Name: sarcomere shortening of pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes using fluorescent-tagged sarcomere proteins.
Uploaded: 2021-03-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins. at JoVE.com

ברצוננו להודות לכל חברי המעבדה באגף לרפואה רגנרטיבית באוניברסיטה הרפואית ג'יצ'י על הדיון המועיל והסיוע הטכני. מחקר זה נתמך על ידי המענקים של הסוכנות היפנית למחקר ופיתוח רפואי (AMED; JP18bm0704012 ו JP20bm0804018), האגודה היפנית לקידום המדע (JSPS; JP19KK0219), וחברת התפוצה היפנית (המענק למחקר בסיסי) ל- H.U.

1. הבחנה של תאי גזע פלוריפוטנטים של עכבר
<ol><li>תחזוקה של תאי ES של עכבר<ol>
<li>אמצעי תחזוקה: יש לערבב 50 מ"ל של סרום בקר עוברי (FBS), 5 מ"ל של L-אלנין-L-גלוטמין, 5 מ"ל של חומצת אמינו לא חיונית (NEAA), 5 מ"ל של 100 מ"ל נתרן פירובט, ו-909 מיקרול של 55 מ"מ 2-מרקפטואתנול עם 450 מ"ל של מדיום חיוני מינימלי בגלזגו (GMEM). תוספת גור...

