة بين عشية وضحاها. في يوم الغمر السابع، استخدم ماصة يدوية لجمع الوسائط والتخلص منها من القاع والغرفة العلوية لكل بئر بناء. لجمع الوسائط العالقة مباشرة تحت الغشاء النفاذ ، ضع طرف ماصة تحت الغشاء ، وضرب إدراج خارج المكان مؤقتا.إضافة ملليلتر واحد من الجلد البشري يعادل أو وسائل الإعلام HSE تكملها مع 5٪ FPS إلى الغرفة السفلى من كل بئر و 200 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى الغرفة العليا من كل بئر. قم بزرع الخلايا القرنية مباشرة على سطح البناء الجلدي والسماح لها بالاستقرار لمدة ساعتين في الحاضنة. بعد ساعتين من بذر الخلايا القرنية ، أضف بعناية 300 ميكرولتر من وسائط HSE ، تكملها 5٪ FPS إلى الغرفة العلوية لكل بئر بناء.بعد تحميل الوسائط، ضع البناء مرة أخرى في الحاضنة. باستخدام ماصة يدوية، ارفع كل بناء إلى واجهته السائلة الهواء، أو ALI، عن طريق إزالة نفايات الوسائط من الغرفة العليا فقط. في محاولة للحصول على أقرب إلى طبقة البشرة ممكن دون لمس أو إتلافه.إمالة لوحات قليلا في زوايا مختلفة لجمع وسائل الإعلام، ثم إضافة ما يقرب من اثنين من ملليلتر من المياه العقيمة إلى الآبار المحيطة بها في لوحة للحفاظ على رطوبة متسقة. تحقق من لوحة بضع ساعات في وقت لاحق للتأكد من أن keratinocytes لا تزال في ALI. إزالة أي وسائط في الغرفة العليا، وتتبع مقدار الوسائط التي تتم إزالتها من كل بئر.يجب أن تبدو طبقات البشرة رطبة ، وليست جافة ، ولكن لا ينبغي أن تكون هناك وسائط مجمعة فوق البناء. لإعداد بناء لتلطيخ immunofluorescent، بدوره إدراج رأسا على عقب ووضعه على بئر على لوحة البئر. تثبيت إدراج بيد واحدة أثناء استخدام ملقط تلميح غرامة أو سكين الدقة لقطع حوالي نصف محيط الغشاء.قطع أقرب إلى السكن البلاستيكي ممكن. باستخدام ملقط طرف غرامة، والاستيلاء على حافة رفرف غشاء قطع وتقشير بلطف الغشاء المسامية قبالة إدراج فضلا عن بناء VHSE. إذا البناء على جانب الغرفة ، فاستخدم ملقط الطرف الناعم أو ملعقة صغيرة لنقله إلى البئر.بمجرد أن يكون VHSE في البئر ، تجاهل أي قطع متبقية من غشاء الإدراج والحفاظ على إدراج الثقافة في كل بئر لعقد VHSEs في وضع مغمور أثناء التلطيخ. قبل يومين من التصوير، قم بإعداد البوليديميثيلسيلوكسيان أو PDMS. وضع أي وعاء خلط نظيفة على توازن الوزن وتاري المقياس.إضافة الأساس، ثم إضافة وصلة عرضية. تحريك الحل بقوة لمدة أربع دقائق على الأقل، وخلق فقاعات صغيرة. بعد خلط كافية، صب PDMS في طبق بيتري 90 أو 100 ملليمتر.ديغا PDMS في غرفة فراغ حتى تختفي جميع الفقاعات وPDMS واضحة. حرر الفراغ ببطء وأزل PDMS. ضع الطبق في فرن لعلاجه بين عشية وضحاها عند 50 إلى 60 درجة مئوية ، مع التأكد من أن الطبق يجلس مسطحا لعلاج PDMS بالتساوي.قبل يوم واحد من التصوير، استخدم لكمة فولاذية أو سكين دقيقة محمولة باليد لكمة أو قطع بئر دائري من ورقة PDMS، بنفس حجم بناء VHSE تقريبا. قطع التصحيح مربع حول البئر الدائري لإنشاء نظام إدارة الأداء الموحد واحد جيدا. باستخدام زلة غطاء زجاجي من حجم مماثل كما PDMS إضافة جيدا الغراء cyanoacrylate إلى السطح السفلي من PDMS وتشويه بالتساوي مع طرف ماصة المتاح.مركز الزجاج واضغط عليه على PDMS جيدا في حين ترك نافذة زجاجية واضحة داخل دائرة لكمة. السماح للغراء الجاف بين عشية وضحاها قبل استخدام. توصيف البشرة والأدمة تظهر علامات immunofluorescent المناسبة للبشرة البشرية في يبني VHSE.Cytokeratin 10 هو علامة التمايز المبكر keratinocyte التي عادة ما علامات جميع طبقات فوقbasal في مكافئات الجلد. إنفولوكرين وفيلاغرين علامات التمايز في وقت متأخر في الخلايا القرنية ووضع علامة على الطبقات العليا فوق القاعدية في مكافئات الجلد. سمح مسح VHSE بالتصوير المباشر في إعداد واحد وقضى على الحاجة إلى إعادة توجيه البناء لتصوير الأدمة وال البشرة بشكل منفصل.الصور الحجمية تجعل من الممكن توليد الاداءات 3D لرسم خريطة الأوعية الدموية في جميع أنحاء كل بناء. تم تحميل أكوام الصور في البرامج الحاسوبية واستخدمت خوارزمية مخصصة لتقديم 3D والتحديد الكمي. تحديد الهيكل العظمي المركز النهائي لكل وعاء الكولاجين الرابع ملحوظ واستخدمت البيانات الناتجة لحساب قطر السفينة، فضلا عن كسر الأوعية الدموية.بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق التوصيف مثل تحليل الحاجز ، والمسح المجهري الإلكتروني ، وملامح الدهون ، وغيرها لفهم كيفية تأثير الأوعية الدموية على نضج البشرة واستقرارها على وجه التحديد. يتيح هذا البروتوكول إجراء دراسات متعلقة بالأنسجة ونوع الخلية في نموذج الجلد الوعائي. وهي مناسبة بشكل خاص للبحث في مجال الشيخوخة والطب الشخصي.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

