Name: patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

אנו מודים למנתחים ולפתולוגים בבתי החולים האוניברסיטאיים של לסטר NHS Trust על מתן רקמת גידול שנקטה בניתוח. אנו מודים גם למתקן ההיסטולוגיה בשירותי הליבה ביוטכנולוגיה על עזרה בעיבוד רקמות וחיתוך של בלוקי רקמת FFPE וקייס סטראטמן על תמיכה בשימוש ב- Vectra Polaris. מחקר זה נתמך ומומן על ידי קונסורציום Explant המורכב מארבעה שותפים: אוניברסיטת לסטר, היחידה טוקסיקולוגיה MRC, מחקר סרטן בריטניה מעבדות גילוי טיפולי, ו LifeArc. תמיכה נוספת ניתנה על ידי המרכז לרפואה ניסיונית לסרטן CRUK-NIHR לסטר (C10604/A25151). המימון ל- GM, CD ו- NA סופק על ידי תוכנית הזרז של סרטן השד עכשיו (2017NOVPCC1066), הנתמכת במימון פייזר.

1. איסוף רקמות
<ol><li>לאחר הניתוח, העבר דגימות גידול אנושי שנפלטו טריות לתוך צינור המכיל 25 מ"ל של מדיום תרבות טרי (המדיום הנשר שונה של Dulbecco בתוספת 4.5 גרם / L גלוקוז ו L-גלוטמין + 1% (v / v) סרום עגל עוברי + 1% פניצילין-סטרפטומיצין) ומאוחסן על קרח. לעבד את explant בתוך 2 שעות של ניתוח בברדס סטרילי בכי...

מאמר זה מתאר את שיטות הדור, הטיפול התרותי והניתוח של מחשבי כף יד ומדגיש את היתרונות של הפלטפורמה כמערכת מודל פרה-קלינית. פולחן Ex vivo של גידול שנפלט טרי, שאינו כרוך בפירוקו, מאפשר שימור של ארכיטקטורת הגידול13,24 ולכן, את האינטראקציות המרחביות של רכיבים תאיים ב- TME...

