Name: patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

हम सर्जिकल पुनः प्राप्त ट्यूमर ऊतक प्रदान करने के लिए लीसेस्टर एनएचएस ट्रस्ट के विश्वविद्यालय अस्पतालों में सर्जन और रोगविज्ञानियों का शुक्रिया अदा करते हैं । हम वेक्ट्रा पोलारिस के उपयोग के समर्थन के लिए ऊतक प्रसंस्करण और एफएफपीई ऊतक ब्लॉकों और कीस स्ट्रैटमैन की अनुभागिंग के साथ मदद के लिए कोर बायोटेक्नोलॉजी सेवाओं के भीतर हिक्टोलॉजी सुविधा का भी धन्यवाद करते हैं। इस शोध का समर्थन किया गया था और चार भागीदारों को शामिल करते हुए Explant कंसोर्टियम द्वारा वित्त पोषित किया गया था: लीसेस्टर विश्वविद्यालय, एमआरसी टॉक्सिकोलॉजी यूनिट, कैंसर रिसर्च यूके चिकित्सीय डिस्कवरी प्रयोगशालाएं, और लाइफआरआरसी। CRUK-NIHR लीसेस्टर प्रायोगिक कैंसर चिकित्सा केंद्र (C10604/A25151) द्वारा अतिरिक्त सहायता प्रदान की गई थी । जीएम, सीडी, और एनए के लिए धन स्तन कैंसर अब उत्प्रेरक कार्यक्रम (2017NOVPCC1066) द्वारा प्रदान किया गया था, जो फाइजर से धन द्वारा समर्थित है ।

1. ऊतक संग्रह
<ol><li>सर्जरी के बाद, ताजा संस्कृति माध्यम के 25 एमएल युक्त ट्यूब में ताजा पुनः प्राप्त मानव ट्यूमर नमूनों को स्थानांतरित करें (दुलबेको का संशोधित ईगल माध्यम 4.5 ग्राम/एल ग्लूकोज और एल-ग्ल?...

यह पेपर पीडीई के उत्पादन, दवा उपचार और विश्लेषण के तरीकों का वर्णन करता है और मंच के फायदों को एक प्रीक्लिनिकल मॉडल सिस्टम के रूप में उजागर करता है। एक हौसले से पुनः प्राप्त ट्यूमर की पूर्व वीवो संस्कृत...

