Name: sarcomere shortening of pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes using fluorescent-tagged sarcomere proteins.
Uploaded: 2021-03-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins. at JoVE.com

Jichi Tıp Üniversitesi Rejeneratif Tıp Bölümü'ndeki tüm laboratuvar üyelerini yararlı tartışma ve teknik yardım için kabul etmek istiyoruz. Bu çalışma Japonya Tıbbi Araştırma ve Geliştirme Ajansı'nın (AMED) hibeleri ile desteklenmiştir; JP18bm0704012 ve JP20bm0804018), Japonya Bilimi Destekleme Derneği (JSPS; JP19KK0219) ve Japon Dolaşım Topluluğu (Temel Araştırma Hibesi) H.U.

1. Fare pluripotent kök hücrelerinin farklılaşması
<ol><li>Fare ES hücrelerinin bakımı<ol>
<li>Bakım ortamı: 50 mL fetal sığır serumu (FBS), 5 mL L-alanin-L-glutamin karıştırın, 5 mL esansiyel olmayan amino asit (NEAA), 5 mL 100 mM Sodyum Pirovat ve 909 μl 55 mM 2-Mercaptoethanol ile 450 mL Glasgow Minimum Esansiyel Orta (GMEM). Ek Lösemi inhibitör faktörü (LIF), CHIR-99021 ve PD0325901 sırasıyla 1000 U/mL, 1 μM ve 3 μM'lik son konsantrasyonda. Ortamı 0,22 μm filtre ile sterilize edin.</li>
...