הפיתוח של סוכני נגד נגדים יעילים ובטוחים דורש מודלים פרה-אקליניים מתאימים שיכולים גם לספק תובנה על מנגנוני פעולה שיכולים להקל על זיהוי של סמנים ביולוגיים חזויים ופרמקודינמיים. בין-1,2,3,4,5 ו- TME6,7,8,9,10,11,12 ידועים כמשפיעים על תגובות תרופות נגד סרטן, ומודלים קיימים רבים של סרטן פרה-אקליני כגון קווי תאים, אורגנוידים ומודלים של עכבר אינם מסוגלים להכיל באופן מלא את אלה חיוניים תכונות. מודל "אידיאלי" הוא מודל שיכול לשחזר את האינטראקציות המרחביות המורכבות של ממאיר עם תאים לא ממאירים בתוך גידולים, כמו גם לשקף את ההבדלים האזוריים בתוך גידולים. מאמר זה מתמקד PDEs כפלטפורמה מתפתחת שיכולה למלא רבים מדרישות אלה13.
הדוגמה הראשונה לשימוש ב- PDEs אנושי, הידוע גם בשם היסטוקולטורות, מתוארכת לסוף שנות השמונים כאשר הופמן ואח 'יצרו פרוסות של גידולים אנושיים שנכרתו טריים ותרבלו אותם במטריצה קולגן14,15. זה היה כרוך בהקמת מערכת תרבית תלת-ממדית ששימרה את ארכיטקטורת הרקמות, והבטיחה שמירה על רכיבים סטרומיים ואינטראקציות תאים בתוך ה- TME. מבלי לפרק את הגידול המקורי, הופמן ואח '16 מבשרים על גישה חדשה של מחקר תרגום, ומאז, קבוצות רבות מיטבו שיטות הסבר שונות במטרה לשמור על שלמות הרקמה ולייצר נתוני תגובה מדויקים לתרופות17,18,19,20,21,22,23,24 למרות כמה הבדלים בין פרוטוקולים ניכרים., באטלר ואח ' explants תרבותית ספוגי ג'לטין כדי לעזור דיפוזיה של חומרים מזינים ותרופות באמצעות הדגימה20,21,25, ואילו מג'ומדר ואח 'יצר מערכת אקולוגית גידול על ידי culturing explants על גבי מטריצה המורכבת של גידול וחלבונים סטרומיים בנוכחות סרום אוטולוגי נגזר מאותו חולה22, 23.
לאחרונה, הקבוצה שלנו הקימה פרוטוקול לפיו explants נוצרים על ידי פיצול של גידולים לתוך 2 - 3 מ"מ3- חתיכות בגודל כי הם ממוקמים לאחר מכן ללא רכיבים נוספים על ממברנות חדירים בממשק אוויר נוזלי של מערכת תרבות24. יחד, מחקרים רבים אלה הוכיחו כי PDEs מאפשרים את התרבות של שלם, שברים חיים של גידולים אנושיים השומרים על הארכיטקטורה המרחבית וההטרוגניות האזורית של הגידולים המקוריים. בניסויים מקוריים, explants או histocultures היו בדרך כלל נתון הומוגניזציה בעקבות טיפול תרופתי, ולאחר מכן בדיקות קיימא שונות הוחלו על דגימות הומוגניות כגון אסאי תגובת התרופה היסטוקולטורה20,21, MTT (3-(6)-2,5-דיפנילטטרזוליום ברומיד) אסי, ההסתה של הלקטט דהידרוגנאז, או אסאי מבוסס רסזורין26,27,28 . ההתקדמות האחרונה בטכניקות ניתוח נקודות קצה, במיוחד פתולוגיה דיגיטלית, הרחיבו כעת את הרפרטואר של בדיקות נקודת קצה ובדיקות שניתן לבצע על explants29,30. כדי ליישם טכנולוגיות חדשות אלה, במקום הומוגניזציה, explants קבועים פורמלין, מוטבע פרפין (FFPE) ולאחר מכן מנותח באמצעות טכניקות חיסוניות, המאפשר פרופיל מרחבי. דוגמאות לגישה זו תועדו עבור סרטן ריאות תאים לא קטנים (NSCLC), סרטן השד, סרטן המעי הגס, ו explants mesothelioma לפיה כתמים אימונוהיסטוכימיים עבור סמן ההתפשטות, Ki67, ואת הסמן אפופטוטי, פולי-ADP פולימראז (cPARP), שימש לניטור שינויים התפשטות התא ומוות תאים24,31,32,33,34.
אימונופלואורסצנטיות מרובת קסים נוחה במיוחד ליצירת פרופיל מרחבי של תגובות סמים ב explants בנקודת קצה35. לדוגמה, ניתן למדוד את ההקצאה מחדש ואת ההתפלגות המרחבית של סוגים ספציפיים של תאים חיסוניים, כגון מקרופאגים או תאי T, בתוך TME על טיפול תרופתי13,36,37,38, ולחקור אם סוכן טיפולי יכול להעדיף את המעבר מ"גידול קר "ל"גידול חם"39 . בשנים האחרונות, קבוצה זו התמקדה בהפקת PDEs מסוגי גידולים שונים (NSCLC, סרטן כליות, סרטן השד, סרטן המעי הגס, מלנומה) ובדיקה של מגוון של חומרים נגד סרטן כולל כימותרפיה, מעכבי מולקולות קטנות, ומעכבי מחסום חיסוני (ICIs). שיטות ניתוח נקודות קצה עברו אופטימיזציה כדי לכלול אימונופלואורסצנטיות מרובת-קסים כדי לאפשר יצירת פרופיל מרחבי של סמנים ביולוגיים לצורך כדאיות, כמו גם סמנים ביולוגיים עבור מרכיבים שונים של TME.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>320099</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody Diluent / Block, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARD1001EA</td>
			<td>Antibody diluent/blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barnstead NANOpure Diamond</td>
			<td>Barnstead</td>
			<td></td>
			<td>Ultra Pure (UP) H2O machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid Monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7129</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Multiple Well Cell Culture Plates</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3516</td>
			<td>6 multiwell plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Dilactate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 x 17 mm Dish, Nunclon Delta</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>150350</td>
			<td>100 mm diameter dish for tissue culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (1x) Dubelcco&#39;s Modified Eagle Medium + 4.5 g/L D-Glucose + 110 mg/mL Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>10569-010</td>
			<td>Tissue culture medium (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>VWR</td>
			<td>360294H</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>Merck</td>
			<td>6522</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3609</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>CellPath</td>
			<td>RBC-0100-00A</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10500-064</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% Formaldehyde</td>
			<td>Fisher (Acros)</td>
			<td>119690010</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iGenix, microwave oven IG2095</td>
			<td>iGenix</td>
			<td>IG2095</td>
			<td>Microwave used for antigen retreival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Industrial methylated spirit (IMS)</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>199050</td>
			<td>99% Industrial Denatured Alcohol (IDA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InForm Advanced Image Analysis Software</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>InForm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Automated Vacuum Tissue Processor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Arcadia H and C</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Embedding wax bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica RM2125RT</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ST4040 Linear Stainer</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>H&#38;E stainer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GHS132-1L</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell Cell Culture Inserts, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m</td>
			<td>Merck Milipore</td>
			<td>PICMORG50</td>
			<td>Organotypic culture insert disc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novolink Polymer Detection System</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>RE7150-K</td>
			<td>DAB staining kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 480</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1500001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 520</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1487001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 570</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 620</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1495001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 650</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1496001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 690</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1497001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 780 / OPAL TSA-DIG Reagent</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1501001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent and TSA-DIG reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal Polymer HRP Ms Plus Rb, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARH1001EA</td>
			<td>HRP polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11548876</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhenoChart Whole Slide Contextual Viewer</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>PhenoChart</td>
			<td>Viewer software for scanned images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline Tablets</td>
			<td>Thermo Scientific Oxoid</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Plus Amplification Diluent</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1498</td>
			<td>Fluorophore diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36961</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Carrier</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>To load slides into Slide Carrier Hotel for scanning with Vectra Polaris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/3160/63</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide pellets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/4920/53</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tenatex Toughened Wax - Pink (500 g)</td>
			<td>KEMDENT</td>
			<td>1-601</td>
			<td>Dental wax surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Shandon Sequenza Slide Rack for Immunostaining Center</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10098889</td>
			<td>Holder for slides and slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Shandon Plastic Coverplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11927774</td>
			<td>Slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vecta Laboratories</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra Polaris Slide Scanner</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Vectra Polaris</td>
			<td>Slide scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>XYL050</td>
			<td>De-waxing agent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients

הבנה של עמידות לתרופות ופיתוח אסטרטגיות חדשניות לחש סרטן עמיד מאוד מסתמכים על זמינותם של מודלים פרה-אקליניים מתאימים שיכולים לחזות במדויק את תגובות המטופלים. אחד החסרונות של מודלים פרה-קליניים קיימים הוא חוסר היכולת לשמר בהקשר את מיקרו-וירוס הגידול האנושי (TME) ולייצג במדויק הטרוגניות תוך-אנושית, ובכך להגביל את התרגום הקליני של נתונים. לעומת זאת, על ידי ייצוג התרבות של שברים חיים של גידולים אנושיים, פלטפורמת explant נגזרת המטופל (PDE) מאפשרת לבחון תגובות סמים בהקשר תלת מימדי (3D) המשקף את התכונות הפתולוגיות והארכיטקטוניות של הגידולים המקוריים מקרוב ככל האפשר. דיווחים קודמים עם PDEs תיעדו את היכולת של הפלטפורמה להבחין בין כימוס רגישים לבין גידולים עמידים chemore, והוכח כי הפרדה זו מנבאת את תגובות המטופל לאותן כימותרפיות. במקביל, PDEs מאפשרים את ההזדמנות לחקור תכונות מולקולריות, גנטיות והיסתולוגיות של גידולים המנבאים תגובות לתרופות, ובכך לזהות סמנים ביולוגיים עבור ריבוד מטופלים, כמו גם גישות התערבותיות חדשניות לחש גידולים עמידים. מאמר זה מדווח על מתודולוגיית PDE בפירוט, מאיסוף דגימות מטופלים ועד לניתוח נקודות קצה. הוא מספק תיאור מפורט של שיטות נגזרות ותרבות, המדגיש תנאים מותאמים לגידולים מסוימים, במידת הצורך. לניתוח נקודות קצה, יש דגש על אימונופלואורסצנטיות מרובת מולטיפלקסים והדמיה רב-ספקטרלית ליצירת פרופיל מרחבי של סמנים ביולוגיים מרכזיים בתוך אזורים גידוליים ושטרומליים כאחד. על ידי שילוב שיטות אלה, ניתן לייצר נתוני תגובה כמותית ואיכותית לתרופות שיכולים להיות קשורים לפרמטרים קליניאופתולוגיים שונים ובכך עשויים לשמש לזיהוי סמן ביולוגי.

