Name: patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

Ringraziamo i chirurghi e i patologi degli ospedali universitari di Leicester NHS Trust per aver fornito tessuto tumorale resecato chirurgicamente. Ringraziamo anche la struttura di istologia all'interno di Core Biotechnology Services per l'aiuto con la lavorazione dei tessuti e il sezionamento dei blocchi di tessuto FFPE e Kees Straatman per il supporto con l'uso di Vectra Polaris. Questa ricerca è stata sostenuta e finanziata dal Consorzio Explant composto da quattro partner: l'Università di Leicester, l'Unità di Tossicologia MRC, i Laboratori di Scoperta Terapeutica di Cancer Research UK e LifeArc. Un ulteriore supporto è stato fornito dal CRUK-NIHR Leicester Experimental Cancer Medicine Centre (C10604/A25151). Il finanziamento per GM, CD e NA è stato fornito dal Breast Cancer Now's Catalyst Programme (2017NOVPCC1066), supportato da finanziamenti di Pfizer.

1. Raccolta dei tessuti
<ol><li>Dopo l'intervento chirurgico, trasferire campioni di tumore umano appena resecati in un tubo contenente 25 ml di terreno di coltura fresco (il mezzo Eagle modificato di Dulbecco integrato con 4,5 g / L di glucosio e L-glutammina + 1% (v / v) siero fetale del vitello + 1% di penicillina-streptomicina) e conservato su ghiaccio. Elaborare l'espianto entro 2 ore dall'intervento chirurgico in una cappa sterile di classe II.</li>
</ol>2. Preparazi...

Questo documento descrive i metodi per la generazione, il trattamento farmacologico e l'analisi delle PDE ed evidenzia i vantaggi della piattaforma come sistema modello preclinico. La coltivazione ex vivo di un tumore appena resecato, che non comporta la sua decostruzione, consente la ritenzione dell'architettura tumorale13,24 e, quindi, le interazioni spaziali dei componenti cellulari nella TME e l'eterogeneità intratumorale. Questo metodo dimostra come, utiliz...

