Name: a plate-based assay for the measurement of endogenous monoamine release in acute brain slices
Uploaded: 2021-08-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Plate-Based Assay for the Measurement of Endogenous Monoamine Release in Acute Brain Slices at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch die Zuschüsse Fondecyt Initiation Fund N 11191049 an J.A.P. und den NIH-Zuschuss DA038598 an G.E.T. unterstützt.

Alle Experimente, einschließlich tierexperimenteller Handhabung und Gewebeentnahme, wurden in Übereinstimmung mit der University of Florida und dem City College of New York Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) nach den genehmigten Protokollen 201508873 (UF) und 1071 (CCNY) durchgeführt. Reagenzien und Puffer entnehmen Sie bitte der Ergänzungsdatei.
1. Bereiten Sie akute Rattenhirnschnitte vor
ANMERKUNG: In diesem Versuch wurden erwa...

Monoaminfreisetzungsmessungen werden seit Jahren in einer Reihe von Systemen wie heterologen Zellen, neuronalen Kulturen, Gehirnsynaposomen, ex vivo akuten Hirnschnitten und ganzen Tieren durchgeführt13,20,41,42,58,64,65,66,67,68<sup class="xref...

Eine Vielzahl von neurologischen und psychiatrischen Erkrankungen ist mit einer Dysregulation oder unzureichenden Aufrechterhaltung des Monoamin-Neurotransmitters (Dopamin [DA], Serotonin [5-HT], Noradrenalin [NE]) der Homöostase verbunden1,2,3. Zu diesen Erkrankungen gehören unter anderem Depressionen1,2, Schizophrenie2, Angstzustände2, Sucht4, Menopause5,6,7, Schmerzen8 und Parkinson3. Zum Beispiel haben mehrere Rattenmodelle der Menopause gezeigt, dass die Dysregulation oder Reduktion von Monoaminen im Hippocampus, im präfrontalen Kortex und im Striatum sowohl mit Depressionen als auch mit kognitivem Verfall verbunden sein kann, was bei Frauen in den Wechseljahren beobachtet wird. Die Dysregulation von Monoaminen in diesen Modellen wurde ausführlich mit HPLC-ECD untersucht, obwohl die Studien nicht zwischen dem gemessenen Neurotransmittergehalt und der Freisetzung von Neurotransmittern unterschieden5,6,7. Monoamine werden klassischerweise durch Ca2+-abhängige vesikuläre Freisetzung9 in den extrazellulären Raum freigesetzt und durch ihr jeweiliges Plasmamembran-Wiederaufnahmesystem (Dopamintransporter, DAT; Serotonintransporter, SERT; Noradrenalintransporter, NET) wieder recycelt 10,11. Umgekehrt deuten die Daten darauf hin, dass diese Transporter in der Lage sind, Monoamine freizusetzen oder auszuströmen, da für Missbrauchsdrogen wie Amphetamin (AMPH) und 3,4-Methylendioxymethamphetamin (MDMA) bekannt ist, dass sie DA bzw. 5-HT über ihre Transportersysteme freisetzen12,13,14,15,16,17 . Daher ist ein richtiges mechanistisches Verständnis der Monoaminfreisetzungsdynamik entscheidend für die Entwicklung spezifischer und zielgerichteter Pharmakotherapien.
Zur Untersuchung der Monoaminfreisetzung wurde eine breite Palette von Techniken eingesetzt, wie z. B. Fast Scan Cyclic Voltammetry (FSCV)18, In-vivo-Mikrodialyse13, Bildgebung19, Präinkubation mit radioaktiv markierten Monoaminen20, Optogenetik und in jüngerer Zeit genetisch kodierte Fluoreszenzsensoren und Photometrie21,22 . FSCV und In-vivo-Mikrodialyse sind die primären Techniken zur Untersuchung der Monoaminfreisetzung. FSCV wird verwendet, um die stimulierte exozytotische Freisetzung von hauptsächlich DA in akuten Hirnschnitten und in vivo23 zu untersuchen. Da FSCV Elektroden verwendet, um die Freisetzung zu stimulieren oder hervorzurufen, ist die primäre Quelle der Freisetzung von Neurotransmittern die Ca2 +-abhängige vesikuläre Freisetzung18,24,25,26,27,28,29,30,31 . Die In-vivo-Mikrodialyse in Verbindung mit HPLC misst Veränderungen der extrazellulären Neurotransmitterspiegel mit einer Sonde, die in einem Hirnareal von Interesse platziert wird13,32. Ähnlich wie bei FSCV ist eine wesentliche Einschränkung der In-vivo-Mikrodialyse die Schwierigkeit, die Quelle der Neurotransmitterfreisetzung zu bestimmen: Ca2+-abhängige vesikuläre Freisetzung oder Transporterabhängigkeit. Bemerkenswert ist, dass beide Methoden die direkte Messung der Monoaminfreisetzung ermöglichen. Durch die jüngste Weiterentwicklung der Optogenetik zeigt die Forschung den Nachweis einer 5-HT- und DA-Freisetzung in kurzer Zeit mit exquisiter Zelltypspezifität21,22. Diese Strategien erfordern jedoch komplexe und kostspielige Techniken und Geräte und messen indirekt die Monoaminfreisetzung, insbesondere durch Monoaminbindung an Rezeptoren. Darüber hinaus werden radioaktiv markierte Monoamine auch zur Untersuchung der Monoamindynamik verwendet. Radioaktiv markierte Monoamine können in verschiedene Modellsysteme vorgeladen werden, wie z.B. heterologe Zellen, die jeden Monoamintransporter überexprimieren20,33,34,35,36,37,38,39,40, primäre Neuronen20, Synaptosomen33,39,41, 42 und akute Hirnschnitte43,44. Radioaktivität stellt jedoch einen potenziellen Schaden für den Experimentator dar, und die tritiummarkierten Analyten rekapitulieren möglicherweise nicht getreu die endogene Monoamindynamik45,46. Superfusionssysteme in Kombination mit Offline-Nachweismethoden wie HPLC-ECD haben den Nachweis von Monoaminen aus mehreren Gewebequellen ermöglicht. Hier bietet dieses Protokoll als optimierte und kostengünstige, einfache und präzise Methode unter Verwendung akuter Hirnschnitte, um die endogene basale und stimulierte Monoaminfreisetzung direkt zu messen.
