Name: patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

نشكر الجراحين وأخصائيي علم الأمراض في المستشفيات الجامعية في ليستر NHS Trust على توفير أنسجة الورم الجراحية التي تم استئصالها. نشكر أيضا منشأة الأنسجة داخل خدمات التكنولوجيا الحيوية الأساسية للمساعدة في معالجة الأنسجة وتجزؤ كتل أنسجة FFPE وKees Straatman لدعمها باستخدام Vectra Polaris. تم دعم وتمويل هذا البحث من قبل اتحاد Explant الذي يضم أربعة شركاء: جامعة ليستر ، ووحدة السموم MRC ، ومختبرات اكتشاف السرطان في المملكة المتحدة العلاجية ، و LifeArc. وقدم مركز CRUK-NIHR ليستر التجريبي لطب السرطان دعما إضافيا (C10604/A25151). تم توفير التمويل لجنرال موتورز، CD، وNA من قبل برنامج محفز سرطان الثدي الآن (2017NOVPCC1066)، الذي يدعمه التمويل من شركة فايزر.

1. جمع الأنسجة
<ol><li>بعد الجراحة، نقل عينات الورم البشري الطازجة إلى أنبوب يحتوي على 25 مل من متوسط الثقافة الطازجة (متوسط النسر المعدل في دولبيكو يكمله 4.5 غرام/ لتر من الجلوكوز وL-الجلوتامين + 1٪ (v/v) مصل عجل الجنين + 1٪ البنسلين-ستريبتومايسين) وتخزينها على الجليد. معالجة explant داخل 2 ساعة...

تصف هذه الورقة طرق توليد الأدوية وعلاجها وتحليلها وتسلط الضوء على مزايا المنصة كنظام نموذجي قبل السريري. ex vivo زراعة ورم استئصالها حديثا، والتي لا تنطوي على تفكيكها، ويسمح للاحتفاظ بنية الورم13،24، وبالتالي، والتفاعلات المكانية للمكونات الخلوية في TME وكذلك ?...