הדמיה רב-ספקטרלית של קטעים היסתולוגיים מוכתמים MIF מאפשרת זיהוי ופנוטיפינג של אוכלוסיות תאים בודדים וזיהוי של רכיבים סרטניים וסטרומליים ב- TME המהולל (איור 2). הדמיה רב-ספקטרלית שימושית במיוחד לניתוח רקמות עם אוטופלואורסצנטיות פנימית גבוהה, כגון רקמות עם תכולת קולגן גבוהה, ש?...

Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

מאמר זה מתאר שיטות לדור, טיפול תרופתי וניתוח של explants נגזרים על ידי המטופל להערכת תגובות לתרופות גידול במערכת מודל חי, רלוונטי למטופל, פרה-קלינית.

גידול שמקורו במטופל explants כפלטפורמה פרה-אקלינית "חיה" לחיזוי עמידות לתרופות בחולים

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

המסלקים שמקורם במטופלים הם שיטה לטווח קצר המספקת נתוני תגובה מיידיים לתרופות שיכולים לחזות במדויק את תוצאות המטופל. פלטפורמות PD מאפשרות לבחון תגובות תרופתיות בהקשר תלת-ממדי המשקף את המאפיינים הפתולוגיים והארכיטקטוניים של הגידולים האזוריים מקרוב ככל האפשר. Explants יש פוטנציאל להציע תובנות חדשניות על חילוף החומרים ומנגנון הפעולה של תרופה כדי להקל על זיהוי של סמנים ביולוגיים פרמקודינמיים חדשים.לפני תחילת הניסוי, נקו את כל הציוד הכירורגי עם פתרון 70% משקאות חריפים מתילאט תעשייתיים. מלאו צלחת תרבות של 10 ס"מ עם 25 מיליליטר של מדיום טרי על הקרח. באמצעות פינצטה, להעביר את הדגימה על משטח שעווה דנטלי ולהשתמש בשני להבי שתל העור לחתוך את הרקמה לרסיסים של כשני עד שלושה מילימטרים מעוקבים.מעבירים את explants לתוך צלחת 10 ס"מ ומניחים שש עד תשע חתיכות של הרקמה לתוך צינור מיליליטר אחד המכיל 10% פתרון פורמלין לא חוצץ עבור דגירה 24 שעות בטמפרטורת החדר. מלאו את המספר הרצוי של בארות של צלחת שש באר עם 1.5 מיליליטר של מדיום טרי לכל טוב. ומניחים תרבות אורגנוטיפית להכניס צלחת לתוך כל באר, כך שהוא צף על גבי המדיום.מניחים שישה עד תשעה explants על כל דיסק הכנס ולאחסן עבור דגירה 16 שעות בחממה 5% פחמן דו חמצני כדי לאפשר התאוששות. למחרת, להוסיף מדיום טרי וסם לכל באר של צלחת חדשה. כלול באר לבקרת הרכב.כאשר כל הטיפולים התרואתיים הוכנו, השתמש פינצטה להעביר תוספת אחת לכל באר של צלחת באר שש החדשה עבור דגירה 24 עד 48 שעות בחממה דו תחמוצת הפחמן. לאחר הטיפול התרואתי, העבר את הדיסקים לשש צלחות באר חדשות המכילות 10% פורמלין. ולהוסיף כמה טיפות של 10% פורמלין לחלק העליון של כל explant כדי להבטיח כיסוי מלא עם הקיבעון במשך 24 שעות של דגירה בטמפרטורת החדר.למחרת, להשרות מספר מתאים של ספוגים היסתולוגיים קטנים ב 70% פתרון מתילאט תעשייתי. ומניחים את הספוגים בתוך קלטות היסתולוגיה. כאשר כל הספוגים הונחו, להעביר את כל explants מאותו מצב טיפול תרופתי על ספוג יחיד עם התרופה מטופלת בצד של כל explant יצירת קשר עם הדיסק המוחדר.מניחים עוד ספוג ספוג מראש על גבי כל explant ולסגור את הקלטת כדי לאבטח את explants בקלטת. לאחר מכן תטביעו את הקלטות בפתרון מתיל תעשייתי של 70% לפני שתמשיכו בעיבוד ההסטולוגי. לאחר הסריקה, בצע ניתוח אימון וטען את הסריקות המכילות את הבולים להכשרה לתוכנת הניתוח המתאימה.