<ol>
	<li>Mensah, G. A., Roth, G. A., Fuster, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Global+Burden+of+Cardiovascular+Diseases+and+Risk+Factors.">The Global Burden of Cardiovascular Diseases and Risk Factors.</a> Journal of the American College of Cardiology. 74 (20), 2529-2532 (2019).</li><li>Wexler, R. K., Elton, T., Pleister, A., Feldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyopathy:+an+overview.">Cardiomyopathy: an overview.</a> American Family Physician. 79 (9), 778-784 (2009).</li><li>Parrotta, E. I., Lucchino, V., Scaramuzzino, L., Scalise, S., Cuda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+Cardiac+Disease+Mechanisms+Using+Induced+Pluripotent+Stem+Cell-Derived+Cardiomyocytes:+Progress,+Promises+and+Challenges.">Modeling Cardiac Disease Mechanisms Using Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes: Progress, Promises and Challenges.</a> International Journal of Molecular Sciences. , 30 (2020).</li><li>Carvajal-Vergara, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-specific+induced+pluripotent+stem-cell-derived+models+of+LEOPARD+syndrome.">Patient-specific induced pluripotent stem-cell-derived models of LEOPARD syndrome.</a> Nature. 465 (7299), 808-812 (2010).</li><li>Lan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+calcium+handling+properties+underlie+familial+hypertrophic+cardiomyopathy+pathology+in+patient-specific+induced+pluripotent+stem+cells.">Abnormal calcium handling properties underlie familial hypertrophic cardiomyopathy pathology in patient-specific induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 12 (1), 101-113 (2013).</li><li>Kim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+arrhythmogenic+right+ventricular+dysplasia+with+patient-specific+iPSCs.">Studying arrhythmogenic right ventricular dysplasia with patient-specific iPSCs.</a> Nature. 494 (7435), 105-110 (2013).</li><li>Gramlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense-mediated+exon+skipping:+a+therapeutic+strategy+for+titin-based+dilated+cardiomyopathy.">Antisense-mediated exon skipping: a therapeutic strategy for titin-based dilated cardiomyopathy.</a> EMBO Molecular Medicine. 7 (5), 562-576 (2015).</li><li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+the+mitochondrial+cardiomyopathy+of+Barth+syndrome+with+induced+pluripotent+stem+cell+and+heart-on-chip+technologies.">Modeling the mitochondrial cardiomyopathy of Barth syndrome with induced pluripotent stem cell and heart-on-chip technologies.</a> Nature Medicine. 20 (6), 616-623 (2014).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+Dysfunctions+Contribute+to+Hypertrophic+Cardiomyopathy+in+Patient+iPSC-Derived+Cardiomyocytes+with+MT-RNR2+Mutation.">Mitochondrial Dysfunctions Contribute to Hypertrophic Cardiomyopathy in Patient iPSC-Derived Cardiomyocytes with MT-RNR2 Mutation.</a> Stem Cell Reports. 10 (3), 808-821 (2018).</li><li>Cho, G. -. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Transplantation+Confers+Maturation+of+PSC-Derived+Cardiomyocytes+Conducive+to+Modeling+Cardiomyopathy.">Neonatal Transplantation Confers Maturation of PSC-Derived Cardiomyocytes Conducive to Modeling Cardiomyopathy.</a> Cell Reports. 18 (2), 571-582 (2017).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tri-iodo-l-thyronine+promotes+the+maturation+of+human+cardiomyocytes-derived+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Tri-iodo-l-thyronine promotes the maturation of human cardiomyocytes-derived from induced pluripotent stem cells.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 72, 296-304 (2014).</li><li>Ribeiro, A. J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-Imaging+Method+to+Assay+the+Contractile+Mechanical+Output+of+Micropatterned+Human+iPSC-Derived+Cardiac+Myocytes.">Multi-Imaging Method to Assay the Contractile Mechanical Output of Micropatterned Human iPSC-Derived Cardiac Myocytes.</a> Circulation Research. 120 (10), 1572-1583 (2017).</li><li>Sewanan, L. R., Campbell, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+sarcomeric+cardiomyopathies+with+human+cardiomyocytes+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Modelling sarcomeric cardiomyopathies with human cardiomyocytes derived from induced pluripotent stem cells.</a> The Journal of Physiology. 598 (14), 2909-2922 (2020).</li><li>Kopljar, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+drug-induced+effects+on+contractile+motion+properties+and+cardiac+biomarkers+in+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Chronic drug-induced effects on contractile motion properties and cardiac biomarkers in human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> British Journal of Pharmacology. 174 (21), 3766-3779 (2017).</li><li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact:+a+versatile+marker+to+visualize+F-actin.">Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin.</a> Nature Methods. 5 (7), 605-607 (2008).