प्रभावी और सुरक्षित कैंसर रोधी एजेंटों के विकास के लिए उपयुक्त प्रीक्लिनिकल मॉडल की आवश्यकता होती है जो कार्रवाई के तंत्र में अंतर्दृष्टि भी प्रदान कर सकते हैं जो भविष्य कहनेवाला और फार्माकोडायनामिक बायोमार्कर की पहचान की सुविधा प्रदान कर सकते हैं। अंतर और इंट्राट्यूमर विषमता1,2,3,4,5 और टीएमई6,7,8,9,10,11, 12कैंसर रोधी दवा प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करने के लिए जाने जाते हैं, और सेल लाइनों, ऑर्गेनॉइड और माउस मॉडल जैसे कई मौजूदा प्रीक्लिनिकल कैंसर मॉडल पूरीतरह से इन महत्वपूर्ण महत्वपूर्ण को समायोजित करने में सक्षम नहीं हैं सुविधाऐं। एक "आदर्श" मॉडल एक है कि ट्यूमर के भीतर गैर घातक कोशिकाओं के साथ घातक के जटिल स्थानिक बातचीत संक्षिप्त कर सकते है और साथ ही ट्यूमर के भीतर क्षेत्रीय मतभेदों को प्रतिबिंबित । यह लेख पीडीई पर एक उभरते मंच के रूप में केंद्रित है जो इनमें से कई आवश्यकताओं को पूरा कर सकता है13.
मानव पीडीई के उपयोग का पहला उदाहरण, जिसे हिस्टोकल्चर के रूप में भी जाना जाता है, 1 9 80 के दशक के उत्तरार्ध में है जब हॉफमैन एट अल ने हौसले से पुनः प्राप्त मानव ट्यूमर के स्लाइस उत्पन्न किए और उन्हें कोलेजन मैट्रिक्स14,15में सुसंस्कृत किया। इसमें एक 3 डी संस्कृति प्रणाली स्थापित करना शामिल था जो ऊतक वास्तुकला को संरक्षित करता है, जो टीएमई के भीतर स्ट्रोमल घटकों और सेल इंटरैक्शन के रखरखाव को सुनिश्चित करता है। मूल ट्यूमर को विघटित किए बिना, हॉफमैन एटअल16 ने ट्रांसलेशनल रिसर्च के एक नए दृष्टिकोण की शुरुआत की, और इस समय से, कई समूहों ने ऊतक अखंडता को संरक्षित करने और सटीक दवा प्रतिक्रिया डेटा17, 18, 19,20,21,22, 23,24बनाने के उद्देश्य से विभिन्न एक्सप्लांट तरीकों को अनुकूलित किया है। , हालांकि प्रोटोकॉल के बीच कुछ मतभेद स्पष्ट हैं । बटलर एट अल. नमूने के माध्यम से पोषक तत्वों और दवाओं के प्रसार में मदद करने के लिए जिलेटिन स्पंज में सुसंस्कृत explants20,21,25,जबकि मजूमडर एट अल. एक ही रोगी22से प्राप्त ऑटोलॉगस सीरम की उपस्थिति में ट्यूमर और स्ट्रोमल प्रोटीन से बना मैट्रिक्स के शीर्ष पर explants खेती द्वारा एक ट्यूमर पारिस्थितिकी तंत्र बनाया, 23.
हाल ही में, हमारे समूह ने एक प्रोटोकॉल स्थापित किया है जिससे ट्यूमर के विखंडन से 2-3 मिमी3आकार के टुकड़े उत्पन्न होते हैं जो तब संस्कृति प्रणाली24के वायु-तरल इंटरफ़ेस पर पारमीय झिल्ली पर अतिरिक्त घटकों के बिना रखे जाते हैं। एक साथ लिया, इन कई अध्ययनों से पता चला है कि पीडीई मानव ट्यूमर के अक्षुण्ण, जीवित टुकड़े की संस्कृति की अनुमति देते हैं जो स्थानिक वास्तुकला और मूल ट्यूमर की क्षेत्रीय विषमता को बनाए रखते हैं। मूल प्रयोगों में, एक्सप्लांट या हिस्टोकल्चर आमतौर पर दवा उपचार के बाद समरूपता के अधीन होते थे, जिसके बाद विभिन्न व्यवहार्यता परख को समरूप नमूनों जैसे हिस्टोकल्चर ड्रग रिस्पांस परख20,21,एमटीटी (3-(6) -2,5-डिफेनिल्टेट्राजोलम ब्रोमाइड) परख, लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज परख, या रेसज़िन आधारित परख26,27, 28परी के रूप में लागू किया गया था। . एंडपॉइंट विश्लेषण तकनीकों, विशेष रूप से डिजिटल पैथोलॉजी में हाल की प्रगति ने अब एंडपॉइंट परीक्षणों और परखों के प्रदर्शनों की सूची का विस्तार किया है जो29,30के एक्सप्लांट्स पर किया जा सकता है। इन नई प्रौद्योगिकियों को लागू करने के लिए, समरूपता के बजाय, पैराफिन (एफएफपीई) में एम्बेडेड फॉर्मेलिन में एक्सप्लांट तय किए जाते हैं और फिर इम्यूनोस्टेटिंग तकनीकों का उपयोग करके विश्लेषण किया जाता है, जिससे स्थानिक प्रोफाइलिंग की अनुमति होती है। इस दृष्टिकोण के उदाहरण गैर छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर (एनएससीएलसी), स्तन कैंसर के लिए प्रलेखित किया गया है, कोलोरेक्टल कैंसर, और मेसोथेलियोमा एक्सप्लांट्स जिससे प्रसार मार्कर, Ki67, और एपोप्टोटिक मार्कर, क्लीव्ड पॉली-एडीपी रिबोज़ पॉलीमरेज (सीपीआरपी) के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधला, सेल प्रसार औरसेल डेथ24,31, 32,33,34में परिवर्तन की निगरानी के लिए उपयोग किया गया था।
मल्टीप्लेक्स्ड इम्यूनोफ्लोरेसेंस विशेष रूप से एंडपॉइंट35पर एक्सप्लांट में दवा प्रतिक्रियाओं की स्थानिक प्रोफाइलिंग के लिए उत्तरदायी है। उदाहरण केलिए, दवा उपचार13, 36, 37, 38पर TME के भीतर प्रतिरक्षा कोशिकाओं के विशिष्ट वर्गों, जैसे मैक्रोफेज या टी कोशिकाओं के पुनर्लोकीकरण और स्थानिक वितरण को मापना संभव है, और जांच करना कि क्या एक चिकित्सीय एजेंट "कोल्ड ट्यूमर" से "हॉट ट्यूमर"39 में संक्रमण का पक्ष ले सकता है . हाल के वर्षों में, इस समूह ने विभिन्न ट्यूमर प्रकारों (एनएससीएलसी, गुर्दे का कैंसर, स्तन कैंसर, कोलोरेक्टल कैंसर, मेलानोमा) और कीमोथेरपी, छोटे-अणु अवरोधकों और प्रतिरक्षा चेकपॉइंट अवरोधकों (ICIs) सहित एंटीकैंसर एजेंटों की एक श्रृंखला के परीक्षण से पीडीई के व्युत्पन्न पर ध्यान केंद्रित किया है। टीएमई के विभिन्न घटकों के लिए व्यवहार्यता के साथ-साथ बायोमार्कर के स्थानिक प्रोफाइलिंग की अनुमति देने के लिए मल्टीप्लेक्स्ड इम्यूनोफ्लोरेसेंस को शामिल करने के लिए एंडपॉइंट विश्लेषण विधियों को अनुकूलित किया गया है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>320099</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody Diluent / Block, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARD1001EA</td>
			<td>Antibody diluent/blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barnstead NANOpure Diamond</td>
			<td>Barnstead</td>
			<td></td>
			<td>Ultra Pure (UP) H2O machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid Monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7129</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Multiple Well Cell Culture Plates</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3516</td>
