Name: patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

Vi takker kirurger og patologer på University Hospitals of Leicester NHS Trust for at give kirurgisk resected tumorvæv. Vi takker også Histology facilitet inden for Core Biotechnology Services for hjælp med vævsbehandling og ræsning af FFPE væv blokke og Kees Straatman for støtte med brug af Vectra Polaris. Denne forskning blev støttet og finansieret af Explant Consortium bestående af fire partnere: University of Leicester, MRC Toxicology Unit, Cancer Research UK Therapeutic Discovery Laboratories og LifeArc. Der blev ydet yderligere støtte fra CRUK-NIHR Leicester Experimental Cancer Medicine Centre (C10604/A25151). Finansiering af GM, CD og NA blev ydet af Breast Cancer Now's Catalyst Programme (2017NOVPCC1066), som støttes af midler fra Pfizer.

1. Vævssamling
<ol><li>Efter operationen overføres nyopførte menneskelige tumorprøver til et rør, der indeholder 25 mL frisk kulturmedium (Dulbeccos modificerede Eagle medium suppleret med 4,5 g/L glukose og L-glutamin + 1% (v/v) fosterkalkale serum + 1% penicillin-streptomycin) og opbevares på is. Behandle explant inden for 2 timer af kirurgi i en steril klasse II hætte.</li>
</ol>2. Explant forberedelse
<ol><li>Rengør alt kirurgisk u...

Dette papir beskriver metoderne til generering, lægemiddelbehandling og analyse af PDEs og fremhæver fordelene ved platformen som et præklinisk modelsystem. Ex vivo dyrkning af en frisk resected tumor, som ikke indebærer dens dekonstruktion, giver mulighed for fastholdelse af tumor arkitektur13,24 og dermed de rumlige interaktioner af cellulære komponenter i TME samt intratumoral heterogenitet. Denne metode viser, hvordan det ved hjælp af en tumorspecifik m...