</li><li>Ribeiro, A. J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractility+of+single+cardiomyocytes+differentiated+from+pluripotent+stem+cells+depends+on+physiological+shape+and+substrate+stiffness.">Contractility of single cardiomyocytes differentiated from pluripotent stem cells depends on physiological shape and substrate stiffness.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (41), 12705-12710 (2015).</li><li>Roberts, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+Gene+Tagging+of+Transcriptionally+Silent+Genes+in+hiPSCs.">Fluorescent Gene Tagging of Transcriptionally Silent Genes in hiPSCs.</a> Stem Cell Reports. 12 (5), 1145-1158 (2019).</li><li>Chanthra, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Fluorescent+Reporter+System+Identifies+Laminin-511/521+as+Potent+Regulators+of+Cardiomyocyte+Maturation.">A Novel Fluorescent Reporter System Identifies Laminin-511/521 as Potent Regulators of Cardiomyocyte Maturation.</a> Scientific Reports. 10 (1), 4249 (2020).</li><li>Ribeiro, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cardiomyocyte+show+of+force:+A+fluorescent+alpha-actinin+reporter+line+sheds+light+on+human+cardiomyocyte+contractility+versus+substrate+stiffness.">A cardiomyocyte show of force: A fluorescent alpha-actinin reporter line sheds light on human cardiomyocyte contractility versus substrate stiffness.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 141, 54-64 (2020).</li><li>Yamanaka, S., Zahanich, I., Wersto, R. P., Boheler, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Proliferation+of+Monolayer+Cultures+of+Embryonic+Stem+(ES)+Cell-Derived+Cardiomyocytes+Following+Acute+Loss+of+Retinoblastoma.">Enhanced Proliferation of Monolayer Cultures of Embryonic Stem (ES) Cell-Derived Cardiomyocytes Following Acute Loss of Retinoblastoma.</a> PLoS ONE. 3 (12), 3896 (2008).</li><li>Miyazaki, T., Isobe, T., Nakatsuji, N., Suemori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+Adhesion+Culture+of+Human+Pluripotent+Stem+Cells+Using+Laminin+Fragments+in+an+Uncoated+Manner.">Efficient Adhesion Culture of Human Pluripotent Stem Cells Using Laminin Fragments in an Uncoated Manner.</a> Scientific Reports. 7 (1), 41165 (2017).</li><li>Prasad, K. -. M. R., Xu, Y., Yang, Z., Acton, S. T., French, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+cardiomyocyte-specific+gene+expression+following+systemic+injection+of+AAV:+in+vivo+gene+delivery+follows+a+Poisson+distribution.">Robust cardiomyocyte-specific gene expression following systemic injection of AAV: in vivo gene delivery follows a Poisson distribution.</a> Gene Therapy. 18 (1), 43-52 (2011).</li><li>Arakawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+evolution+by+hypermutation+and+selection+in+the+B+cell+line+DT40.">Protein evolution by hypermutation and selection in the B cell line DT40.</a> Nucleic Acids Research. 36 (1), e1 (2007).</li><li>Konno, A., Hirai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+whole+brain+transduction+by+systemic+infusion+of+minimally+purified+AAV-PHP.eB.">Efficient whole brain transduction by systemic infusion of minimally purified AAV-PHP.eB.</a> Journal of Neuroscience Methods. 346, 108914 (2020).</li><li>Anzai, T., et al., Yoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Efficient+Knock-in+Mouse+and+Human+Pluripotent+Stem+Cells+Using+CRISPR-Cas9.">Generation of Efficient Knock-in Mouse and Human Pluripotent Stem Cells Using CRISPR-Cas9.</a> Methods of Molecular Biology. , (2020).</li><li>Ahmed, R. E., Anzai, T., Chanthra, N., Uosaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Brief+Review+of+Current+Maturation+Methods+for+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cells-Derived+Cardiomyocytes.">A Brief Review of Current Maturation Methods for Human Induced Pluripotent Stem Cells-Derived Cardiomyocytes.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 178 (2020).</li><li>Moretti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-specific+induced+pluripotent+stem-cell+models+for+long-QT+syndrome.">Patient-specific induced pluripotent stem-cell models for long-QT syndrome.</a> The New England Journal of Medicine. 363 (15), 1397-1409 (2010).</li><li>Flores, L. R., Keeling, M. C., Zhang, X., Sliogeryte, K., Gavara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact-GFP+alters+F-actin+organization,+cellular+morphology+and+biophysical+behaviour.">Lifeact-GFP alters F-actin organization, cellular morphology and biophysical behaviour.</a> Scientific Reports. 9 (1), 3241 (2019).</li><li>Sparrow, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+Myofilament-Localized+Calcium+Dynamics+in+Adult+Cardiomyocytes+and+the+Effect+of+Hypertrophic+Cardiomyopathy+Mutations.">Measurement of Myofilament-Localized Calcium Dynamics in Adult Cardiomyocytes and the Effect of Hypertrophic Cardiomyopathy Mutations.</a> Circulation Research. 124 (8), 1228-1239 (2019).</li></ol>

