Name: using the gal4-uas system for functional genetics in anopheles gambiae
Uploaded: 2021-04-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the GAL4-UAS System for Functional Genetics in Anopheles gambiae at JoVE.com

ونحن نعترف بامتنان التمويل من LSTM وIVCC (أدريانا أدولفي)، BBSRC (جائزة المحقق الجديد (AL)، MRC (درجة الدكتوراه إلى BCP:MR/P016197/1)، ويلكوم (السير هنري ويلكوم زمالة ما بعد الدكتوراه إلى LG: 215894/Z/19/Z) التي أدرجت تحليل Gal4UAS في المقترحات.

1. تصميم وبناء بنى ال UAS
<ol><li>تصميم وتجميع النواقل للتعبير الجيني المرشح
	<ol>
<li>تحديد التسلسل الذي سيتم استخدامه للتنظيم التنظيمي للجين المرشح.<ol>
<li>تسلسل cDNA / gDNA من سلالة الاهتمام ومقارنتها بالتسلسل المنشور للتحقق من هويته وتحديد SNPs المحتملة ومواقع التقييد للهضم التشخيص?...

<ol>
	<li>Brand, A. H., Perimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Duffy, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GAL4+system+in+drosophila:+A+fly+geneticist's+swiss+army+knife.">GAL4 system in drosophila: A fly geneticist's swiss army knife.</a> Journal of Genetics and Development. 34 (1-2), 1-15 (2002).</li><li>Dow, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ELS. , (2012).</li><li>Edi, C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CYP6+P450+Enzymes+and+ACE-1+Duplication+Produce+Extreme+and+Multiple+Insecticide+Resistance+in+the+Malaria+Mosquito+Anopheles+gambiae.">CYP6 P450 Enzymes and ACE-1 Duplication Produce Extreme and Multiple Insecticide Resistance in the Malaria Mosquito Anopheles gambiae.</a> PLoS Genetics. 10 (3), 1004236 (2014).</li><li>Daborn, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Drosophila+melanogaster+to+validate+metabolism-based+insecticide+resistance+from+insect+pests.">Using Drosophila melanogaster to validate metabolism-based insecticide resistance from insect pests.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 42 (12), 918-924 (2012).</li><li>Riveron, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+transcription+and+functional+analyses+reveal+heterogeneous+molecular+mechanisms+driving+pyrethroids+resistance+in+the+major+malaria+vector+Anopheles+funestus+across+Africa.">Genome-wide transcription and functional analyses reveal heterogeneous molecular mechanisms driving pyrethroids resistance in the major malaria vector Anopheles funestus across Africa.</a> Genes Genomes Genetics. 7 (6), 1819-1832 (2017).</li><li>Riveron, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+mutation+in+the+GSTe2+gene+allows+tracking+of+metabolically+based+insecticide+resistance+in+a+major+malaria+vector.">A single mutation in the GSTe2 gene allows tracking of metabolically based insecticide resistance in a major malaria vector.</a> Genome Biology. 15 (2), (2014).</li><li>Lynd, A., Lycett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+Bi-Partite+Gal4-UAS+System+in+the+African+Malaria+Mosquito,+Anopheles+gambiae.">Development of the Bi-Partite Gal4-UAS System in the African Malaria Mosquito, Anopheles gambiae.</a> PLoS ONE. 7 (2), 31552 (2012).</li><li>Lynd, A., Lycett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+Gal4-UAS+system+in+an+Anopheles+gambiae+cell+line.">Optimization of the Gal4-UAS system in an Anopheles gambiae cell line.</a> Insect Molecular Biology. 20 (5), 599-608 (2011).</li><li>Adolfi, A., Pondeville, E., Lynd, A., Bourgouin, C., Lycett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-tissue+GAL4-mediated+gene+expression+in+all+Anopheles+gambiae+life+stages+using+an+endogenous+polyubiquitin+promoter.">Multi-tissue GAL4-mediated gene expression in all Anopheles gambiae life stages using an endogenous polyubiquitin promoter.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 96, 1-9 (2018).</li><li>Kokoza, V. A., Raikhel, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+in+the+transgenic+Aedes+aegypti+using+the+binary+Gal4-UAS+system.">Targeted gene expression in the transgenic Aedes aegypti using the binary Gal4-UAS system.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 41, 637-644 (2011).</li><li>O'Brochta, D. A., Pilitt, K. L., Harrell, R. A., Aluvihare, C., Alford, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gal4-based+Enhancer-Trapping+in+the+Malaria+Mosquito+Anopheles+stephensi.">Gal4-based Enhancer-Trapping in the Malaria Mosquito Anopheles stephensi.</a> Genes Genomes Genetics. 2, 21305-21315 (2012).</li><li>Zhao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+Gut-Specific+Carboxypeptidase:+A+Study+Using+the+Binary+Gal4/UAS+System+in+the+Mosquito+Aedes+Aegypti.">Regulation of the Gut-Specific Carboxypeptidase: A Study Using the Binary Gal4/UAS System in the Mosquito Aedes Aegypti.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 54, 1-10 (2014).</li><li>Imamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Gene+Expression+Using+the+GAL4/UAS+System+in+the+Silkworm+Bombyx+mori.">Targeted Gene Expression Using the GAL4/UAS System in the Silkworm Bombyx mori.</a> Genetics. 165 (3), 1329-1340 (2003).</li><li>Lynd, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+functional+genetic+tool+for+Anopheles+gambiae+oenocyte+characterisation:+application+to+cuticular+hydrocarbon+synthesis.">Development of a functional genetic tool for Anopheles gambiae oenocyte characterisation: application to cuticular hydrocarbon synthesis.</a> bioRxiv. , (2019).</li><li>Pondeville, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemocyte-targeted+gene+expression+in+the+female+malaria+mosquito+using+the+hemolectin+promoter+from+Drosophila.">Hemocyte-targeted gene expression in the female malaria mosquito using the hemolectin promoter from Drosophila.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 120, 103339 (2020).</li><li>Adolfi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genetic+validation+of+key+genes+conferring+insecticide+resistance+in+the+major+African+malaria+vector,+Anopheles+gambiae.">Functional genetic validation of key genes conferring insecticide resistance in the major African malaria vector, Anopheles gambiae.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (51), 25764-25772 (2019).</li><li>Pondeville, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+integrase-mediated+site-specific+germline+transformation+of+Anopheles+gambiae.">Efficient integrase-mediated site-specific germline transformation of Anopheles gambiae.</a> Nature Protocols. 9 (7), 1698-1712 (2014).</li><li>Horn, C., Schmid, B. G. M., Pogoda, F. S., Wimmer, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+transformation+markers+for+insect+transgenesis.">Fluorescent transformation markers for insect transgenesis.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 32, 1221-1235 (2002).