Name: patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

Vi tackar kirurgerna och patologerna på universitetssjukhusen i Leicester NHS Trust för att tillhandahålla kirurgisk resected tumör vävnad. Vi tackar också histologianläggningen inom Core Biotechnology Services för hjälp med vävnadsbearbetning och sektionering av FFPE-vävnadsblock och Kees Straatman för stöd med användning av Vectra Polaris. Denna forskning stöddes och finansierades av Explant Consortium bestående av fyra partners: University of Leicester, MRC Toxicology Unit, Cancer Research UK Therapeutic Discovery Laboratories och LifeArc. Ytterligare stöd gavs av CRUK-NIHR Leicester Experimental Cancer Medicine Centre (C10604/A25151). Finansiering för GM, CD och NA tillhandahölls av Breast Cancer Now's Catalyst Programme (2017NOVPCC1066), som stöds av finansiering från Pfizer.

1. Vävnadssamling
<ol><li>Efter kirurgi, överföra ny resected mänskliga tumör exemplar till ett rör som innehåller 25 mL av färsk kultur medium (Dulbeccos modifierade Eagle medium kompletteras med 4,5 g/L glukos och L-glutamin + 1% (v/v) fetala kalv serum + 1% penicillin-streptomycin) och lagras på is. Bearbeta explanten inom 2 timmar från operationen i en steril klass II-huva.</li>
</ol>2. Explant preparat
<ol><li>Rengör all kirurg...

Detta dokument beskriver metoderna för produktion, läkemedelsbehandling och analys av PDEs och belyser fördelarna med plattformen som ett prekliniskt modellsystem. Ex vivo odling av en nyligen resected tumör, som inte innebär dess dekonstruktion, möjliggör bevarandet avtumörarkitekturen 13,24 och därmed de rumsliga interaktionerna mellan cellulära komponenter i TME samt intratumoral heterogenitet. Denna metod visar hur det genom att använda en tumörsp...

