Name: sarcomere shortening of pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes using fluorescent-tagged sarcomere proteins.
Uploaded: 2021-03-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins. at JoVE.com

نود أن نعترف بجميع أعضاء المختبر في شعبة الطب التجديدي في جامعة جيتشي الطبية للمناقشة المفيدة والمساعدة التقنية. وقد دعمت هذه الدراسة المنح المقدمة من الوكالة اليابانية للبحث والتطوير الطبي؛ JP18bm0704012 و JP20bm0804018)، والجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (JSPS؛ JP19KK0219)، وجمعية التداول اليابانية (منحة للبحوث الأساسية) إلى جامعة H.U.

1. تمايز الخلايا الجذعية متعددة القدرات الماوس
<ol><li>صيانة خلايا الماوس ES<ol>
<li>صيانة المتوسطة: مزيج 50 مل من مصل الأبقار الجنينية (FBS)، 5 مل من L-ألانين-L-الجلوتامين، 5 مل من الأحماض الأمينية غير الأساسية (NEAA)، 5 مل من 100 مليون صوديوم بيروفاتي، و 909 ميكرولتر من 55 مليون 2-ميركابتوثانول مع 450 مل من غلاس...

<ol>
	<li>Mensah, G. A., Roth, G. A., Fuster, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Global+Burden+of+Cardiovascular+Diseases+and+Risk+Factors.">The Global Burden of Cardiovascular Diseases and Risk Factors.</a> Journal of the American College of Cardiology. 74 (20), 2529-2532 (2019).</li><li>Wexler, R. K., Elton, T., Pleister, A., Feldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyopathy:+an+overview.">Cardiomyopathy: an overview.</a> American Family Physician. 79 (9), 778-784 (2009).</li><li>Parrotta, E. I., Lucchino, V., Scaramuzzino, L., Scalise, S., Cuda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+Cardiac+Disease+Mechanisms+Using+Induced+Pluripotent+Stem+Cell-Derived+Cardiomyocytes:+Progress,+Promises+and+Challenges.">Modeling Cardiac Disease Mechanisms Using Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes: Progress, Promises and Challenges.</a> International Journal of Molecular Sciences. , 30 (2020).</li><li>Carvajal-Vergara, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-specific+induced+pluripotent+stem-cell-derived+models+of+LEOPARD+syndrome.">Patient-specific induced pluripotent stem-cell-derived models of LEOPARD syndrome.</a> Nature. 465 (7299), 808-812 (2010).</li><li>Lan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+calcium+handling+properties+underlie+familial+hypertrophic+cardiomyopathy+pathology+in+patient-specific+induced+pluripotent+stem+cells.">Abnormal calcium handling properties underlie familial hypertrophic cardiomyopathy pathology in patient-specific induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 12 (1), 101-113 (2013).</li><li>Kim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+arrhythmogenic+right+ventricular+dysplasia+with+patient-specific+iPSCs.">Studying arrhythmogenic right ventricular dysplasia with patient-specific iPSCs.</a> Nature. 494 (7435), 105-110 (2013).</li><li>Gramlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense-mediated+exon+skipping:+a+therapeutic+strategy+for+titin-based+dilated+cardiomyopathy.">Antisense-mediated exon skipping: a therapeutic strategy for titin-based dilated cardiomyopathy.</a> EMBO Molecular Medicine. 7 (5), 562-576 (2015).</li><li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+the+mitochondrial+cardiomyopathy+of+Barth+syndrome+with+induced+pluripotent+stem+cell+and+heart-on-chip+technologies.">Modeling the mitochondrial cardiomyopathy of Barth syndrome with induced pluripotent stem cell and heart-on-chip technologies.</a> Nature Medicine. 20 (6), 616-623 (2014).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+Dysfunctions+Contribute+to+Hypertrophic+Cardiomyopathy+in+Patient+iPSC-Derived+Cardiomyocytes+with+MT-RNR2+Mutation.">Mitochondrial Dysfunctions Contribute to Hypertrophic Cardiomyopathy in Patient iPSC-Derived Cardiomyocytes with MT-RNR2 Mutation.</a> Stem Cell Reports. 10 (3), 808-821 (2018).</li><li>Cho, G. -. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Transplantation+Confers+Maturation+of+PSC-Derived+Cardiomyocytes+Conducive+to+Modeling+Cardiomyopathy.">Neonatal Transplantation Confers Maturation of PSC-Derived Cardiomyocytes Conducive to Modeling Cardiomyopathy.</a> Cell Reports. 18 (2), 571-582 (2017).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tri-iodo-l-thyronine+promotes+the+maturation+of+human+cardiomyocytes-derived+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Tri-iodo-l-thyronine promotes the maturation of human cardiomyocytes-derived from induced pluripotent stem cells.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 72, 296-304 (2014).</li><li>Ribeiro, A. J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-Imaging+Method+to+Assay+the+Contractile+Mechanical+Output+of+Micropatterned+Human+iPSC-Derived+Cardiac+Myocytes.">Multi-Imaging Method to Assay the Contractile Mechanical Output of Micropatterned Human iPSC-Derived Cardiac Myocytes.</a> Circulation Research. 120 (10), 1572-1583 (2017).</li><li>Sewanan, L. R., Campbell, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+sarcomeric+cardiomyopathies+with+human+cardiomyocytes+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Modelling sarcomeric cardiomyopathies with human cardiomyocytes derived from induced pluripotent stem cells.</a> The Journal of Physiology. 598 (14), 2909-2922 (2020).