</li><li>Clements, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A. Biology of Mosquitoes, Volume 1: Development, Nutrition and Reproduction. 1, (1992).</li><li>Trpi&#353;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+bleaching+and+decalcifying+method+for+general+use+in+zoology.">A new bleaching and decalcifying method for general use in zoology.</a> Canadian Journal of Zoology. 48, 892-893 (1970).</li><li>Kaiser, M. L., Duncan, F. D., Brooke, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+Development+and+Rates+of+Metabolic+Activity+in+Early+and+Late+Hatching+Eggs+of+the+Major+Malaria+Vector+Anopheles+gambiae.">Embryonic Development and Rates of Metabolic Activity in Early and Late Hatching Eggs of the Major Malaria Vector Anopheles gambiae.</a> PLoS ONE. 9 (12), 114381 (2014).</li><li>Grigoraki, L., Grau-Bov&#233;, X., Yates, H. C., Lycett, G. J., Ranson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+transcriptomic+analysis+of+Anopheles+gambiae+oenocytes+enables+the+delineation+of+hydrocarbon+biosynthesis.">Isolation and transcriptomic analysis of Anopheles gambiae oenocytes enables the delineation of hydrocarbon biosynthesis.</a> eLife. 9, 58019 (2020).</li><li>Xiao, Y. -. H., Yin, M. -. H., Hou, L., Pei, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+amplification+of+intron-containing+hairpin+RNA+construct+from+genomic+DNA.">Direct amplification of intron-containing hairpin RNA construct from genomic DNA.</a> BioTechniques. 41 (5), 548-552 (2006).</li><li>Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+and+Mapping+of+a+Sequence+on+the+Drosophila+melanogaster+X+and+Y+Chromosomes+That+Is+Transcribed+during+Spermatogenesis.">Organization and Mapping of a Sequence on the Drosophila melanogaster X and Y Chromosomes That Is Transcribed during Spermatogenesis.</a> Genetics. 107 (4), 611-634 (1984).</li><li>MR4, CDC, NEI &amp; beiResources. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The MR4 Methods in Anopheles Research Laboratory Manual. 5th Edition. , (2015).</li><li>Sik Lee, Y., Carthew, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+a+better+RNAi+vector+for+Drosophila:+use+of+intron+spacers.">Making a better RNAi vector for Drosophila: use of intron spacers.</a> Methods. 30 (4), 322-329 (2003).</li><li>Cha-aim, K., Hoshida, H., Fukunaga, T., Akada, R., Peccoud, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gene Synthesis: Methods and Protocols. , 97-110 (2012).</li><li>Cavener, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+consensus+sequence+flanking+translational+start+sites+in+Drosophila+and+vertebrates.">Comparison of the consensus sequence flanking translational start sites in Drosophila and vertebrates.</a> Nucleic Acids Research. 15 (4), 1353-1361 (1987).</li><li>Wang, Y., Wang, F., Wang, R., Zhao, P., Xia, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2A+self-cleaving+peptide-based+multi-gene+expression+system+in+the+silkworm+Bombyx+mori.">2A self-cleaving peptide-based multi-gene expression system in the silkworm Bombyx mori.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li><li>Galizi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+synthetic+sex+ratio+distortion+system+for+the+control+of+the+human+malaria+mosquito.">A synthetic sex ratio distortion system for the control of the human malaria mosquito.</a> Nature Communications. 5, 3977 (2014).</li><li>Kondo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurochemical+organisation+of+the+Drosophila+Brain+Visualised+by+Endogenously+Tagged+Neurotransmitter+Receptors.">Neurochemical organisation of the Drosophila Brain Visualised by Endogenously Tagged Neurotransmitter Receptors.</a> Cell Reports. 30 (1), 284-297 (2020).</li><li>Lee, P. -. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gene-specific+T2A-GAL4+library+for+Drosophila.">A gene-specific T2A-GAL4 library for Drosophila.</a> eLife. 7, 35574 (2018).</li><li>Marois, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+sorting+of+mosquito+larvae+for+laboratory+studies+and+for+future+vector+control+interventions.">High-throughput sorting of mosquito larvae for laboratory studies and for future vector control interventions.</a> Malaria Journal. 11, 302 (2012).</li><li>Crawford, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+production+of+male+Wolbachia-infected+Aedes+aegypti+mosquitoes+enables+large-scale+suppression+of+wild+populations.">Efficient production of male Wolbachia-infected Aedes aegypti mosquitoes enables large-scale suppression of wild populations.</a> Nature Biotechnology. 38 (4), 482-492 (2020).</li><li>Goltsev, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+and+evolutionary+basis+for+drought+tolerance+of+the+Anopheles+gambiae+embryo.">Developmental and evolutionary basis for drought tolerance of the Anopheles gambiae embryo.</a> Developmental Biology. 330 (2), 462-470 (2009).</li><li>Rezende, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+desiccation+resistance+in+Aedes+aegypti:+presumptive+role+of+the+chitinized+Serosal+Cuticle.">Embryonic desiccation resistance in Aedes aegypti: presumptive role of the chitinized Serosal Cuticle.</a> BMC Developmental Biology. 8 (1), 82 (2008).</li><li>Vargas, H. C. M., Farnesi, L. C., Martins, A. J., Valle, D., Rezende, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serosal+cuticle+formation+and+distinct+degrees+of+desiccation+resistance+in+embryos+of+the+mosquito+vectors+Aedes+aegypti,+Anopheles+aquasalis+and+Culex+quinquefasciatus.">Serosal cuticle formation and distinct degrees of desiccation resistance in embryos of the mosquito vectors Aedes aegypti, Anopheles aquasalis and Culex quinquefasciatus.</a> Journal of Insect Physiology. 62, 54-60 (2014).</li><li>Chang, C. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-canonical+Notch+signaling+is+essential+for+the+control+of+fertility+in+Aedes+aegypti.">The non-canonical Notch signaling is essential for the control of fertility in Aedes aegypti.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 12 (3), 0006307 (2018).</li><li>Clemons, A., Flannery, E., Kast, K., Severson, D., Duman-Scheel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+Analysis+of+Protein+Expression+during+Aedes+aegypti+Development.">Immunohistochemical Analysis of Protein Expression during Aedes aegypti Development.</a> Spring Harbor Protocols. 10, 1-4 (2010).</li><li>Juhn, J., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybridization+in+situ+of+Salivary+Glands,+Ovaries+and+Embryos+of+Vector+Mosquitoes.">Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries and Embryos of Vector Mosquitoes.</a> Journal of Visualized Experiments. , e3709 (2012).</li></ol>