Utvecklingen av effektiva och säkra cancermedel kräver lämpliga prekliniska modeller som också kan ge insikt i verkningsmekanismer som kan underlätta identifieringen av prediktiva och farmakodynamiska biomarkörer. Heterogenitet mellan och intratumor1,2,3,4,5 och TME6,7,8,9,10,11,12 är kända för att påverka läkemedel mot cancer, och många befintliga prekliniska cancermodeller som cellinjer, organoider och musmodeller kan inte fullt ut tillgodose dessa avgörande Funktioner. En "idealisk" modell är en som kan rekapitulera de komplexa rumsliga interaktionerna av maligna med icke-maligna celler inom tumörer samt återspegla de regionala skillnaderna inom tumörer. Den här artikeln fokuserar på PDEs som en framväxande plattform som kan uppfylla många av dessa krav13.
Det första exemplet på användningen av mänskliga PDEs, även känd som histokulturer, går tillbaka till slutet av 1980-talet när Hoffman et al. genererade skivor av nyförrättade mänskliga tumörer och odlade dem i en kollagenmatris14,15. Detta innebar att etablera ett 3D-odlingssystem som bevarade vävnadsarkitektur, vilket säkerställer upprätthållandet av stromala komponenter och cellinteraktioner inom TME. Utan att dekonstruera den ursprungliga tumören förebådade Hoffman m.fl.16 ett nytt tillvägagångssätt för translationell forskning, och sedan denna tid har många grupper optimerat olika explantmetoder i syfte att bevara vävnadens integritet och generera exakta läkemedelssvarsdata17,18,19,20,21,22,23,24 , även om vissa skillnader mellan protokollen är uppenbara. Butler et al. odlade explanter i gelatinsvampar för att hjälpa diffusionen av näringsämnen och läkemedel genom exemplaret20,21,25, medan Majumder et al. skapade ett tumörekosystem genom att odla explanter ovanpå en matris bestående av tumör- och stromatproteiner i närvaro av autologt serum som härrör från samma patient22, 23.
Mer nyligen har vår grupp inrättat ett protokoll där explanter genereras av fragmentering av tumörer i 2- 3 mm3-storlekbitar som sedan placeras utan ytterligare komponenter på genomsläppliga membran vid luft-vätskegränssnittet i ett odlingssystem24. Sammantaget har dessa många studier visat att PDEs tillåter kulturen av intakta, levande fragment av mänskliga tumörer som behåller den rumsliga arkitekturen och regionala heterogenitet av de ursprungliga tumörerna. I originalexperiment utsattes explanter eller histokulturer vanligtvis för homogenisering efter läkemedelsbehandling, varefter olika lönsamhetsanalyser tillämpades på homogeniserade prover såsom histokulturläkemedelssvarsanalysen20,21,MTT (3-(6)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid), laktatdehydrogenasanalysen eller den omzurinbaserade analysen2,2 . Den senaste tidens framsteg inom slutpunktsanalysteknik, särskilt digital patologi, har nu utökat repertoaren av endpointtester och analyser som kan utföras på explanter29,30. För att tillämpa dessa nya tekniker, istället för homogenisering, explanter fixeras i formalin, bäddas in i paraffin (FFPE) och analyseras sedan med hjälp av immunstainingtekniker, vilket möjliggör rumslig profilering. Exempel på detta tillvägagångssätt har dokumenterats för icke-småcellig lungcancer (NSCLC), bröstcancer, kolorektal cancer och mesoteliom explanter varigenom immunohistokemisk färgning för spridningsmarkören, Ki67, och den apoptotiska markören, klyvd poly-ADP ribose polymeras (cPARP), användes för att övervaka förändringar i cellproliferation och celldöd24,31,32,33,34.
Multiplexerad immunofluorescens är särskilt mottaglig för rumslig profilering av läkemedelssvar hos explanter vid endpoint35. Det är till exempel möjligt att mäta omlokalisering och rumslig fördelning av specifika klasser av immunceller, såsom makrofager eller T-celler, inom TME vid läkemedelsbehandling13,36,37,38, och undersöka om ett terapeutiskt medel kan gynna övergången från "kall tumör" till "varm tumör"39 . Under de senaste åren har denna grupp fokuserat på härledning av PDEs från olika tumörtyper (NSCLC, njurcancer, bröstcancer, kolorektal cancer, melanom) och testning av en rad cancermedel inklusive kemoterapier, småmolekylära hämmare och immunkontrollpunktshämmare (ICIs). Endpointanalysmetoder har optimerats för att inkludera multiplexerad immunofluorescens för att möjliggöra rumslig profilering av biomarkörer för livskraft samt biomarkörer för olika beståndsdelar i TME.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>320099</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody Diluent / Block, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARD1001EA</td>
			<td>Antibody diluent/blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barnstead NANOpure Diamond</td>
			<td>Barnstead</td>
			<td></td>
			<td>Ultra Pure (UP) H2O machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid Monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7129</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Multiple Well Cell Culture Plates</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3516</td>
			<td>6 multiwell plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Dilactate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 x 17 mm Dish, Nunclon Delta</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>150350</td>
			<td>100 mm diameter dish for tissue culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (1x) Dubelcco&#39;s Modified Eagle Medium + 4.5 g/L D-Glucose + 110 mg/mL Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>10569-010</td>
			<td>Tissue culture medium (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>VWR</td>
			<td>360294H</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>Merck</td>
			<td>6522</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3609</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>CellPath</td>
			<td>RBC-0100-00A</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10500-064</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% Formaldehyde</td>
			<td>Fisher (Acros)</td>
			<td>119690010</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iGenix, microwave oven IG2095</td>
			<td>iGenix</td>
			<td>IG2095</td>
			<td>Microwave used for antigen retreival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Industrial methylated spirit (IMS)</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>199050</td>
			<td>99% Industrial Denatured Alcohol (IDA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InForm Advanced Image Analysis Software</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>InForm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Automated Vacuum Tissue Processor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Arcadia H and C</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Embedding wax bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica RM2125RT</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ST4040 Linear Stainer</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>H&#38;E stainer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GHS132-1L</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell Cell Culture Inserts, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m</td>
			<td>Merck Milipore</td>
			<td>PICMORG50</td>
			<td>Organotypic culture insert disc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novolink Polymer Detection System</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>RE7150-K</td>
			<td>DAB staining kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 480</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1500001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 520</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1487001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 570</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 620</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1495001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 650</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1496001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 690</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1497001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 780 / OPAL TSA-DIG Reagent</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1501001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent and TSA-DIG reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal Polymer HRP Ms Plus Rb, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARH1001EA</td>
			<td>HRP polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11548876</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhenoChart Whole Slide Contextual Viewer</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>PhenoChart</td>
			<td>Viewer software for scanned images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline Tablets</td>
			<td>Thermo Scientific Oxoid</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Plus Amplification Diluent</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1498</td>
			<td>Fluorophore diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36961</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Carrier</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>To load slides into Slide Carrier Hotel for scanning with Vectra Polaris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/3160/63</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide pellets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/4920/53</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tenatex Toughened Wax - Pink (500 g)</td>
			<td>KEMDENT</td>
			<td>1-601</td>
			<td>Dental wax surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Shandon Sequenza Slide Rack for Immunostaining Center</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10098889</td>
			<td>Holder for slides and slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Shandon Plastic Coverplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11927774</td>
			<td>Slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vecta Laboratories</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra Polaris Slide Scanner</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Vectra Polaris</td>
			<td>Slide scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>XYL050</td>
			<td>De-waxing agent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients

En förståelse för läkemedelsresistens och utvecklingen av nya strategier för att sensibilisera mycket resistenta cancerformer förlitar sig på tillgången till lämpliga prekliniska modeller som exakt kan förutsäga patientens svar. En av nackdelarna med befintliga prekliniska modeller är oförmågan att kontextuellt bevara den mänskliga tumör microenvironment (TME) och korrekt representera intratumoral heterogenitet, vilket begränsar den kliniska översättningen av data. Däremot, genom att representera kulturen av levande fragment av mänskliga tumörer, tillåter den patient-härledda explant (PDE) plattformen läkemedelssvar att undersökas i ett tredimensionellt (3D) sammanhang som speglar de patologiska och arkitektoniska funktionerna i de ursprungliga tumörerna så nära som möjligt. Tidigare rapporter med PDEs har dokumenterat plattformens förmåga att skilja chemosensitive från kemoresistant tumörer, och det har visat sig att denna segregering är prediktiv för patientens svar på samma kemoterapier. Samtidigt ger PDEs möjlighet att förhöra molekylära, genetiska och histologiska funktioner hos tumörer som förutsäger läkemedelssvar och därigenom identifiera biomarkörer för patient stratifiering samt nya interventionella metoder för att sensibilisera resistenta tumörer. Detta dokument rapporterar PDE metodik i detalj, från samling av patient prover till slut punkt analys. Det ger en detaljerad beskrivning av explant härledning och kultur metoder, belyser skräddarsydda villkor för vissa tumörer, där så är lämpligt. För endpointanalys finns fokus på multiplexerad immunofluorescens och multispektral avbildning för rumslig profilering av viktiga biomarkörer inom både tumör- och stromalregioner. Genom att kombinera dessa metoder är det möjligt att generera kvantitativa och kvalitativa läkemedelssvarsdata som kan relateras till olika clinicopathologiska parametrar och därmed potentiellt användas för biomarköridentifiering.

Multispektral avbildning av mIF-färgade histologiska sektioner tillåter identifiering och fenotypning av enskilda cellpopulationer och identifiering av tumör- och strosala komponenter i explant TME(figur 2). Multispektral avbildning är särskilt användbart för analys av vävnader med hög inneboende autofluorescens, såsom vävnad med högt kollageninnehåll, eftersom det gör det möjligt att dekonvolutera autofluorescenssignalen från andra signaler och uteslutas från efterföljande...

Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

Detta dokument beskriver metoder för generering, läkemedelsbehandling och analys av patient-härledda explants för att bedöma tumör läkemedel svar i ett levande, patient-relevant, prekliniska modellsystem.

