Name: a plate-based assay for the measurement of endogenous monoamine release in acute brain slices
Uploaded: 2021-08-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Plate-Based Assay for the Measurement of Endogenous Monoamine Release in Acute Brain Slices at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים קרן ייזום Fondecyt N 11191049 J.A.P. ו NIH מענק DA038598 ל- G.E.T.

כל הניסויים, כולל טיפול בבעלי חיים ואיסוף רקמות, בוצעו בהתאם לאוניברסיטת פלורידה ולוועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים של המכללה העירונית של ניו יורק (IACUC), בעקבות הפרוטוקול המאושר 201508873 (UF) ו- 1071 (CCNY). עבור ריאגנטים ומאגר אנא עיין בקובץ המשלים.
1. הכן פרוסות מוח חולדה חריפה<...

מדידות שחרור מונואמין בוצעו במשך שנים במספר מערכות כגון תאים הטרולוגיים, תרביות עצביות, סינפטוזומים במוח, פרוסות מוח חריפות ex vivo, ובעלי חיים שלמים13,20,41,42,58,64,65,66,67,68</s...

שפע של מחלות נוירולוגיות ופסיכיאטריות קשורות dysregulation או תחזוקה מספקת של נוירוטרנסמיטר מונואמין (דופמין [DA], סרוטונין [5-HT], נוראדרנלין [NE]) הומאוסטזיס1,2,3. תנאים אלה כוללים, אך אינם מוגבלים, דיכאון1,2, סכיזופרניה2, חרדה2, התמכרות4, גיל המעבר5,6,7, pain8, ומחלת פרקינסון3. לדוגמה, מספר מודלים חולדה של גיל המעבר הראו כי dysregulation או הפחתת מונומינים בתוך ההיפוקמפוס, קליפת המוח הקדם מצחית, סטריאטום עשוי להיות קשור הן דיכאון וירידה קוגניטיבית, אשר נראה אצל נשים חווה גיל המעבר. dysregulation של מונומינים בדגמים אלה נבדקו בהרחבה באמצעות HPLC-ECD, אם כי המחקרים לא להפלות בין תוכן נוירוטרנסמיטר נמדד לעומת שחרור נוירוטרנסמיטר 5,6,7. מונומינים משתחררים באופן קלאסי לחלל החוץ-תאי באמצעות שחרור רכבים תלוי Ca2+, והם ממוחזרים בחזרה דרך מערכת ספיגה מחדש של קרום הפלזמה שלהם (משגר דופמין, DAT; טרנספורטר סרוטונין, SERT; משגר נוראדרנלין, NET)10,11. לעומת זאת, הנתונים מצביעים על כך שמשגרים אלה מסוגלים לשחרר או efflux monoamines, שכן תרופות של התעללות כגון אמפטמין (AMPH) ו 3,4-מתילנדיוקסימטאמפטמין (MDMA) ידועים לשחרר DA ו 5-HT, בהתאמה באמצעות מערכות טרנספורטר שלהם12,13,14,15,16,17 . לכן, הבנה מכנית נכונה של דינמיקת שחרור מונואמין חיונית לפיתוח תרופות ספציפיות וממוקחות.
מגוון רחב של טכניקות שימשו לחקר שחרור מונואמין כגון Voltammetry מחזורי סריקה מהירה (FSCV)18, ב microdialysis vivo13, הדמיה19, דגירה מוקדמת עם מונומימינים radiolabeled20, אופטוגנטיקה, ולאחרונה, חיישנים פלואורסצנטיים מקודדים גנטית ו photometry21,22 . FSCV ו- in vivo microdialysis הן הטכניקות העיקריות המשמשות לחקר שחרור מונואמין. FSCV משמש לחקר שחרור אקסוציאוטי מגורה של, בעיקר, DA בפרוסות מוח חריפה ב- vivo23. מכיוון ש- FSCV משתמש באלקטרודות כדי לעורר או לעורר שחרור, המקור העיקרי לשחרור נוירוטרנסמיטר הוא שחרור רכבים תלוי Ca2+18,24,25,26,27,28,29,30,31 . במיקרודיאליזה של Vivo בשילוב עם HPLC מודדים שינויים ברמות הנוירוטרנסמיטר החוץ-תאי באמצעות בדיקה הממוקמת באזור מוח של עניין13,32. בדומה ל- FSCV, מגבלה מרכזית למיקרודיאליזה של ויוו היא הקושי לקבוע את מקור שחרור הנוירוטרנסמיטר: שחרור רכב תלוי Ca2+ או טרנספורטר תלוי. ראוי לציון, שתי השיטות מאפשרות מדידה ישירה של שחרור מונואמין. באמצעות ההתקדמות האחרונה של אופטוגנטיקה, המחקר מדגים זיהוי של שחרור 5-HT ו DA ב- תוחלת זמן קצרה עם ספציפיות מעולה סוג תא21,22. עם זאת, אסטרטגיות אלה דורשות טכניקות וציוד מורכבים ויקרים, ולמדוד בעקיפין שחרור מונואמין, במיוחד באמצעות מונואמין מחייב קולטנים. יתר על כן, מונמינים radiolabeled משמשים גם לחקר דינמיקת מונואמין. מונומינים Radiolabeled עשוי להיות טעון מראש לתוך מערכות מודל שונות כגון תאים הטרולוגיים overexpressing כל משגר מונואמין20,33,34,35,36,37,38,39,40, נוירונים ראשוניים20, synaptosomes33,39,41, 42, ופרוסות מוח חריפות43,44. עם זאת, רדיואקטיביות מהווה נזק פוטנציאלי לנסיין, וייתכן שהניתוחים המסומנים על ידי טריטיום לא יתמכו בנאמנות על דינמיקת מונואמין אנדוגני45,46. מערכות Superfusion בשילוב עם שיטות זיהוי לא קו כגון HPLC-ECD אפשרו זיהוי של מונומינים ממקורות רקמות מרובים. כאן, פרוטוקול זה מספק כשיטה ממוטבת ובעלות נמוכה, פשוטה ומדויקת באמצעות פרוסות מוח חריפות כדי למדוד ישירות את שחרור הבזל אנדוגני ומונואמין מגורה.