The Three-Dimensional Human Skin Reconstruct Model: a Tool to Study Normal  Skin and Melanoma Progression

الجلد ثلاثي الأبعاد إعادة بناء الإنسان النموذجي : أداة لدراسة بشرة العادية والتقدم الميلانوما

Most in vitro studies in experimental skin biology have been done in 2-dimensional (2D) monocultures, while accumulating evidence suggests that cells ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

جيل من سمك ثلاثي الأبعاد الجلد كامل أي ما يعادل واصابة الآلي

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Engineered Vascularized Muscle Flap

المهندسة أوعية دموية العضلات رفرف

One of the main factors limiting the thickness of a tissue construct and its consequential viability and applicability in vivo, is the control of oxygen ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

فاسكولاريزيد بيوبرينتينج موائع جزيئية لهندسة الأنسجة وأورجانويدس

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Isolation of Adult Human Dermal Fibroblasts from Abdominal Skin and Generation of Induced Pluripotent Stem Cells Using a Non-Integrating Method

عزل الخلايا الليفية الجلدية البشرية البالغين من جلد البطن وتوليد مستحث المستحثة باستخدام أسلوب غير دمج

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) could be considered, to date, a promising source of pluripotent cells for the management of currently untreatable ...

In Vitro Model of Human Cutaneous Hypertrophic Scarring using Macromolecular Crowding

في النموذج الفيترو من الإنسان التشعب التشعبي تندب باستخدام الزحام الجزيئي الكلي

It has been shown that in vivo tissues are highly crowded by proteins, nucleic acids, ribonucleoproteins, polysaccharides, etc. The following protocol ...

Scalable Generation of Mature Cerebellar Organoids from Human Pluripotent Stem Cells and Characterization by Immunostaining

التوليد القابل للتحجيم من العضيات الدماغية الناضجة من الخلايا الجذعية البشرية المتعددة القدرات والتوصيف عن طريق المناعة

The cerebellum plays a critical role in the maintenance of balance and motor coordination, and a functional defect in different cerebellar neurons can ...

Generation of a Simplified Three-Dimensional Skin-on-a-chip Model in a Micromachined Microfluidic Platform

جيل من نموذج مبسط ثلاثي الأبعاد للبشرة على رقاقة في منصة Micromachined Microfluidic

This work presents a new, cost-effective, and reliable microfluidic platform with the potential to generate complex multilayered tissues. As a proof of ...

Microtubule Plus-End Dynamics Visualization in Huntington's Disease Model based on Human Primary Skin Fibroblasts

Microtubule زائد نهاية ديناميات التصور في نموذج مرض هنتنغتون على أساس الخلايا الليفية الجلد الأساسية البشرية

Transfection with a fluorescently labeled marker protein of interest in combination with time-lapse video microscopy is a classic method of studying the ...

A Reliable Porcine Fascio-Cutaneous Flap Model for Vascularized Composite Allografts Bioengineering Studies

نموذج رفرف لفافة جلدية خزفية موثوقة لدراسات الهندسة الحيوية المركبة الوعائية

Vascularized Composite Allografts (VCA) such as hand, face, or penile transplant represents the cutting-edge treatment for devastating skin defects, ...