</li><li>Kopljar, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+drug-induced+effects+on+contractile+motion+properties+and+cardiac+biomarkers+in+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Chronic drug-induced effects on contractile motion properties and cardiac biomarkers in human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> British Journal of Pharmacology. 174 (21), 3766-3779 (2017).</li><li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact:+a+versatile+marker+to+visualize+F-actin.">Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin.</a> Nature Methods. 5 (7), 605-607 (2008).</li><li>Ribeiro, A. J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractility+of+single+cardiomyocytes+differentiated+from+pluripotent+stem+cells+depends+on+physiological+shape+and+substrate+stiffness.">Contractility of single cardiomyocytes differentiated from pluripotent stem cells depends on physiological shape and substrate stiffness.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (41), 12705-12710 (2015).</li><li>Roberts, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+Gene+Tagging+of+Transcriptionally+Silent+Genes+in+hiPSCs.">Fluorescent Gene Tagging of Transcriptionally Silent Genes in hiPSCs.</a> Stem Cell Reports. 12 (5), 1145-1158 (2019).</li><li>Chanthra, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Fluorescent+Reporter+System+Identifies+Laminin-511/521+as+Potent+Regulators+of+Cardiomyocyte+Maturation.">A Novel Fluorescent Reporter System Identifies Laminin-511/521 as Potent Regulators of Cardiomyocyte Maturation.</a> Scientific Reports. 10 (1), 4249 (2020).</li><li>Ribeiro, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cardiomyocyte+show+of+force:+A+fluorescent+alpha-actinin+reporter+line+sheds+light+on+human+cardiomyocyte+contractility+versus+substrate+stiffness.">A cardiomyocyte show of force: A fluorescent alpha-actinin reporter line sheds light on human cardiomyocyte contractility versus substrate stiffness.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 141, 54-64 (2020).</li><li>Yamanaka, S., Zahanich, I., Wersto, R. P., Boheler, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Proliferation+of+Monolayer+Cultures+of+Embryonic+Stem+(ES)+Cell-Derived+Cardiomyocytes+Following+Acute+Loss+of+Retinoblastoma.">Enhanced Proliferation of Monolayer Cultures of Embryonic Stem (ES) Cell-Derived Cardiomyocytes Following Acute Loss of Retinoblastoma.</a> PLoS ONE. 3 (12), 3896 (2008).</li><li>Miyazaki, T., Isobe, T., Nakatsuji, N., Suemori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+Adhesion+Culture+of+Human+Pluripotent+Stem+Cells+Using+Laminin+Fragments+in+an+Uncoated+Manner.">Efficient Adhesion Culture of Human Pluripotent Stem Cells Using Laminin Fragments in an Uncoated Manner.</a> Scientific Reports. 7 (1), 41165 (2017).</li><li>Prasad, K. -. M. R., Xu, Y., Yang, Z., Acton, S. T., French, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+cardiomyocyte-specific+gene+expression+following+systemic+injection+of+AAV:+in+vivo+gene+delivery+follows+a+Poisson+distribution.">Robust cardiomyocyte-specific gene expression following systemic injection of AAV: in vivo gene delivery follows a Poisson distribution.</a> Gene Therapy. 18 (1), 43-52 (2011).</li><li>Arakawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+evolution+by+hypermutation+and+selection+in+the+B+cell+line+DT40.">Protein evolution by hypermutation and selection in the B cell line DT40.</a> Nucleic Acids Research. 36 (1), e1 (2007).</li><li>Konno, A., Hirai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+whole+brain+transduction+by+systemic+infusion+of+minimally+purified+AAV-PHP.eB.">Efficient whole brain transduction by systemic infusion of minimally purified AAV-PHP.eB.</a> Journal of Neuroscience Methods. 346, 108914 (2020).</li><li>Anzai, T., et al., Yoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Efficient+Knock-in+Mouse+and+Human+Pluripotent+Stem+Cells+Using+CRISPR-Cas9.">Generation of Efficient Knock-in Mouse and Human Pluripotent Stem Cells Using CRISPR-Cas9.</a> Methods of Molecular Biology. , (2020).</li><li>Ahmed, R. E., Anzai, T., Chanthra, N., Uosaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Brief+Review+of+Current+Maturation+Methods+for+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cells-Derived+Cardiomyocytes.">A Brief Review of Current Maturation Methods for Human Induced Pluripotent Stem Cells-Derived Cardiomyocytes.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 178 (2020).</li><li>Moretti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-specific+induced+pluripotent+stem-cell+models+for+long-QT+syndrome.">Patient-specific induced pluripotent stem-cell models for long-QT syndrome.</a> The New England Journal of Medicine. 363 (15), 1397-1409 (2010).</li><li>Flores, L. R., Keeling, M. C., Zhang, X., Sliogeryte, K., Gavara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact-GFP+alters+F-actin+organization,+cellular+morphology+and+biophysical+behaviour.">Lifeact-GFP alters F-actin organization, cellular morphology and biophysical behaviour.</a> Scientific Reports. 9 (1), 3241 (2019).</li><li>Sparrow, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+Myofilament-Localized+Calcium+Dynamics+in+Adult+Cardiomyocytes+and+the+Effect+of+Hypertrophic+Cardiomyopathy+Mutations.">Measurement of Myofilament-Localized Calcium Dynamics in Adult Cardiomyocytes and the Effect of Hypertrophic Cardiomyopathy Mutations.</a> Circulation Research. 124 (8), 1228-1239 (2019).</li></ol>