Lo sviluppo di agenti antitumorali efficaci e sicuri richiede modelli preclinici appropriati che possano anche fornire informazioni sui meccanismi d'azione che possono facilitare l'identificazione di biomarcatori predittivi e farmacodinamici. L'eterogeneitàinter- e intratumorale1,2,3,4, 5 e la TME6,7,8,9,10, 11,12sono note per influenzare le risposte ai farmaci antitumorali e molti modelli di cancro preclinico esistenti come linee cellulari, organoidi e modelli murini non sono in grado di accogliere pienamente questi cruciali tratti somatici. Un modello "ideale" è quello che può ricapitolare le complesse interazioni spaziali di cellule maligne con cellule non maligne all'interno dei tumori e riflettere le differenze regionali all'interno dei tumori. Questo articolo si concentra sulle PDE come piattaforma emergente in grado di soddisfare molti di questi requisiti13.
Il primo esempio dell'uso di PDE umane, note anche come istocolture, risale alla fine degli anni 1980 quando Hoffman et al. generarono fette di tumori umani appena resecati e li coltivarono in una matrice di collagene14,15. Ciò ha comportato la creazione di un sistema di coltura 3D che ha preservato l'architettura dei tessuti, garantendo il mantenimento dei componenti stromali e delle interazioni cellulari all'interno della TME. Senza decostruire il tumore originale, Hoffman et al.16 hanno annunciato un nuovo approccio di ricerca traslazionale e, da questo momento, molti gruppi hanno ottimizzato diversi metodi di espianto con l'obiettivo di preservare l'integrità del tessuto e generare dati accurati sulla risposta ai farmaci17,18, 19,20,21,22,23,24 , anche se alcune differenze tra i protocolli sono evidenti. Butler et al. hanno coltivato espianti in spugne di gelatina per aiutare la diffusione di nutrienti e farmaci attraverso il campione20,21,25,mentre Majumder et al. hanno creato un ecosistema tumorale coltivando espianti su una matrice composta da proteine tumorali e stromali in presenza di siero autologo derivato dallo stesso paziente22, 23.
Più recentemente, il nostro gruppo ha istituito un protocollo in base al quale gli espianti sono generati dalla frammentazione dei tumori in pezzi di dimensioni 2 - 3 mm3che vengono poi posizionati senza componenti aggiuntivi su membrane permeabili all'interfaccia aria-liquido di un sistema dicoltura 24. Nel loro insieme, questi numerosi studi hanno dimostrato che le PDE consentono la coltura di frammenti intatti e vivi di tumori umani che conservano l'architettura spaziale e l'eterogeneità regionale dei tumori originali. Negli esperimenti originali, gli espianti o le istocolture venivano solitamente sottoposti a omogeneizzazione dopo il trattamento farmacologico, dopo di che sono stati applicati vari saggi di vitalità ai campioni omogeneizzati come il saggio di risposta ai farmaci inistocoltura 20,21, il saggio MTT (3-(6) -2,5-difeniltetrazolio bromuro), il saggio della lattato deidrogenasi o il saggio a base di resazurina26,27,28 . I recenti progressi nelle tecniche di analisi degli endpoint, in particolare la patologia digitale, hanno ora ampliato il repertorio di test e saggi endpoint che possono essere eseguiti su espianti29,30. Per applicare queste nuove tecnologie, invece dell'omogeneizzazione, gli espianti vengono fissati in formalina, incorporati nella paraffina (FFPE) e quindi analizzati utilizzando tecniche di immunocolorazione, consentendo la profilazione spaziale. Esempi di questo approccio sono stati documentati per il carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC), il cancro al seno, il cancro del colon-retto e gli espianti di mesotelioma, per cui la colorazione immunoistochimica per il marcatore di proliferazione, Ki67, e il marcatore apoptotico, la poli-ADP ribosio polimerasi scissa (cPARP), è stata utilizzata per monitorare i cambiamenti nella proliferazione cellulare e la morte cellulare24,31,32,33,34.
L'immunofluorescenza multiplexata è particolarmente suscettibile per la profilazione spaziale delle risposte ai farmaci negli espianti all'endpoint35. Ad esempio, è possibile misurare la rilocalizzazione e la distribuzione spaziale di specifiche classi di cellule immunitarie, come macrofagi o cellule T, all'interno della TME dopo il trattamento farmacologico13,36,37,38,e indagare se un agente terapeutico può favorire il passaggio da "tumore freddo" a "tumore caldo"39 . Negli ultimi anni, questo gruppo si è concentrato sulla derivazione di PDE da diversi tipi di tumore (NSCLC, cancro renale, cancro al seno, cancro del colon-retto, melanoma) e sulla sperimentazione di una serie di agenti antitumorali tra cui chemioterapie, inibitori di piccole molecole e inibitori del checkpoint immunitario (ICO). I metodi di analisi degli endpoint sono stati ottimizzati per includere l'immunofluorescenza multiplexata per consentire la profilazione spaziale dei biomarcatori per la vitalità e dei biomarcatori per i diversi costituenti della TME.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>320099</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody Diluent / Block, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARD1001EA</td>
			<td>Antibody diluent/blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barnstead NANOpure Diamond</td>
			<td>Barnstead</td>
			<td></td>
			<td>Ultra Pure (UP) H2O machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid Monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7129</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Multiple Well Cell Culture Plates</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3516</td>
			<td>6 multiwell plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Dilactate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 x 17 mm Dish, Nunclon Delta</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>150350</td>
			<td>100 mm diameter dish for tissue culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (1x) Dubelcco&#39;s Modified Eagle Medium + 4.5 g/L D-Glucose + 110 mg/mL Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>10569-010</td>
			<td>Tissue culture medium (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>VWR</td>
			<td>360294H</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>Merck</td>
			<td>6522</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3609</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>CellPath</td>
			<td>RBC-0100-00A</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10500-064</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% Formaldehyde</td>
			<td>Fisher (Acros)</td>
			<td>119690010</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iGenix, microwave oven IG2095</td>
			<td>iGenix</td>
			<td>IG2095</td>
			<td>Microwave used for antigen retreival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Industrial methylated spirit (IMS)</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>199050</td>
			<td>99% Industrial Denatured Alcohol (IDA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InForm Advanced Image Analysis Software</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>InForm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Automated Vacuum Tissue Processor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Arcadia H and C</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Embedding wax bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica RM2125RT</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ST4040 Linear Stainer</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>H&#38;E stainer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GHS132-1L</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell Cell Culture Inserts, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m</td>
			<td>Merck Milipore</td>
			<td>PICMORG50</td>
			<td>Organotypic culture insert disc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novolink Polymer Detection System</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>RE7150-K</td>
			<td>DAB staining kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 480</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1500001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 520</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1487001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 570</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 620</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1495001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 650</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1496001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 690</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1497001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 780 / OPAL TSA-DIG Reagent</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1501001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent and TSA-DIG reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal Polymer HRP Ms Plus Rb, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARH1001EA</td>
			<td>HRP polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11548876</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhenoChart Whole Slide Contextual Viewer</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>PhenoChart</td>
			<td>Viewer software for scanned images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline Tablets</td>
			<td>Thermo Scientific Oxoid</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Plus Amplification Diluent</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1498</td>
			<td>Fluorophore diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36961</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Carrier</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>To load slides into Slide Carrier Hotel for scanning with Vectra Polaris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/3160/63</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide pellets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/4920/53</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tenatex Toughened Wax - Pink (500 g)</td>
			<td>KEMDENT</td>
			<td>1-601</td>
			<td>Dental wax surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Shandon Sequenza Slide Rack for Immunostaining Center</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10098889</td>
			<td>Holder for slides and slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Shandon Plastic Coverplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11927774</td>
			<td>Slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vecta Laboratories</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra Polaris Slide Scanner</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Vectra Polaris</td>
			<td>Slide scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>XYL050</td>
			<td>De-waxing agent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients

La comprensione della resistenza ai farmaci e lo sviluppo di nuove strategie per sensibilizzare i tumori altamente resistenti si basano sulla disponibilità di modelli preclinici adatti in grado di prevedere con precisione le risposte dei pazienti. Uno degli svantaggi dei modelli preclinici esistenti è l'incapacità di preservare contestualmente il microambiente tumorale umano (TME) e rappresentare accuratamente l'eterogeneità intratumorale, limitando così la traduzione clinica dei dati. Al contrario, rappresentando la coltura di frammenti vivi di tumori umani, la piattaforma di espianto derivato dal paziente (PDE) consente di esaminare le risposte ai farmaci in un contesto tridimensionale (3D) che rispecchia il più possibile le caratteristiche patologiche e architettoniche dei tumori originali. Precedenti rapporti con PDE hanno documentato la capacità della piattaforma di distinguere i tumori chemiosensibili da quelli chemioresistenti, ed è stato dimostrato che questa segregazione è predittiva delle risposte dei pazienti alle stesse chemioterapie. Allo stesso tempo, le PDE consentono l'opportunità di interrogare le caratteristiche molecolari, genetiche e istologiche dei tumori che predicono le risposte ai farmaci, identificando così i biomarcatori per la stratificazione del paziente e nuovi approcci interventistici per sensibilizzare i tumori resistenti. Questo documento riporta in dettaglio la metodologia PDE, dalla raccolta di campioni di pazienti fino all'analisi degli endpoint. Fornisce una descrizione dettagliata della derivazione dell'espianto e dei metodi di coltura, evidenziando le condizioni su misura per particolari tumori, se del caso. Per l'analisi degli endpoint, ci si concentra sull'immunofluorescenza multiplexata e sull'imaging multispettrale per la profilazione spaziale di biomarcatori chiave all'interno di entrambe le regioni tumorali e stromali. Combinando questi metodi, è possibile generare dati quantitativi e qualitativi sulla risposta ai farmaci che possono essere correlati a vari parametri clinicopatologici e quindi potenzialmente utilizzati per l'identificazione dei biomarcatori.

L'imaging multispettrale di sezioni istologiche colorate con mIF consente l'identificazione e la fenotipizzazione di singole popolazioni cellulari e l'identificazione di componenti tumorali e stromali nell'espianto TME (Figura 2). L'imaging multispettrale è particolarmente utile per l'analisi di tessuti ad alta autofluorescenza intrinseca, come tessuti ad alto contenuto di collagene, in quanto consente di deconvolure il segnale di autofluorescenza da altri segnali ed escluderlo da analisi s...