Akute Hirnschnitte ermöglichen das Testen mechanistischer Hypothesen, vor allem, da sie die anatomische In-vivo-Mikroumgebung erhalten und intakte Synapsen beibehalten47,48,49,50,51,52. In einigen Studien wurden akute Hirnschnitte oder gehacktes Hirngewebe in Verbindung mit einer Superfusionstechnik verwendet, bei der KCl zur Stimulierung der Ca2+-vermittelten Freisetzung verwendet wurde53,54,55,56. Superfusionssysteme waren entscheidend, um das Verständnis der Freisetzungsmechanismen von Neurotransmittern, einschließlich Monoaminen, voranzutreiben. Diese Systeme sind jedoch relativ teuer, und die Anzahl der für die Gewebeanalyse verfügbaren Kammern reicht von 4 bis 12. Im Vergleich dazu ist die hier vorgestellte Methode kostengünstig, ermöglicht die Messung von 48 Gewebeproben und kann auf bis zu 96 Gewebeproben verfeinert werden. Jede Vertiefung innerhalb der 48-Well-Platte enthält Gewebehalter, die Filter verwenden, um das freigesetzte Produkt vom Gewebe zu trennen, und freigesetzte Monoamine werden dann gesammelt und durch HPLC-ECD analysiert. Wichtig ist, dass diese Methode die gleichzeitige Messung der 5-HT-, DA- und NE-Freisetzung aus verschiedenen Gehirnbereichen wie dem präfrontalen Kortex, dem Hippocampus und dem dorsalen Striatum nach behandlung mit pharmakologischen Wirkstoffen ermöglicht, die die Monoaminfreisetzung modulieren. So kann der Experimentator mehrere Fragen mit einem kostengünstigen Multi-Well-System beantworten, das die Anzahl der getesteten Proben erhöht und dadurch die Anzahl der verwendeten Tiere reduziert.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>48 Well plate</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>Assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>A998-1</td>
			<td>Mobile Phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Ahydrous</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td>Modified Artifical Cerebrospinal Fluid OR Efflux Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clarity Software</td>
			<td>Anetc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>Mobile Phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1002608421</td>
			<td>Dissection Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMF</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D4551</td>
			<td>MTT Assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA-Na2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>Mobile Phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td>Graphpad Software, Inc</td>
			<td></td>
			<td>Statistical Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC, Decade Amperometric</td>
			<td>Anetc</td>
			<td></td>
			<td>HPLC, LC-EC system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC</td>
			<td>Amuza</td>
			<td></td>
			<td>HPLC HTEC-510.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Asrobic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A5960</td>
			<td>Dissection Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7487-88-9</td>
			<td>KH Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge Filter Units UltraFree</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>C7554</td>
			<td>Assay - 6 to fit in 48 well plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTT</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>M6494</td>
			<td>MTT Assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanosep</td>
			<td>VWR</td>
			<td>29300-606</td>
			<td>Assay; protein assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octanesulfonic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>V800010</td>
			<td>Mobile Phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pargyline Clorohydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P8013</td>
			<td>Modified Artifical Cerebrospinal Fluid OR Efflux Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>Mobile Phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>12636</td>
			<td>KH Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1001655559</td>
			<td>KH Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precisonary VF-21-0Z</td>
			<td>Precissonary</td>
			<td></td>
			<td>Compresstome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P2714</td>
			<td>Lysis buffer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td>Dissection Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>Dissection Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3014</td>
			<td>KH Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>L3771</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td>MTT Assay / Lysis buffer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a plate-based assay for the measurement of endogenous monoamine release in acute brain slices