إن فهم وظيفة الجينات للبعوض أمر حيوي لتطوير نهج جديدة لمكافحة الأنوفيليس والتأثير على انتقال الملاريا. نظام GAL4-UAS الموصوف هو نظام متعدد الاستخدامات وقوي للتحليل الوظيفي للجينات المرشحة وحتى الآن استخدمنا النظام لدراسة الأساس الوراثي لمقاومة المبيدات الحشرية17 وإنتاج ا?...

نظام GAL4-UAS ثنائي الأطراف هو العمود الفقري لتوصيف وظيفي للجينات في الكائن الحي نموذج الحشرات Drosophila melanogaster1،2،3. لاستخدام نظام GAL4-UAS ، يتم عبور خطوط السائق المعدلة وراثيا ، والتي تعبر عن عامل نسخ الخميرة GAL4 تحت سيطرة تسلسل تنظيمي ، مع خطوط المستجيب التي تحمل جينا مهما أو بناء تداخل الحمض النووي الريبي (RNAI) الذي يتحكم فيه تسلسل تنشيط المنبع (UAS) المعترف به من قبل GAL4. تعبر ذرية هذا الصليب عن تحويل الاهتمام بنمط ندواتي يمليه المروج الذي يتحكم في تعبير GAL4 (الشكل 1). يمكن تقييم الأنماط الظاهرية التي تظهرها ذرية الصلبان المستجيبة للسائق لتوضيح وظيفة الجينات المرشحة. على الرغم من أن D. melanogaster قد استخدمت لفحص الجينات من الكائنات الحية الأخرى4,5,6,7, وقد تم تكييف نظام GAL4-UAS الآن لاستخدامها في الحشرات ذات الأهمية الطبية والزراعية لتوفير تحليل مباشر في الأنواع ذات الأهمية 8,9,10,11,12,13,14.
وفي بعوضة الملاريا الأفريقية، أنوفيليس غامبيا، تم اختبار نظام GAL4-UAS لأول مرة عن طريق خط الخلية المشترك transfection9. تم فحص العديد من البنى للكفاءة في تركيبات مختلفة ثنائية ووجدت أن 14 UAS المتكررة جنبا إلى جنب تكملها intron اصطناعية صغيرة (UAS-14i) عرض أوسع نطاق من إمكانات التنشيط عند استخدامها مع لوحة من السائقين GAL4. لإثبات في وظائف الجسم الحي، ثم استخدمت هذه البنى لإنشاء خطين منفصلين المعدلة وراثيا An. غامبيا بواسطة PiggyBac transformation8: خط سائق يحمل GAL4 يقودها مروج محدد midgut، وخط المستجيب التي تحتوي على كل من لوسيفيراز وتعزيز الجينات البروتين الفلوري الأصفر (eYFP) تحت تنظيم تسلسل UAS. وأشار نشاط لوسيفيراز محددة الأمعاء والفلورسينس في ذرية أن النظام كان فعالا في Anopheles. ومنذ ذلك الحين، تم إنشاء خطوط للسائق تعبر عن المتحولات في الأنسجة الأخرى الهامة لقدرة النواقل ومقاومة المبيدات الحشرية، بما في ذلك oenocytes15 و hemocytes16، وفي نمط قريب من كل مكان10. كما تم إنشاء العديد من خطوط UAS لتقصي الجينات التي يعتقد أنها تشارك في عملية التمثيل الغذائي وعزل مقاومة المبيدات الحشرية بوساطة ، وتركيب الهيدروكربونات الخصية ووضع علامات فلورية على أنواع مختلفة من الخلايا والأنسجة (الجدول 1). بالنسبة لخطوط المستجيب ، يتم الآن تنفيذ التكامل الموجه من الموقع للمتحول من قبل ΦC31 الكاسيت المحفز 17،18 لإصلاح السياق الجينومي للجينات المنظمة ل UAS. وبهذه الطريقة، يتم تطبيع التعبير المتحول فيما يتعلق بموقع الإدراج الجينومي، مما يسمح بإجراء مقارنة أكثر دقة للآثار الظاهرية للجينات المرشحة المختلفة.
تم تصميم خطوط المستجيب التي تم إنشاؤها حتى الآن إما للتعبير عن المتحول إما عند مستويات مرتفعة أو للحد من التعبير الجيني من خلال تداخل الحمض النووي الريبي (RNAAi). عادة ما يتم دمج استنساخ cDNA في تسلسل UAS لتوليد البلازميدات التعبيرية المناسبة ، ولكن التسلسلات الجينومية الكاملة ممكنة أيضا على افتراض أنها ليست كبيرة جدا للاستنساخ. لتوليد بناء إسكات، استخدمنا ثلاث طرق مختلفة للحصول على تسلسل مقلوب جنبا إلى جنب مناسبة التي تشكل دبوس الشعر dsRNA الذي يحفز RNAI. وشملت هذه PCR الانصهار، PCR غير المتماثلة والتوليف التجاري لبنى دبوس الشعر. ومن الشائع في كل طريقة إدراج تسلسل إنتروني بين التسلسلات المقلوبة لتوفير استقرار الاستنساخ. وقد تم تطوير البلازميدات المستجيبة التي يمكن إدخال جين من الفائدة / بناء RNAi15. هذه البلازميدات تحمل أيضا مواقع ATTB ΦC31 المطلوبة لRMCE (الموصوفة في ورقة أدولفي المصاحبة JoVE التي تصف تقنية RCME بالتفصيل). تتضمن هذه المخطوطة بروتوكولات تغطي الخطوات المهمة المطلوبة عند اختيار التسلسل لإدراجه في إحدى هذه البلازميدات للإفراط في التعبير. بالإضافة إلى ذلك، يتم وصف ويتضح بروتوكولين لإنشاء بناء دبوس الشعر RNAi.
عند إنشاء خطوط جديدة، وتحديد الأفراد المعدلة وراثيا نادرة أمر بالغ الأهمية للتكاثر من لإنشاء وصيانة المستعمرات المعدلة وراثيا. والأهم من ذلك بالنسبة لنظام GAL4-UAS هناك ضرورة للتمييز بين خطوط المستجيب والسائق لإنشاء الصلبان وتحديد ذرية الفردية التي تحمل كلا المتحولين. ويتحقق ذلك باستخدام جينات مختلفة مهيمنة للعلامات القابلة للاختيار مرتبطة بمقايس السائق والمستجيب. الأكثر شيوعا هذه هي الجينات علامة الفلورسنت التي يمكن تمييزها بوضوح باستخدام المرشحات البصرية (على سبيل المثال، eYFP، eCFP، dsRed). من المهم أن يتم التعبير عن العلامات في نمط ندواتي معروف وموثوق به لأن هذا يجعل تحديد التشوهات والتلوث أسهل. يتم تنظيم التعبير الجيني لعلامة الفلورسنت بشكل روتيني من قبل المروج الاصطناعي 3xP3 ، والذي يسبب تعبيرا محددا للعين والبطين في جميع مراحل التنمية الغامبية An. يتم تضمين علامات الفلورسنت التي تسيطر عليها 3xP3 في جميع plasmids التحول الموصوفة في هذه المقالة. يتم تضمين بروتوكول يفصل الأساليب الشائعة المستخدمة لفحص خطوط الفلورسنت An. غامبيا PUPAe GAL4-UAS هنا.