			<td>6 multiwell plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Dilactate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 x 17 mm Dish, Nunclon Delta</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>150350</td>
			<td>100 mm diameter dish for tissue culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (1x) Dubelcco&#39;s Modified Eagle Medium + 4.5 g/L D-Glucose + 110 mg/mL Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>10569-010</td>
			<td>Tissue culture medium (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>VWR</td>
			<td>360294H</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>Merck</td>
			<td>6522</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3609</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>CellPath</td>
			<td>RBC-0100-00A</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10500-064</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% Formaldehyde</td>
			<td>Fisher (Acros)</td>
			<td>119690010</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iGenix, microwave oven IG2095</td>
			<td>iGenix</td>
			<td>IG2095</td>
			<td>Microwave used for antigen retreival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Industrial methylated spirit (IMS)</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>199050</td>
			<td>99% Industrial Denatured Alcohol (IDA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InForm Advanced Image Analysis Software</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>InForm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Automated Vacuum Tissue Processor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Arcadia H and C</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Embedding wax bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica RM2125RT</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ST4040 Linear Stainer</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>H&#38;E stainer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GHS132-1L</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell Cell Culture Inserts, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m</td>
			<td>Merck Milipore</td>
			<td>PICMORG50</td>
			<td>Organotypic culture insert disc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novolink Polymer Detection System</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>RE7150-K</td>
			<td>DAB staining kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 480</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1500001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 520</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1487001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 570</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 620</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1495001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 650</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1496001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 690</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1497001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 780 / OPAL TSA-DIG Reagent</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1501001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent and TSA-DIG reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal Polymer HRP Ms Plus Rb, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARH1001EA</td>
			<td>HRP polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11548876</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhenoChart Whole Slide Contextual Viewer</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>PhenoChart</td>
			<td>Viewer software for scanned images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline Tablets</td>
			<td>Thermo Scientific Oxoid</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Plus Amplification Diluent</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1498</td>
			<td>Fluorophore diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36961</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Carrier</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>To load slides into Slide Carrier Hotel for scanning with Vectra Polaris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/3160/63</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide pellets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/4920/53</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tenatex Toughened Wax - Pink (500 g)</td>
			<td>KEMDENT</td>
			<td>1-601</td>
			<td>Dental wax surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Shandon Sequenza Slide Rack for Immunostaining Center</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10098889</td>
			<td>Holder for slides and slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Shandon Plastic Coverplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11927774</td>
			<td>Slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vecta Laboratories</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra Polaris Slide Scanner</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Vectra Polaris</td>
			<td>Slide scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>XYL050</td>
			<td>De-waxing agent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients

दवा प्रतिरोध की समझ और अत्यधिक प्रतिरोधी कैंसर को जागरूक करने के लिए उपन्यास रणनीतियों का विकास उपयुक्त प्रीक्लिनिकल मॉडल की उपलब्धता पर भरोसा करता है जो रोगी प्रतिक्रियाओं की सटीक भविष्यवाणी कर सकते हैं। मौजूदा प्रीक्लिनिकल मॉडल के नुकसान में से एक मानव ट्यूमर माइक्रोएनवायरनमेंट (टीएमई) को प्रासंगिक रूप से संरक्षित करने में असमर्थता है और इंट्राट्यूमरल विषमता का सही प्रतिनिधित्व करता है, इस प्रकार डेटा के नैदानिक अनुवाद को सीमित करता है। इसके विपरीत, मानव ट्यूमर के जीवित टुकड़ों की संस्कृति का प्रतिनिधित्व करके, रोगी-व्युत्पन्न एक्सप्लांट (पीडीई) मंच दवा प्रतिक्रियाओं को त्रि-आयामी (3 डी) संदर्भ में जांच करने की अनुमति देता है जो मूल ट्यूमर की रोग और वास्तुशिल्प विशेषताओं को यथासंभव बारीकी से प्रतिबिंबित करता है। पीडीई के साथ पिछली रिपोर्टों ने केमोरिस्ट्रिस्ट ट्यूमर से केमोसेंसिटिव को अलग करने के लिए मंच की क्षमता का दस्तावेजीकरण किया है, और यह दिखाया गया है कि यह अलगाव एक ही कीमोथेरपी के लिए रोगी प्रतिक्रियाओं का भविष्य कहनेवाला है। इसके साथ ही, पीडीई दवा प्रतिक्रियाओं की भविष्यवाणी करने वाले ट्यूमर की आणविक, आनुवंशिक और हिस्टोलॉजिकल सुविधाओं से पूछताछ करने का अवसर देते हैं, जिससे प्रतिरोधी ट्यूमर को जागरूक करने के लिए रोगी स्तरीकरण के साथ-साथ उपन्यास इंटरवेंशनल दृष्टिकोणों के लिए बायोमार्कर की पहचान होती है। यह पेपर पीडीई पद्धति की विस्तार से रिपोर्ट करता है, रोगी के नमूनों के संग्रह से लेकर एंडपॉइंट विश्लेषण तक। यह एक्सप्लांट व्युत्पन्न और संस्कृति विधियों का विस्तृत विवरण प्रदान करता है, विशेष ट्यूमर के लिए बेस्पोक स्थितियों को रेखांकित करता है, जहां उचित हो। एंडपॉइंट विश्लेषण के लिए, ट्यूमर और स्ट्रोमल दोनों क्षेत्रों के भीतर प्रमुख बायोमार्कर के स्थानिक प्रोफाइलिंग के लिए मल्टीप्लेक्स्ड इम्यूनोफ्लोरेसेंस और मल्टीस्पेक्ट्रल इमेजिंग पर ध्यान केंद्रित किया गया है। इन तरीकों के संयोजन से, मात्रात्मक और गुणात्मक दवा प्रतिक्रिया डेटा उत्पन्न करना संभव है जो विभिन्न चिकित्सकीय मापदंडों से संबंधित हो सकता है और इस प्रकार संभावित रूप से बायोमार्कर पहचान के लिए उपयोग किया जा सकता है।