ويتطلب تطوير عوامل فعالة وآمنة مضادة للانسان نماذج مناسبة قبل السريرية يمكن أن توفر أيضا نظرة ثاقبة لآليات العمل التي يمكن أن تسهل تحديد المؤشرات الحيوية التنبؤية والدوائية. بين وبين التجانس داخل التومور1،2،3،4،5 و TME6،7،8،9،10،11،12 معروفة للتأثير على استجابات الأدوية المضادة للسرطان ، والعديد من نماذج السرطان الموجودة قبل السريرية مثل خطوط الخلايا ، organoids ، ونماذج الماوس ليست قادرة على استيعاب هذه الاستجابات بشكل كامل حاسم ملامح. النموذج "المثالي" هو النموذج الذي يمكن أن يلخص التفاعلات المكانية المعقدة للخلايا الخبيثة غير الخبيثة داخل الأورام وكذلك يعكس الاختلافات الإقليمية داخل الأورام. تركز هذه المقالة على PDEs كمنصة ناشئة يمكنها تلبية العديد من هذه المتطلبات13.
يرجع أول مثال على استخدام PDEs البشرية ، والمعروف أيضا باسم زراعة الهستو ، إلى أواخر الثمانينيات عندما قام هوفمان وآخرون بتوليد شرائح من الأورام البشرية الطازجة واستزراعها في مصفوفة الكولاجين14،15. وشمل ذلك إنشاء نظام ثقافة ثلاثي الأبعاد يحافظ على بنية الأنسجة، ويضمن الحفاظ على المكونات السترومالية وتفاعلات الخلايا داخل TME. دون تفكيك الورم الأصلي، هوفمان وآخرون16 بشرت نهجا جديدا للبحوث التحويلية، ومنذ هذا الوقت، وقد الأمثل العديد من المجموعات أساليب مختلفة explant بهدف الحفاظ على سلامة الأنسجة وتوليد بيانات دقيقة استجابة المخدرات17،18،19،20،21،22،24 ، على الرغم من أن بعض الاختلافات بين البروتوكولات واضحة. بتلر وآخرون المستزرعة explants في الإسفنج الجيلاتين للمساعدة في نشر المواد الغذائية والأدوية من خلال عينة20،21،25، في حين أن Majumder وآخرون خلق نظام بيئي الورم عن طريق زراعة explants على رأس مصفوفة تتكون من الورم والبروتينات سترومال في وجود مصل أوتولوجوس المستمدة من نفس المريض22، 23.
في الآونة الأخيرة ، وضعت مجموعتنا بروتوكولا يتم بموجبه إنشاء النباتات الخارجية عن طريق تجزئة الأورام إلى قطع بحجم 2 - 3 مم3- يتم وضعها بعد ذلك دون مكونات إضافية على أغشية نفاذية في واجهة الهواء السائل لنظام الثقافة24. وقد أظهرت هذه الدراسات العديدة مجتمعة أن PDEs تسمح بثقافة الأجزاء الحية السليمة من الأورام البشرية التي تحتفظ بالعمارة المكانية وعدم التجانس الإقليمي للأورام الأصلية. في التجارب الأصلية، كانت النباتات أو النباتات النسيجية تخضع عادة للتجانس بعد العلاج من المخدرات، وبعد ذلك تم تطبيق مختلف المقايسات الجدوى على عينات متجانسة مثل الهيدروجينيلترات المخدرات استجابة المقايسة20،21، و MTT (3-(6) - 2،5-ديفينيلتيترازوليوم بروميد) المقايسة ، وdhydrogenase اللاكتات المقايسة ، أو المقايسة القائمة على الريزازورين26،27،28 . التقدم الأخير في تقنيات تحليل نقطة النهاية ، وخاصة علم الأمراض الرقمي ، قد وسع الآن ذخيرة اختبارات نقطة النهاية والمقاسات التي يمكن إجراؤها على explants29،30. لتطبيق هذه التقنيات الجديدة، بدلا من التجانس، يتم إصلاح النباتات في الفورماليين، جزءا لا يتجزأ من البارافين (FFPE) ومن ثم تحليلها باستخدام تقنيات الاحتواء المناعي، مما يسمح التنميط المكاني. وقد تم توثيق أمثلة على هذا النهج لسرطان الرئة الخلايا غير الصغيرة (NSCLC)، وسرطان الثدي، سرطان القولون والمستقيم، وورم الظهارة المتوسطة النباتات التي بموجبها تلطيخ المناعية الكيميائية لعلامة الانتشار، Ki67، وعلامة أبوبتوتيك، مشقوق بولي ADP الريبوز بوليمراز (cPARP)، واستخدمت لرصد التغيرات في انتشار الخلايا وموت الخلية24،31،32،33،34.
متعددة immunofluorescence قابلة بشكل خاص للتنميط المكاني للاستجابات المخدرات في explants عند نقطة النهاية35. على سبيل المثال ، من الممكن قياس إعادة توطين وتوزيع مكاني لفئات محددة من الخلايا المناعية ، مثل الضامة أو الخلايا التائية ، داخل TME عند العلاج الدوائي13و36و37و38، والتحقيق فيما إذا كان العامل العلاجي يمكن أن يفضل الانتقال من "الورم البارد" إلى "الورم الساخن"39 . في السنوات الأخيرة ، ركزت هذه المجموعة على اشتقاق PDEs من أنواع الأورام المختلفة (NSCLC ، سرطان الكلى ، سرطان الثدي ، سرطان القولون والمستقيم ، سرطان الميلانوما) واختبار مجموعة من عوامل مضادة للسرطان بما في ذلك العلاج الكيميائي ، ومثبطات الجزيئات الصغيرة ، ومثبطات نقاط التفتيش المناعية (ICIs). وقد تم تحسين أساليب تحليل نقطة النهاية لتشمل تعدد المناعة للسماح بالتنميط المكاني للمؤشرات الحيوية من أجل الجدوى وكذلك المؤشرات الحيوية لمختلف مكونات TME.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>320099</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody Diluent / Block, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARD1001EA</td>
			<td>Antibody diluent/blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barnstead NANOpure Diamond</td>
			<td>Barnstead</td>
			<td></td>
			<td>Ultra Pure (UP) H2O machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid Monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7129</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Multiple Well Cell Culture Plates</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3516</td>
			<td>6 multiwell plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Dilactate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 x 17 mm Dish, Nunclon Delta</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>150350</td>
			<td>100 mm diameter dish for tissue culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (1x) Dubelcco&#39;s Modified Eagle Medium + 4.5 g/L D-Glucose + 110 mg/mL Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>10569-010</td>
			<td>Tissue culture medium (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>VWR</td>
			<td>360294H</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>Merck</td>
			<td>6522</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3609</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>CellPath</td>
			<td>RBC-0100-00A</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10500-064</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% Formaldehyde</td>
			<td>Fisher (Acros)</td>
			<td>119690010</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iGenix, microwave oven IG2095</td>
			<td>iGenix</td>
			<td>IG2095</td>
			<td>Microwave used for antigen retreival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Industrial methylated spirit (IMS)</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>199050</td>
			<td>99% Industrial Denatured Alcohol (IDA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InForm Advanced Image Analysis Software</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>InForm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Automated Vacuum Tissue Processor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Arcadia H and C</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Embedding wax bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica RM2125RT</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ST4040 Linear Stainer</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>H&#38;E stainer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GHS132-1L</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell Cell Culture Inserts, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m</td>
			<td>Merck Milipore</td>
			<td>PICMORG50</td>
			<td>Organotypic culture insert disc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novolink Polymer Detection System</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>RE7150-K</td>
			<td>DAB staining kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 480</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1500001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 520</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1487001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 570</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 620</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1495001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 650</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1496001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 690</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1497001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 780 / OPAL TSA-DIG Reagent</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1501001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent and TSA-DIG reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal Polymer HRP Ms Plus Rb, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARH1001EA</td>
			<td>HRP polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11548876</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhenoChart Whole Slide Contextual Viewer</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>PhenoChart</td>
			<td>Viewer software for scanned images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline Tablets</td>
			<td>Thermo Scientific Oxoid</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Plus Amplification Diluent</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1498</td>
			<td>Fluorophore diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36961</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Carrier</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>To load slides into Slide Carrier Hotel for scanning with Vectra Polaris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/3160/63</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide pellets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/4920/53</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tenatex Toughened Wax - Pink (500 g)</td>
			<td>KEMDENT</td>
			<td>1-601</td>
			<td>Dental wax surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Shandon Sequenza Slide Rack for Immunostaining Center</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10098889</td>
			<td>Holder for slides and slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Shandon Plastic Coverplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11927774</td>
			<td>Slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vecta Laboratories</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra Polaris Slide Scanner</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Vectra Polaris</td>
			<td>Slide scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>XYL050</td>
			<td>De-waxing agent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients

إن فهم مقاومة الأدوية ووضع استراتيجيات جديدة لتوعية السرطانات شديدة المقاومة يعتمدان على توافر نماذج مناسبة قبل السريرية يمكنها التنبؤ بدقة باستجابات المرضى. أحد عيوب النماذج الموجودة قبل السريرية هو عدم القدرة على الحفاظ على البيئة الدقيقة للورم البشري (TME) بشكل سياقي وتمثيل التغايرية داخل الرحم بدقة ، مما يحد من الترجمة السريرية للبيانات. وعلى النقيض من ذلك، من خلال تمثيل ثقافة الشظايا الحية للأورام البشرية، تسمح منصة التشميل المشتقة من المريض (PDE) بفحص استجابات الأدوية في سياق ثلاثي الأبعاد (ثلاثي الأبعاد) يعكس السمات المرضية والمعمارية للأورام الأصلية قدر الإمكان. وقد وثقت التقارير السابقة مع PDEs قدرة المنصة على التمييز بين العلاج الكيميائي الحسي من الأورام الكيميائية ، وقد ثبت أن هذا الفصل هو تنبؤي باستجابات المرضى لنفس العلاج الكيميائي. وفي الوقت نفسه، تتيح أجهزة مكافحة الأمراض الوراثية الفرصة لاستجواب السمات الجزيئية والوراثية والهسولوجية للأورام التي تتنبأ بالاستجابات الدوائية، وبالتالي تحديد المؤشرات الحيوية لتقسيم المرضى إلى طبقات فضلا عن النهج التدخلية الجديدة لتوعية الأورام المقاومة. هذه الورقة تقارير منهجية PDE بالتفصيل، من جمع عينات المرضى من خلال لتحليل نقطة النهاية. وهو يقدم وصفا مفصلا لأساليب الاشتقاق والثقافة التفسيرية ، وتسليط الضوء على الظروف المخصصة لأورام معينة ، عند الاقتضاء. لتحليل نقطة النهاية ، هناك تركيز على تعدد المناعة والتصوير متعدد الأطياف للتنميط المكاني للمؤشرات الحيوية الرئيسية داخل كل من المناطق الورمية والسترومالية. ومن خلال الجمع بين هذه الأساليب، يمكن توليد بيانات كمية ونوعية للاستجابة للأدوية يمكن ربطها بمختلف البارامترات الباثولوجية العيادية، وبالتالي يمكن استخدامها لتحديد العلامات البيولوجية.