<ol>
	<li>Mensah, G. A., Roth, G. A., Fuster, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Global+Burden+of+Cardiovascular+Diseases+and+Risk+Factors.">The Global Burden of Cardiovascular Diseases and Risk Factors.</a> Journal of the American College of Cardiology. 74 (20), 2529-2532 (2019).</li><li>Wexler, R. K., Elton, T., Pleister, A., Feldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyopathy:+an+overview.">Cardiomyopathy: an overview.</a> American Family Physician. 79 (9), 778-784 (2009).</li><li>Parrotta, E. I., Lucchino, V., Scaramuzzino, L., Scalise, S., Cuda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+Cardiac+Disease+Mechanisms+Using+Induced+Pluripotent+Stem+Cell-Derived+Cardiomyocytes:+Progress,+Promises+and+Challenges.">Modeling Cardiac Disease Mechanisms Using Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes: Progress, Promises and Challenges.</a> International Journal of Molecular Sciences. , 30 (2020).</li><li>Carvajal-Vergara, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-specific+induced+pluripotent+stem-cell-derived+models+of+LEOPARD+syndrome.">Patient-specific induced pluripotent stem-cell-derived models of LEOPARD syndrome.</a> Nature. 465 (7299), 808-812 (2010).</li><li>Lan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+calcium+handling+properties+underlie+familial+hypertrophic+cardiomyopathy+pathology+in+patient-specific+induced+pluripotent+stem+cells.">Abnormal calcium handling properties underlie familial hypertrophic cardiomyopathy pathology in patient-specific induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 12 (1), 101-113 (2013).</li><li>Kim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+arrhythmogenic+right+ventricular+dysplasia+with+patient-specific+iPSCs.">Studying arrhythmogenic right ventricular dysplasia with patient-specific iPSCs.</a> Nature. 494 (7435), 105-110 (2013).</li><li>Gramlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense-mediated+exon+skipping:+a+therapeutic+strategy+for+titin-based+dilated+cardiomyopathy.">Antisense-mediated exon skipping: a therapeutic strategy for titin-based dilated cardiomyopathy.</a> EMBO Molecular Medicine. 7 (5), 562-576 (2015).</li><li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+the+mitochondrial+cardiomyopathy+of+Barth+syndrome+with+induced+pluripotent+stem+cell+and+heart-on-chip+technologies.">Modeling the mitochondrial cardiomyopathy of Barth syndrome with induced pluripotent stem cell and heart-on-chip technologies.</a> Nature Medicine. 20 (6), 616-623 (2014).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+Dysfunctions+Contribute+to+Hypertrophic+Cardiomyopathy+in+Patient+iPSC-Derived+Cardiomyocytes+with+MT-RNR2+Mutation.">Mitochondrial Dysfunctions Contribute to Hypertrophic Cardiomyopathy in Patient iPSC-Derived Cardiomyocytes with MT-RNR2 Mutation.</a> Stem Cell Reports. 10 (3), 808-821 (2018).</li><li>Cho, G. -. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Transplantation+Confers+Maturation+of+PSC-Derived+Cardiomyocytes+Conducive+to+Modeling+Cardiomyopathy.">Neonatal Transplantation Confers Maturation of PSC-Derived Cardiomyocytes Conducive to Modeling Cardiomyopathy.</a> Cell Reports. 18 (2), 571-582 (2017).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tri-iodo-l-thyronine+promotes+the+maturation+of+human+cardiomyocytes-derived+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Tri-iodo-l-thyronine promotes the maturation of human cardiomyocytes-derived from induced pluripotent stem cells.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 72, 296-304 (2014).</li><li>Ribeiro, A. J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-Imaging+Method+to+Assay+the+Contractile+Mechanical+Output+of+Micropatterned+Human+iPSC-Derived+Cardiac+Myocytes.">Multi-Imaging Method to Assay the Contractile Mechanical Output of Micropatterned Human iPSC-Derived Cardiac Myocytes.</a> Circulation Research. 120 (10), 1572-1583 (2017).</li><li>Sewanan, L. R., Campbell, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+sarcomeric+cardiomyopathies+with+human+cardiomyocytes+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Modelling sarcomeric cardiomyopathies with human cardiomyocytes derived from induced pluripotent stem cells.</a> The Journal of Physiology. 598 (14), 2909-2922 (2020).</li><li>Kopljar, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+drug-induced+effects+on+contractile+motion+properties+and+cardiac+biomarkers+in+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Chronic drug-induced effects on contractile motion properties and cardiac biomarkers in human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> British Journal of Pharmacology. 174 (21), 3766-3779 (2017).</li><li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact:+a+versatile+marker+to+visualize+F-actin.">Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin.</a> Nature Methods. 5 (7), 605-607 (2008).