एमआईएफ-दाग हिस्टोलॉजिकल सेक्शन की मल्टीस्पेक्ट्रल इमेजिंग अलग-अलग सेल आबादी की पहचान और फेनोटाइपिंग और एक्सप्लांट टीएमई(चित्रा 2)में ट्यूमर और स्ट्रोमल घटकों की पहचान की अनुमति देती है। ?...

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Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

यह पेपर एक जीवित, रोगी-प्रासंगिक, प्रीक्लिनिकल मॉडल प्रणाली में ट्यूमर दवा प्रतिक्रियाओं का आकलन करने के लिए रोगी-व्युत्पन्न एक्सप्लांट के उत्पादन, दवा उपचार और विश्लेषण के तरीकों का वर्णन करता है।

रोगी में दवा प्रतिरोध की भविष्यवाणी के लिए एक "लाइव" प्रीक्लिनिकल मंच के रूप में रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर Explants

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

रोगी-व्युत्पन्न एक्सप्लांट एक अल्पकालिक विधि है जो तत्काल दवा प्रतिक्रिया डेटा प्रदान करती है जो रोगी परिणामों की सटीक भविष्यवाणी कर सकती है। पीडी प्लेटफॉर्म दवा प्रतिक्रियाओं को 3 डी संदर्भ में जांच करने की अनुमति देता है जो क्षेत्रीय ट्यूमर की रोग और वास्तुशिल्प विशेषताओं को यथासंभव बारीकी से प्रतिबिंबित करता है। एक्सप्लांट्स में दवा की कार्रवाई के मेटाबोलिज्म और तंत्र में उपन्यास अंतर्दृष्टि प्रदान करने और नए फार्माकोडायनामिक बायोमार्कर की पहचान को सुविधाजनक बनाने की क्षमता होती है।प्रयोग शुरू करने से पहले, 70% औद्योगिक मिथाइलेटेड स्पिरिट समाधान के साथ सभी सर्जिकल उपकरणों को साफ करें। बर्फ पर ताजा माध्यम के 25 मिलीलीटर के साथ एक 10 सेंटीमीटर संस्कृति पकवान भरें । चिमटी का उपयोग करना, एक दंत मोम की सतह पर नमूना हस्तांतरण और लगभग दो से तीन घन मिलीमीटर के टुकड़ों में ऊतक टुकड़ा करने के लिए दो त्वचा भ्रष्टाचार ब्लेड का उपयोग करें ।एक्सप्लांट्स को 10 सेंटीमीटर डिश में स्थानांतरित करें और ऊतक के छह से नौ टुकड़ों को एक मिलीलीटर ट्यूब में रखें जिसमें कमरे के तापमान पर 24 घंटे इनक्यूबेशन के लिए 10% गैर बफर फॉर्मेलिन समाधान होता है। एक छह अच्छी तरह से थाली के कुओं की वांछित संख्या को अच्छी तरह से १.५ मिलीलीटर ताजा माध्यम के साथ भरें । और एक ऑर्गैजोटिक कल्चर को प्रत्येक कुएं में पकवान डालें ताकि यह माध्यम के शीर्ष पर तैरता रहे।वसूली की अनुमति देने के लिए 5% कार्बन डाइऑक्साइड इनक्यूबेटर में 16 घंटे इनक्यूबेशन के लिए प्रत्येक डालने डिस्क और स्टोर पर छह से नौ एक्सप्लांट रखें। अगले दिन, एक नई थाली के प्रत्येक कुएं में ताजा माध्यम और दवा जोड़ें। वाहन नियंत्रण के लिए एक कुआं शामिल करें।जब सभी दवा उपचार तैयार किया गया है, चिमटी का उपयोग करने के लिए एक 24 से ४८ घंटे के लिए नई छह अच्छी तरह से थाली के प्रत्येक अच्छी तरह से हस्तांतरण कार्बन डाइऑक्साइड इनक्यूबेटर में इनक्यूबेशन । दवा उपचार के बाद, डिस्क को 10% फॉर्मेलिन युक्त नई छह अच्छी तरह से प्लेटों में स्थानांतरित करें। और कमरे के तापमान पर इनक्यूबेशन के 24 घंटे के लिए फिक्सेटिव के साथ पूर्ण कवरेज सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक एक्सप्लांट के शीर्ष पर 10% फॉर्मेलिन की कुछ बूंदें जोड़ें।अगले दिन, 70% औद्योगिक मिथाइलेटेड समाधान में छोटे हिस्टोलॉजी स्पंज की एक उचित संख्या सोख लें। और स्पंज को हिट्सोलॉजी कैसेट के अंदर रखें। जब सभी स्पंज रखे गए हैं, तो सभी एक्सप्लांट्स को एक ही दवा उपचार स्थिति से एक ही स्पंज पर स्थानांतरित करें, प्रत्येक एक्सप्लांट के इलाज की ओर से डाला डिस्क से संपर्क करें।प्रत्येक एक्सप्लांट के शीर्ष पर एक और प्रीसोक्ड स्पंज रखें और कैसेट में एक्सप्लांट को सुरक्षित करने के लिए कैसेट बंद करें। फिर हिस्टोलॉजिकल प्रोसेसिंग के साथ आगे बढ़ने से पहले 70% औद्योगिक मिथाइलेटेड समाधान में कैसेट को जलमग्न कर दें। स्कैनिंग के बाद, एक प्रशिक्षण विश्लेषण करें और उचित विश्लेषण सॉफ्टवेयर में प्रशिक्षण के लिए टिकटों वाले स्कैन लोड करें।एकल मोड दृश्य में, छवियों के माध्यम से नेविगेट करें और विश्लेषण करने के लिए स्कैन का चयन करें और आंतरिक फ्लोरेसेंस के साथ स्कैन करें। एक ही दृश्य पर आंतरिक फ्लोरेसेंस स्कैन के साथ, अन दागदार ऊतक के क्षेत्र पर एक खंड आकर्षित करने के लिए ऑटोफ्लोरेसेंस पिकर पर क्लिक करें। मार्कर और रंगों को संपादित करें और प्रत्येक फ्लोरोफोर से जुड़े बॉक्स में मार्कर नाम दर्ज करें।