Monoamin-Neurotransmitter sind mit zahlreichen neurologischen und psychiatrischen Erkrankungen verbunden. Tiermodelle solcher Zustände haben Veränderungen in der Freisetzungs- und Aufnahmedynamik von Monoamin-Neurotransmittern gezeigt. Technisch komplexe Methoden wie Elektrophysiologie, Fast Scan Cyclic Voltammetry (FSCV), Bildgebung, In-vivo-Mikrodialyse, Optogenetik oder die Verwendung von Radioaktivität sind erforderlich, um die Monoaminfunktion zu untersuchen. Die hier vorgestellte Methode ist ein optimierter zweistufiger Ansatz zum Nachweis der Monoaminfreisetzung in akuten Hirnschnitten unter Verwendung einer 48-Well-Platte mit Gewebehaltern zur Untersuchung der Monoaminfreisetzung und einer Hochleistungsflüssigkeitschromatographie in Verbindung mit elektrochemischer Detektion (HPLC-ECD) zur Messung der Monoaminfreisetzung. Kurz gesagt, Rattenhirnschnitte, die Regionen von Interesse enthielten, einschließlich präfrontaler Kortex, Hippocampus und dorsales Striatum, wurden mit einem Gewebeschneider oder Vibratom erhalten. Diese interessanten Regionen wurden aus dem gesamten Gehirn seziert und in einem mit Sauerstoff angereicherten physiologischen Puffer inkubiert. Die Lebensfähigkeit wurde während des gesamten Versuchszeitraums durch 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (MTT)-Assay untersucht. Die akut sezierten Hirnregionen wurden unter verschiedenen Medikamentenbedingungen inkubiert, von denen bekannt ist, dass sie die Monoaminfreisetzung durch den Transporter (Amphetamin) oder durch die Aktivierung der exozytotischen vesikulären Freisetzung (KCl) induzieren. Nach der Inkubation wurden die freigesetzten Produkte im Überstand gesammelt und durch ein HPLC-ECD-System analysiert. Hier wird die basale Monoaminfreisetzung mittels HPLC aus akuten Hirnschnitten nachgewiesen. Diese Daten unterstützen frühere In-vivo- und In-vitro-Ergebnisse, die zeigen, dass AMPH und KCl die Monoaminfreisetzung induzieren. Diese Methode ist besonders nützlich für die Untersuchung von Mechanismen, die mit einer von Monoamintransportern abhängigen Freisetzung verbunden sind, und bietet die Möglichkeit, Verbindungen, die die Monoaminfreisetzung beeinflussen, schnell und kostengünstig zu screenen.

Diese Technik beschreibt die Verwendung von Hirnschnitten zur Messung der Freisetzung von endogenen Monoaminen mittels HPLC mit elektrochemischer Detektion basierend auf einer 48-Well-Platte mit einem internen Gewebehalter. Der Versuchsaufbau ist in Abbildung 1 und Abbildung 2 dargestellt. Um die Lebensfähigkeit des Gewebes bis zum Ende der Experimente sicherzustellen, wurde zunächst ein MTT-Assay (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-...

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A Plate-Based Assay for the Measurement of Endogenous Monoamine Release in Acute Brain Slices

Diese Methode führt eine einfache Technik zum Nachweis der endogenen Monoaminfreisetzung unter Verwendung akuter Hirnschnitte ein. Das Setup verwendet eine 48-Well-Platte, die einen Gewebehalter für die Monoaminfreisetzung enthält. Freigesetztes Monoamin wird mittels HPLC in Verbindung mit elektrochemischem Nachweis analysiert. Darüber hinaus bietet diese Technik eine Screening-Methode für die Arzneimittelentdeckung.