يسمح التصوير متعدد الأطياف للأقسام النسيجية الملطخة ب mIF بتحديد مجموعات الخلايا الفردية وتحديد مكونات الورم والسترومال في TME(الشكل 2). التصوير متعدد الأطياف مفيد بشكل خاص لتحليل الأنسجة ذات الفلورة الذاتية العالية ، مثل الأنسجة ذات محتوى الكولاجين العالي ، لأنه يسمح بفك إ?...

Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

تصف هذه الورقة أساليب توليد العلاج الدوائي وتحليل النباتات المشتقة من المريض لتقييم استجابات أدوية الورم في نظام نموذج حي ومناسب للمريض قبل السريرية.

استئصال الورم المشتق من المريض كمنصة "حية" قبل السريرية للتنبؤ بمقاومة الأدوية لدى المرضى

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

النباتات المشتقة من المريض هي طريقة قصيرة الأجل توفر بيانات الاستجابة الفورية للأدوية التي يمكن أن تتنبأ بدقة بنتائج المرضى. تسمح منصات PD بفحص استجابات الأدوية في سياق ثلاثي الأبعاد يعكس السمات المرضية والمعمارية للأورام الإقليمية قدر الإمكان. لدى Explants القدرة على تقديم رؤى جديدة في عملية التمثيل الغذائي وآلية عمل الدواء وتسهيل تحديد المؤشرات الحيوية الدوائية الجديدة.قبل بدء التجربة، تنظيف جميع المعدات الجراحية مع 70٪ من محلول المشروبات الروحية الميثيلية الصناعية. ملء طبق ثقافة 10 سم مع 25 ملليلتر من المتوسط الطازج على الجليد. باستخدام ملاقط، نقل العينة على سطح شمع الأسنان واستخدام اثنين من شفرات الكسب غير المشروع الجلد لشريحة الأنسجة إلى شظايا من ما يقرب من 2-3 ملليمترات مكعبة.نقل explants في طبق 10 سم ووضع ست إلى تسع قطع من الأنسجة في أنبوب ملليلتر واحد يحتوي على 10٪ غير العازلة حل الفورمالاتين لاحتضان 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة. ملء العدد المطلوب من الآبار من لوحة بئر ستة مع 1.5 ملليلتر من المتوسطة الطازجة لكل بئر. ووضع ثقافة organotypic إدراج طبق في كل بئر بحيث يطفو على رأس المتوسطة.ضع ستة إلى تسعة نباتات خارجية على كل قرص إدراج وتخزينها لاحتضان 16 ساعة في حاضنة ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪ للسماح بالتعافي. في اليوم التالي، إضافة متوسطة جديدة والمخدرات إلى كل بئر من لوحة جديدة. تضمين بئر للتحكم في السيارة.عندما يتم إعداد جميع العلاجات الدوائية، استخدم الملاقط لنقل إدخال واحد إلى كل بئر من لوحة البئر الستة الجديدة لاحتضان 24 إلى 48 ساعة في حاضنة ثاني أكسيد الكربون. بعد العلاج من المخدرات، نقل الأقراص إلى ست لوحات بئر جديدة تحتوي على 10٪ الفورمالاتين. وإضافة بضع قطرات من 10٪ الفورمالين إلى الجزء العلوي من كل explant لضمان تغطية كاملة مع المثبت لمدة 24 ساعة من الحضانة في درجة حرارة الغرفة.في اليوم التالي، نقع عدد مناسب من الإسفنج الأنسجة الصغيرة في محلول ميثيلات الصناعية 70٪. ووضع الإسفنج داخل أشرطة الأنسجة. عندما يتم وضع جميع الإسفنج، نقل جميع explants من نفس حالة العلاج من المخدرات على اسفنجة واحدة مع الجانب المعالج المخدرات من كل explant الاتصال القرص إدراجها.وضع اسفنجة presoaked آخر على رأس كل explant وإغلاق كاسيت لتأمين explants في كاسيت. ثم غمر أشرطة في 70٪ المثيلة الصناعية الحل قبل الشروع في المعالجة النسيجية. بعد المسح الضوئي، قم بإجراء تحليل تدريبي وحمل عمليات المسح التي تحتوي على الطوابع للتدريب في برنامج التحليل المناسب.