</li><li>Ribeiro, A. J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractility+of+single+cardiomyocytes+differentiated+from+pluripotent+stem+cells+depends+on+physiological+shape+and+substrate+stiffness.">Contractility of single cardiomyocytes differentiated from pluripotent stem cells depends on physiological shape and substrate stiffness.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (41), 12705-12710 (2015).</li><li>Roberts, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+Gene+Tagging+of+Transcriptionally+Silent+Genes+in+hiPSCs.">Fluorescent Gene Tagging of Transcriptionally Silent Genes in hiPSCs.</a> Stem Cell Reports. 12 (5), 1145-1158 (2019).</li><li>Chanthra, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Fluorescent+Reporter+System+Identifies+Laminin-511/521+as+Potent+Regulators+of+Cardiomyocyte+Maturation.">A Novel Fluorescent Reporter System Identifies Laminin-511/521 as Potent Regulators of Cardiomyocyte Maturation.</a> Scientific Reports. 10 (1), 4249 (2020).</li><li>Ribeiro, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cardiomyocyte+show+of+force:+A+fluorescent+alpha-actinin+reporter+line+sheds+light+on+human+cardiomyocyte+contractility+versus+substrate+stiffness.">A cardiomyocyte show of force: A fluorescent alpha-actinin reporter line sheds light on human cardiomyocyte contractility versus substrate stiffness.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 141, 54-64 (2020).</li><li>Yamanaka, S., Zahanich, I., Wersto, R. P., Boheler, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Proliferation+of+Monolayer+Cultures+of+Embryonic+Stem+(ES)+Cell-Derived+Cardiomyocytes+Following+Acute+Loss+of+Retinoblastoma.">Enhanced Proliferation of Monolayer Cultures of Embryonic Stem (ES) Cell-Derived Cardiomyocytes Following Acute Loss of Retinoblastoma.</a> PLoS ONE. 3 (12), 3896 (2008).</li><li>Miyazaki, T., Isobe, T., Nakatsuji, N., Suemori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+Adhesion+Culture+of+Human+Pluripotent+Stem+Cells+Using+Laminin+Fragments+in+an+Uncoated+Manner.">Efficient Adhesion Culture of Human Pluripotent Stem Cells Using Laminin Fragments in an Uncoated Manner.</a> Scientific Reports. 7 (1), 41165 (2017).</li><li>Prasad, K. -. M. R., Xu, Y., Yang, Z., Acton, S. T., French, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+cardiomyocyte-specific+gene+expression+following+systemic+injection+of+AAV:+in+vivo+gene+delivery+follows+a+Poisson+distribution.">Robust cardiomyocyte-specific gene expression following systemic injection of AAV: in vivo gene delivery follows a Poisson distribution.</a> Gene Therapy. 18 (1), 43-52 (2011).</li><li>Arakawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+evolution+by+hypermutation+and+selection+in+the+B+cell+line+DT40.">Protein evolution by hypermutation and selection in the B cell line DT40.</a> Nucleic Acids Research. 36 (1), e1 (2007).</li><li>Konno, A., Hirai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+whole+brain+transduction+by+systemic+infusion+of+minimally+purified+AAV-PHP.eB.">Efficient whole brain transduction by systemic infusion of minimally purified AAV-PHP.eB.</a> Journal of Neuroscience Methods. 346, 108914 (2020).</li><li>Anzai, T., et al., Yoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Efficient+Knock-in+Mouse+and+Human+Pluripotent+Stem+Cells+Using+CRISPR-Cas9.">Generation of Efficient Knock-in Mouse and Human Pluripotent Stem Cells Using CRISPR-Cas9.</a> Methods of Molecular Biology. , (2020).</li><li>Ahmed, R. E., Anzai, T., Chanthra, N., Uosaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Brief+Review+of+Current+Maturation+Methods+for+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cells-Derived+Cardiomyocytes.">A Brief Review of Current Maturation Methods for Human Induced Pluripotent Stem Cells-Derived Cardiomyocytes.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 178 (2020).</li><li>Moretti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-specific+induced+pluripotent+stem-cell+models+for+long-QT+syndrome.">Patient-specific induced pluripotent stem-cell models for long-QT syndrome.</a> The New England Journal of Medicine. 363 (15), 1397-1409 (2010).</li><li>Flores, L. R., Keeling, M. C., Zhang, X., Sliogeryte, K., Gavara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact-GFP+alters+F-actin+organization,+cellular+morphology+and+biophysical+behaviour.">Lifeact-GFP alters F-actin organization, cellular morphology and biophysical behaviour.</a> Scientific Reports. 9 (1), 3241 (2019).</li><li>Sparrow, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+Myofilament-Localized+Calcium+Dynamics+in+Adult+Cardiomyocytes+and+the+Effect+of+Hypertrophic+Cardiomyopathy+Mutations.">Measurement of Myofilament-Localized Calcium Dynamics in Adult Cardiomyocytes and the Effect of Hypertrophic Cardiomyopathy Mutations.</a> Circulation Research. 124 (8), 1228-1239 (2019).</li></ol>