Ein plattenbasierter Assay zur Messung der endogenen Monoaminfreisetzung in akuten Hirnschnitten

Monoamine neurotransmitters are associated with numerous neurologic and psychiatric ailments. Animal models of such conditions have shown alterations in ...

Diese Technik ist eine Anpassung der üblicherweise verwendeten Methoden zur Untersuchung der Monoaminfreisetzung, die die Messung der endogenen Freisetzung anstelle von vorgeladenen radioaktiv markierten Monoaminen unter mehreren pharmakologischen Bedingungen gleichzeitig ermöglicht. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass sie ziemlich kostengünstig ist, mehrere pharmakologische Zustände gleichzeitig untersucht werden können und wir die endogene Monoaminfreisetzung mit der Fähigkeit untersuchen können, zwischen vesikulärer und transportervermittelter Freisetzung zu unterscheiden. Um Gehirnschnitte von erwachsenen männlichen Ratten mit einer Größe von 250 bis 350 Gramm nach der Ernte vorzubereiten, legen Sie sofort den Gehirn- und eiskalten sauerstoffhaltigen Dissektionspuffer und erwerben Sie 300 Mikrometer koronale Gehirnabschnitte aus jeder Region von Interesse.Für die weitere Sezierung der Gehirnschnitte bewegen Sie die Gewebe vorsichtig auf Glasobjektträger und verwenden Sie einen Rattenhirnatlas, um das dorsale Striatum anhand seiner dunkel gestreiften Struktur zu identifizieren und den Hippocampus anhand seiner Nähe zum Kortex und seiner einzigartigen Spiralstruktur zu identifizieren. Trennen Sie die rechte und linke Hemisphäre für ihre Verwendung als Kontroll- und Versuchsscheiben. Das dorsale Striatum kann weiter in zwei Millimeter große Stempel zerlegt werden.Verwenden Sie dann eine Kunststoff-Transferpipette mit einer modifizierten Spitze, um die Proben in kleine Behälter zu überführen, die in sauerstoffhaltigen eiskalten Dissektionspuffer mit sauerstoffsprudelndem Sauerstoff eingetaucht sind. Um die Monoaminfreisetzung zu induzieren, übertragen Sie die Gewebeproben in jede Vertiefung einer speziell angefertigten 48-Well-Efflux-Kammer mit 0,5 bis einem Milliliter Effluxpuffer pro Vertiefung mit konstantem sanftem Blubbern und lassen Sie die Proben für 30 bis 50 Minuten bei 37 Grad Celsius zurückgewinnen. Am Ende der Gleichgewichtsperiode bewegen Sie den Gewebehalter mit Hirngewebe zu Vertiefungen, die 500 Mikroliter sauerstoffhaltigen Effluxpuffer mit oder ohne pharmakologisches Mittel enthalten, und klopfen Sie auf den Halter am Rand des Bohrlochs, um die minimale Übertragung des Puffers zwischen den Vertiefungen für eine 20-minütige Inkubation bei 37 Grad Celsius zu verhindern.Am Ende der Inkubation wird der Halter in einen neuen Satz von Vertiefungen mit 500 Mikrolitern Effluxpuffer mit oder ohne das interessierende Arzneimittel gebracht und die Platte für weitere 20 Minuten in den Zellkulturinkubator zurückgeführt. Während der zweiten Inkubation die Lösung aus den Vertiefungen der ersten Inkubation in Mikrozentrifugenröhrchen mit 50 Mikrolitern einer normalen Perchlor- oder Phosphorsäure auf Eis übertragen und die Röhrchen als Nummer eins markieren"Am Ende der zweiten Inkubation bewegen Sie den Gewebehalter zu leeren Vertiefungen mit der Platte auf Eis und übertragen Sie die Überstände aus der zweiten Inkubation auf neue Mikrozentrifugenröhrchen, die 50 Mikroliter eines normalen Perchlor- oder Phosphorsäure enthalten Säure auf Eis. Wenn alle Überstände übertragen wurden, fügen Sie jedem Gewebetopf einen Milliliter eiskalten Dissektionspuffer hinzu und verwenden Sie eine kleine Pinzette, um jede Gewebeprobe in ein neues Mikrozentrifugenröhrchen zu übertragen.Entfernen Sie den Puffer aus den Probenröhrchen und lagern Sie das Gewebe bei minus 80 Grad Celsius, dann übertragen Sie die gesammelten Inkubationslösungen zur Zentrifugation in Mikrozentrifugenfilterröhrchen und legen Sie das Filtrat bis zur HPLC-Analyse auf Eis. Stellen Sie das Potenzial des ECD und die Durchflussrate gemäß der Empfehlung des Herstellers für den Nachweis von Monoaminen ein. Laden und geeignetes Aliquot jeder Probe, einschließlich Neurotransmitter-Standards, in die HPLC für die automatische Injektion und Detektion und ermöglichen Sie es dem Gerät, die Analyse abzuschließen.Verwenden Sie dann die HPLC-Analysesoftware, um die Chromatographendaten unter Verwendung einer Standardkurve, die aus jedem Monoamin besteht, zu erfassen und zu analysieren, um die Fläche unter der Kurve basierend auf den Richtlinien des Herstellers zu erhalten. Nach sechs Stunden Funktionsanalyse bleiben Gewebeproben lebensfähig, während Proben, die mit 1% Triton X-100 inkubiert wurden, eine signifikante Verringerung der MTT-Transformation zeigen. Eine akute 20-minütige Behandlung von Hippocampus- und präfrontalen Kortex-Hirnschnitten mit Amphetamin induziert einen signifikanten Anstieg des extrazellulären Spiegels jedes Monoamins.Wenn die Proben mit Fluoxetin, einem selektiven Serotonin-Wiederaufnahmehemmer, vorbehandelt werden, tritt der amphetamininduzierte Anstieg des extrazellulären Serotonins im Hippocampus und im präfrontalen Kortex nicht auf, während der Anstieg der extrazellulären Dopamin- und Noradrenalinproduktion nicht beeinflusst wird. Darüber hinaus induziert eine akute 20-minütige Behandlung von dorsalen Striatumschlägen mit Amphetamin eine 35-fache Erhöhung der extrazellulären Dopaminspiegelexpression, während die dorsale Striatum-Punschbehandlung mit Kokain, einem Monoamintransporterblocker, zu einer signifikanten Hemmung des amphetamininduzierten extrazellulären Dopamins führt. Die Erhöhung der Konzentration von extrazellulärem Kaliumchlorid, um eine Membrandepolarisation hervorzurufen, reicht aus, um die exozytotische Freisetzung von Monoaminen im Vergleich zu unbehandelten Kontrollbedingungen zu induzieren, und weder Fluoxetin noch Kokain die Behandlung blockieren diesen tiefen polarisationsinduzierten Anstieg.Es ist unerlässlich, saubere Schnittabschnitte zu haben, eine präzise Lokalisierung der Stempel zu haben und während des gesamten Experiments eine konsistente Sauerstoffversorgung aufrechtzuerhalten. Die Gehirnschnitte können nach dem Experimentieren für weitere biochemische Verarbeitung und Analyse wie Western Blotting und Histologie verwendet werden.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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Vorbereitung der akuten Subventrikulärzone Slices für Calcium Imaging