أحد العناصر الرئيسية لنظام GAL4-UAS هو ضرورة عبور خطوط السائق والمستجيب المميزة بشكل متفاوت. للقيام بذلك يجب فصل الذكور والإناث من كل خط قبل التزاوج. الكبار يمكن تمييزها بسهولة عن طريق البصر، ومع ذلك، لإنشاء الصلبان الوراثية فمن المعقول لفصل بين الجنسين قبل ظهور الكبار لضمان أن التزاوج لم يحدث. والفرق العام في الحجم بين الذكور والإناث An. gambiae pupae متغير جدا بحيث لا يمكن أن يكون طريقة فعالة ويمكن الاعتماد عليها لتحديد نوع الجنس20. وبدلا من ذلك، توفر الاختلافات المورفولوجية الواضحة في الأعضاء التناسلية الخارجية أساسا موثوقا به لممارسة الجنس في أن غامبيا. في هذه المقالة، ونحن نصف طريقة يمكن الاعتماد عليها لممارسة الجنس An. الغامبية الخوادر لإعداد الصلبان المناسبة.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62131/62131fig1v3.jpg"> الشكل 1 - التمثيل التخطيطي لعملية استخدام نظام GAL4-UAS ثنائي الأطراف في أنوفيليس غامبيا. (أ) يتم تصوير المكونات الرئيسية لمتجه مثال (pSL-attB-UAS14-gyp [3xp3-eYFP]) ، مع تفصيل مواقع التقييد المتاحة (EcoRI و NheI و XhoI و NcoI) داخل مواقع الاستنساخ المتعددة المناسبة للاستخدام لإدراج بناء دبوس الشعر أو تسلسل الترميز لجين الاهتمام. كما يصور هيكل خط الإرساء. (ب) توضح خطوة العبور استخدام الذكور من خط السائق (تحمل سائق GAL4 من قبل مروج للاهتمام وeCFP يقودها المروج 3xP3) والإناث من خط المستجيب (تحمل جين الاهتمام أو بناء دبوس الشعر التي يسيطر عليها مروج UAS وعلامة eYFP التي يسيطر عليها المروج 3xP3). (ج) تمثيل تخطيطي ل GAL4 يقود التعبير عن جين الاهتمام بذرية الصليب في B وقائمة ببعض الأنماط الظاهرية النموذجية التي يتم تقييمها. الاختصارات: موقع استنساخ متعدد (MCS)، تبادل كاسيت بوساطة إعادة دمج (RMCE)، تسلسل المنشط المنبع (UAS)، البروتين الفلوري الأصفر المعزز (eYFP)، بروتين فلوري سماوي معزز (eCFP). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62131/62131fig1v2large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
إن استخدام الصلبان هو الذي يوفر الطبيعة الثنائية لنظام GAL4-UAS، الذي له مزايا متميزة على النهج الخطية الأكثر. فعلى سبيل المثال، يمكن تقييم توليفات من خطوط السائق والمستجيب أكثر بكثير مما يمكن أن يكون ممكنا إذا كان لا بد من إنشاء خط جديد معدل وراثيا وصيانته لكل تركيبة من مجموعات المروجين/الجينات. والأهم من ذلك، أنه يسمح بتحليل الجينات التي تنتج الأنماط الظاهرية القاتلة أو العقيمة عندما يكون تعبيرها مضطربا والتي يصعب إنشاؤها / صيانتها في نظام خطي. ويمكن أن تظهر هذه الأنماط الظاهرية الفتاكة في جميع مراحل النمو، اعتمادا على وظيفة الجينات والتعبير الصدغي، ولكن غالبا ما يلاحظ أثناء النمو الجنيني. يتطلب تصور نمو جنين البعوض إزالة المشيمة المبهمة التي تغطي البيض. بعد الأساليب الموصوفة في Trpiš (1970)21 وكايزر وآخرون (2014)22، نقوم بوصف البروتوكولات التي نستخدمها لإصلاح الأجنة، مع الحفاظ على السلامة الهيكلية، والتبييض لمسح الإندوشوريون الذي يسمح بالتصور والتصوير المجهريين.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 x 15 mm plastic Petri dish</td>
			<td>SLS</td>
			<td>2175546</td>
			<td>Pack of 10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L Gilson Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F144059P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20/25 mL Universal Tubes</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>E1412-3020</td>
			<td>Pack of 400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Pasteur Pipettes</td>
			<td>SLS</td>
			<td>G612398</td>
			<td>Greiner Pasteur pipette 3 mL sterile individually wrapped</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Falcon Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11512303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-500</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>SLS</td>
			<td>45726-1L-F</td>
			<td>1 L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cages</td>
			<td>SLS</td>
			<td>E6099</td>
			<td>30x30x30 with screen port</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Paint Brushes</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>UKDPB66</td>
			<td>KOLAMOON 9 Pieces Detail Painting Brush Set Miniture Brushes for Watercolor, Acrylic Painting, Oil Painting (Wine Red)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish food</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
			<td>Tetra Min Fish Food, Complete Food for All Tropical Fish for Health, Colour and Vitality, 10 L&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde Solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouth Aspirator</td>
			<td>John Hock</td>
			<td>612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pond Salt</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
			<td>Blagdon Guardian Pond Tonic Salt, for Fish Health, Water Quality, General Tonic, pH Buffer, 9.08 kg, treats 9,092 L&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pupae Pots</td>
			<td>Cater4you</td>
			<td>SP8OZ</td>
			<td>250 pots with lids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Plastic Buckets</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
			<td>2.5 L White Plastic Pail Complete with White Lid (Pack of 10)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hypochlorite</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S25552</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the gal4-uas system for functional genetics in anopheles gambiae