Udviklingen af effektive og sikre kræftmidler kræver passende prækliniske modeller, der også kan give indsigt i virkningsmekanismer, der kan lette identifikationen af prædiktive og farmakodynamiske biomarkører. Inter- og intratumor heterogenitet1,2,3,4,5 og TME6,7,8,9,10,11,12 er kendt for at påvirke anticancer narkotika svar, og mange eksisterende prækliniske kræft modeller såsom cellelinjer, organoider, og musemodeller er ikke i stand til fuldt ud at rumme disse afgørende Funktioner. En "ideel" model er en, der kan generobre de komplekse rumlige interaktioner af maligne med ikke-ondartede celler i tumorer samt afspejle de regionale forskelle inden for tumorer. Denne artikel fokuserer på PDF-filer som en ny platform, der kan opfylde mange af disse krav13.
Det første eksempel på brugen af menneskelige PDEs, også kendt som histokulturer, går tilbage til slutningen af 1980'erne, da Hoffman et al. genererede skiver af nyopførte menneskelige tumorer og dyrkede dem i en kollagenmatrix14,15. Dette indebar etablering af et 3D-kultursystem, der bevarede vævsarkitektur, hvilket sikrede vedligeholdelse af stromale komponenter og celleinteraktioner inden for TME. Uden at dekonstruere den oprindelige tumor, Hoffman et al.16 varslede en ny tilgang til translationel forskning, og siden denne tid, mange grupper har optimeret forskellige explant metoder med det formål at bevare væv integritet og generere nøjagtige lægemiddelrespon data17,18,19,20,21,22,23,24 , selv om nogle forskelle mellem protokollerne er tydelige. Butler et al. dyrkede explants i gelatine svampe til at hjælpe udbredelsen af næringsstoffer og narkotika gennem prøven20,21,25, mens Majumder et al. skabt en tumor økosystem ved dyrkning explants på toppen af en matrix bestående af tumor og stromale proteiner i overværelse af autolog serum stammer fra samme patient22, 23.
For nylig oprettede vores gruppe en protokol, hvorved explants genereres ved fragmentering af tumorer i 2 - 3 mm3-størrelsestykker, der derefter placeres uden yderligere komponenter på gennemtrængelige membraner ved luft-flydende interface af et kultursystem24. Tilsammen har disse talrige undersøgelser vist, at PDEs tillader kulturen af intakte, levende fragmenter af menneskelige tumorer, der bevarer den rumlige arkitektur og regionale heterogenitet af de oprindelige tumorer. I originale forsøg blev explants eller histokulturer normalt udsat for homogenisering efter lægemiddelbehandling, hvorefter der blev anvendt forskellige levedygtighedsanalyser på de homogeniserede prøver såsom histokulturlægemiddelrespons assay20,21, MTT (3-(6)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid) assay, laktat dehydrogenase assay, eller resazurin-baserede assay26,27,28 . Nylige fremskridt inden for endpointanalyseteknikker, især digital patologi, har nu udvidet repertoiret af endpointtests og -analyser, der kan udføres på explants29,30. For at anvende disse nye teknologier, i stedet for homogenisering, explants er fastsat i formalin, indlejret i paraffin (FFPE) og derefter analyseret ved hjælp af immunstaining teknikker, der tillader rumlig profilering. Eksempler på denne fremgangsmåde er blevet dokumenteret for ikke-småcellet lungekræft (NSCLC), brystkræft, kolorektal cancer, og lungehindekræft explants hvorved immunohistokemisk farvning for spredning markør, Ki67, og apoptotisk markør, kløvet poly-ADP ribose polymerase (cPARP), blev brugt til at overvåge ændringer i cellespredning og celledød24,31,32,33,34.
Multipelxet immunofluorescence er særligt modtagelig for rumlig profilering af lægemiddelresponser i explants ved slutpunkt35. For eksempel er det muligt at måle omfordeling og rumlig fordeling af specifikke klasser af immunceller, såsom makrofager eller T-celler, inden for TME ved lægemiddelbehandling13,36,37,38, og undersøge, om et terapeutisk middel kan favorisere overgangen fra "kold tumor" til "hot tumor"39 . I de senere år har denne gruppe fokuseret på afledning af PDEs fra forskellige tumortyper (NSCLC, nyrekræft, brystkræft, kolorektal cancer, melanom) og testning af en række anticancermidler, herunder kemoterapier, småmolekylehæmmere og immunkontrolpunkthæmmere (ICIs). Endpoint analysemetoder er blevet optimeret til at omfatte multiplexed immunofluorescence at tillade rumlig profilering af biomarkører for levedygtighed samt biomarkører for forskellige bestanddele af TME.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>320099</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody Diluent / Block, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARD1001EA</td>
			<td>Antibody diluent/blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barnstead NANOpure Diamond</td>
			<td>Barnstead</td>
			<td></td>
			<td>Ultra Pure (UP) H2O machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid Monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7129</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Multiple Well Cell Culture Plates</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3516</td>
			<td>6 multiwell plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Dilactate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 x 17 mm Dish, Nunclon Delta</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>150350</td>
			<td>100 mm diameter dish for tissue culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (1x) Dubelcco&#39;s Modified Eagle Medium + 4.5 g/L D-Glucose + 110 mg/mL Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>10569-010</td>
			<td>Tissue culture medium (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>VWR</td>
			<td>360294H</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>Merck</td>
			<td>6522</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3609</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>CellPath</td>
			<td>RBC-0100-00A</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10500-064</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% Formaldehyde</td>
			<td>Fisher (Acros)</td>
			<td>119690010</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iGenix, microwave oven IG2095</td>
			<td>iGenix</td>
			<td>IG2095</td>
			<td>Microwave used for antigen retreival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Industrial methylated spirit (IMS)</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>199050</td>
			<td>99% Industrial Denatured Alcohol (IDA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InForm Advanced Image Analysis Software</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>InForm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Automated Vacuum Tissue Processor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Arcadia H and C</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Embedding wax bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica RM2125RT</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ST4040 Linear Stainer</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>H&#38;E stainer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GHS132-1L</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell Cell Culture Inserts, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m</td>
			<td>Merck Milipore</td>
			<td>PICMORG50</td>
			<td>Organotypic culture insert disc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novolink Polymer Detection System</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>RE7150-K</td>
			<td>DAB staining kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 480</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1500001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 520</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1487001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 570</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 620</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1495001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 650</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1496001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 690</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1497001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 780 / OPAL TSA-DIG Reagent</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1501001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent and TSA-DIG reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal Polymer HRP Ms Plus Rb, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARH1001EA</td>
			<td>HRP polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11548876</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhenoChart Whole Slide Contextual Viewer</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>PhenoChart</td>
			<td>Viewer software for scanned images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline Tablets</td>
			<td>Thermo Scientific Oxoid</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Plus Amplification Diluent</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1498</td>
			<td>Fluorophore diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36961</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Carrier</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>To load slides into Slide Carrier Hotel for scanning with Vectra Polaris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/3160/63</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide pellets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/4920/53</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tenatex Toughened Wax - Pink (500 g)</td>
			<td>KEMDENT</td>
			<td>1-601</td>
			<td>Dental wax surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Shandon Sequenza Slide Rack for Immunostaining Center</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10098889</td>
			<td>Holder for slides and slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Shandon Plastic Coverplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11927774</td>
			<td>Slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vecta Laboratories</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra Polaris Slide Scanner</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Vectra Polaris</td>
			<td>Slide scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>XYL050</td>
			<td>De-waxing agent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients

En forståelse af resistens over for lægemidler og udvikling af nye strategier til at sensibilisere meget resistente kræftformer er afhængige af tilgængeligheden af egnede prækliniske modeller, der præcist kan forudsige patientens reaktioner. En af ulemperne ved eksisterende prækliniske modeller er den manglende evne til kontekstuelt at bevare det menneskelige tumormikromiljø (TME) og nøjagtigt repræsentere intratumoral heterogenitet, hvilket begrænser den kliniske oversættelse af data. I modsætning hertil, ved at repræsentere kulturen af levende fragmenter af menneskelige tumorer, den patient-afledte explant (PDE) platform tillader narkotika svar, der skal undersøges i en tre-dimensionel (3D) sammenhæng, der afspejler de patologiske og arkitektoniske træk ved de oprindelige tumorer så tæt som muligt. Tidligere rapporter med PDEs har dokumenteret platformens evne til at skelne kemosensitive fra chemoresistant tumorer, og det har vist sig, at denne adskillelse er forudsigende for patientens reaktioner på de samme kemoterapier. Samtidig giver PDEs mulighed for at afhøre molekylære, genetiske og histologiske træk ved tumorer, der forudsiger lægemiddelresponser og derved identificerer biomarkører til patient stratificering samt nye interventionelle tilgange til at sensibilisere resistente tumorer. Dette papir rapporterer PDE-metoden i detaljer, fra indsamling af patientprøver til endpoint-analyse. Det giver en detaljeret beskrivelse af explant afledning og kultur metoder, der fremhæver skræddersyede betingelser for bestemte tumorer, hvor det er relevant. Til endpointanalyse er der fokus på multiplexed immunofluorescence og multispektral billeddannelse til rumlig profilering af nøglebiomarkører inden for både tumorale og stromale regioner. Ved at kombinere disse metoder er det muligt at generere kvantitative og kvalitative lægemiddelresponsdata, der kan relateres til forskellige klinikopatologiske parametre og dermed potentielt bruges til biomarkøridentifikation.

Multispektral billeddannelse af mIF-farvede histologiske sektioner gør det muligt at identificere og fænotypiske individuelle cellepopulationer og identifikation af tumor- og stromalkomponenter i explant TME (figur 2). Multispektral billeddannelse er især nyttig til analyse af væv med høj iboende autofluorescence, såsom væv med et højt kollagenindhold, da det gør det muligt for autofluorescencesignalet at blive devoluteret fra andre signaler og udelukket fra efterfølgende analyse. ...

Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

Dette papir beskriver metoder til generering, lægemiddelbehandling og analyse af patientafledte explants til vurdering af tumormedicinresponser i et levende, patientrelevant, præklinisk modelsystem.