Patient-härledda tumör explanter som en "levande" preklinisk plattform för att förutsäga läkemedelsresistens hos patienter

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

De patient-härledda explants är en kortsiktig metod som ger omedelbara läkemedelssvarsdata som exakt kan förutsäga patientens resultat. PD-plattformarna gör det möjligt att undersöka läkemedelssvar i ett 3D-sammanhang som speglar de patologiska och arkitektoniska egenskaperna hos de regionala tumörerna så nära som möjligt. Explanter har potential att ge nya insikter om metabolismen och verkningsmekanismen för ett läkemedel och att underlätta identifieringen av nya farmakodynamiska biomarkörer.Innan du påbörjar experimentet, rengör all kirurgisk utrustning med 70% industriell metylerad spritlösning. Fyll en 10 centimeters odlingsfat med 25 ml färskt medium på is. Använd pincett, överför provet till en dental vaxyta Och använd två hudtransplantatblad för att skära vävnaden i fragment på cirka två till tre kubikmillimeter.Överför explanterna till en 10 centimeter skål och placera sex till nio bitar av vävnaden i ett en milliliterrör som innehåller 10% icke buffrad formalinlösning för en 24-timmars inkubation vid rumstemperatur. Fyll önskat antal brunnar på en sex brunnsplatta med 1,5 milliliter färskt medium per brunn. Och placera en organotypisk kulturinsats skål i varje brunn så att den flyter ovanpå mediet.Placera sex till nio explanter på varje insatsskiva och förvara för en inkubation på 16 timmar i en 5% koldioxidinkubator för att möjliggöra återvinning. Nästa dag, tillsätt färskt medium och läkemedel till varje brunn på en ny tallrik. Inkludera en brunn för fordonskontrollen.När alla läkemedelsbehandlingar har förberetts, använd pincett för att överföra ett skär till varje brunn i den nya sex brunnsplattan för en 24 till 48 timmars inkubation i koldioxidinkubatorn. Efter läkemedelsbehandlingen överför du skivorna till nya sex brunnsplattor som innehåller 10%formalin. Och tillsätt några droppar 10% formalin till toppen av varje explant för att säkerställa fullständig täckning med fixativet i 24 timmars inkubation vid rumstemperatur.Nästa dag blötlägg ett lämpligt antal små histologisvampar i 70% industriell metylerad lösning. Och placera svamparna i histologikassetter. När alla svampar har placerats, överför alla explanter från samma läkemedelsbehandlingstillstånd till en enda svamp med den läkemedelsbehandlade sidan av varje explant som kontaktar den insatta skivan.Placera en annan presoaked svamp ovanpå varje explant och stäng kassetten för att säkra explanterna i kassetten. Sänk sedan ner kassetterna i 70% industriell metylerad lösning innan du fortsätter med den histologiska bearbetningen. Efter skanning utför du en utbildningsanalys och laddar skanningarna som innehåller stämplarna för utbildning till lämplig analysprogramvara.I enlägesvy navigerar du genom bilderna och väljer skanningarna för att analysera och skanna med inneboende fluorescens. med den inneboende fluorescensskanningen på en enda vy klickar du på autofluorescensväljaren för att rita ett segment på ett område med oförstörd vävnad. Klicka på redigera markörer och färger och ange markörnamnen i rutan som är associerad med varje fluorofor.Klicka på förbered bilder så att programvaran kan subtrahera intensiteten av inneboende fluorescens från alla uppladdade bilder. Klicka på segmentvävnadssteget ovanpå skärmen för att öppna träningsfönstret för vävnadssegmentering. Ange namnet på varje vävnadskategori som ska segmenteras på panelen vävnadskategorier.Klicka på rita om du vill rita regioner runt grupper av celler i den vävnadskategori som är av intresse. Byt sedan till nästa vävnadskategori och rita nya regioner. När alla träningsregioner har definierats använder du tågvävnadssegmenterare och väntar på att träningsnoggrannheten ska avgöras.Eventuellt till ett värde nära 100%Klicka segment alla för att segmentera vävnaderna. När du har verifierat kvaliteten på vävnadssegmenteringen klickar du på cellsegmentering och väljer de cellfack som ska segmenteras. Om du vill konfigurera kärnkomponenten använder du det typiska intensitetsreglaget för att justera