PSC-CMs لديها إمكانات كبيرة لاستخدامها كمنصة في المختبر لنموذج أمراض القلب واختبار آثار الأدوية. ومع ذلك، يجب أولا وضع طريقة دقيقة وموحدة لتقييم وظائف نظام PSC-CMs. معظم الاختبارات الوظيفية تعمل مع PSC-CMs، على سبيل المثال، الكهربية، والكالسيوم عابرة، والتمثيل الغذائي26،وكانت وا...

أمراض القلب والأوعية الدموية هي السبب الرئيسي للوفيات في جميع أنحاء العالم1 واعتلال عضلة القلب يمثل السبب الثالث للوفيات المرتبطة بالقلب2. اعتلال عضلة القلب هو مجموعة جماعية من الأمراض التي تؤثر على عضلات القلب. فتحت التطورات الأخيرة للخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات (iPS) والتمايز الموجه لخلايا iPS نحو خلايا القلب (PSC-CMs) الباب لدراسة خلايا القلب مع جينوم المريض كنموذج في المختبر لاعتلال عضلة القلب. ويمكن استخدام هذه الخلايا لفهم الفيزيولوجيا المرضية لأمراض القلب، لتوضيح آلياتها الجزيئية، واختبار المرشحين العلاجية المختلفة3. هناك كمية هائلة من الاهتمام، وبالتالي، تم إنشاء خلايا iPS المشتقة من المريض (على سبيل المثال، اعتلال عضلة القلب الإفراطي [HCM]4،5، اعتلال عضلة القلب البطيني الأيمن غير المهيء بالقلب [ARVC]6، اعتلال عضلة القلب المتوسع [DCM]7، وأمراض القلب الميتوكوندريا ذات الصلة8،9). لأن واحدة من خصائص اعتلال عضلة القلب هو الخلل الوظيفي وتعطيل ساركومير، وهناك حاجة إلى أداة صالحة أن يقيس بشكل موحد وظيفة ساركومير.
تقصير ساركومير هو الأسلوب الأكثر استخداما لتقييم وظيفة الساركومير وانقباض خلايا القلب الكبار المستمدة من النماذج الحيوانية والبشر. لتنفيذ تقصير الساركومير، مطلوب ساركومير متطورة التي هي مرئية تحت مرحلة التباين. ومع ذلك، PSC-CMs مثقف في عرض المختبر ساركومير المتخلفة وغير منظمة، وبالتالي، غير قادرين على استخدامها لقياس ساركومير تقصير10بشكل صحيح . هذه الصعوبة في تقييم بشكل صحيح انقباض PSC-CMs يعوق استخدامها كمنصة لتقييم وظائف القلب في المختبر. لتقييم انكماش PSC-CMs بشكل غير مباشر ، تم استخدام مجهر القوة الذرية ، وصفائف البريد الدقيق ، والفحص المجهري لقوة الجر ، وقياسات المعاوقة لقياس آثار الحركة التي تمارسها هذه الخلايا على محيطها11،12،13. يمكن استخدام تسجيلات تصوير الفيديو المجهرية الأكثر تطورا والأقل غزوا للحركة الخلوية الفعلية (على سبيل المثال ، SI8000 من SONY) لتقييم قابليتها للانقباض بدلا من ذلك ، ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة لا تقيس حركة الساركومير مباشرة أو قوة توليد الحركية14.
لقياس حركة الساركومير مباشرة في PSC-CMs ، تظهر نهج جديدة ، مثل وضع علامات الفلورسنت على بروتين الساركومير. على سبيل المثال، يستخدم Lifeact لتسمية أكتين خيوط (F-أكتين) لقياس حركة ساركومير15،16. خلايا iPS المعدلة وراثيا هي خيار آخر لوضع علامات على بروتينات الساركومير (على سبيل المثال، α-أكتينين [ACTN2] وميوميسين-2 [MYOM2]) بواسطة البروتين الفلوري17،18،19.
في هذه الورقة، ونحن نصف كيفية إجراء التصوير الفاصل الزمني لقياس تقصير الساركومير باستخدام Myom2-TagRFP (الماوس الجذعية الجنينية [ES] الخلايا) وACTN2-mCherry (خلايا iPS الإنسان). كما نظهر أن الثقافة المنقوشة تسهل محاذاة الساركومير. بالإضافة إلى ذلك، نقوم بوصف طريقة بديلة لوضع العلامات على الساركومير، باستخدام الفيروسات المرتبطة بال أدينو (AAVs)، والتي يمكن تطبيقها على نطاق واسع على خلايا iPS المشتقة من المريض.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-Thioglycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6145-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol (55mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21985-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC) polymer,</td>
			<td>NOF Corp.</td>
			<td>LIPIDURE-CM5206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Propanol</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>166-04836</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35-mm imaging dish with a polymer coverslip (&#181;-Dish 35 mm, high)</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAVproR Helper Free System (AAV6) 
			(vectors; pHelper, pRC6, pAAV-CMV-Vector)</td>
			<td>Takara</td>
			<td>6651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACTN2-mCherry (AR12, AR21) hiPSCs</td>
			<td>N.A.</td>
			<td></td>
			<td>We inserted IRES-puromycin resistant casette to 3&#39; UTR of TNNT2 locus and mCherry around the stop codon of ACTN2 in 610B1 hiPSC line, following a method describe elsewhere (Anzai, Methods Mol Biol, in press)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement (50X), serum free</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement, minus insulin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A18956-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement (50X), minus Vitamin A</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12587-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzonase (25 U/&#181;L)</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>70746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blasticidin S Hydrochloride</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>029-18701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP-4, Human, Recombinant,</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>314-BP-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C59, Wnt Antagonist (WntC59)</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab142216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CAD drawing software,</td>
			<td>Robert McNeel and Associates, WA, USA</td>
			<td>Rhinoceros 6.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugal ultrafiltration unit (100k MWCO), Vivaspin-20</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>VS2042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR99021</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>13122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromium etchant</td>
			<td>Nihon Kagaku Sangyo Co., Ltd., Japan</td>
			<td>N14B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromium mask coated with AZP1350</td>