في طريقة عرض وضع واحد، انتقل من خلال الصور وحدد عمليات المسح الضوئي لتحليل والمسح الضوئي مع مضان جوهري. مع المسح الضوئي المضان الجوهري على وجهة نظر واحدة ، انقر فوق منتقي autofluorescence لرسم جزء على مساحة من الأنسجة غير الملطخة. انقر فوق علامات تحرير والألوان وأدخل أسماء العلامات في المربع المقترن بكل فلوروفور.انقر فوق إعداد الصور للسماح للبرنامج بطرح كثافة الفلورسينس الجوهري من جميع الصور التي تم تحميلها. انقر فوق خطوة أنسجة الشريحة أعلى الشاشة لفتح نافذة التدريب على تقسيم الأنسجة. في لوحة فئات الأنسجة، أدخل اسم كل فئة نسيج ليتم تقسيمها.انقر فوق رسم، لرسم المناطق حول مجموعات من الخلايا في فئة الأنسجة ذات الاهتمام. ثم انتقل إلى فئة الأنسجة التالية ورسم مناطق جديدة. عندما يتم تحديد جميع مناطق التدريب، استخدم مقسم أنسجة القطار، وانتظر حتى تستقر دقة التدريب.ربما إلى قيمة قريبة من 100٪ انقر فوق الجزء كله لتقسيم الأنسجة. بعد التحقق من جودة تجزئة الأنسجة، انقر فوق تقسيم الخلية وحدد المقصورات الخلوية لتقسيمها. لتكوين المكون النووي، استخدم شريط التمرير النموذجي للكثافة لضبط العتبة المستخدمة للكشف عن وحدات البكسل النووية.يتم توفير الملاحظات المباشرة من خلال نافذة المعاينة. لتقسيم مجموعات من بكسل النووية، في لوحة تقسيم المكونات النووية، حدد الزر الذي يصف أفضل نوعية تلطيخ من النوى واستخدام شريط التمرير لضبط حساسية تقسيم. ثم انقر فوق مقطع الكل لتقسيم كافة الصور.عندما يتم تقسيم جميع الصور، في لوحة الأنماط الظاهرية، أضف قائمة الأنماط الظاهرية ليتم اكتشافها وأدخل اسم الأنماط الظاهرية في مربع النص المقابل. انقر فوق تحرير الأنماط الظاهرية لتحديد خلية معينة وحدد النمط الظاهري المطابق في القائمة المنسدلة. بعد الانتهاء من اختيار للتدريب، انقر فوق المصنف القطار لتقييم نتيجة كل النمط الظاهري.المضي قدما مع النمط الظاهري جميع، حفظ المشروع وانقر فوق التصدير. حدد علامة التبويب تحليل الدفعة ثم قم بتحميل المشروع في خوارزمية الدفعة أو مربع المشروع. لتصدير الصور والجداول، حدد كافة المربعات في خيارات التصدير، وانقر فوق إضافة شرائح وتحميل كافة الصور التي تحتوي على الطوابع للدفعات المعدة مسبقا.ثم انقر فوق تشغيل إلى تحليل دفعة البدء من طابع واحد وتصدير البيانات المقابلة عندما تم الحصول عليها. التصوير متعدد الأطياف من الأنسجة EXPLANT NSCLC ملطخة لعلامات صلاحية الخلية، ويسمح لتحديد وphenotyping من مجموعات الخلايا الفردية، فضلا عن تحديد مكونات الورم والسترومال داخل البيئة المجهرية الورم explant. الأنسجة وتجزئة الخلايا من بقع علامة صلاحية الخلية صور متعددة الأطياف كما هو موضح، يمكن استخدامها لقياس موت الخلايا وانتشارها في explants المشتقة من المريض تعامل مع الأدوية ذات الأهمية.على سبيل المثال، في هذا التحليل، في عينات الأنسجة من الأورام المعالجة مع نيفولوماب، تم تحديد عدد أكبر من الخلايا المحتضرة مقارنة بعينات الورم المعالجة للتحكم. وبالإضافة إلى ذلك، كما هو موضح، فإن القدرة على استخراج المعلومات المكانية من التشريح الملون، تسمح بحساب المسافات بين الخلايا. يمكن أيضا استخدام النباتات السابقة في التنميط المكاني الواسع النطاق أو القياس الخلوي الشامل ، والذي يسمح بتصنيف مئات المؤشرات الحيوية في وقت واحد بدقة فرعية مع الحفاظ على البنية ثلاثية الأبعاد للعينة.يمكن أن تتنبأ أجهزة المساعدين الطبيين بفعالية العلاج المناعي. فعلى سبيل المثال، يمكن التمييز بين الحالات الحساسة أو المقاومة ومثبطات نقاط التفتيش المناعية والتحقيق في الآليات التي يقوم عليها هذا التمييز.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