PSC-CM'ler, kalp hastalıklarını modellemek ve ilaçların etkilerini test etmek için bir in vitro platform olarak kullanılma potansiyeline sahiptir. Bununla birlikte, PSC-CMs işlevlerini değerlendirmek için önce doğru, birleşik bir yöntem oluşturulmalıdır. Fonksiyonel testlerin çoğu PSC-CM'ler ile çalışır, örneğin elektrofizyoloji, kalsiyum geçici ve metabolizma26ve ilk hasta kaynaklı PSC-CM çalışmalarından biri long-QT sendromuhakkındaydı ...

Kardiyovasküler hastalıklar dünya çapında mortalitenin önde gelen nedenidir1 ve kardiyomiyopati kardiyak ilişkili ölümlerin üçüncü nedenini temsil eder2. Kardiyomiyopati, kalp kaslarını etkileyen toplu bir hastalık grubudur. İndüklenen pluripotent stem (iPS) hücrelerinin son gelişmeleri ve iPS hücrelerinin kardiyomiyositlere (PSC-CM) yönelik yönlendirilmiş farklılaşması, kardiyomiyopatinin in vitro modeli olarak hasta genomlu kardiyomiyositlerin incelenmesine kapı açmıştır. Bu hücreler kardiyak hastalıkların patofizyolojisini anlamak, moleküler mekanizmalarını ortaya çıkarmak ve farklı terapötik adayları test etmek için kullanılabilir3. Bu nedenle, hasta kaynaklı iPS hücreleri üretilmiştir (örneğin, hipertrofik kardiyomiyopati [HCM]4,5,aritmojenik sağ ventrikül kardiyomiyopatisi [ARVC]6, genişlemiş kardiyomiyopati [DCM]7ve mitokondriyal ilişkili kardiyomiyopatiler8,9). Kardiyomiyopatinin özelliklerinden biri sarkomların işlev bozukluğu ve bozulması olduğundan, sarkom fonksiyonunu düzgün bir şekilde ölçen geçerli bir araca ihtiyaç vardır.
Sarkom kısaltma, sarkom fonksiyonunu ve hayvan modellerinden ve insanlardan elde edilen yetişkin kardiyomiyositlerin sözleşmeliğini değerlendirmek için en yaygın kullanılan tekniktir. Sarkom kısaltması yapmak için faz kontrastı altında görülebilen iyi gelişmiş sarkomlar gereklidir. Bununla birlikte, PSC-CM'ler in vitro ekran az gelişmiş ve dağınık sarkomları kültüre eder ve bu nedenle, sarkom kısaltmasını düzgün bir şekilde ölçmek için kullanılamaz10. PSC-CM'lerin sözleşmelerinin sözleşmeye uygun şekilde değerlendirilmesindeki bu zorluk, kardiyak fonksiyonları in vitroolarak değerlendirmek için bir platform olarak kullanımlarını engeller. PSC-CM'lerin sözleşmelliğini dolaylı olarak değerlendirmek için atomik kuvvet mikroskopisi, mikro-post dizileri, çekiş kuvveti mikroskopisi ve empedans ölçümleri, bu hücrelerin uyguladıkları hareketin çevreleri üzerindeki etkilerini ölçmek için kullanılmıştır11,12,13. Gerçek hücresel hareketin daha sofistike ve daha az invaziv video-mikroskopi kayıtları (örneğin, SONY'den SI8000) sözleşmelerini alternatif olarak değerlendirmek için kullanılabilir, ancak bu yöntem doğrudan sarkom hareketini ölçmez veya üretimi zorlar kinetik14.
PSC-CM'lerde sarkomer hareketini doğrudan ölçmek için sarkom proteinine floresan etiketleme gibi yeni yaklaşımlar ortaya çıkıyor. Örneğin, Lifeact sarkom hareketi15,16ölçmek için filamentli aktinin (F-actin) etiketlemek için kullanılır. Genetiği değiştirilmiş iPS hücreleri, sarkom proteinlerini (örneğin, α-actinin [ACTN2] ve Myomesin-2 [MYOM2]) floresan protein17 , 18,19ile etiketlemek için başka bir seçenektir.
Bu yazıda Myom2-TagRFP (fare embriyonik sapı [ES] hücreleri) ve ACTN2-mCherry (insan iPS hücreleri) kullanılarak sarkom kısaltmasını ölçmek için zaman atlamalı görüntülemenin nasıl gerçekleştirildiğini açıklıyoruz. Ayrıca desenli bir kültürün sarkom hizalamasını kolaylaştırdığını gösteriyoruz. Ek olarak, hasta kaynaklı iPS hücrelerine yaygın olarak uygulanabilen adeno ilişkili virüsler (AAV' ler) kullanarak sarkom etiketlemesinin alternatif bir yöntemini açıklıyoruz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-Thioglycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6145-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol (55mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21985-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC) polymer,</td>
			<td>NOF Corp.</td>
			<td>LIPIDURE-CM5206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Propanol</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>166-04836</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35-mm imaging dish with a polymer coverslip (&#181;-Dish 35 mm, high)</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAVproR Helper Free System (AAV6) 
			(vectors; pHelper, pRC6, pAAV-CMV-Vector)</td>
			<td>Takara</td>
			<td>6651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACTN2-mCherry (AR12, AR21) hiPSCs</td>
			<td>N.A.</td>
			<td></td>
			<td>We inserted IRES-puromycin resistant casette to 3&#39; UTR of TNNT2 locus and mCherry around the stop codon of ACTN2 in 610B1 hiPSC line, following a method describe elsewhere (Anzai, Methods Mol Biol, in press)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement (50X), serum free</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement, minus insulin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A18956-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement (50X), minus Vitamin A</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12587-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzonase (25 U/&#181;L)</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>70746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blasticidin S Hydrochloride</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>029-18701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP-4, Human, Recombinant,</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>314-BP-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C59, Wnt Antagonist (WntC59)</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab142216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CAD drawing software,</td>
			<td>Robert McNeel and Associates, WA, USA</td>
			<td>Rhinoceros 6.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugal ultrafiltration unit (100k MWCO), Vivaspin-20</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>VS2042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR99021</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>13122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromium etchant</td>