PSC-CMs יש פוטנציאל גדול להיות מנוצל כפלטפורמת מביהה כדי מודל מחלות לב ולבדוק את ההשפעות של תרופות. עם זאת, יש לקבוע תחילה שיטה מדויקת ומאוחדת להערכת פונקציות PSC-CMs. רוב הבדיקות התפקודיות עובדות עם PSC-CMs, למשל, אלקטרופיזיולוגיה, סידן ארעי, ומטבוליזם26, ואחד המחקרים הראשונים שמקו...

מחלות לב וכלי דם הן הגורם המוביל לתמותה ברחבי העולם1 וקרדיומיופתיה מייצגת את הגורם השלישי למוות הקשור לב2. קרדיומיופתיה היא קבוצה קולקטיבית של מחלות המשפיעות על שרירי הלב. ההתפתחויות האחרונות של תאי גזע פלוריפוטנטים המושרים (iPS) וההבחנה המוכוונת של תאי IPS כלפי קרדיומיוציטים (PSC-CMs) פתחו את הדלת לחקר קרדיומיוציטים עם גנום המטופל כמודל במבחנה של קרדיומיופתיה. תאים אלה יכולים לשמש כדי להבין את הפתופיזיולוגיה של מחלות לב, כדי לרהור המנגנונים המולקולריים שלהם, ולבדוק מועמדים טיפוליים שונים3. יש כמות עצומה של עניין, ולכן, תאי iPS שמקורם בחולה נוצרו (למשל, קרדיומיופתיה היפרטרופית [HCM]4,5 , הפרעות קצבקרדיומיופתיהחדרית ימנית [ARVC]6, קרדיומיופתיה המורחבת [DCM]7,וקרדיומיופתיות הקשורות למיטוכונדריה8,9). כי אחד המאפיינים של קרדיומיופתיה הוא תפקוד לקוי ושיבוש של sarcomeres, כלי תקף המודד באופן אחיד פונקציה sarcomere יש צורך.
קיצור Sarcomere היא הטכניקה הנפוצה ביותר להערכת תפקוד sarcomere ואת התכווצות של cardiomyocytes למבוגרים נגזר מודלים בעלי חיים ובני אדם. כדי לבצע קיצור סרקומרים, נדרשים סרקומרים מפותחים הנראים תחת ניגודיות פאזה. עם זאת, PSC-CMs מתורבתים במבחנה להציג סרקומרים מפותחים ולא מאורגנים, ולכן, אינם יכולים לשמש כדי למדוד כראוי sarcomere קיצור10. קושי זה להעריך כראוי את התכווצות של PSC-CMs מעכב את השימוש בהם כפלטפורמה להערכת תפקודי הלב במבחנה. כדי להעריך התכווצות PSC-CMs בעקיפין, מיקרוסקופיה כוח אטומי, מערכי מיקרו-פוסט, מיקרוסקופיה כוח המתיחה, ומדידות עקיפה שימשו למדידת ההשפעות של התנועה המופעלת על ידי תאים אלה על סביבתם11,12,13. הקלטות וידאו-מיקרוסקופיה מתוחכמות יותר ופחות פולשניות של תנועה תאית בפועל (למשל, SI8000 מ- SONY) יכולות לשמש לחילופין כדי להעריך את החוזה שלהם, עם זאת, שיטה זו אינה מודדת ישירות תנועה סרקומרית או קינטיקה של יצירת כוח14.
כדי למדוד ישירות את תנועת הסרקומורה ב- PSC-CMs, מתגלות גישות חדשות, כגון תיוג פלואורסצנטי לחלבון סרקומר. לדוגמה, Lifeact משמש לתיוג actin filamentous (F-actin) כדי למדוד תנועת סרקומר15,16. תאי IPS מהונדסים גנטית הם אפשרות נוספת לתיוג חלבוני סרקומר (למשל, α-אקטינין [ACTN2] ומיומיסין-2 [MYOM2]) על ידי חלבון פלואורסצנטי17,18,19.
במאמר זה, אנו מתארים כיצד לבצע הדמיה בזמן לשגות למדידת קיצור סרקומר באמצעות Myom2-TagRFP (תאי גזע עוברי עכבר [ES] ) ו ACTN2-mCherry (תאי IPS אנושיים). אנו גם מראים שתרבות בדוגמת דפוס מקלה על יישור סרקומר. בנוסף, אנו מתארים שיטה חלופית של תיוג סרקומר, באמצעות וירוסים הקשורים לאדנו (AAVs), אשר ניתן ליישם באופן נרחב על תאי iPS שמקורם בחולה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-Thioglycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6145-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol (55mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21985-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC) polymer,</td>
			<td>NOF Corp.</td>
			<td>LIPIDURE-CM5206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Propanol</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>166-04836</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35-mm imaging dish with a polymer coverslip (&#181;-Dish 35 mm, high)</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAVproR Helper Free System (AAV6) 
			(vectors; pHelper, pRC6, pAAV-CMV-Vector)</td>
			<td>Takara</td>
			<td>6651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACTN2-mCherry (AR12, AR21) hiPSCs</td>
			<td>N.A.</td>
			<td></td>
			<td>We inserted IRES-puromycin resistant casette to 3&#39; UTR of TNNT2 locus and mCherry around the stop codon of ACTN2 in 610B1 hiPSC line, following a method describe elsewhere (Anzai, Methods Mol Biol, in press)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement (50X), serum free</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement, minus insulin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A18956-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement (50X), minus Vitamin A</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12587-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzonase (25 U/&#181;L)</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>70746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blasticidin S Hydrochloride</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>029-18701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP-4, Human, Recombinant,</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>314-BP-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C59, Wnt Antagonist (WntC59)</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab142216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CAD drawing software,</td>
			<td>Robert McNeel and Associates, WA, USA</td>
			<td>Rhinoceros 6.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugal ultrafiltration unit (100k MWCO), Vivaspin-20</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>VS2042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR99021</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>13122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromium etchant</td>
			<td>Nihon Kagaku Sangyo Co., Ltd., Japan</td>
			<td>N14B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromium mask coated with AZP1350</td>
			<td>Clean Surface Technology Co., Japan</td>
			<td>CBL2506Bu-AZP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dr. GenTLE Precipitation Carrier (20mg/mL Glycogen, 3 M Sodium Acetate (pH 5.2))</td>
			<td>Takara</td>
			<td>9094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM) - high glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D6429-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM) - high glucose, without sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (99.5)</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>057-00456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Moregate</td>
			<td>59301104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF-10, Human, Recombinant,</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>345-FG-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblast Growth Factor(basic), human, recombinant</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>060-04543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin from porcine skin powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G1890-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glasgow Minimum Essential Medium (GMEM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5154-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GLASS BOTTOM culture plates</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P24G-1.5-13-F/H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#8217;s F-12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11765-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iscove&#39;s Modified Dulbecco&#39;s Medium (IMDM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12440-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-alanine-L-glutamine (GlutaMAX Supplement, 200mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L(+)-Ascorbic Acid Sodium Salt</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>196-01252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin-511 E8 fragment (LN511-E8, iMatrix-511)</td>
			<td>Nippi</td>
			<td>892012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mask aligner</td>
			<td>Union Optical Co., Ltd., Japan</td>
			<td>PEM-800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maskless lithography tool</td>
			<td>NanoSystem Solutions, Inc., Japan</td>
			<td>D-Light DL-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-HV Syringe Filter Unit, 0.45 &#181;m, PVDF (0.45-&#181;m filter)</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLHVR33RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myom2-RFP (SMM18)</td>
			<td>N.A.</td>
			<td></td>
			<td>Developed in our previous paper (Chanthra, Sci Rep, 2020)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ORCA-Flash4.0 V3 digital CMOS camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>C13440-20CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD0325901</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0006-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Sansei medical co. Ltd</td>
			<td>01-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol (25:24:1)</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>311-90151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydimethylsiloxane (PDMS) elastomer</td>
			<td>Dow Corning Corp., MI, USA</td>
			<td>SILPOT 184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polyethylenimine MAX (MW. 40,000)</td>
			<td>Polyscience</td>
			<td>24765-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Positive photoresist developer</td>
			<td>Tokyo Ohka Kogyo Co., Ltd., Japan</td>
			<td>NMD-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerUp SYBR Green Master Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A25742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Takara</td>
			<td>9034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin Dihydrochloride</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>166-23153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human/Mouse/Rat Activin A Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>338-AC-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant trypsin-like protease (rTrypsin; TrypLE express)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12604-039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI1640 Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon wafer</td>
			<td>Matsuzaki Seisakusyo Co., Ltd., Japan</td>
			<td>N.A.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin-coater</td>
			<td>Mikasa Co., Ltd., Japan</td>
			<td>MS-A100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spininng confocal microscopy</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>Andor Dragonfly Spinning Disk System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemSure LIF, Mouse, recombinant, Solution (10^6U)</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>195-16053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU-8 3010</td>
			<td>Kayaku Advanced Materials, Inc., MA, USA</td>
			<td>SU-8 3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU-8 developer</td>
			<td>Kayaku Advanced Materials, Inc., MA, USA</td>
			<td>SU-8 developer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-EDTA</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>314-90021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular Endothelial Growth Factor-A165(VEGF), Human, recombinant</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>226-01781</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sarcomere shortening of pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes using fluorescent-tagged sarcomere proteins.

קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטים (PSC-CMs) יכולים להיות מיוצרים הן מתאי גזע עובריים והן מתאי גזע פלוריפוטנטיים (ES/iPS). תאים אלה מספקים מקורות מבטיחים למידול מחלות לב. עבור קרדיומיופתיות, קיצור sarcomere היא אחת ההערכות הפיזיולוגיות הסטנדרטיות המשמשות עם קרדיומיוציטים למבוגרים כדי לבחון את פנוטיפים המחלה שלהם. עם זאת, השיטות הזמינות אינן מתאימות להערכת התכווצות של PSC-CMs, שכן לתאים אלה יש סרקומרים לא מפותחים שאינם נראים תחת מיקרוסקופיה של ניגודיות פאזה. כדי לטפל בבעיה זו ולבצע קיצור סרקומר עם PSC-CMs, נעשה שימוש בחלבוני סרקומר מתויגים פלואורסצנטיים והדמיה חיה פלואורסצנטית. קווי Z דקים וקו M שוכנים בשני הקצוות ובמרכז סרקומר, בהתאמה. חלבוני קו Z - α-Actinin (ACTN2), טלתונין (TCAP) וחלבון LIM הקשור לאקטין (PDLIM3) - וחלבון קו M אחד - מיומיסין-2 (Myom2) - תויגו בחלבונים פלואורסצנטיים. חלבונים מתויגים אלה יכולים לבוא לידי ביטוי מאללים אנדוגניים כמו דפיקות או מווירוסים הקשורים אדנו (AAVs). כאן, אנו מציגים את השיטות להבדיל בין תאי גזע של עכברים ופלוריפוטנטים אנושיים לקרדיומיוציטים, לייצר AAVs, ולבצע ולנתח הדמיה חיה. אנו מתארים גם את השיטות לייצור חותמות פולידימתילסילוקסן (PDMS) עבור תרבות בדוגמת PSC-CMs, המאפשרת ניתוח של קיצור סרקומר עם חלבונים מתויגים פלואורסצנטית. כדי להעריך קיצור של sarcomere, תמונות זמן לשגות של התאים הפועמים נרשמו בקצב מסגרת גבוה (50-100 פריימים לשנייה) תחת גירוי חשמלי (0.5-1 הרץ). כדי לנתח את אורך הסרקום במהלך התכווצות התא, התמונות המוקלטות של זמן לשגות היו כפופות ל- SarcOptiM, תוסף ל- ImageJ / פיג'י. האסטרטגיה שלנו מספקת פלטפורמה פשוטה לחקירת פנוטיפים של מחלות לב ב- PSC-CMs.