सॉफ्टवेयर को अपलोड की गई सभी छवियों से आंतरिक फ्लोरेसेंस की तीव्रता को घटाने की अनुमति देने के लिए छवियों को तैयार करने पर क्लिक करें। टिश्यू सेगमेंटेशन ट्रेनिंग विंडो खोलने के लिए स्क्रीन के टॉप पर सेगमेंट टिश्यू स्टेप पर क्लिक करें। ऊतक श्रेणियों पैनल में, प्रत्येक ऊतक श्रेणी के नाम को खंडित करने के लिए दर्ज करें।आकर्षित क्लिक करें, ब्याज की ऊतक श्रेणी में कोशिकाओं के समूहों के आसपास के क्षेत्रों को आकर्षित करने के लिए । फिर अगले ऊतक श्रेणी में स्विच करें और नए क्षेत्रों को आकर्षित करें। जब सभी प्रशिक्षण क्षेत्रों को परिभाषित किया गया है, ट्रेन ऊतक सेगमेंटर का उपयोग करें, और प्रशिक्षण सटीकता के लिए व्यवस्थित करने के लिए प्रतीक्षा करें ।संभवतः ऊतकों को सेगमेंट करने के लिए 100% क्लिक सेगमेंट के करीब मूल्य के लिए। टिश्यू सेगमेंटेशन की क्वॉलिटी को वेरिफाई करने के बाद सेल सेगमेंटेशन पर क्लिक करें और सेलुलर डिब्बों को सेगमेंट में सेलेक्ट करें । परमाणु घटक को कॉन्फ़िगर करने के लिए, परमाणु पिक्सल का पता लगाने के लिए उपयोग की जाने वाली सीमा को समायोजित करने के लिए विशिष्ट तीव्रता स्लाइडर का उपयोग करें।पूर्वावलोकन विंडो द्वारा लाइव प्रतिक्रिया प्रदान की जाती है। परमाणु पिक्सल के समूहों को विभाजित करने के लिए, परमाणु घटकों के बंटवारे पैनल में, बटन का चयन करें जो नाभिक की धुंधला गुणवत्ता का सबसे अच्छा वर्णन करता है और बंटवारे की संवेदनशीलता को समायोजित करने के लिए स्लाइडर बार का उपयोग करता है। फिर सभी छवियों को सेगमेंट करने के लिए सेगमेंट पर क्लिक करें।जब सभी छवियों को खंडित कर दिया गया है, फेनोटाइप्स पैनल में, पता लगाने के लिए फेनोटाइप की सूची जोड़ें और संबंधित टेक्स्ट बॉक्स में फेनोटाइप का नाम दर्ज करें। किसी विशेष कोशिका का चयन करने के लिए फेनोटाइप को संपादित करें और ड्रॉपडाउन मेनू में संबंधित फेनोटाइप का चयन करें। प्रशिक्षण के लिए चयन पूरा करने के बाद, प्रत्येक फेनोटाइप के परिणाम का मूल्यांकन करने के लिए ट्रेन क्लासिफायर पर क्लिक करें।सभी फेनोटाइप के साथ आगे बढ़ें, परियोजना को बचाएं और निर्यात पर क्लिक करें। बैच विश्लेषण टैब का चयन करें और बैच एल्गोरिदम या प्रोजेक्ट बॉक्स में परियोजना लोड करें। छवियों और तालिकाओं को निर्यात करने के लिए, निर्यात विकल्पों में सभी बक्से का चयन करें, स्लाइड जोड़ें और पहले से तैयार बैचों के लिए टिकटों वाले सभी चित्रों को लोड करें।फिर एक स्टैंप के स्टार्ट बैच विश्लेषण पर क्लिक करें और अधिग्रहण किए जाने पर संबंधित डेटा का निर्यात करें। एनएससीएलसी एक्सप्लांट ऊतक की बहु-स्पेक्ट्रल इमेजिंग सेल व्यवहार्यता के मार्कर के लिए दाग, व्यक्तिगत कोशिका आबादी की पहचान और फेनोटाइपिंग की अनुमति देता है, साथ ही एक्सप्लांट ट्यूमर माइक्रो वातावरण के भीतर ट्यूमर और स्ट्रोमल घटकों की पहचान करता है। सेल व्यवहार्यता मार्कर के ऊतक और सेल विभाजन बहु-स्पेक्ट्रल छवियों के रूप में प्रदर्शित होते हैं, का उपयोग ब्याज की दवाओं के साथ इलाज किए गए रोगी व्युत्पन्न एक्सप्लांट में सेल मृत्यु और प्रसार की मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है।उदाहरण के लिए, इस विश्लेषण में, Nivolumab के साथ इलाज ट्यूमर से ऊतक के नमूनों में, मरने वाली कोशिकाओं की एक उच्च संख्या की पहचान की गई नियंत्रण का इलाज ट्यूमर नमूनों की तुलना में । इसके अलावा, जैसा कि सचित्र है, दाग विच्छेदन से स्थानिक जानकारी निकालने की क्षमता, इंटरसेल दूरी की गणना की अनुमति देती है। एक्सप्लांट्स का उपयोग व्यापक स्थानिक प्रोफाइलिंग या मास साइटोमेट्री के लिए भी किया जा सकता है, जो नमूने की 3 डी संरचना को संरक्षित करते हुए सैकड़ों बायोमार्कर को सहायक संकल्प पर एक साथ प्रोफाइल करने की अनुमति देता है।PDs इम्यूनोथेरेपी की प्रभावकारिता की भविष्यवाणी कर सकता है। उदाहरण के लिए, संवेदनशील या प्रतिरोधी मामलों को प्रतिरक्षा चेकपॉइंट अवरोधकों में अलग करना और इस अंतर को रेखांकित करने वाले तंत्रों की जांच करना संभव हो सकता है।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