tröskelvärdet som används för att identifiera kärnpixlarna.Live feedback tillhandahålls av förhandsgranskningsfönstret. Om du vill dela kluster av kärnpixlar markerar du den knapp som bäst beskriver färgningskvaliteten på kärnorna i delningspanelen i delningspanelen och använder skjutreglaget för att justera delningskänsligheten. Klicka sedan på segmentera alla för att segmentera alla bilder.När alla bilder har segmenterats, i fenotyppanelen, lägg till listan över fenotyper som ska detekteras och ange namnet på fenotyperna i motsvarande textruta. Klicka på redigera fenotyper för att markera en viss cell och markera motsvarande fenotyp i den nedrullningsbara menyn. När du har slutfört valet för träning klickar du på tågklassificeraren för att utvärdera resultatet av varje fenotyp.Fortsätt med fenotyp alla, spara projektet och klicka på exportera. Välj fliken batchanalys och läs in projektet i batchalgoritmen eller projektrutan. Om du vill exportera bilderna och tabellerna markerar du alla rutor i exportalternativen, klickar på Lägg till bilder och läser in alla bilder som innehåller stämplarna för de tidigare förberedda batcharna.Klicka sedan på Kör till startbatchens analys av en stämpel och exportera motsvarande data när de har förvärvats. Multi-spektral imaging av NSCLC explant vävnad färgade för markörer för cellen livskraft, tillåter identifiering och fenotypning av enskilda cellpopulationer, liksom identifiering av tumör och stromal komponenter inom explant tumör micro miljö. Vävnad och cell segmentering av cellen livskraft markör fläckar multi-spektral bilder som visats, kan användas för att kvantifiera celldöd och spridning hos patienten härledda explanter behandlas med läkemedel av intresse.I denna analys identifierades till exempel ett högre antal döende celler i vävnadsprover från tumörer som behandlats med Nivolumab jämfört med de kontrollbehandlade tumörproverna. Dessutom, som illustreras, möjligheten att extrahera rumslig information från färgade dissekeringar, tillåter beräkningen av intercell avstånd. Explanter kan också användas för omfattande rumslig profilering eller masscytometri, vilket gör att hundratals biomarkörer kan profileras samtidigt vid subsidiär upplösning samtidigt som provets 3D-struktur bevaras.PDs kunde förutsäga effekten av immunterapi. Det kan till exempel vara möjligt att skilja känsliga eller resistenta fall till immun kontrollpunktshämmare och undersöka de mekanismer som ligger till grund för denna distinktion.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Utveckling och underhåll av en preklinisk patient Derived Tumör xenograft modell för undersökning av nya anti-cancerterapier

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Märkning av bröstcancerpatient som härrör xenografter med spår Reportrar för tumörtillväxt och metastas studier

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patient-härledda ortotopiska xenograft-modeller för Human Urotelial cellkarcinom och kolorektal cancer tumörtillväxt och spontan metastaser

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Patient-derived heterogena xenograft modell av pankreascancer med Zebrafish larver som värdar för jämförande drog bedömning

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Inrättande av patienter med Ventrikelhärledd xenograft-modell och primära cellinjer

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

Förbättrad livskraft för Ex vivo 3D Hydrogel Kulturer av patient-derived Xenografts i en Perfused mikrofluidisk plattform

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Läkemedelsscreening av primär patient härledd tumör Xenografts i Zebrafish

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

In vitro-analys med hög genomströmning med patient-härledda tumörorganoider

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

Multiparametrisk tumörorganoid läkemedelsscreening med hjälp av Widefield Live-Cell Imaging för bulk- och enorganoidanalys

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

Ortotopisk implantation av patienthärledda cancerceller hos möss rekapitulerar avancerad kolorektal cancer

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...