מדידת קיצור סרקומר באמצעות שורות כתב PSC-CMs. PSC-CMs שכותרתו Sarcomere שימשו למדידת קיצור סרקומר. הקווים מבטאים את Myom2-RFP ו ACTN2-mCherry מלוצי אנדוגני. TagRFP הוכנס ל Myom2, קידוד M-חלבונים כי לוקליזציה לקו M, בעוד mCherry היה דפק ב ל ACTN2, קידוד α-Actinin, אשר לוקליזציה לקו Z18</s...

Watch this Scientific Journal Video about Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins. at JoVE.com

Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins.

שיטה זו יכולה לשמש כדי לבחון קיצור סרקומר באמצעות קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטים עם חלבוני סרקומר מתויגים פלואורסצנטיים.

קיצור סרקומר של קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטים באמצעות חלבוני סרקומר מתויגים פלואורסצנטיים.

Pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (PSC-CMs) can be produced from both embryonic and induced pluripotent stem (ES/iPS) cells. These cells ...

קשה להעריך את תפקוד הסרקום בקרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטים בשל הסרקומר הלא מפותח והמבולגן שלהם. באמצעות חלבוני סרקומר מתויגים פלואורסצנטית, אנו יכולים כעת לגשת לקיצור סרקומר. אנחנו יכולים לדמיין סרקומרים ולהעריך את התפקוד שלהם במבחנה באמצעות קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע וחלבוני סרקומר מתויגים פלואורסצנטית.באמצעות התמרה מבוססת AAV, אנו יכולים להרחיב את השיטה לכל תאי גזע פלוריפוטנטים המושרים על ידי המטופל. שיטה זו יכולה להיות מורחבת להתפתחות של טיפול קרדיומיופתיה, כפי שניתן להשתמש בו כדי להעריך ישירות תפקוד לקוי sarcomere הקשורים למחלה במבחנה. שיטה זו שימושית בתחום הקרדיולוגיה, כולל מחקר קרדיולוגיה ילדים.עם זאת, זה יכול להיות מיושם גם על המחקר של תפקוד שריר השלד, כגון מיופתיה. ביום מינוס ארבע אינדוקציה בידול, לצפות צלחת שש באר עם 0.5 מיקרוגרם לסנטימטר מרובע של למינין-511 E8 מדולל PBS עבור דגירה של 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני. לקראת סוף הדגירה, לטפל בתאי גזע פלוריפוטנטים הנגרמים על ידי האדם עם טריפסין רקומביננטי במשך שלוש דקות ב 37 מעלות צלזיוס.כאשר התאים התנתקו, קציר תאים לבינוני בתוספת 10% FBS לספירה, ו resuspend התאים ב 1.25 פעמים 10 כדי 10 עד התא החמישי לכל שני מיליליטר של AK02N בינוני בתוספת למינין-511 E8 ומעכב ROCK לאחר צנטריפוגה. לאחר מכן, שאפו את תמיסת הציפוי מכל באר של צלחת ששת הטובות, וזרעו שני מיליליטר של תאים לתוך כל באר. תחזיר את הצלחת לאינקובטור תרבית התאים.לאחר ארבעה ימים, התאים מגיעים ל-80% השפעה. החלף את supernatant בכל באר עם שני מיליליטר של RPMI בתוספת B27 ללא אינסולין בינוני בתוספת מעכב GSK-3 לבאר כדי לגרום לבידול. לאחר יומיים של בידול, בעדינות להחליף את המדיום עם שני מיליליטר של RPMI בתוספת B27 ללא אינסולין בינוני בתוספת מעכב קיפוד לבאר.התאים היו צריכים להגיע ל-100% השפעה. ביום הרביעי של בידול, בעדינות להחליף את supernatants עם שני מיליליטר של RPMI בתוספת B27 ללא אינסולין לבאר. התאים צריכים להישאר בצפיפות גבוהה, וחלקם אולי החלו לצוף.ביום השביעי והתשע של בידול, להחליף את supernatant בכל באר עם שני מיליליטר של RPMI בתוספת B27 עם אינסולין בתוספת puromycin עבור תרבות קרדיומיוצית תאי גזע פלוריפוטנטים סלקטיבית. בשלב זה, יש לראות תאים מכים בתוך התרבויות. כדי להגדיר תרבות קרדיומיוציט שמקורה בתאי גזע pluripotent בדוגמת, השתמש תחילה בסרט תיקון כדי להסיר אבק מפני השטח של חותמת PDMS בהזמנה אישית, ולהטביע בקצרה את החותמת ב -70%אתנול.