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Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

Questo documento descrive i metodi per la generazione, il trattamento farmacologico e l'analisi di espianti derivati dal paziente per valutare le risposte ai farmaci tumorali in un sistema modello preclinico vivo, rilevante per il paziente.

Espianti tumorali derivati dal paziente come piattaforma preclinica "live" per prevedere la resistenza ai farmaci nei pazienti

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

Gli espianti derivati dal paziente sono un metodo a breve termine che fornisce dati immediati sulla risposta al farmaco in grado di prevedere con precisione i risultati dei pazienti. Le piattaforme PD consentono di esaminare le risposte ai farmaci in un contesto 3D che rispecchia il più fedelmente possibile le caratteristiche patologiche e architettoniche dei tumori regionali. Gli espianti hanno il potenziale per offrire nuove informazioni sul metabolismo e sul meccanismo d'azione di un farmaco e per facilitare l'identificazione di nuovi biomarcatori farmacodinamici.Prima di iniziare l'esperimento, pulire tutte le apparecchiature chirurgiche con una soluzione di alcolici metilati industriali al 70%. Riempi un piatto di coltura di 10 centimetri con 25 millilitri di terreno fresco su ghiaccio. Usando una pinzetta, trasferire il campione su una superficie di cera dentale E utilizzare due lame di innesto cutaneo per tagliare il tessuto in frammenti di circa due o tre millimetri cubi.Trasferire gli espianti in un piatto di 10 centimetri e posizionare da sei a nove pezzi di tessuto in un tubo da un millilitro contenente il 10% di soluzione di formalina non tamponata per un'incubazione di 24 ore a temperatura ambiente. Riempire il numero desiderato di pozzetti di una piastra a sei pozzetti con 1,5 millilitri di mezzo fresco per pozzetto. E posizionare un piatto di inserto di coltura organotipica in ogni pozzetto in modo che galleggi sopra il mezzo.Posizionare da sei a nove espianti su ciascun disco di inserimento e conservare per un'incubazione di 16 ore in un incubatore di anidride carbonica al 5% per consentire il recupero. Il giorno dopo, aggiungi mezzo fresco e farmaco a ciascun pozzetto di un nuovo piatto. Includere un pozzo per il controllo del veicolo.Quando tutti i trattamenti farmacologici sono stati preparati, utilizzare una pinzetta per trasferire un inserto in ciascun pozzetto della nuova piastra a sei pozzetti per un'incubazione da 24 a 48 ore nell'incubatore di anidride carbonica. Dopo il trattamento farmacologico, trasferire i dischi in nuove piastre a sei pozzetti contenenti il 10% di formalina. E aggiungi qualche goccia di formalina al 10% nella parte superiore di ogni espianto per garantire una copertura completa con il fissativo per 24 ore di incubazione a temperatura ambiente.Il giorno successivo, immergere un numero appropriato di piccole spugne istologiche in una soluzione metilata industriale al 70%. E posiziona le spugne all'interno di cassette istologiche. Quando tutte le spugne sono state posizionate, trasferire tutti gli espianti dalla stessa condizione di trattamento farmacologico su una singola spugna con il lato trattato con il farmaco di ciascun espianto che contatta il disco inserito.Posizionare un'altra spugna presoalda sopra ogni espianto e chiudere la cassetta per fissare gli espianti nella cassetta. Quindi immergere le cassette in soluzione metilata industriale al 70% prima di procedere con l'elaborazione istologica. Dopo la scansione, eseguire un'analisi di addestramento e caricare le scansioni contenenti i timbri per l'addestramento nel software di analisi appropriato.Nella visualizzazione a modalità singola, navigare tra le immagini e selezionare le scansioni da analizzare e la scansione con fluorescenza intrinseca. con la scansione a fluorescenza intrinseca su una singola vista, fare clic sul selettore di autofluorescenza per disegnare un segmento su un'area di tessuto non macchiato. Fare clic su Modifica marcatori e colori e immettere i nomi dei marcatori nella casella associata a ciascun fluoroforo.Fare clic su Prepara immagini per consentire al software di sottrarre l'intensità della