Name: patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

Vi takker kirurgene og patologene ved Universitetssykehusene i Leicester NHS Trust for å ha gitt kirurgisk resected tumorvev. Vi takker også histologianlegget i Core Biotechnology Services for hjelp med vevsbehandling og seksjonering av FFPE vevsblokker og Kees Straatman for støtte ved bruk av Vectra Polaris. Denne forskningen ble støttet og finansiert av Explant Consortium bestående av fire partnere: University of Leicester, THE MRC Toxicology Unit, Cancer Research UK Therapeutic Discovery Laboratories og LifeArc. Ytterligere støtte ble gitt av CRUK-NIHR Leicester Experimental Cancer Medicine Centre (C10604/A25151). Støtten til GM, CD og NA ble levert av Breast Cancer Now's Catalyst Program (2017NOVPCC1066), som støttes av finansiering fra Pfizer.

1. Vevsinnsamling
<ol><li>Etter operasjonen, overfør nyoppussede menneskelige tumorprøver til et rør som inneholder 25 ml ferskt kulturmedium (Dulbeccos modifiserte Eagle-medium supplert med 4,5 g/l glukose og L-glutamin + 1% (v/ v) fosterkalvserum + 1% penicillin-streptomycin) og lagret på is. Behandle utvisning innen 2 timer etter operasjonen i en steril klasse II hette.</li>
</ol>2. Explant forberedelse
<ol><li>Rengjør alt kirurgisk ut...

Denne artikkelen beskriver metodene for generering, narkotikabehandling og analyse av PDEer og fremhever fordelene ved plattformen som et preklinisk modellsystem. Ex vivo culturing av en nyoppusset svulst, som ikke involverer dens dekonstruksjon, tillater oppbevaring av tumorarkitekturen13,24 og dermed de romlige interaksjonene mellom cellulære komponenter i TME samt intratumoral heterogenitet. Denne metoden demonstrerer hvordan, ved hjelp av en tumorspesifikk m...