نظام GAL4-UAS ثنائي الأطراف هو أداة متعددة الاستخدامات وقوية للتحليل الجيني الوظيفي. جوهر النظام هو عبور خطوط "السائق" المعدلة وراثيا التي تعبر عن عامل نسخ الخميرة GAL4 بطريقة محددة الأنسجة، مع خطوط "المستجيب" المعدلة وراثيا تحمل الجينات مرشح / الجيش الملكي النيبالي تدخل بناء الذي يتم التحكم في التعبير عن طريق تسلسل التنشيط المنبع (UAS) التي تربط GAL4. في ذرية ما تلا ذلك، يتم التعبير عن بناء الجينات أو إسكات بطريقة محددة الفضة، مما يتيح الأنماط الظاهرية الناتجة أن يتم فحصها واستدلال وظيفة الجينات. يتيح النظام الثنائي المرونة في النهج التجريبية لفحص الأنماط الظاهرية الناتجة عن التعبير المتحول في أنماط متعددة خاصة بالأنسجة ، حتى لو تم تحريض تكاليف اللياقة البدنية الشديدة. وقد قمنا بتكييف هذا النظام مع أنوفيليس غامبيا، الناقل الرئيسي للملاريا في أفريقيا.
في هذه المقالة، نقدم بعض الإجراءات الشائعة المستخدمة أثناء تحليل GAL4-UAS. ونصف خطوط An. gambiae GAL4-UAS التي تم إنشاؤها بالفعل، وكذلك استنساخ البنى المستجيبة الجديدة ل upregulation وRNAi بالضربة القاضية. نحدد دليلا خطوة بخطوة لممارسة الجنس مع جرو البعوض لإنشاء الصلبان الوراثية ، والتي تشمل أيضا فحص ذرية لمتابعة ميراث علامات الجينات الفلورية التي تشير إلى إدخال السائق والمستجيب. كما نقدم بروتوكولا لتطهير أجنة أنغامبيا لدراسة التطور الجنيني. وأخيرا، نقدم التكيفات المحتملة للطريقة لتوليد خطوط السائق من خلال إدراج CRISPR/Cas9 من GAL4 المصب من الجينات المستهدفة.