विकास और एक Preclinical रोगी व्युत्पन्न ट्यूमर उपन्यास विरोधी कैंसर उपचार की जांच के लिए Xenograft मॉडल का रखरखाव

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

ट्यूमर के विकास और मेटास्टेसिस अध्ययन के लिए Traceable पत्रकारों के साथ स्तन कैंसर के रोगी व्युत्पन्न Xenografts की लेबलिंग

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

रोगी व्युत्पन्न ओर्थोटोपिक Xenograft मॉडल मानव यूरोथेलियल सेल कार्सिनोमा और कोलोरेक्टल कैंसर ट्यूमर विकास और सहज मेटास्टेसिस के लिए

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

रोगी व्युत्पन्न विषम लैंगिक Xenograft मॉडल अग्नाशय के कैंसर के तुलनात्मक दवा आकलन के लिए मेजबान के रूप में ज़ेब्राफ़िश लार्वा का उपयोग

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

गैस्ट्रिक कैंसर रोगी व्युत्पन्न Xenograft मॉडल और प्राथमिक सेल लाइनों की स्थापना

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

एक Perfused Microfluidic मंच में रोगी-व्युत्पन्न Xenografts के पूर्व वीवो 3 डी हाइड्रोजेल संस्कृतियों के लिए बढ़ी हुई व्यवहार्यता

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

जेब्राफिश में प्राथमिक रोगी व्युत्पन्न ट्यूमर ज़ेनोग्राफ्ट की दवा जांच

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर ऑर्गेनॉइड का उपयोग करके विट्रो परख में उच्च-थ्रूपुट

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

थोक और एकल-ऑर्गेनॉइड विश्लेषण के लिए वाइडफील्ड लाइव-सेल इमेजिंग का उपयोग करके मल्टीपैरामीट्रिक ट्यूमर ऑर्गेनॉइड ड्रग स्क्रीनिंग

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

चूहों में रोगी-व्युत्पन्न कैंसर कोशिकाओं का ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण उन्नत कोलोरेक्टल कैंसर को पुन: उत्पन्न करता है

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...