פרוסות מוח חריפות מאפשרות לבחון השערות מכאניסטיות, בעיקר כאשר הן משמרות את המיקרו-סביבה האנטומית, ושומרות על סינפסות שלמות47,48,49,50,51,52. במספר מחקרים, פרוסות מוח חריפות או רקמת מוח קצוצה שימשו בשילוב עם טכניקת superfusion באמצעות KCl כדי לעורר Ca2 + שחרור מתווך53,54,55,56. מערכות Superfusion היו קריטיות כדי לקדם את ההבנה של השדה של מנגנוני שחרור נוירוטרנסמיטר, כולל מונונמינים. עם זאת, מערכות אלה יקרות יחסית, ומספר התאים הזמינים לניתוח רקמות נע בין 4-12. לשם השוואה, השיטה המוצגת כאן היא זולה, מאפשרת מדידה של 48 דגימות רקמה, וניתן לזקק אותו לשימוש עד 96 דגימות רקמה. כל באר בתוך צלחת 48-well מכיל מחזיקי רקמות המשתמשים במסננים כדי להפריד את המוצר ששוחרר מן הרקמה, מונמינים משוחררים נאספים לאחר מכן מנותחים על ידי HPLC-ECD. חשוב לציין, שיטה זו מאפשרת מדידה סימולטנית של 5-HT, DA, ו- NE לשחרר מאזורים שונים במוח כגון קליפת המוח הקדם מצחית, ההיפוקמפוס, ואת סטריאטום געש לאחר טיפול עם סוכנים פרמקולוגיים המווסתים שחרור מונואמין. לכן, הנסיין יכול לענות על שאלות מרובות באמצעות מערכת רב-באר זולה המגבירה את מספר הדגימות שנבדקו ובכך מפחיתה את מספר בעלי החיים המשמשים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>48 Well plate</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>Assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>A998-1</td>
			<td>Mobile Phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Ahydrous</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td>Modified Artifical Cerebrospinal Fluid OR Efflux Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clarity Software</td>
			<td>Anetc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>Mobile Phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1002608421</td>
			<td>Dissection Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMF</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D4551</td>
			<td>MTT Assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA-Na2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>Mobile Phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td>Graphpad Software, Inc</td>
			<td></td>
			<td>Statistical Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC, Decade Amperometric</td>
			<td>Anetc</td>
			<td></td>
			<td>HPLC, LC-EC system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC</td>
			<td>Amuza</td>
			<td></td>
			<td>HPLC HTEC-510.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Asrobic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A5960</td>
			<td>Dissection Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7487-88-9</td>
			<td>KH Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge Filter Units UltraFree</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>C7554</td>
			<td>Assay - 6 to fit in 48 well plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTT</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>M6494</td>
			<td>MTT Assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanosep</td>
			<td>VWR</td>
			<td>29300-606</td>
			<td>Assay; protein assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octanesulfonic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>V800010</td>
			<td>Mobile Phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pargyline Clorohydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P8013</td>
			<td>Modified Artifical Cerebrospinal Fluid OR Efflux Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>Mobile Phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>12636</td>
			<td>KH Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1001655559</td>
			<td>KH Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precisonary VF-21-0Z</td>
			<td>Precissonary</td>
			<td></td>
			<td>Compresstome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P2714</td>
			<td>Lysis buffer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td>Dissection Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>Dissection Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3014</td>
			<td>KH Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>L3771</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td>MTT Assay / Lysis buffer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a plate-based assay for the measurement of endogenous monoamine release in acute brain slices