تطوير وصيانة للورم المريض قبل السريرية المستمدة طعم أجنبي نموذج للتحقيق في رواية مكافحة السرطان العلاج

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

وضع العلامات لسرطان الثدي Xenografts المستمدة من المريض مع يمكن عزوها مراسلون لنمو الأورام والدراسات الانبثاث

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

نماذج Xenograft المتوارثية المستمدة من المريض لسرطان الخلايا البولية البشرية ونمو ورم سرطان القولون والمستقيم وورم الانبثاث العفوي

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

نموذج Xenograft غير متجانس ة من سرطان البنكرياس المستمدة من المريض باستخدام يرقات سمك الحمار الوحشي كمضيفين للتقييم المقارن للأدوية

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

إنشاء نماذج Xenograft المستمدة من سرطان المعدة وخطوط الخلايا الأولية

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

تعزيز قابلية البقاء لثقافات الهيدروجيل Ex vivo 3D من Xenografts المستمدة من المريض في منصة Microfluidic Perfused

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

فحص المخدرات للمريض الأولي المشتقة الورم Xenografts في حمار وحشي

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

عالية الإنتاجية في المختبر المقايسة باستخدام الجهازيات الورم المستمدة من المريض

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

فحص المخدرات العضوية متعددة المعلمات للورم باستخدام تصوير الخلايا الحية واسع المجال للتحليل السائب والعضوي الفردي

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

زرع تقويم العظام للخلايا السرطانية المشتقة من المريض في الفئران يلخص سرطان القولون والمستقيم المتقدم

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...