Utviklingen av effektive og sikre anticancer agenter krever passende prekliniske modeller som også kan gi innsikt i virkningsmekanismer som kan lette identifisering av prediktive og farmakodynamiske biomarkører. Inter- og intratumor heterogenitet1,2,3,4,5 og TME6,7,8,9,10,11,12 er kjent for å påvirke anticancer narkotikaresponser, og mange eksisterende prekliniske kreftmodeller som cellelinjer, organoider og musemodeller er ikke i stand til å imøtekomme disse avgjørende Funksjoner. En "ideell" modell er en som kan rekapitulere de komplekse romlige interaksjonene mellom ondartede med ikke-ondartede celler i svulster, samt reflektere de regionale forskjellene innen svulster. Denne artikkelen fokuserer på PDEer som en ny plattform som kan oppfylle mange av disse kravene13.
Det første eksemplet på bruk av menneskelige PDEer, også kjent som histokulturer, dateres tilbake til slutten av 1980-tallet da Hoffman et al. genererte skiver av nyoppussede menneskelige svulster og dyrket dem i en kollagenmatrise14,15. Dette innebar å etablere et 3D-kultursystem som bevarte vevsarkitektur, og sikret vedlikehold av stromale komponenter og celleinteraksjoner i TME. Uten å dekonstruere den opprinnelige svulsten, varslet Hoffman et al.16 en ny tilnærming til translasjonell forskning, og siden denne gangen har mange grupper optimalisert forskjellige explantmetoder med sikte på å bevare vevsintegriteten og generere nøyaktige legemiddelresponsdata17,18,19,20,21,22,23,24 , selv om det er tydelige forskjeller mellom protokoller. Butler et al. dyrket explants i gelatin svamper for å hjelpe diffusjon av næringsstoffer og stoffer gjennom prøven20,21,25, mens Majumder et al. opprettet et tumorøkosystem ved å dyrke explants på toppen av en matrise sammensatt av svulst og stromale proteiner i nærvær av autologt serum avledet fra samme pasient22, 23.
Mer nylig satte gruppen vår opp en protokoll der explants genereres ved fragmentering av svulster i 2 - 3 mm3-størrelsestykker som deretter plasseres uten ekstra komponenter på gjennomtrengelige membraner ved luftvæskegrensesnittet til et kultursystem24. Samlet sett har disse mange studiene vist at PDEer tillater kulturen av intakte, levende fragmenter av menneskelige svulster som beholder den romlige arkitekturen og den regionale heterogeniteten til de opprinnelige svulstene. I originale eksperimenter ble explants eller histokulturer vanligvis utsatt for homogenisering etter legemiddelbehandling, hvoretter ulike levedyktighetsanalyser ble brukt på de homogeniserte prøvene som histokulturens legemiddelresponsanalyse20,21, MTT (3-(6)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid) analyse, laktat dehydrogenaseanalysen eller den resazurinbaserte analysen26,27, 28,28 . Nylig fremgang i endepunktanalyseteknikker, spesielt digital patologi, har nå utvidet repertoaret til endepunktstester og analyser som kan utføres på explants29,30. For å bruke disse nye teknologiene, i stedet for homogenisering, er explants festet i formalin, innebygd i paraffin (FFPE) og deretter analysert ved hjelp av immundempende teknikker, slik at romlig profilering. Eksempler på denne tilnærmingen er dokumentert for ikke-småcellet lungekreft (NSCLC), brystkreft, kolorektal kreft, og mesothelioma utviser der immunhiistokjemisk farging for spredningsmarkøren, Ki67, og apoptotisk markør, spaltet poly-ADP ribosepolymerase (cPARP), ble brukt til å overvåke endringer i celleproliferasjon og celledød24,31,32,33,34.
Multiplekset immunfluorescens er spesielt egnet for romlig profilering av legemiddelresponser i utvisning ved endepunkt35. For eksempel er det mulig å måle omfordeling og romlig fordeling av spesifikke klasser av immunceller, for eksempel makrofager eller T-celler, innenfor TME ved legemiddelbehandling13,36,37,38, og undersøke om et terapeutisk middel kan favorisere overgangen fra "kald svulst" til "varm svulst"39 . De siste årene har denne gruppen fokusert på avledning av PDEer fra forskjellige tumortyper (NSCLC, nyrekreft, brystkreft, kolorektal kreft, melanom) og testing av en rekke anticancer-midler, inkludert kjemoterapier, småmolekylhemmere og immunkontrollpunkthemmere (ICIer). Endepunktanalysemetoder er optimalisert for å inkludere multiplekset immunfluorescens for å tillate romlig profilering av biomarkører for levedyktighet samt biomarkører for forskjellige bestanddeler av TME.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>320099</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody Diluent / Block, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARD1001EA</td>
			<td>Antibody diluent/blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barnstead NANOpure Diamond</td>
			<td>Barnstead</td>
			<td></td>
			<td>Ultra Pure (UP) H2O machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid Monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7129</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Multiple Well Cell Culture Plates</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3516</td>
			<td>6 multiwell plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Dilactate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 x 17 mm Dish, Nunclon Delta</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>150350</td>
			<td>100 mm diameter dish for tissue culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (1x) Dubelcco&#39;s Modified Eagle Medium + 4.5 g/L D-Glucose + 110 mg/mL Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>10569-010</td>
			<td>Tissue culture medium (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>VWR</td>
			<td>360294H</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>Merck</td>
			<td>6522</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3609</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>CellPath</td>
			<td>RBC-0100-00A</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10500-064</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% Formaldehyde</td>
			<td>Fisher (Acros)</td>
			<td>119690010</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iGenix, microwave oven IG2095</td>
			<td>iGenix</td>
			<td>IG2095</td>
			<td>Microwave used for antigen retreival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Industrial methylated spirit (IMS)</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>199050</td>
			<td>99% Industrial Denatured Alcohol (IDA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InForm Advanced Image Analysis Software</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>InForm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Automated Vacuum Tissue Processor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Arcadia H and C</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Embedding wax bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica RM2125RT</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ST4040 Linear Stainer</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>H&#38;E stainer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GHS132-1L</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell Cell Culture Inserts, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m</td>
			<td>Merck Milipore</td>
			<td>PICMORG50</td>
			<td>Organotypic culture insert disc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novolink Polymer Detection System</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>RE7150-K</td>
			<td>DAB staining kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 480</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1500001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 520</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1487001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 570</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 620</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1495001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 650</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1496001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 690</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1497001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 780 / OPAL TSA-DIG Reagent</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1501001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent and TSA-DIG reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal Polymer HRP Ms Plus Rb, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARH1001EA</td>
			<td>HRP polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11548876</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhenoChart Whole Slide Contextual Viewer</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>PhenoChart</td>
			<td>Viewer software for scanned images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline Tablets</td>
			<td>Thermo Scientific Oxoid</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Plus Amplification Diluent</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1498</td>
			<td>Fluorophore diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36961</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Carrier</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>To load slides into Slide Carrier Hotel for scanning with Vectra Polaris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/3160/63</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide pellets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/4920/53</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tenatex Toughened Wax - Pink (500 g)</td>
			<td>KEMDENT</td>
			<td>1-601</td>
			<td>Dental wax surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Shandon Sequenza Slide Rack for Immunostaining Center</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10098889</td>
			<td>Holder for slides and slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Shandon Plastic Coverplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11927774</td>
			<td>Slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vecta Laboratories</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra Polaris Slide Scanner</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Vectra Polaris</td>
			<td>Slide scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>XYL050</td>
			<td>De-waxing agent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients

En forståelse av legemiddelresistens og utvikling av nye strategier for å sensibilisere svært resistente kreftformer er avhengig av tilgjengeligheten av egnede prekliniske modeller som nøyaktig kan forutsi pasientresponser. En av ulempene ved eksisterende prekliniske modeller er manglende evne til kontekstuelt å bevare det menneskelige tumormikromiljøet (TME) og nøyaktig representere intratumoral heterogenitet, og dermed begrense den kliniske oversettelsen av data. Til sammenligning, ved å representere kulturen av levende fragmenter av menneskelige svulster, tillater den pasientavledede explant (PDE) plattformen narkotikaresponser å bli undersøkt i en tredimensjonal (3D) kontekst som speiler de patologiske og arkitektoniske egenskapene til de opprinnelige svulstene så nært som mulig. Tidligere rapporter med PDEer har dokumentert plattformens evne til å skille chemosensitive fra chemoresistant svulster, og det har vist seg at denne segregeringen er prediktiv for pasientresponser på de samme kjemoterapiene. Samtidig tillater PDEer muligheten til å forhøre molekylære, genetiske og histologiske trekk ved svulster som forutsier legemiddelresponser, og dermed identifisere biomarkører for pasientstratifisering samt nye intervensjonelle tilnærminger for å sensibilisere resistente svulster. Dette dokumentet rapporterer PDE-metodikk i detalj, fra innsamling av pasientprøver til endepunktanalyse. Det gir en detaljert beskrivelse av eklant avledning og kulturmetoder, og fremhever skreddersydde forhold for bestemte svulster, der det er hensiktsmessig. For endepunktanalyse er det fokus på multiplekset immunfluorescens og multispektral avbildning for romlig profilering av viktige biomarkører innenfor både tumor- og stromale regioner. Ved å kombinere disse metodene er det mulig å generere kvantitative og kvalitative legemiddelresponsdata som kan relateres til ulike klinopatiske parametere og dermed potensielt brukes til biomarkøridentifikasjon.

Multispektral avbildning av mIF-fargede histologiske seksjoner tillater identifisering og fenotyping av individuelle cellepopulasjoner og identifisering av tumor- og stromalkomponenter i den utplantede TME (figur 2). Multispektral avbildning er spesielt nyttig for analyse av vev med høy iboende autofluorescens, for eksempel vev med høyt kollageninnhold, da det gjør at autofluorescence-signalet kan dekonvolverteres fra andre signaler og utelukkes fra etterfølgende analyse. Etterfølgende ...

Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

Dette dokumentet beskriver metoder for generering, legemiddelbehandling og analyse av pasientavledede utvisningsmodeller for å vurdere tumormedisinske responser i et levende, pasientrelevant, preklinisk modellsystem.