3xP3 التعبير عن eYFP، dsRed وeCFP يوفر موثوق بها، وتحديد يمكن تمييزها بسهولة من الأفراد الذين يمتلكون الجينات علامة إنتاج التعبير في العيون والعصابات البطنية من الجراء غامبيا (الشكل 3). 100- ويبرز الشكل 4 المورفولوجيا التفاضلية الملاحظة في الأعضاء التناسلي?...

Watch this Scientific Journal Video about Using the GAL4-UAS System for Functional Genetics in Anopheles gambiae at JoVE.com

Using the GAL4-UAS System for Functional Genetics in Anopheles gambiae

نظام GAL4-UAS ثنائي الأطراف هو أداة متعددة الاستخدامات لتعديل التعبير الجيني بطريقة ندواتية خاضعة للرقابة تسمح بالتحليل الوراثي الوظيفي في أنوفيليس غامبيا. والإجراءات الموصوفة لاستخدام هذا النظام هي استراتيجية استنساخ شبه موحدة، والجنس وفحص الخوادر للكشف عن علامات البروتين الفلورية تثبيت الأجنة.

استخدام نظام GAL4-UAS لعلم الوراثة الوظيفية في أنوفيليس غامبيا

The bipartite GAL4-UAS system is a versatile and powerful tool for functional genetic analysis. The essence of the system is to cross transgenic 'driver' ...