נוירוטרנסמיטורים מונואמין קשורים ל מחלות נוירולוגיות ופסיכיאטריות רבות. מודלים בעלי חיים של תנאים כאלה הראו שינויים בשחרור נוירוטרנסמיטר מונואמין דינמיקה ספיגה. שיטות מורכבות מבחינה טכנית כגון אלקטרופיזיולוגיה, סקירה מהירה ולטמטריה מחזורית (FSCV), הדמיה, מיקרודיאליזה ויוו, אופטוגנטיקה, או שימוש רדיואקטיביות נדרשים ללמוד תפקוד מונואמין. השיטה המוצגת כאן היא גישה דו-שלבית ממוטבת לזיהוי שחרור מונואמין בפרוסות מוח חריפות באמצעות צלחת 48 באר המכילה מחזיקי רקמות לבחינת שחרור מונואמין, וכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים בשילוב עם זיהוי אלקטרוכימי (HPLC-ECD) למדידת שחרור מונואמין. בקצרה, חלקים במוח חולדה המכילים אזורים של עניין, כולל קליפת המוח הקדם מצחית, היפוקמפוס, וסטריאטום שרירי אל-קדם הושגו באמצעות פורס רקמות או ויברטום. אזורים מעניינים אלה נותחו מכל המוח ודגרו במאגר פיזיולוגי מחומצן. הכדאיות נבדקה לאורך כל קורס הזמן הניסיוני, על ידי בדיקה 3-(4,5-דימתילתיאזול-2-yl)-2,5-דיפנילטטרזוליום ברומיד (MTT). אזורי המוח ניתחו באופן חריף דוגרו בתנאי סמים שונים הידועים כמזינים לשחרור מונואמין באמצעות המשגר (אמפטמין) או באמצעות הפעלה של שחרור אופניים אקסוציאוטיים (KCl). לאחר הדגירה, המוצרים שפורסמו בסופרנט נאספו ונותחו באמצעות מערכת HPLC-ECD. כאן, שחרור מונואמין בזאלי מזוהה על ידי HPLC מפרוסות מוח חריפות. נתונים אלה תומכים בתוצאות קודמות של vivo ו- in vitro המראים כי AMPH ו- KCl גורמים לשחרור מונואמין. שיטה זו שימושית במיוחד לחקר מנגנונים הקשורים לשחרור תלוי מונואמין טרנספורטר ומספקת הזדמנות לסנן תרכובות המשפיעות על שחרור מונואמין באופן מהיר ובעלות נמוכה.

טכניקה זו מתארת את השימוש בפרוסות המוח כדי למדוד את שחרורם של מונומינים אנדוגניים באמצעות HPLC עם זיהוי אלקטרוכימי המבוסס על צלחת 48 באר עם מחזיק רקמות פנימי. מערך ניסיוני מתואר באיור 1 ובאיור 2. בתחילה, כדי להבטיח את הכדאיות של הרקמה עד סוף הנ...

Watch this Scientific Journal Video about A Plate-Based Assay for the Measurement of Endogenous Monoamine Release in Acute Brain Slices at JoVE.com

A Plate-Based Assay for the Measurement of Endogenous Monoamine Release in Acute Brain Slices

שיטה זו מציגה טכניקה פשוטה לזיהוי של שחרור מונואמין אנדוגני באמצעות פרוסות מוח חריפות. ההתקנה משתמשת בלוח 48 באר המכיל מחזיק רקמות לשחרור מונואמין. מונואמין ששוחרר מנותח על ידי HPLC יחד עם זיהוי אלקטרוכימי. בנוסף, טכניקה זו מספקת שיטת סינון לגילוי סמים.