			<td>Clean Surface Technology Co., Japan</td>
			<td>CBL2506Bu-AZP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dr. GenTLE Precipitation Carrier (20mg/mL Glycogen, 3 M Sodium Acetate (pH 5.2))</td>
			<td>Takara</td>
			<td>9094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM) - high glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D6429-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM) - high glucose, without sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (99.5)</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>057-00456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Moregate</td>
			<td>59301104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF-10, Human, Recombinant,</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>345-FG-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblast Growth Factor(basic), human, recombinant</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>060-04543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin from porcine skin powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G1890-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glasgow Minimum Essential Medium (GMEM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5154-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GLASS BOTTOM culture plates</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P24G-1.5-13-F/H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#8217;s F-12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11765-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iscove&#39;s Modified Dulbecco&#39;s Medium (IMDM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12440-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-alanine-L-glutamine (GlutaMAX Supplement, 200mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L(+)-Ascorbic Acid Sodium Salt</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>196-01252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin-511 E8 fragment (LN511-E8, iMatrix-511)</td>
			<td>Nippi</td>
			<td>892012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mask aligner</td>
			<td>Union Optical Co., Ltd., Japan</td>
			<td>PEM-800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maskless lithography tool</td>
			<td>NanoSystem Solutions, Inc., Japan</td>
			<td>D-Light DL-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-HV Syringe Filter Unit, 0.45 &#181;m, PVDF (0.45-&#181;m filter)</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLHVR33RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myom2-RFP (SMM18)</td>
			<td>N.A.</td>
			<td></td>
			<td>Developed in our previous paper (Chanthra, Sci Rep, 2020)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ORCA-Flash4.0 V3 digital CMOS camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>C13440-20CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD0325901</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0006-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Sansei medical co. Ltd</td>
			<td>01-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol (25:24:1)</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>311-90151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydimethylsiloxane (PDMS) elastomer</td>
			<td>Dow Corning Corp., MI, USA</td>
			<td>SILPOT 184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polyethylenimine MAX (MW. 40,000)</td>
			<td>Polyscience</td>
			<td>24765-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Positive photoresist developer</td>
			<td>Tokyo Ohka Kogyo Co., Ltd., Japan</td>
			<td>NMD-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerUp SYBR Green Master Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A25742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Takara</td>
			<td>9034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin Dihydrochloride</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>166-23153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human/Mouse/Rat Activin A Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>338-AC-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant trypsin-like protease (rTrypsin; TrypLE express)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12604-039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI1640 Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon wafer</td>
			<td>Matsuzaki Seisakusyo Co., Ltd., Japan</td>
			<td>N.A.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin-coater</td>
			<td>Mikasa Co., Ltd., Japan</td>
			<td>MS-A100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spininng confocal microscopy</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>Andor Dragonfly Spinning Disk System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemSure LIF, Mouse, recombinant, Solution (10^6U)</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>195-16053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU-8 3010</td>
			<td>Kayaku Advanced Materials, Inc., MA, USA</td>
			<td>SU-8 3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU-8 developer</td>
			<td>Kayaku Advanced Materials, Inc., MA, USA</td>
			<td>SU-8 developer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-EDTA</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>314-90021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular Endothelial Growth Factor-A165(VEGF), Human, recombinant</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>226-01781</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sarcomere shortening of pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes using fluorescent-tagged sarcomere proteins.