نظام GAL4-UAS ثنائي الأطراف هو أداة متعددة الاستخدامات للتحليل الجيني الوظيفي في أنوفيليس غامبيا من خلال التعديل الوراثي للتعبير الجيني بطريقة محكومة بالفضفضة. النظام الثنائي يتيح المرونة في النهج التجريبية لتوصيف phenotypic التعبير transgene حتى لو تم تحريض تكاليف اللياقة البدنية الشديدة. يمكن استخدام هذا النظام في التوصيف الظاهري للجينات التي يحتمل أن تشارك في مقاومة المبيدات الحشرية أو انتقال مسببات الأمراض أو تلك التي لها استخدامات في أساليب التحكم الجيني.فريزر كولمان، فني أبحاث، سوف تساعد على إظهار هذا الإجراء تبدأ عن طريق جمع الخوخ باستخدام ماصة باستور البلاستيك ثلاثة ملليلتر مع قطع نهاية قبالة على طبق مسطح واضحة مناسبة للاستخدام مع المجهر ستيريو. إزالة بعناية معظم المياه حول الخوخ. بدوره على لمبة الفلورسنت والسماح لها الاحماء.النظر في أنماط اللون spatiotemporal من التعبير ونسبة الأنماط الظاهرية المختلفة التي من المتوقع عند فحص لعلامة الفلورسنت. حدد الفلتر المطلوب على مجسمة الفلورسينس وتحقق من وجود شعاع ملون من الضوء المرئي موجه إلى وسط لوحة المسرح. تحت الضوء الأبيض، مركز الخوادر في مجال الرؤية وجعلها في التركيز.قم بإيقاف تشغيل الضوء الأبيض واستخدم التركيز الدقيق لجعل منطقة الخوادر تحمل النمط الظاهري للاهتمام مع نمط فلوري مرئي في التركيز. استخدام فرشاة الطلاء تفاصيل دقيقة لتحويل بلطف الخوادر وتحريك المجاذيف الشرجية بحيث يمكن التعرف على الأعضاء التناسلية الخارجية. جروة منفصلة على أساس الأعضاء التناسلية الخارجية المميزة.الذكور لديهم أنبوب طويل أن ينقذم من الجزء الظهري النهائي ما يقرب من نصف طول المجاذيف الشرجية. الأعضاء التناسلية الخارجية للجرو الأنثوي أقصر بكثير وbifurcate. فصل الخوادر جنس إلى مجموعات من 10 أو أقل في أنابيب واضحة 20 ملليلتر مع الماء، وختم الأنابيب مع كرة من القطن والصوف.يستنشق العدد المطلوب من البالغين الذكور والإناث من الأنابيب إلى قفص أو دلو صغير ، مع الحرص على عدم إلحاق الضرر بالبالغين أثناء هذا النقل. الحفاظ على الصليب لمدة خمسة إلى سبعة أيام قبل تغذية الدم. في اليوم التالي، يمكن جمع البويضات لدراسة نمو الجنين.تجميع غرفة oviposition وإدخال بعناية 10 إلى 15 الإناث التي تغذيها الدم في ذلك. تغطية غرفة oviposition وترك لمدة 20 دقيقة. فصل بعناية أنبوب البولي بروبلين 50 ملليلتر من وعاء oviposition، مع التأكد من عدم الإفراج عن البعوض.يغطى القدر ويترك البيض ينضج إلى مرحلة النمو من الاهتمام. التقاط البيض من وعاء باستخدام فرشاة الطلاء تفاصيل دقيقة ووضعها على الماء في كتلة الزجاج حفر 40 ملليمتر مربع. إزالة المياه بعناية من كتلة الزجاج مع micropipette وتغطية البيض في 500 ميكرولتر من FAA.تذبذب بلطف على شاكر المدارية في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. شطف البيض جيدا 15 مرة مع الماء المقطر لإزالة جميع آثار حل FAA. باستخدام 1000 ميكرولتر micropipette إضافة ثم إزالة ملليلتر واحد من الماء المقطر في وقت واحد مع الحرص على عدم الإضرار البيض أثناء القيام بذلك.يغطى البيض الثابت بميليلتر واحد من محلول Trpis ويحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. سيبدأ البيض في تطوير بقع شاحبة بعد خمس دقائق من الحضانة التي تصل في نهاية المطاف إلى لون أبيض حليبي بمجرد مسحه. شطف البيض جيدا 15 مرات مع الماء المقطر لإزالة جميع آثار محلول Trpis.ويلاحظ التعبير عن علامات الفلورسنت التي يقودها المروج 3xP3 في العينين والعصابات البطنية من الخوخ غامبي Anopheles. باستخدام علامات الفلورسنت الملونة المختلفة يسمح اختيار وفحص الأفراد المعدلة تحمل مختلف GAL4 ومكونات UAS. عند العمل مع نظام GAL4-UAS ثنائي الأطراف ، من الضروري عبور الذكور والإناث من سلالات مختلفة للحصول على ذرية تحمل مكونات GAL4 و UAS.يستخدم المورفولوجيا التفاضلية التي لوحظت في الأعضاء التناسلية الخارجية للذكور والإناث من الخوادر لممارسة الجنس. يتم تسليط الضوء هنا على مثال لجروة لا يمكن التعرف عليها. إزالة جميع المياه من الخوادر ، كما هو مبين على اليمين ، يزيد من صعوبة الجنس حيث تحجب المجاذيف الشرجية تصور الأعضاء التناسلية.يسمح نظام GAL4-UAS ثنائي الأطراف بتعديل التعبير الجيني بطريقة ندواتية متحكم فيها. ويمكن تصور هذا عن طريق عبور oenocyte وGAL4 في كل مكان أربعة التعبير عن خطوط السائق مع خط المستجيب UAS-mCherry. فائدة رئيسية لاستخدام نظام GAL4-UAS ثنائي الأطراف هي سهولة دراسة الأنماط الظاهرية القاتلة حتى في المرحلة الجنينية.للقيام بذلك ، من الضروري تصور مورفولوجيا الداخلية للأجنة. يمكن رؤية الخصائص المورفولوجية الطبيعية التي لوحظت في مراحل مختلفة من النمو الجنيني في 12 و 24 و 36 ساعة بعد الولادة بعد الانتهاء من بروتوكول إزالة الأجنة. من الضروري طوال هذا الإجراء عدم السماح للجراء والبيض بالجفف.لذلك، من المهم العمل بسرعة عند إزالة السوائل. وقد سمحت لنا طريقة GAL4-UAS بالتوصيف الوظيفي للجينات المشاركة في مقاومة المبيدات الحشرية وتلك التي لها استخدامات محتملة في أساليب التحكم في محركات الجينات.