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Forschung

Neurowissenschaften

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Dual-Elektrophysiologische Recordings synaptisch-evozierte astrogliale und neuronale Antworten in Acute Hippocampusschnitte

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In-vivo-Elektroporation und Postnatale Zeitraffer-Imaging Neuroblast von Migration in Maus Akute Hirnschnitten

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

Elektrophysiologische und morphologische Charakterisierung neuronaler Schaltkreise in akuten Hirnschnitten Mit Paired-Patch-Clamp-Aufnahmen

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

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Vorbereitung der akuten Gehirnscheiben mit einem optimierten N-Methyl-D-Glucamine-schützende Recovery-Methode

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

In-depth Physiological Analysis of Defined Cell Populations in Acute Tissue Slices of the Mouse Vomeronasal Organ

In eingehenden Physiologische Analyse definierter Zellpopulationen bei der akuten Gewebeschnitten der Maus Vomeronasalorgans

In most mammals, the vomeronasal organ (VNO) is a chemosensory structure that detects both hetero- and conspecific social cues. Vomeronasal sensory ...

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Aufnahme synaptische Plastizität in akuten Hippocampal Scheiben gepflegt in einem kleinvolumigen Recycling - Perfusions- und untertauchen-Typ-Kammer-System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Application of Automated Image-guided Patch Clamp for the Study of Neurons in Brain Slices

Anwendung von automatisierten Bild-geführten Patch-Clamp für die Studie von Neuronen in Gehirn-Scheiben

Whole-cell patch clamp is the gold-standard method to measure the electrical properties of single cells. However, the in vitro patch clamp remains a ...

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Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from ...