Patient-afledt tumor explants som en "Live" præklinisk platform til forudsigelse af resistens hos patienter

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

De patient-afledte explants er en kortsigtet metode giver øjeblikkelige lægemiddelresponsdata, der præcist kan forudsige patientens resultater. PD platforme gør det muligt at undersøge narkotika svar, der skal undersøges i en 3D-sammenhæng, der afspejler de patologiske og arkitektoniske træk ved de regionale tumorer så tæt som muligt. Explants har potentiale til at tilbyde ny indsigt i et lægemiddels metabolisme og virkningsmekanisme og lette identifikationen af nye farmakodynamiske biomarkører.Før du starter forsøget, skal du rengøre alt kirurgisk udstyr med 70% industriel methyleret spiritusopløsning. Fyld en 10 centimeter kulturskål med 25 milliliter frisk medium på is. Ved hjælp af pincet, overføre prøven på en dental voks overflade og bruge to hudtransplantation knive til at skære vævet i fragmenter på cirka to til tre kubik millimeter.Overfør explants i en 10 centimeter skål og læg seks til ni stykker af vævet i en en milliliter rør, der indeholder 10% ikke buffered formalin opløsning til en 24 timers inkubation ved stuetemperatur. Fyld det ønskede antal brønde af en seks brøndplade med 1,5 milliliter frisk medium pr. Brønd. Og læg en organotypic kultur indsætte parabol i hver brønd, så det flyder på toppen af mediet.Placer seks til ni explants på hver skær disk og opbevares i en 16 timers inkubation i en 5% kuldioxid inkubator for at tillade nyttiggørelse. Den næste dag, tilsæt frisk medium og stof til hver brønd af en ny plade. Medtag en brønd til køretøjets kontrol.Når alle lægemiddelbehandlinger er blevet forberedt, skal du bruge pincet til at overføre en indsats til hver brønd af den nye seks brøndplade til en 24 til 48 timers inkubation i kuldioxidinkubatoren. Efter lægemiddelbehandlingen overføres diskene til nye seks brøndplader, der indeholder 10% formalin. Og tilsæt et par dråber på 10% formalin til toppen af hver explant for at sikre fuldstændig dækning med fiksativt i 24 timers inkubation ved stuetemperatur.Den næste dag, blød et passende antal små histologi svampe i 70% industriel methyleret opløsning. Og læg svampene inde i histologikassetter. Når alle svampe er blevet placeret, overføre alle explants fra samme stofbehandling tilstand på en enkelt svamp med den behandlede stof behandling side af hver explant kontakte den indsatte disk.Placer en anden presoaked svamp på toppen af hver explant og lukke kassetten for at sikre explants i kassetten. Derefter nedsænke kassetterne i 70% industriel methyleret opløsning, før du fortsætter med den histologiske behandling. Efter scanning skal du udføre en træningsanalyse og indlæse scanningerne, der indeholder frimærkerne til træning, i den relevante analysesoftware.I visning i enkelttilstand skal du navigere gennem billederne og vælge de scanninger, der skal analyseres, og scanningen med iboende fluorescens. med den iboende fluorescensscanning på en enkelt visning skal du klikke på autofluorescenceplukkeren for at tegne et segment på et område med ufarvet væv. Klik på rediger mærker og farver, og angiv mærkenavnene i den boks, der er knyttet til hver fluorophor.Klik forberede billeder til at tillade softwaren at trække intensiteten af iboende fluorescens fra alle de uploadede billeder. Klik på segmentvævstrinnet øverst på skærmen for at åbne træningsvinduet for vævssegmentering. I panelet vævskategorier skal du angive navnet på hver vævskategori, der skal segmenteres.Klik på tegning for at tegne områder omkring grupper af celler i vævskategorien af interesse. Skift derefter til den næste vævskategori og tegn nye regioner. Når alle træningsregionerne er defineret, skal du bruge togvæv og vente på, at træningsnøjagtigheden afregner.Muligvis til en værdi tæt på 100% Klik segment alle til at segmentere væv. Når du har kontrolleret kvaliteten af vævssegmenteringen, skal du klikke på cellesegmentering og vælge de cellulære rum, der skal segmenteres. Hvis du vil konfigurere den nukleare komponent, skal du bruge den typiske intensitetsskyder til at justere den tærskel, der bruges til at registrere