يمكن إنتاج خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية المتعددة القدرات (PSC-CMs) من كل من الخلايا الجذعية الجنينية والمستحثة متعددة القدرات (ES/iPS). توفر هذه الخلايا مصادر واعدة لنمذجة أمراض القلب. لأمراض عضلة القلب، وتقصير ساركومير هي واحدة من التقييمات الفسيولوجية القياسية التي تستخدم مع خلايا القلب الكبار لفحص الأنماط الظاهرية مرضهم. ومع ذلك، فإن الأساليب المتاحة ليست مناسبة لتقييم انكماش PSC-CMs، لأن هذه الخلايا لديها ساركوميرات متخلفة غير مرئية تحت المجهر التباين المرحلي. ولمعالجة هذه المسألة وإجراء تقصير الساركومير باستخدام PSC-CMs، استخدمت بروتينات الساركومير الموسومة بالفلورسنت والتصوير الحي الفلوري. رقيقة Z-خطوط وخط M يقيمون في كلا الطرفين ووسط ساركومير، على التوالي. تم وضع علامات على بروتينات Z-line — α-Actinin (ACTN2) وTelethonin (TCAP) وبروتين LIM المرتبط بال أكتين (PDLIM3) - وبروتين واحد من خط M - Myomesin-2 (Myom2) - ببروتينات فلورية. يمكن التعبير عن هذه البروتينات الموسومة من الأليل الذاتية كطرق أو من الفيروسات المرتبطة بال أدينو (AAVs). هنا، نقدم طرق للتمييز بين الماوس والخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات لخلايا القلب، لإنتاج AAVs، وإجراء وتحليل التصوير الحي. كما نقوم بوصف طرق إنتاج طوابع البوليديمثيلسيلوكسيان (PDMS) لثقافة منقوشة من PSC-CMs ، مما يسهل تحليل تقصير الساركومير مع البروتينات الموسومة بالفلورسنت. لتقييم تقصير الساركومير، تم تسجيل صور الفاصل الزمني للخلايا النابضة بمعدل إطار مرتفع (50-100 إطار في الثانية) تحت التحفيز الكهربائي (0.5-1 هرتز). لتحليل طول الساركومير على مدار انكماش الخلية ، تعرضت الصور المسجلة الفاصل الزمني لSarcOptiM ، وهو مكون إضافي ل ImageJ / فيجي. توفر استراتيجيتنا منصة بسيطة للتحقيق في الأنماط الظاهرية لأمراض القلب في PSC-CMs.