השתמש בדאסטר אוויר כדי להסיר את האתנול מפני השטח בול, ולטפל בפני השטח עם חמישה עד 10 microliters של 0.5% MPC פולימר ואתנול. כאשר הפולימר התייבש לחלוטין, מניחים את החותמת על כיסוי פולימר בצלחת הדמיה של 35 מ"מ, ומניחים משקל על החותמת. לאחר 10 דקות, השתמש במיקרוסקופ קל כדי לאשר כי התבנית הועברה על כיסוי, לשטוף את הצלחת מכסה פעמיים עם PBS.לאחר הכביסה השנייה, מצפים את כיסוי עם 0.5 עד מיקרוגרם אחד לסנטימטר מרובע של למינין-511 E8 מדולל ב 0.1% ג'לטין עבור דגירה של שעתיים עד ארבע שעות בטמפרטורת החדר. ביום 10 של בידול, לשטוף את התאים פעמיים עם PBS, ואחריו טיפול עם מיליליטר אחד של טריפסין רקומביננטי לבאר במשך שלוש עד חמש דקות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר הספירה, resuspend התאים ב 2.5 עד חמש פעמים 10 לתאים החמישיים למיליליטר של RPMI בתוספת B27 עם אינסולין בתוספת ריכוז puromycin, וזרע מיליליטר אחד של תאים על הצלחת עבור דגירה לילה ב 37 מעלות צלזיוס.למחרת בבוקר, להחליף את supernatant עם RPMI טרי בתוספת B27 עם אינסולין בתוספת puromycin, ולהחזיר את התאים אינקובטור תרבית התא, מרענן את המדיום פעמיים עד שלוש פעמים בשבוע עד ימים 21 עד 28 עבור הדמיה. להדמיה בזמן-לשגות של קיצור הסרקום בתרביות PCCSM, החל שמן על העדשה האובייקטיבית פי 100 של מיקרוסקופ קונפוקלי פלואורסצנטי, ובחר תנאי הדמיה חיים בתוכנה המשויכת. כדי להשיג נתונים מייצגים טובים, בחר את קצב הפריימים הגבוה ביותר, הגדר את התריס לפתיחה והחל תריס של ארבע על ארבע בחיתוך של אזור הרכישה כדי להשיג את המרווחים הקצרים ביותר בין תמונות במהלך הדמיית זמן-לשגות.אם קצב ההכאה של התאים נמוך, לעורר את התאים על ידי גירוי שדה חשמלי, ולהתחיל את הקלטת זמן לשגות, תוך טיפול כי השדה הדמוי נשאר במוקד במהלך ההדמיה. בסוף תקופת ההדמיה, שמור את התמונות של זמן לשגות בתיקיה מתאימה. כדי לנתח את התמונות של זמן-זמן, פתחו סדרה של תמונות בזמן ל-ImageJ, והתאמו את הבהירות והניגודיות של התמונות עד שניתן יהיה לראות בבירור את תבנית הסרקום.בתפריט כלים נוספים, בחר SarcOptiM והקש Control Shift P ועל לחצן מיקרון אחד בסרגל הכלים כדי להשתמש בהוראות לכיול התוכנית. לאחר מכן למתוח קו על פני האזור של sarcomere לשמש כדי למדוד את קיצור sarcomere, ולחץ על AVI תא יחיד כדי להתחיל ניתוח קיצור sarcomere. הדמיה בזמן לשגות של sarcomere מסומן, בדוגמת תאי גזע pluripotent נגזר קרדיומיוציטים ניתן להשתמש כדי למדוד קיצור sarcomere בנקודות זמן שונות.כדי להתגבר על אי-הארגון של סרקום שנצפו בדרך כלל בתרביות קרדיומיוציטים שמקורן בתאי גזע, חותמות PDMS ספציפיות יכולות לשמש לקרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטים בדוגמת גזע בדפוס פסים, המקדם צורת תא מוארכת ותבנית סרקומר מאורגנת יותר בהשוואה לתאים בתרבית באזור שאינו דפוס. תרביות דפוס גם מקדמות התכווצות סלולרית טובה יותר ומספקות פרופיל אורך סרקומר חלק בהשוואה לתאים שאינם בעלי תרבית. קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע pluripotent המועברים על-ידי AAV מבטאים אותות GFP סרקומריים לאורך הקרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים כבר בשלושה ימים לאחר ההחלמה וניתן להשתמש בהם גם למדידת פרופילי התכווצות סרקומר.יתר על כן, התוספת של גן עמיד blasticidin במהלך transduction יכול לשמש גם כדי להקל על דפוס פלוריפוטנטים נגזר תאי גזע בחירת קרדיומיוציט לטוהר של מעל 90%כדי להקל על ניתוח תמונה קל יותר ואיכותי יותר, זה חיוני כדי לזהות אזור עם sarcomeres לנוע ליניארית ולקבל תמונות בקצב הפריימים הגבוה ביותר. באמצעות שיטה זו, אנו יכולים להעריך את תפקיד ההתבגרות בחלבוני סרקומה כדי לחקור תפקוד לקוי של סרקומר במעבדה cardiomyocyte נגזר תאי IPS ספציפיים למחלה, שמקורם בחולה.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