Pasientavledede tumor utviser som en "levende" preklinisk plattform for å forutsi legemiddelresistens hos pasienter

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

De pasientavledede utvisningene er en kortsiktig metode som gir umiddelbare legemiddelresponsdata som nøyaktig kan forutsi pasientutfall. PD-plattformene gjør det mulig å undersøke legemiddelresponser i en 3D-sammenheng som speiler de patologiske og arkitektoniske egenskapene til de regionale svulstene så nært som mulig. Explants har potensial til å tilby ny innsikt i metabolismen og virkningsmekanismen til et stoff og for å lette identifiseringen av nye farmakodynamiske biomarkører.Før du starter eksperimentet, rengjør alt kirurgisk utstyr med 70% industriell metylert brennevinsløsning. Fyll en 10 centimeter kulturrett med 25 milliliter ferskt medium på is. Bruk pinsett, overfør prøven til en tannvoksoverflate Og bruk to hudtransplantasjonsblader for å kutte vevet i fragmenter på omtrent to til tre kubikkmillimeter.Overfør uttivelsene til en 10 centimeter tallerken og legg seks til ni stykker av vevet til et milliliterrør som inneholder 10% ikke-bufret formalinløsning for en 24 timers inkubasjon ved romtemperatur. Fyll ønsket antall brønner på en seks brønnplate med 1,5 milliliter friskt medium per brønn. Og legg en organotypisk kultur sett parabolen inn i hver brønn slik at den flyter på toppen av mediet.Plasser seks til ni vidder på hver innsatsdisk og lagre i en 16 timers inkubasjon i en 5% karbondioksidinkubator for å tillate utvinning. Neste dag legger du til friskt medium og stoff til hver brønn av en ny tallerken. Ta med en brønn for kjøretøykontrollen.Når alle legemiddelbehandlinger er utarbeidet, bruk pinsett for å overføre en innsats til hver brønn av den nye seks brønnplaten i en 24 til 48 timers inkubasjon i karbondioksidinkubatoren. Etter medikamentbehandlingen, overfør platene til nye seks brønnplater som inneholder 10% formalin. Og legg til noen dråper 10% formalin til toppen av hver explant for å sikre fullstendig dekning med fiksering i 24 timers inkubasjon ved romtemperatur.Neste dag, suge et passende antall små histologi svamper i 70% industriell metylert løsning. Og plasser svampene inne i histologikassetter. Når alle svamper er plassert, overføre alle explants fra samme narkotika behandling tilstand på en enkelt svamp med stoffet behandlet side av hver explant kontakte den innsatte platen.Plasser en annen forhåndssinntatt svamp på toppen av hver utvisning og lukk kassetten for å feste uttredingene i kassetten. Senk deretter kassettene i 70% industriell metylert løsning før du fortsetter med histologisk behandling. Etter skanning, utfør en treningsanalyse og last skanningene som inneholder stemplene for trening i riktig analyseprogramvare.I enkeltmodusvisning navigerer du gjennom bildene og velger skanningene som skal analyseres, og skanningen med innebygd fluorescens. med den innebygde fluorescensskanningen på en enkelt visning, klikker du på autofluorescence picker for å tegne et segment på et område med unstained vev. Klikk på rediger markører og farger og skriv inn indikatornavnene i boksen som er knyttet til hver fluorofor.Klikk på forbered bilder for å la programvaren trekke intensiteten av egen fluorescens fra alle opplastede bilder. Klikk på segmentvevstrinnet øverst på skjermen for å åpne treningsvinduet for vevssegmentering. I vevskategoripanelet skriver du inn navnet på hver vevskategori som skal segmenteres.Klikk Tegn for å tegne områder rundt grupper med celler i vevskategorien av interesse. Bytt deretter til neste vevskategori og tegn nye regioner. Når alle treningsregionene er definert, bruker du togvevssegmenteren og venter på at treningsnøyaktigheten skal slå seg til ro.Muligens til en verdi nær 100%Klikk segmenter alle for å segmentere vevet. Etter å ha bekreftet kvaliteten på vevssegmenteringen, klikker du på cellesegmentering og velger de cellulære rommene som skal segmenteres. For å konfigurere kjernekomponenten bruker du den typiske glidebryteren for intensitet til å justere terskelen som brukes til å oppdage kjernefysiske piksler.Direkte tilbakemelding