قياس تقصير الساركومير باستخدام خطوط مراسل PSC-CMs. واستخدمت أجهزة PSC-CMs التي تحمل اسم ساركومير لقياس تقصير الساركومير. خطوط التعبير عن Myom2-RFP وACTN2-mCherry من loci الذاتية. تم إدراج TagRFP إلى Myom2، ترميز M-البروتينات التي توطينها على خط M، في حين تم طرقت mCherry في لACTN2،الت?...

Watch this Scientific Journal Video about Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins. at JoVE.com

Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins.

يمكن استخدام هذه الطريقة لفحص تقصير الساركومير باستخدام خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات مع بروتينات الساركومير الموسومة بالفلورسنت.

Sarcomere تقصير متعدد القدرات خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية باستخدام الفلورسنت الموسومة بروتينات ساركومير.

Pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (PSC-CMs) can be produced from both embryonic and induced pluripotent stem (ES/iPS) cells. These cells ...

من الصعب تقييم وظيفة الساركومير في خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية المتعددة القدرات بسبب ساركوميرها المتخلف وغير المنظم. باستخدام بروتينات الساركومير الموسومة بالفلورسنت، يمكننا الآن الوصول إلى تقصير الساركومير. يمكننا تصور الساركومير وتقييم وظيفتها في المختبر باستخدام خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية وبروتينات الساركومير الموسومة بالفلورسنت.باستخدام النقل القائم على AAV ، يمكننا توسيع الطريقة إلى أي خلايا جذعية مستحثة مشتقة من المريض. يمكن توسيع هذه الطريقة لتطوير علاج اعتلال عضلة القلب ، حيث يمكن استخدامها لتقييم خلل الساركومير المرتبط بالأمراض مباشرة في المختبر. هذه الطريقة مفيدة في مجال أمراض القلب، بما في ذلك دراسة أمراض القلب للأطفال.ومع ذلك، فإنه يمكن أيضا تطبيقها على دراسة خلل العضلات الهيكل العظمي، مثل اعتلال عضلي. في اليوم ناقص أربعة من التعريفي التمايز، معطف لوحة من ستة آبار مع 0.5 ميكروغرام لكل سنتيمتر مربع من صفيحة-511 E8 المخفف في برنامج تلفزيوني لاحتضان لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. قرب نهاية الحضانة، علاج الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان مع تريبسين المؤتلف لمدة ثلاث دقائق في 37 درجة مئوية.عندما تكون الخلايا قد انفصلت، حصاد الخلايا إلى متوسطة تكملها 10٪ FBS للعد، وإعادة إنفاق الخلايا في 1.25 مرات 10 إلى الخلايا الخامسة لكل اثنين من ملليلتر من AK02N المتوسطة تكملها مغلفة 511 E8 وروك المثبط بعد الطرد المركزي. بعد ذلك ، يستنشق محلول الطلاء من كل بئر من لوحة ستة آبار ، وبذور اثنين من ملليلتر من الخلايا في كل بئر. أعد الطبق إلى حاضنة ثقافة الخلية.بعد أربعة أيام، تصل الخلايا إلى التقاء 80٪. استبدال supernatant في كل بئر مع اثنين من ملليلتر من RPMI بالإضافة إلى B27 دون الأنسولين المتوسطة تكملها GSK-3 المانع لكل بئر للحث على التمايز. بعد يومين من التمايز، استبدال بلطف المتوسطة مع اثنين من ملليلتر من RPMI بالإضافة إلى B27 دون الأنسولين المتوسطة تكملها مثبط القنفذ لكل بئر.الخلايا يجب أن تصل إلى التقاء 100٪. في اليوم الرابع من التمايز ، استبدل المضادات الفائقة بلطف بميليلترين من RPMI بالإضافة إلى B27 بدون الأنسولين لكل بئر. يجب أن تبقى الخلايا في كثافة عالية، وبعضها قد بدأت تطفو.في اليوم السابع والتاسع من التمايز ، استبدل الفائق في كل بئر بميليلترين من RPMI بالإضافة إلى B27 بالإنسولين المكمل بالبوروميسين لثقافة القلب المشتقة من الخلايا الجذعية الانتقائية متعددة القدرات. عند هذه النقطة، ينبغي ملاحظة ضرب الخلايا داخل الثقافات. لإعداد ثقافة خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية المتعددة القدرات المنقوشة ، استخدم أولا شريط إصلاح لإزالة أي غبار من سطح طابع PDMS المصنوع خصيصا ، وغمر الطابع لفترة وجيزة في الإيثانول بنسبة 70٪.