בתצוגת מצב יחיד, נווט בין התמונות ובחר את הסריקות כדי לנתח את הסריקה עם פלואורסצנטיות מהותית. עם סריקת פלואורסצנטיות מהותית בתצוגה אחת, לחץ על בורר הפלואורסצנטיות האוטומטית כדי לצייר מקטע על אזור של רקמה לא נגועה. לחץ על ערוך סמנים וצבעים והזן את שמות הסמנים בתיבה המשויכת לכל פלואורופור.לחץ על להכין תמונות כדי לאפשר לתוכנה להפחית את עוצמת הפלואורסצנטיות המהותית מכל התמונות שהועלו. לחץ על שלב רקמת המקטע מעל המסך כדי לפתוח את חלון האימון של פילוח הרקמות. בחלונית קטגוריות הרקמות, הזן את השם של כל קטגוריית רקמה לפלח.לחץ על צייר, כדי לצייר אזורים סביב קבוצות של תאים בקטגוריית הרקמה של עניין. לאחר מכן עבור לקטגוריית הרקמה הבאה וצייר אזורים חדשים. כאשר כל אזורי האימון הוגדרו, השתמש במקטע רקמת הרכבת, והמתן לדיוק האימונים כדי להתיישב.אולי לערך קרוב ל 100%לחץ על פלח כל לפלח את הרקמות. לאחר אימות איכות פילוח הרקמות, לחץ על פילוח תאים ובחר את התאים הסלולריים לפלח. כדי להגדיר את הרכיב הגרעיני, השתמש במחוון העוצמה הטיפוסי כדי להתאים את הסף המשמש לזיהוי הפיקסלים הגרעיניים.משוב חי מסופק על-ידי חלון התצוגה המקדימה. כדי לפצל את אשכולות הפיקסלים הגרעיניים, בלוח הפיצול של הרכיבים הגרעיניים, בחר את הלחצן המתאר בצורה הטובה ביותר את איכות הכתמים של הגרעינים והשתמש בסרגל המחוון כדי להתאים את רגישות הפיצול. לאחר מכן לחץ על פלח שוק הכל כדי לפלח את כל התמונות.כאשר כל התמונות כבר פלחו, בלוח phenotypes, להוסיף את רשימת פנוטיפים להיות מזוהה ולהזין את השם של פנוטיפים לתוך תיבת הטקסט המתאימה. לחץ על ערוך פנוטיפים כדי לבחור תא מסוים ולבחור את הפנוטיפ המתאים בתפריט הנפתח. לאחר השלמת הבחירה להכשרה, לחץ על מסווג הרכבת כדי להעריך את התוצאה של כל פנוטיפ.המשך עם פנוטיפ הכל, שמור את הפרוייקט ולחץ על ייצוא. בחר בכרטיסיה ניתוח אצווה וטען את הפרוייקט באלגוריתם האצווה או בתיבת הפרוייקט. כדי לייצא את התמונות והטבלאות, בחר את כל התיבות באפשרויות הייצוא, לחץ על הוסף שקופיות וטען את כל התמונות המכילות את הבולים עבור האצוות שהוכנו בעבר.לאחר מכן לחץ על הפעל אל ניתוח אצוות ההתחלה של חותמת אחת וייצוא הנתונים המתאימים כאשר הם נרכשו. הדמיה רב-ספקטרלית של רקמת הסבר NSCLC מוכתמת בסמנים של כדאיות התא, מאפשרת זיהוי ופנוטיפינג של אוכלוסיות תאים בודדים, כמו גם זיהוי של רכיבים גידוליים וסטרומליים בתוך הסביבה מיקרו הגידול explant. פילוח רקמות ותאים של סמן הכדאיות התא מכתים תמונות מרובות ספקטרליות כפי שהודגם, ניתן להשתמש כדי לכמת מוות תאים והתפשטות ב explants נגזר המטופל שטופלו בתרופות מעניינות.לדוגמה, בניתוח זה, בדגימות רקמה מגידולים שטופלו ב- Nivolumab, זוהו מספר גבוה יותר של תאים גוססים בהשוואה לדגימות הגידול שטופלו בקרה. בנוסף, כפי שמודגם, היכולת לחלץ מידע מרחבי מנתוחים מוכתמים, מאפשרת חישוב של מרחקים בין-עירוניים. Explants יכול לשמש גם ליצירת פרופיל מרחבי נרחב או ציטומטריה המונית, המאפשרת למאות סמנים ביולוגיים להיות בפרופיל בו זמנית ברזולוציית חברת הבת תוך שמירה על המבנה 3D של המדגם.PDs יכול לחזות את היעילות של אימונותרפיה. לדוגמה, ניתן להבחין בין מקרים רגישים או עמידים למעכבי מחסום חיסוני ולחקור את המנגנונים העומדים בבסיס הבחנה זו.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