			<td>Nihon Kagaku Sangyo Co., Ltd., Japan</td>
			<td>N14B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromium mask coated with AZP1350</td>
			<td>Clean Surface Technology Co., Japan</td>
			<td>CBL2506Bu-AZP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dr. GenTLE Precipitation Carrier (20mg/mL Glycogen, 3 M Sodium Acetate (pH 5.2))</td>
			<td>Takara</td>
			<td>9094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM) - high glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D6429-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM) - high glucose, without sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (99.5)</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>057-00456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Moregate</td>
			<td>59301104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF-10, Human, Recombinant,</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>345-FG-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblast Growth Factor(basic), human, recombinant</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>060-04543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin from porcine skin powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G1890-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glasgow Minimum Essential Medium (GMEM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5154-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GLASS BOTTOM culture plates</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P24G-1.5-13-F/H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#8217;s F-12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11765-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iscove&#39;s Modified Dulbecco&#39;s Medium (IMDM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12440-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-alanine-L-glutamine (GlutaMAX Supplement, 200mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L(+)-Ascorbic Acid Sodium Salt</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>196-01252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin-511 E8 fragment (LN511-E8, iMatrix-511)</td>
			<td>Nippi</td>
			<td>892012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mask aligner</td>
			<td>Union Optical Co., Ltd., Japan</td>
			<td>PEM-800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maskless lithography tool</td>
			<td>NanoSystem Solutions, Inc., Japan</td>
			<td>D-Light DL-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-HV Syringe Filter Unit, 0.45 &#181;m, PVDF (0.45-&#181;m filter)</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLHVR33RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myom2-RFP (SMM18)</td>
			<td>N.A.</td>
			<td></td>
			<td>Developed in our previous paper (Chanthra, Sci Rep, 2020)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ORCA-Flash4.0 V3 digital CMOS camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>C13440-20CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD0325901</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0006-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Sansei medical co. Ltd</td>
			<td>01-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol (25:24:1)</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>311-90151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydimethylsiloxane (PDMS) elastomer</td>
			<td>Dow Corning Corp., MI, USA</td>
			<td>SILPOT 184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polyethylenimine MAX (MW. 40,000)</td>
			<td>Polyscience</td>
			<td>24765-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Positive photoresist developer</td>
			<td>Tokyo Ohka Kogyo Co., Ltd., Japan</td>
			<td>NMD-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerUp SYBR Green Master Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A25742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Takara</td>
			<td>9034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin Dihydrochloride</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>166-23153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human/Mouse/Rat Activin A Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>338-AC-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant trypsin-like protease (rTrypsin; TrypLE express)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12604-039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI1640 Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon wafer</td>
			<td>Matsuzaki Seisakusyo Co., Ltd., Japan</td>
			<td>N.A.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin-coater</td>
			<td>Mikasa Co., Ltd., Japan</td>
			<td>MS-A100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spininng confocal microscopy</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>Andor Dragonfly Spinning Disk System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemSure LIF, Mouse, recombinant, Solution (10^6U)</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>195-16053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU-8 3010</td>
			<td>Kayaku Advanced Materials, Inc., MA, USA</td>
			<td>SU-8 3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU-8 developer</td>
			<td>Kayaku Advanced Materials, Inc., MA, USA</td>
			<td>SU-8 developer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-EDTA</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>314-90021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular Endothelial Growth Factor-A165(VEGF), Human, recombinant</td>
			<td>Fujifilm wako</td>
			<td>226-01781</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sarcomere shortening of pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes using fluorescent-tagged sarcomere proteins.

Pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyositler (PSC-CM) hem embriyonik hem de indüklenmiş pluripotent kök (ES/iPS) hücrelerinden üretilebilir. Bu hücreler kardiyak hastalık modellemesi için umut verici kaynaklar sağlar. Kardiyomiyopatiler için sarkom kısaltma, yetişkin kardiyomiyositlerle hastalık fenotiplerini incelemek için kullanılan standart fizyolojik değerlendirmelerden biridir. Bununla birlikte, mevcut yöntemler PSC-CM'lerin sözleşmelliğini değerlendirmek için uygun değildir, çünkü bu hücreler faz kontrastlı mikroskopi altında görünmeyen az gelişmiş sarkomlara sahiptir. Bu sorunu gidermek ve PSC-CM'ler ile sarkom kısaltması yapmak için floresan etiketli sarkomere proteinleri ve floresan canlı görüntüleme kullanılmıştır. İnce Z hatları ve bir M-hattı sırasıyla her iki uçta ve bir sarkomun merkezinde yer almaktadır. Z-line proteinler — α-Actinin (ACTN2), Teletonin (TCAP) ve aksin ilişkili LIM proteini (PDLIM3) — ve bir M-line protein — Myomesin-2 (Myom2) — floresan proteinlerle etiketlendi. Bu etiketli proteinler endojen alellerden knock-in olarak veya adeno ilişkili virüslerden (AAV' ler) ifade edilebilir. Burada fare ve insan pluripotent kök hücrelerini kardiyomiyositlere ayırt etme, AAV üretme, canlı görüntüleme yapma ve analiz etme yöntemlerini tanıtıyoruz. Ayrıca, floresan etiketli proteinlerle sarkom kısaltmasının analizini kolaylaştıran PSC-CM'lerin desenli kültürü için polidimetilsiloksan (PDMS) pulları üretme yöntemlerini de açıklıyoruz. Sarkom kısaltmasını değerlendirmek için, dayak hücrelerinin hızlandırılmış görüntüleri elektriksel uyarım (0,5-1 Hz) altında yüksek kare hızında (saniyede 50-100 kare) kaydedildi. Hücre kasılması boyunca sarkom uzunluğunu analiz etmek için, kaydedilen zaman atlamalı görüntüler ImageJ / Fiji için bir eklenti olan SarcOptiM'e tabi tutuldu. Stratejimiz, PSC-CM'lerdeki kardiyak hastalık fenotiplerini araştırmak için basit bir platform sağlar.