استخدام منفضة الهواء لإزالة الإيثانول من سطح الطابع، ومعالجة السطح مع خمسة إلى 10 ميكرولتر من البوليمر MPC 0.5٪ والإيثانول. عندما يجف البوليمر تماما، ضع الختم على غطاء بوليمر في طبق تصوير 35 ملليمترا، وضع وزنا على الطابع. بعد 10 دقائق، استخدم المجهر الخفيف للتأكد من أن النمط قد تم نقله إلى غطاء الغطاء، وغسل الطبق والأغطية مرتين مع PBS.بعد الغسيل الثاني، قم بتغطية الغطاء ب 0.5 إلى ميكروغرام واحد لكل سنتيمتر مربع من اللامينين-511 E8 المخفف في الجيلاتين بنسبة 0.1٪ لاحتضان لمدة ساعتين إلى أربع ساعات في درجة حرارة الغرفة. في اليوم 10 من التمايز، اغسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني، يليه العلاج مع ملليلتر واحد من التريبسين المؤتلف لكل بئر لمدة ثلاث إلى خمس دقائق عند 37 درجة مئوية. بعد العد، إعادة إنفاق الخلايا في 2.5 إلى خمس مرات 10 إلى الخلايا الخامسة لكل ملليلتر من RPMI زائد B27 مع الأنسولين تكملها تركيز بوروميسين، والبذور ملليلتر واحد من الخلايا على لوحة لاحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية.في صباح اليوم التالي، استبدل الناطور ب RPMI الطازج بالإضافة إلى B27 بالإنسولين المكمل بالبوروميسين، وأعيد الخلايا إلى حاضنة ثقافة الخلية، منعشا المتوسط مرتين إلى ثلاث مرات في الأسبوع حتى أيام 21 إلى 28 للتصوير. لتصوير الفاصل الزمني لتقصير الساركومير في ثقافات PCCSM ، وتطبيق النفط على عدسة الهدف 100 مرة من المجهر confocal الفلورسنت ، واختيار ظروف التصوير الحي في البرامج المرتبطة بها. للحصول على بيانات تمثيلية جيدة، حدد أعلى معدل الإطار، تعيين مصراع لفتح، وتطبيق binning أربعة في أربعة في محصول من منطقة الاستحواذ لتحقيق أقصر فترات بين الصور أثناء التصوير الفاصل الزمني.إذا كان معدل الضرب للخلايا منخفضا ، فاستحضار الخلايا عن طريق تحفيز المجال الكهربائي ، وبدء تسجيل الفاصل الزمني ، مع الحرص على أن يظل الحقل المصور في التركيز أثناء التصوير. في نهاية فترة التصوير، احفظ الصور الفاصلة الزمنية في مجلد مناسب. لتحليل الصور الفاصلة زمنيا ، افتح سلسلة من الصور الفاصلة زمنيا في ImageJ ، وضبط سطوع الصور وتباينها حتى يمكن ملاحظة نمط الساركومير بوضوح.في القائمة أدوات أكثر، حدد SarcOptiM، واضغط على Control Shift P وزر ميكرون واحد على شريط الأدوات لاستخدام الإرشادات لمعايرة البرنامج. ثم رسم خط عبر المنطقة من ساركومير لاستخدامها لقياس تقصير ساركومير، وانقر فوق AVI خلية واحدة لبدء تحليل تقصير ساركومير. يمكن استخدام التصوير الفاصل الزمني لخلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية المنقوشة والمنقوشة بالساركومير لقياس تقصير الساركومير في نقاط زمنية مختلفة.للتغلب على عدم تنظيم الساركومير الذي لوحظ عادة في ثقافات القلب المشتقة من الخلايا الجذعية المتعددة القدرات المنقوشة ، يمكن استخدام طوابع PDMS محددة زراعة خلايا القلب المنقوشة متعددة القدرات المشتقة من الخلايا الجذعية في نمط شريطي ، مما يعزز شكل الخلية الممدود ونمط ساركومير أكثر تنظيما مقارنة بالخلايا المستزرعة في منطقة غير نمطية. كما تعزز الثقافات المنقوشة تقلصا أفضل للخلايا وتوفر ملفا جانبيا سلسا لطول الساركومير مقارنة بالخلايا المستزرعة غير النمطية. النمط المتحول AAV خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التعبير عن إشارات GFP ساركومريك على طول خلايا القلب المنقوشة المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات في وقت مبكر من ثلاثة أيام بعد النقل ويمكن أيضا أن تستخدم لقياس ملامح تقلصات الساركومير.علاوة على ذلك ، يمكن أيضا استخدام إضافة جين مقاوم للنيستيسيدين أثناء النقل لتسهيل اختيار خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية المتعددة القدرات المنقوشة إلى نقاء يزيد عن 90٪ لتسهيل تحليل الصور الأسهل والأعلى جودة ، من الضروري تحديد منطقة ذات ساركومير تتحرك خطيا والحصول على صور بأعلى معدل إطار. باستخدام هذه الطريقة، يمكننا تقييم دور النضج في بروتينات الساركوما لدراسة خلل الساركومير في مختبر cardiomyocyte المستمدة من الخلايا iPS الخاصة بالأمراض والمشتقة من المريض.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