Research

JoVE Journal

Genetics

Using the GAL4-UAS System for Functional Genetics in Anopheles gambiae

Analysis of the Ambient Particulate Matter-induced Chromosomal Aberrations Using an In Vitro System

Analysis of the Ambient Particulate Matter-induced Chromosomal Aberrations Using an In Vitro System

تحليل الكروموسومات الزيغ الناجم عن المواد-المحيط الجسيمات باستخدام<em&gt; في المختبر</em&gt; النظام

Exposure to particulate matter (PM) is a major world health concern, which may damage various cellular components, including the nuclear genetic material. ...

Detection of Copy Number Alterations Using Single Cell Sequencing

الكشف عن نسخة عدد التعديلات عن طريق التسلسل خلية واحدة

Detection of genomic changes at single cell resolution is important for characterizing genetic heterogeneity and evolution in normal tissues, cancers, and ...

Systemic Delivery of MicroRNA Using Recombinant Adeno-associated Virus Serotype 9 to Treat Neuromuscular Diseases in Rodents

منهجية تقديم ميكرورنا باستخدام النمط المصلي المسيطر المؤتلف الفيروسات المرتبطة بالغدة 9 لعلاج الأمراض العصبية العضلية في القوارض

RNA interference via the endogenous miRNA pathway regulates gene expression by controlling protein synthesis through post-transcriptional gene silencing. ...

Determination of the Optimal Chromosomal Location(s) for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

Determination of the Optimal Chromosomal Locations for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

تحديد المواقع صبغية أمثل لعنصر الحمض النووي في الإشريكيّة القولونية باستخدام نهج ينقول بوساطة جديدة

The optimal chromosomal position(s) of a given DNA element was/were determined by transposon-mediated random insertion followed by fitness selection. In ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

عالية الدقة الفلورسنت في الموقع التهجين في المورفولوجية الأجنة والأنسجة باستخدام التضخيم الإشارات تيراميدي

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

CRISPR-Mediated Reorganization of Chromatin Loop Structure

كريسبر بوساطة إعادة تنظيم هيكل حلقة الكروماتين

Recent studies have clearly shown that long-range, three-dimensional chromatin looping interactions play a significant role in the regulation of gene ...

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System (REQS)

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System REQS

قياس "مستويات ممارسة" في المورفولوجية melanogaster تدوير ممارسة القياس الكمي النظام (ريكس) باستخدام

Drosophila melanogaster is a new model organism for studies in exercise biology. To date, two main exercise systems, the Power Tower and the Treadwheel ...

Characterizing Histone Post-translational Modification Alterations in Yeast Neurodegenerative Proteinopathy Models

يصف هستون تعديل بوستترانسلاشونال التعديلات في نماذج بروتينوباثي الأعصاب الخميرة

Neurodegenerative diseases, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Parkinson&#39;s disease (PD), cause the loss of hundreds of thousands of lives ...

In vivo Application of the REMOTE-control System for the Manipulation of Endogenous Gene Expression

في تطبيق نظام التحكم عن بعد "التلاعب بالتعبير الجيني الذاتية" فيفو

Here we describe a protocol for implementing the REMOTE-control system (Reversible Manipulation of Transcription at Endogenous loci), which allows for ...

In Vivo Functional Study of Disease-associated Rare Human Variants Using Drosophila

In Vivo Functional Study of Disease-associated Rare Human Variants Using Drosophila

في فيفو دراسة وظيفية من المتغيرات البشرية النادرة المرتبطة بالأمراض باستخدام دروسوفيلا

Advances in sequencing technology have made whole-genome and whole-exome datasets more accessible for both clinical diagnosis and cutting-edge human ...