gis av forhåndsvisningsvinduet. Hvis du vil dele klyngene med kjernefysiske piksler, velger du knappen som best beskriver fargekvaliteten til kjernene, i panelet for deling av kjernekomponenter, i panelet for deling av kjernekomponenter, og bruker glidebryteren til å justere delingsfølsomheten. Klikk deretter på segmenter alle for å segmentere alle bildene.Når alle bildene er segmentert, legger du til listen over fenotyper som skal oppdages, i fenotypepanelet og skriver inn navnet på fenotypene i den tilsvarende tekstboksen. Klikk rediger fenotyper for å velge en bestemt celle og velge den tilsvarende fenotypen i rullegardinmenyen. Etter å ha fullført valget for trening, klikker du på togklassifisereren for å evaluere resultatet av hver fenotype.Fortsett med fenotype alle, lagre prosjektet og klikk eksport. Velg kategorien satsvis analyse , og last inn prosjektet i batchalgoritmen eller prosjektboksen. Hvis du vil eksportere bildene og tabellene, merker du alle boksene i eksportalternativene, klikker legg til lysbilder og laster inn alle bildene som inneholder stemplene for de tidligere forberedte bunkene.Klikk deretter kjør til startbunkeanalysen av ett stempel og eksporter de tilsvarende dataene når de er anskaffet. Multi-spektral avbildning av NSCLC explant vev farget for markører av celle levedyktighet, tillater identifisering og fenotyping av individuelle cellepopulasjoner, samt identifisering av tumor og stromal komponenter i explant tumor mikromiljø. Vev og cellesegmentering av celle levedyktighetsmarkør flekker multispektrale bilder som demonstrert, kan brukes til å kvantifisere celledød og spredning hos pasientavledede utvisningsmidler behandlet med medikamenter av interesse.For eksempel, i denne analysen, i vevsprøver fra svulster behandlet med Nivolumab, ble et høyere antall døende celler identifisert sammenlignet med kontrollbehandlede tumorprøver. I tillegg, som illustrert, tillater evnen til å trekke ut romlig informasjon fra fargede disseksjoner, beregning av intercellavstander. Explants kan også brukes til omfattende romlig profilering eller massecytometri, noe som gjør at hundrevis av biomarkører kan profilereres samtidig ved subsidiær oppløsning samtidig som 3D-strukturen i prøven bevares.PD-er kan forutsi effekten av immunterapi. For eksempel kan det være mulig å skille sensitive eller resistente tilfeller til immunkontrollpunkthemmere og undersøke mekanismene som ligger til grunn for dette skillet.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Utvikling og vedlikehold av en Preklinisk Pasient Avledet Tumor Xenotransplantat Modell for Undersøkelse av Novel Anti-Cancer Therapies

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Merking av brystkreftpasient-avledet xenografter med Spor Reporters for tumorvekst og metastase Studier

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Pasient-avledet Orthotopic Xenograft modeller for Human Urotelialt Cell kreft og tykktarmskreft tumor vekst og spontan metastasering

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Pasient-avledet heterogen Xenograft modell av bukspyttkjertelen Cancer bruke sebrafisk larver som verter for sammenlignende Drug Assessment

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Etablering av magekreft pasient-avledet Xenograft modeller og primær celle Lines

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

Forbedret levedyktighet for Ex vivo 3D hydrogelkulturer av pasientavledede Xenografts i en perfused mikrofluidisk plattform

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Narkotikascreening av primær pasient avledet tumor xenografts i sebrafisk

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay ved bruk av pasientavledede tumororganoider

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

Multiparametrisk tumor organoid narkotika screening ved hjelp av Widefield Live-Cell Imaging for bulk og single-organoid analyse

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

Ortotopisk implantasjon av pasientavledede kreftceller hos mus rekapitulerer avansert kolorektal kreft

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...