פיתוח ותחזוקה של גידול נגזר החולה פרה xenograft דגם לחקירת Novel טיפולים נגד סרטן

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

תיוג של xenografts הנגזר חולה סרטן השד עם כתבים לעקיבים עבור צמיחת גידולים וגרורים מחקרים

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

מטופל-נגזר אורתוטופית מודלים של תאים האדם Urothelial קרצינומה של סרטן המעי הגס ואת הגידול גרורות ספונטנית

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

מטופל-נגזר הטרוגנית מודל Xenograft של סרטן הלבלב באמצעות הזחלים Zebrafish כפונדקאים עבור הערכת סמים השוואתי

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

הקמת החולה סרטן קיבה-מודלים נגזרים הנגזרות וקווי התא הראשי

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

קיימות משופרת עבור תרבויות הידרוג'ל 3D Ex vivo של Xenografts נגזר המטופל בפלטפורמה מיקרופלויד perfused

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

הקרנת התרופה של החולה העיקרי הנגזר גידול Xenografts ב Zebrafish

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

תפוקה גבוהה במבחנה במבחנה באמצעות organoids גידול נגזר המטופל

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

בדיקת תרופות אורגנואידיות של גידולים רב-פרמטריים באמצעות הדמיית תאים חיים של Widefield לניתוח בתפזורת ואורגנואיד יחיד

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

השתלה אורתוטופית של תאים סרטניים שמקורם בחולה בעכברים משחזרת סרטן מעי גס מתקדם

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...