de nukleare pixel.Live feedback leveres af eksempelvinduet. Hvis du vil opdele klyngerne af nukleare pixels, skal du i det nukleare komponenters splittepanel vælge den knap, der bedst beskriver kernernes farvningskvalitet, og bruge skyderen til at justere opdelingsfølsomheden. Klik derefter på segmentet alle for at segmentere alle billederne.Når alle billederne er segmenteret, skal du i panelet fænotyper tilføje listen over fænotyper, der skal registreres, og indtaste navnet på fænotyperne i den tilsvarende tekstboks. Klik på rediger fænotyper for at markere en bestemt celle, og vælg den tilsvarende fænotype i rullemenuen. Når du har fuldført markeringen til træning, skal du klikke på togklasseringsklassen for at evaluere resultatet af hver fænotype.Fortsæt med fænotype alle, gemme projektet og klik eksport. Vælg fanen batchanalyse, og indlæs projektet i batchalgoritmen eller projektboksen. Hvis du vil eksportere billederne og tabellerne, skal du markere alle felterne i eksportindstillingerne, klikke på tilføj dias og indlæse alle de billeder, der indeholder frimærkerne for de tidligere forberedte batches.Klik derefter på kør til startbatchanalysen af ét stempel, og eksporter de tilsvarende data, når de er anskaffet. Multi-spektral billeddannelse af NSCLC explant væv farves til markører for celle levedygtighed, tillader identifikation og fænotypning af de enkelte cellepopulationer, samt identifikation af tumor og stromale komponenter inden for explant tumor mikro miljø. Væv og celle segmentering af celle levedygtighed markør pletter multi-spektrale billeder som påvist, kan bruges til at kvantificere celledød og spredning i patientens afledte explants behandlet med lægemidler af interesse.For eksempel blev der i denne analyse i vævsprøver fra tumorer behandlet med Nivolumab identificeret et højere antal døende celler sammenlignet med de kontrolbehandlede tumorprøver. Hertil kommer, som illustreret, evnen til at udtrække rumlige oplysninger fra farvede dissektioner, tillader beregning af intercell afstande. Explants kan også bruges til omfattende rumlig profilering eller massecytometri, som gør det muligt at profilere hundredvis af biomarkører samtidigt ved subsidiær opløsning, samtidig med at prøvens 3D-struktur bevares.PS'er kan forudsige effekten af immunterapi. For eksempel kan det være muligt at skelne følsomme eller resistente tilfælde til immunkontrolpunkthæmmere og undersøge de mekanismer, der ligger til grund for denne sondring.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Udvikling og vedligeholdelse af et præklinisk Patient Afledt Tumor xenograftmodel for undersøgelse af Novel Anti-Cancer Therapies

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Mærkning af Breast Cancer Patient-afledte Xenografter med Sporbare Journalister for tumorvækst og Metastase Studies

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patient afledte Ortotopiske xenograft-modeller til humant Urothelialt celle karcinom og kolorektal cancer tumor vækst og spontan metastase

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Patient-afledt heterogene xenograft model af kræft i bugspytkirtlen ved hjælp af Zebrafish larver som værter for sammenlignende Lægemiddelvurdering

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Etablering af gastrisk Cancer patient afledte xenograft-modeller og primære cellelinjer

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

Forbedret levedygtighed for Ex vivo 3D Hydrogel Kulturer af patient-afledte Xenografts i en perfunderet microfluidic platform

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Drug Screening af primære patient afledt tumor xenografts i Zebrafish

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay ved hjælp af patient-afledte tumor organoider

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

Multiparametrisk tumororganoid lægemiddelscreening ved hjælp af widefield levende cellebilleddannelse til bulk- og enkeltorganoidanalyse

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

Ortopisk implantation af patientafledte kræftceller hos mus rekapitulerer avanceret kolorektal cancer

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...