fluorescenza intrinseca da tutte le immagini caricate. Fare clic sul gradino del tessuto del segmento nella parte superiore dello schermo per aprire la finestra di allenamento della segmentazione del tessuto. Nel pannello delle categorie di tessuti, inserire il nome di ciascuna categoria di tessuto da segmentare.Fare clic su Draw, per disegnare le regioni attorno a gruppi di cellule nella categoria di tessuto di interesse. Quindi passare alla categoria di tessuto successiva e disegnare nuove regioni. Quando tutte le regioni di addestramento sono state definite, utilizzare il segmentatore di tessuto del treno e attendere che l'accuratezza dell'allenamento si stabilizzi.Possibilmente a un valore vicino al 100% Clicca sul segmento tutto per segmentare i tessuti. Dopo aver verificato la qualità della segmentazione tissutale, fare clic su Segmentazione cellulare e selezionare i compartimenti cellulari da segmentare. Per configurare il componente nucleare, utilizzare il tipico cursore di intensità per regolare la soglia utilizzata per rilevare i pixel nucleari.Il feedback in tempo reale è fornito dalla finestra di anteprima. Per dividere i cluster di pixel nucleari, nel pannello di divisione dei componenti nucleari, selezionare il pulsante che meglio descrive la qualità di colorazione dei nuclei e utilizzare la barra di scorrimento per regolare la sensibilità di scissione. Quindi fare clic su Segmenta tutto per segmentare tutte le immagini.Quando tutte le immagini sono state segmentate, nel pannello fenotipi, aggiungere l'elenco dei fenotipi da rilevare e inserire il nome dei fenotipi nella casella di testo corrispondente. Fare clic su modifica fenotipi per selezionare una particolare cella e selezionare il fenotipo corrispondente nel menu a discesa. Dopo aver completato la selezione per la formazione, fare clic sul classificatore del treno per valutare il risultato di ciascun fenotipo.Procedere con il fenotipo tutto, salvare il progetto e fare clic su Esporta. Selezionare la scheda Analisi batch e caricare il progetto nell'algoritmo batch o nella casella del progetto. Per esportare le immagini e le tabelle, selezionare tutte le caselle nelle opzioni di esportazione, fare clic su Aggiungi diapositive e caricare tutte le immagini contenenti i timbri per i lotti precedentemente preparati.Quindi fare clic su Esegui per avviare l'analisi batch di un timbro ed esportare i dati corrispondenti quando è stato acquisito. L'imaging multispettrale del tessuto di espianto NSCLC colorato per marcatori di vitalità cellulare, consente l'identificazione e la fenotipizzazione di singole popolazioni cellulari, nonché l'identificazione di componenti tumorali e stromali all'interno del microambiente tumorale di espianto. La segmentazione tissutale e cellulare delle macchie di marcatori di vitalità cellulare immagini multispettrali, come dimostrato, può essere utilizzata per quantificare la morte e la proliferazione cellulare in espianti derivati da pazienti trattati con farmaci di interesse.Ad esempio, in questa analisi, in campioni di tessuto da tumori trattati con Nivolumab, è stato identificato un numero maggiore di cellule morenti rispetto ai campioni tumorali trattati di controllo. Inoltre, come illustrato, la capacità di estrarre informazioni spaziali da dissezioni colorate, consente il calcolo delle distanze intercellulari. Gli espianti possono anche essere utilizzati per un'ampia profilazione spaziale o citometria di massa, che consente di profilare centinaia di biomarcatori contemporaneamente a risoluzione sussidiaria preservando la struttura 3D del campione.I PD potrebbero predire l'efficacia dell'immunoterapia. Ad esempio, potrebbe essere possibile distinguere i casi sensibili o resistenti agli inibitori del checkpoint immunitario e studiare i meccanismi alla base di questa distinzione.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

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Sviluppo e manutenzione di un tumore del paziente preclinici Derivato dello xenotrapianto modello per il Controllo delle Novel Anti-Cancer Therapies

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Ricerca

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