Darbeli PSC-CMs muhabir hatları kullanılarak sarkom kısaltması ölçülüyor. Sarkom kısaltmayı ölçmek için sarkom etiketli PSC-CM'ler kullanıldı. Hatlar myom2-RFP ve ACTN2-mCherry'yi endojen lociden ifade eder. TagRFP Myom2'yeeklendi , M-hattına lokalize olan M-proteinleri kodlarken, mCherry ACTN2'ye,Z-line18,25'eyerelleştiren α-Actinin kodlamasına girildi. Şekil 1 ve 2 <...

Watch this Scientific Journal Video about Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins. at JoVE.com

Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins.

Bu yöntem, floresan etiketli sarkomere proteinleri ile pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositler kullanarak sarkomere kısaltmasını incelemek için kullanılabilir.

Floresan Etiketli Sarkom Proteinleri kullanılarak Pluripotent Kök Hücre Türevli Kardiyomiyositlerin Sarkomer Kısaltılması.

Pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (PSC-CMs) can be produced from both embryonic and induced pluripotent stem (ES/iPS) cells. These cells ...

Pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositlerde sarkomer fonksiyonunu az gelişmiş ve dağınık sarkomerleri nedeniyle değerlendirmek zordur. Floresan etiketli sarkom proteinlerini kullanarak artık sarkom kısaltmaya erişebiliriz. Sarkomları görselleştirebilir ve kök hücreden türetilmiş kardiyomiyositler ve floresan etiketli sarkomere proteinleri kullanarak in vitro işlevlerini değerlendirebiliriz.AAV tabanlı transdüksiyon kullanarak, yöntemi herhangi bir hasta kaynaklı indüklenmiş pluripotent kök hücreye genişletebiliriz. Bu yöntem kardiyomiyopati tedavisinin gelişimine genişletilebilir, çünkü hastalığa bağlı sarkom disfonksiyon in vitro'yu doğrudan değerlendirmek için kullanılabilir. Bu yöntem pediatrik kardiyoloji çalışması da dahil olmak üzere kardiyoloji alanında yararlıdır.Bununla birlikte, miyopati gibi iskelet kas disfonksiyonu çalışmasına da uygulanabilir. Diferansiyon indüksiyonunun eksi dört gününde, PBS'de 37 santigrat derecede 30 dakikalık bir inkübasyon ve% 5 karbondioksit için seyreltilmiş santimetrekare başına 0,5 mikrogram laminin-511 E8 ile altı kuyulu bir plakayı kaplar. Kuluçkanın sonuna yaklaşırken, insan kaynaklı pluripotent kök hücreleri rekombinant tripsin ile 37 santigrat derecede üç dakika boyunca tedavi edin.Hücreler ayrıldığında, hücreleri sayım için% 10 FBS ile desteklenmiş ortama hasat edin ve hücreleri santrifüjlemeden sonra laminin-511 E8 ve ROCK inhibitörü ile desteklenmiş iki mililitre AK02N ortamı başına 1,25 çarpı 10'da beşinci hücrelere yeniden biriktirin. Daha sonra, altı kuyu plakasının her kuyusundan kaplama çözeltisini epire edin ve her kuyuya iki mililitre hücre tohumlayın. Plakayı hücre kültürü inkübatörüne döndürün.Dört gün sonra, hücreler% 80 izdiah eder. Farklılaşmayı teşvik etmek için kuyu başına GSK-3 inhibitörü ile desteklenmiş insülin ortamı olmadan her kuyudaki süpernatantı iki mililitre RPMI artı B27 ile değiştirin. İki günlük farklılaşmadan sonra, iyi başına kirpi inhibitörü ile desteklenmiş insülin ortamı olmadan ortamı iki mililitre RPMI artı B27 ile hafifçe değiştirin.Hücreler %100 konfluense ulaşmalıydı. Farklılaşmanın dördüncü gününde, süpernatantları kuyu başına insülin olmadan iki mililitre RPMI artı B27 ile hafifçe değiştirin. Hücreler yüksek yoğunlukta kalmalı ve bazıları yüzmeye başlamış olabilir.Farkların yedinci ve dokuzuncu gününde, her kuyudaki süpernatantı iki mililitre RPMI artı B27 ile seçici pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyosit kültürü için püromisitin ile desteklenmiş insülin ile değiştirin. Bu noktada kültürler içinde dayak hücreleri gözlemlenmelidir. Desenli pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyosit kültürünü ayarlamak için, önce özel yapım PDMS damgasının yüzeyindeki tozları temizlemek için ondalık bant kullanın ve damgayı kısaca% 70 etanol içine batırın.Etanol'ü damga yüzeyinden çıkarmak için bir hava tozlayıcı kullanın ve yüzeyi% 0,5 MPC polimer ve etanolden beş ila 10 mikrolitre ile muamele edin. Polimer tamamen kuruduğunda, damgayı 35 milimetrelik bir görüntüleme kabındaki polimer kapak kapağına yerleştirin ve damgaya bir ağırlık yerleştirin. 10 dakika sonra, desenin kapak kılıfına aktarıldığını onaylamak için hafif bir mikroskop kullanın ve kabı ve örtü kapağı pbs ile iki kez yıkayın.İkinci yıkamadan sonra, kapak sapını oda sıcaklığında iki ila dört saatlik bir inkübasyon için% 0,1 jelatin ile seyreltilmiş santimetrekare laminin-511 E8 santimetrekare başına 0,5 ila bir mikrogramla kaplayın. Farklılaşmanın 10. gününde, hücreleri PBS ile iki kez yıkayın, ardından 37 santigrat derecede üç ila beş dakika boyunca kuyu başına bir mililitre rekombinant tripsin ile tedavi edin. Saydıktan sonra, hücreleri 2,5 ila beş çarpı 10'da RPMI artı B27 mililitresi başına beşinci hücrelere puromycin konsantrasyonu ile desteklenmiş insülin ile yeniden depolayın ve 37 santigrat derecede bir gecede inkübasyon için bir mililitre hücreyi tabağa tohumlayın.Ertesi sabah, süpernatantı taze RPMI artı B27 ile puromycin ile desteklenmiş insülinle değiştirin ve hücreleri hücre kültürü inkübatörüne geri döndürün, görüntüleme için 21 ila 28 gün arasında haftada iki ila üç kez ortayı yenileyin. PCCSM kültürlerinde sarkom kısaltmasının hızlandırılmış görüntülemesi için, floresan konfokal mikroskobun 100 kat objektif lensine yağ uygulayın ve ilgili yazılımda canlı görüntüleme koşullarını seçin. İyi temsili veriler elde etmek için en yüksek kare hızını seçin, deklanşörü açılacak şekilde ayarlayın ve zaman atlamalı görüntüleme sırasında görüntüler arasında en kısa aralıkları elde etmek için alım alanının bir mahsulüne dörte dört binning uygulayın.Hücrelerin dayak oranı düşükse, hücreleri elektrik alanı stimülasyonu ile uyandırın ve görüntüleme sırasında görüntülenen alanın odakta kalmasına dikkat ederek zaman atlamalı kaydı başlatın. Görüntüleme süresinin sonunda, zaman atlamalı görüntüleri uygun bir klasöre kaydedin. Zaman atlamalı görüntüleri analiz etmek için ImageJ'e bir dizi zaman atlamalı görüntü açın ve sarkom deseni net bir şekilde gözlemleninceye kadar görüntülerin parlaklığını ve kontrastını ayarlayın.Diğer Araçlar menüsünde SarcOptiM'i seçin ve programı kalibre etmek için yönergeleri kullanmak için Control Shift P'ye ve araç çubuğundaki bir mikron düğmesine basın. Daha sonra sarkom kısaltmasını ölçmek için kullanılacak sarkanın bölgesi boyunca bir çizgi çizin ve sarkom kısaltma analizine başlamak için Tek Hücreli AVI'yi tıklayın. Sarkom etiketli, desenli pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositlerin zaman atlamalı görüntülemesi, farklı zaman noktalarında sarkom kısaltmasını ölçmek için kullanılabilir.Tipik olarak desenli pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyosit kültürlerinde gözlenen sarkom disorganizasyonunun üstesinden gelmek için, desenli olmayan bir alanda kültürlenen hücrelere kıyasla uzun bir hücre şeklini ve daha düzenli bir sarkom desenini destekleyen çizgili bir desende desenli pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositleri kültüre etmek için belirli PDMS pulları kullanılabilir. Desenli kültürler ayrıca daha iyi bir hücre kasılmasını teşvik eder ve desen olmayan kültürlü hücrelere kıyasla pürüzsüz bir sarkom uzunluğu profili sağlar. AAV-transdüklenmiş desen pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyositler, transdüksiyon sonrası üç gün kadar erken bir zamanda desenli pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositler boyunca sarkolerik GFP sinyallerini ifade eder ve sarkode kasılma profillerini ölçmek için de kullanılabilir.Ayrıca, transdüksiyon sırasında blastisidin dirençli genin eklenmesi, desenli pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyosit seçimini% 90'ın üzerinde bir saflığa kolaylaştırmak için de kullanılabilir Daha kolay ve daha kaliteli bir görüntü analizini kolaylaştırmak için, doğrusal olarak hareket eden sarkomlara sahip bir alanın tanımlanması ve en yüksek kare hızında görüntü elde edilmesi esastır. Bu yöntemi kullanarak, hastalığa özgü, hasta kaynaklı iPS hücrelerinden elde edilen laboratuvar kardiyomiyositinde sarkom disfonksiyonunu incelemek için sarkom proteinlerinde olgunlaşmanın rolünü değerlendirebiliriz.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