בידוד, אפיון והשוואתי התמיינות של תאי גזע אנושיים שיניים זולות נגזרה שיניים קבועות על ידי שימוש בשתי שיטות שונות

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

בידוד ואפיון פונקציונלי של אדם חדרית שריר לב מדוגמאות כירורגי טריות

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Muscular Dystrophy Patients: Efficient Integration-free Reprogramming of Urine Derived Cells

דור של גזע תאים המושרה pluripotent מחולי ניוון שרירים: תכנות מחדש ללא אינטגרציה יעילה של תאים שתן נגזר

Dystrophic cardiomyopathy is a poorly understood consequence of muscular dystrophy. Generating induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) from patients with ...

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

הדור מהיר ויעיל של תאי גזע פלוריפוטנטיים רקומביננטי אנושי ידי recombinase בתיווך המרת קלטת ב<em&gt; AAVS1</em&gt; לוקוס

Even with the revolution of gene-targeting technologies led by CRISPR-Cas9, genetic modification of human pluripotent stem cells&#160;(hPSCs)&#160;is ...

Isolation and Cultivation of Adult Rat Cardiomyocytes

בידוד, טיפוח של עכברים בוגרים Cardiomyocytes

In an intact heart, adjacent cells influence adult cardiomyocytes. With the method of isolation and cultivation of adult cardiomyocytes, a precise ...

Targeted and Selective Treatment of Pluripotent Stem Cell-derived Teratomas Using External Beam Radiation in a Small-animal Model

טיפול ממוקד, סלקטיבי של Teratomas נגזר תאי גזע Pluripotent באמצעות קרינה חיצוני קרן במודל של חיית-קטן

The growing number of victims of &#34;stem cell tourism,&#34; the unregulated transplantation of stem cells worldwide, has raised concerns about the ...

Analyzing Oxygen Consumption Rate in Primary Cultured Mouse Neonatal Cardiomyocytes Using an Extracellular Flux Analyzer

קצב צריכת החמצן וניתוח Cardiomyocytes Neonatal העכבר בתרבית הראשי באמצעות של מנתח השטף חוץ-תאית

Mitochondria and oxidative metabolism are critical for maintaining cardiac muscle function. Research has shown that mitochondrial dysfunction is an ...

In Vitro Assessment of Cardiac Function Using Skinned Cardiomyocytes

להערכת ויטרו של תפקוד הלב באמצעות קרדיומיוציטים עור

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring ...

Model of Ischemic Heart Disease and Video-Based Comparison of Cardiomyocyte Contraction Using hiPSC-Derived Cardiomyocytes

מודל של מחלות לב איסכמיות והשוואה מבוססת וידאו של התכווצות קרדיומיוציטים באמצעות קרדיומיוציטים נגזר hiPSC

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with ...

Directed Induction of Retinal Organoids from Human Pluripotent Stem Cells

אינדוקציה מכוונת של אורגנואידים ברשתית מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים

Retinal cell transplantation is a promising therapeutic approach, which could restore the retinal architecture and stabilize or even improve the visual ...