العزلة، وتوصيف المقارن التمييز بين الخلايا الجذعية البشرية الأسنان اللب المستمدة من الأسنان الدائمة باستخدام طريقتين مختلفتين

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

عزل وتوصيف وظيفي من الإنسان البطيني العضلية من العينات الجراحية الطازجة

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Muscular Dystrophy Patients: Efficient Integration-free Reprogramming of Urine Derived Cells

جيل من المستحثة متعددة القدرات الخلايا الجذعية من الضمور العضلي المرضى: كفاءة خالية من التكامل إعادة برمجة الخلايا المستمدة البول

Dystrophic cardiomyopathy is a poorly understood consequence of muscular dystrophy. Generating induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) from patients with ...

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

الجيل السريع والفعال للخلايا الجذعية متعددة القدرات المؤتلف الإنسان التي تتوسط Recombinase-تبادل كاسيت في<em&gt; AAVS1</em&gt; الحالة رقم

Even with the revolution of gene-targeting technologies led by CRISPR-Cas9, genetic modification of human pluripotent stem cells&#160;(hPSCs)&#160;is ...

Isolation and Cultivation of Adult Rat Cardiomyocytes

عزل وزراعة كارديوميوسيتيس الفئران الكبار

In an intact heart, adjacent cells influence adult cardiomyocytes. With the method of isolation and cultivation of adult cardiomyocytes, a precise ...

Targeted and Selective Treatment of Pluripotent Stem Cell-derived Teratomas Using External Beam Radiation in a Small-animal Model

العلاج المستهدفة وانتقائية من Teratomas المستمدة من الخلايا الجذعية Pluripotent استخدام الإشعاع الخارجي شعاع في نموذج الحيوانات الصغيرة

The growing number of victims of &#34;stem cell tourism,&#34; the unregulated transplantation of stem cells worldwide, has raised concerns about the ...

Analyzing Oxygen Consumption Rate in Primary Cultured Mouse Neonatal Cardiomyocytes Using an Extracellular Flux Analyzer

تحليل معدل استهلاك الأكسجين في Cardiomyocytes الولدان الماوس مثقف الأساسي محلل تدفق خارج الخلية باستخدام

Mitochondria and oxidative metabolism are critical for maintaining cardiac muscle function. Research has shown that mitochondrial dysfunction is an ...

In Vitro Assessment of Cardiac Function Using Skinned Cardiomyocytes

في المختبر تقييم وظيفة القلب باستخدام خلايا القلب skinned

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring ...

Model of Ischemic Heart Disease and Video-Based Comparison of Cardiomyocyte Contraction Using hiPSC-Derived Cardiomyocytes

نموذج من مرض القلب الإقفاري والمقارنة المستندة إلى الفيديو من انكماش القلبية من خلال استخدام هابسك المشتقة من القلب

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with ...

Directed Induction of Retinal Organoids from Human Pluripotent Stem Cells

الحث الموجه للعضويات الشبكية من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات

Retinal cell transplantation is a promising therapeutic approach, which could restore the retinal architecture and stabilize or even improve the visual ...