Taze Cerrahi Örneklerden İzolasyon ve İnsan Ventriküler kardiyomiyositlerin Fonksiyonel Karakterizasyonu

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Muscular Dystrophy Patients: Efficient Integration-free Reprogramming of Urine Derived Cells

Musküler Distrofi Hastalarda gelen uyarılmış pluripotent kök hücrelerin oluşturulması: İdrar Türetilmiş Hücre Verimli Entegrasyonu-ücretsiz yeniden programlanması

Dystrophic cardiomyopathy is a poorly understood consequence of muscular dystrophy. Generating induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) from patients with ...

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

içinde Recombinase aracılı Kaset Borsası tarafından Rekombinant insan pluripotent kök hücreleri hızlı ve verimli Nesil<em&gt; AAVS1</em&gt; Odağı

Even with the revolution of gene-targeting technologies led by CRISPR-Cas9, genetic modification of human pluripotent stem cells&#160;(hPSCs)&#160;is ...

Isolation and Cultivation of Adult Rat Cardiomyocytes

Yalıtım ve yetişkin fare Cardiomyocytes tarımı

In an intact heart, adjacent cells influence adult cardiomyocytes. With the method of isolation and cultivation of adult cardiomyocytes, a precise ...

Targeted and Selective Treatment of Pluripotent Stem Cell-derived Teratomas Using External Beam Radiation in a Small-animal Model

Pluripotent kök hücre kaynaklı Teratomas Dış Beam radyasyon bir küçük-hayvan modelinde kullanarak hedeflenen ve seçici tedavisinde

The growing number of victims of &#34;stem cell tourism,&#34; the unregulated transplantation of stem cells worldwide, has raised concerns about the ...

Analyzing Oxygen Consumption Rate in Primary Cultured Mouse Neonatal Cardiomyocytes Using an Extracellular Flux Analyzer

Oksijen tüketim oranını bir hücre dışı akı Analyzer kullanarak birincil kültürlü fare yenidoğan Cardiomyocytes içinde analiz

Mitochondria and oxidative metabolism are critical for maintaining cardiac muscle function. Research has shown that mitochondrial dysfunction is an ...

In Vitro Assessment of Cardiac Function Using Skinned Cardiomyocytes

Derili Kardiyomiyositler Kullanarak Kardiyak Fonksiyonun İn Vitro Değerlendirilmesi

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring ...

Model of Ischemic Heart Disease and Video-Based Comparison of Cardiomyocyte Contraction Using hiPSC-Derived Cardiomyocytes

HiPSC Türetilmiş Kardiyomiyosit Kullanarak İskemik Kalp Hastalığı Modeli ve Kardiyomiyosit Kontraksiyonunun Video Tabanlı Karşılaştırılması

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with ...

Directed Induction of Retinal Organoids from Human Pluripotent Stem Cells

İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Retinal Organoidlerin Yönlendirilmiş İndüksiyonu

Retinal cell transplantation is a promising therapeutic approach, which could restore the retinal architecture and stabilize or even improve the visual ...