בסיס בסיס צלחת למדידת שחרור מונואמין אנדוגני בפרוסות מוח חריפות

Monoamine neurotransmitters are associated with numerous neurologic and psychiatric ailments. Animal models of such conditions have shown alterations in ...

טכניקה זו היא התאמה של שיטות נפוצות לבחינת שחרור מונואמין, המאפשרות מדידת שחרור אנדוגני ולא מונומינים טעונים מראש רדיובל בתנאים פרמקולוגיים מרובים בבת אחת. היתרונות העיקריים לטכניקה זו הם כי זה חסכוני למדי, תנאים פרמקולוגיים מרובים ניתן לבחון בבת אחת, ואנחנו יכולים ללמוד שחרור מונואמין אנדוגני עם היכולת להבחין בין ניסיון ושחרור מתווך טרנספורטר. כדי להכין פרוסות מוח ממבוגרים 250 עד 350 גרם חולדות זכר לאחר הקציר, מיד להציב את המוח ואת קרח קר מחומצן חוצץ, ולרכוש 300 מקטעי מוח קורוני מיקרון מכל אזור של עניין.לניתוח נוסף של פרוסות המוח, הזיזו בזהירות את הרקמות לשקופיות זכוכית והשתמשו באטלס מוח חולדה כדי לזהות את הסטריאטום של הגעש בהתבסס על המבנה המפוספס הכהה שלו, ולזהות את ההיפוקמפוס בהתבסס על קרבתו לקליפת המוח והמבנה הספירלי הייחודי שלו. הפרד את האונה הימנית והשמאלית לשימושם כשליטה ופרוסות ניסיוניות. ניתן לנתח עוד יותר את הסטריאטום של החזרה לשני מילימטרים.לאחר מכן השתמש pipette העברת פלסטיק עם קצה שונה כדי להעביר את הדגימות לתוך מיכלים קטנים שקועים חיץ ניתוח קר קרח מחומצן עם מבעבע חמצן. כדי לגרום לשחרור מונואמין, להעביר את דגימות הרקמה לכל באר של תא שפכים מותאם אישית 48 טוב המכיל 0.5 כדי אחד מיליליטר של חוצץ שפכים לכל טוב עם מבעבע עדין מתמיד ולאפשר את הדגימות להתאושש במשך 30 עד 50 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. בסוף תקופת שיווי משקל, להעביר את מחזיק הרקמה עם רקמת המוח לבארות המכילות 500 microliters של חיץ שפכים מחומצן עם או בלי סוכן פרמקולוגי, הקשה על המחזיק על קצה הבאר כדי למנוע העברה מינימלית של חוצץ בין בארות עבור דגירה של 20 דקות ב 37 מעלות צלזיוס.בסוף הדגירה, להעביר את המחזיק לסט חדש של בארות המכילות 500 microliters של חוצץ שפכים עם או בלי התרופה של עניין ולהחזיר את הצלחת לחממה תרבית התא במשך 20 דקות נוספות. במהלך הדגירה השנייה, העבירו את הפתרון מהבארות מהדגירה הראשונה לצינורות מיקרוצנטריפוגה המכילים 50 מיקרוליטרים של חומצה פרכלורית או זרחתית רגילה אחת על קרח, ותייגו את הצינורות מספר אחת"בסוף הדגירה השנייה, הזיזו את מחזיק הרקמה לבארות ריקות עם הצלחת על הקרח והעבירו את הסופרנטנטים מדגירה השנייה לצינורות מיקרוצנטריפוגה חדשים המכילים 50 מיקרוליטרים של פרכלורי או זרחתי אחד רגיל חומצה על קרח. סמן צינורות אלה מספר שתיים"כאשר כל supernatants הועברו, להוסיף מיליליטר אחד של חוצץ ניתוח קר קרח לכל באר של רקמה ולהשתמש פינצטה קטנה להעביר כל דגימת רקמה לצינור microcentrifuge חדש.הסר את המאגר מצינורות הדגימה ולאחסן את הרקמות במינוס 80 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן להעביר את פתרונות הדגירה שנאספו לתוך צינורות מסנן microcentrifuge עבור צנטריפוגה ומניחים את הסינון על קרח עד ניתוח HPLC. הגדר את הפוטנציאל של ה- ECD וקצב הזרימה להמלצת היצרן לאיתור מונומינים. טען ו- aliquot מתאים של כל מדגם, כולל תקני משדר עצבי לתוך HPLC להזרקה אוטומטית וזיהוי ולאפשר את המכשיר כדי להשלים את הניתוח.לאחר מכן השתמש בתוכנת הניתוח של HPLC כדי לרכוש ולנתח את נתוני הכרומטוגרפיה באמצעות עקומה סטנדרטית המורכבת מכל מונואמין כדי להשיג את השטח שמתחת לעקומה בהתבסס על הנחיות היצרן. לאחר שש שעות של ניתוח פונקציונלי, דגימות רקמה נשארות קיימא, בעוד דגימות דגירה עם 1% Triton X-100 להפגין ירידה משמעותית טרנספורמציה MTT. טיפול חריף של 20 דקות בחלקי מוח בהיפוקמפוס ובקליפת המוח הקדם-מצחית עם אמפטמין גורמת לעלייה משמעותית ברמה החוץ-תאית של כל מונואמין.כאשר הדגימות מטופלות מראש עם פלואוקסטין, מעכב ספיגה חוזרת של סרוטונין סלקטיבי, אמפטמין המושרה עלייה בסרוטונין חוץ תאי בתוך ההיפוקמפוס וקליפת המוח הקדם-מצחית אינה מתרחשת, בעוד הגידול בייצור דופמין ונוראפינפרין חוץ תאי אינו מושפע. בנוסף, טיפול חריף של 20 דקות של אגרופים סטריאטום הגב עם אמפטמין גורם לעלייה של פי 35 ביטוי רמת דופמין חוץ תאי, בעוד טיפול אגרוף סטריאטום הגב עם קוקאין, חוסם משגר מונואמין, תוצאות עיכוב משמעותי של אמפטמין המושרה דופמין חוץ תאי. הגדלת הריכוז של אשלגן כלורי חוץ תאי כדי לעורר דה-פולאריזציה של הממברנה מספיקה כדי לגרום לשחרור אקסוציאוטי של מונומינים בהשוואה לתנאי בקרה לא מטופלים, ולא פלואוקסטין ולא טיפול בקוקאין חוסמים את הגידול העמוק הזה.זה הכרחי יש קטעים לחתוך נקי, לוקליזציה מדויקת של אגרופים, ולשמור על חמצון עקבי לאורך כל הניסוי. ניתן להשתמש במקטעי המוח לאחר ניסויים לעיבוד וניתוח ביוכימיים נוספים, כגון סופג מערבי והיסתולוגיה.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

הכנת Slices האזור Subventricular החריף להדמית סיד

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

קלטות אלקטרו כפולות של תגובות Astroglial ועצביות עוררו-synaptically בפרוסות ביפוקמפוס חריפות

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo electroporation ואחרי הלידה וזמן לשגות הדמיה של neuroblast הגירה בעכבר חריפה פרוסות המוח

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

אלקטרו ומורפולוגי אפיון של שבבים עצביים במוח חריף Slices שימוש מותאם Patch-קלאמפ הקלטות

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

הכנת פרוסות המוח חריפה באמצעות אופטימיזציה N-מתיל-D-שיטת שחזור מגן glucamine

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

In-depth Physiological Analysis of Defined Cell Populations in Acute Tissue Slices of the Mouse Vomeronasal Organ

מעמיק פיסיולוגי ניתוח של אוכלוסיות תאים מוגדרות ב אקוטי רקמות פרוסות של איברי עכבר vomeronasal

In most mammals, the vomeronasal organ (VNO) is a chemosensory structure that detects both hetero- and conspecific social cues. Vomeronasal sensory ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

הקלטה הפלסטיות הסינפטית בפרוסות בהיפוקמפוס חריפה, בהשתתפות של מיחזור - בנפח מצומצם, זלוף- ומערכת ועלייתו-סוג תא

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Application of Automated Image-guided Patch Clamp for the Study of Neurons in Brain Slices

יישום אוטומטי של תמונה מודרך תיקון מהדק לחקר נוירונים של פרוסות המוח

Whole-cell patch clamp is the gold-standard method to measure the electrical properties of single cells. However, the in vitro patch clamp remains a ...

Assessment of Long-term Depression Induction in Adult Cerebellar Slices

הערכה של האינדוקציה לטווח ארוך של דיכאון פרוסות למבוגרים בלבד

Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from ...