Name: using the gal4-uas system for functional genetics in anopheles gambiae
Uploaded: 2021-04-15T13:00:00
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हम कृतज्ञतापूर्वक LSTM और IVCC (एड्रियाना एडॉल्फी), BBSRC (नए अन्वेषक पुरस्कार (AL), MRC (BCP: MR/ P016197/1 के लिए पीएचडी studentship), Wellcome (सर हेनरी वेलकम पोस्टडॉक्टरल फैलोशिप से एलजी: 215894 / Z / 19 / Z) से धन को स्वीकार करते हैं, जिन्होंने प्रस्तावों में Gal4UAS विश्लेषण को शामिल किया है।

1. डिजाइन और यूएएस निर्माणों का निर्माण
<ol><li>उम्मीदवार जीन अभिव्यक्ति के लिए वैक्टर का डिजाइन और असेंबली
	<ol>
<li>उम्मीदवार जीन upregulation के लिए इस्तेमाल किया जा करने के लिए अनुक्रम निर्धारित करें।<o...

<ol>
	<li>Brand, A. H., Perimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Duffy, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GAL4+system+in+drosophila:+A+fly+geneticist's+swiss+army+knife.">GAL4 system in drosophila: A fly geneticist's swiss army knife.</a> Journal of Genetics and Development. 34 (1-2), 1-15 (2002).</li><li>Dow, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ELS. , (2012).</li><li>Edi, C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CYP6+P450+Enzymes+and+ACE-1+Duplication+Produce+Extreme+and+Multiple+Insecticide+Resistance+in+the+Malaria+Mosquito+Anopheles+gambiae.">CYP6 P450 Enzymes and ACE-1 Duplication Produce Extreme and Multiple Insecticide Resistance in the Malaria Mosquito Anopheles gambiae.</a> PLoS Genetics. 10 (3), 1004236 (2014).</li><li>Daborn, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Drosophila+melanogaster+to+validate+metabolism-based+insecticide+resistance+from+insect+pests.">Using Drosophila melanogaster to validate metabolism-based insecticide resistance from insect pests.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 42 (12), 918-924 (2012).</li><li>Riveron, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+transcription+and+functional+analyses+reveal+heterogeneous+molecular+mechanisms+driving+pyrethroids+resistance+in+the+major+malaria+vector+Anopheles+funestus+across+Africa.">Genome-wide transcription and functional analyses reveal heterogeneous molecular mechanisms driving pyrethroids resistance in the major malaria vector Anopheles funestus across Africa.</a> Genes Genomes Genetics. 7 (6), 1819-1832 (2017).</li><li>Riveron, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+mutation+in+the+GSTe2+gene+allows+tracking+of+metabolically+based+insecticide+resistance+in+a+major+malaria+vector.">A single mutation in the GSTe2 gene allows tracking of metabolically based insecticide resistance in a major malaria vector.</a> Genome Biology. 15 (2), (2014).</li><li>Lynd, A., Lycett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+Bi-Partite+Gal4-UAS+System+in+the+African+Malaria+Mosquito,+Anopheles+gambiae.">Development of the Bi-Partite Gal4-UAS System in the African Malaria Mosquito, Anopheles gambiae.</a> PLoS ONE. 7 (2), 31552 (2012).</li><li>Lynd, A., Lycett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+Gal4-UAS+system+in+an+Anopheles+gambiae+cell+line.">Optimization of the Gal4-UAS system in an Anopheles gambiae cell line.</a> Insect Molecular Biology. 20 (5), 599-608 (2011).</li><li>Adolfi, A., Pondeville, E., Lynd, A., Bourgouin, C., Lycett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-tissue+GAL4-mediated+gene+expression+in+all+Anopheles+gambiae+life+stages+using+an+endogenous+polyubiquitin+promoter.">Multi-tissue GAL4-mediated gene expression in all Anopheles gambiae life stages using an endogenous polyubiquitin promoter.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 96, 1-9 (2018).</li><li>Kokoza, V. A., Raikhel, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+in+the+transgenic+Aedes+aegypti+using+the+binary+Gal4-UAS+system.">Targeted gene expression in the transgenic Aedes aegypti using the binary Gal4-UAS system.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 41, 637-644 (2011).</li><li>O'Brochta, D. A., Pilitt, K. L., Harrell, R. A., Aluvihare, C., Alford, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gal4-based+Enhancer-Trapping+in+the+Malaria+Mosquito+Anopheles+stephensi.">Gal4-based Enhancer-Trapping in the Malaria Mosquito Anopheles stephensi.</a> Genes Genomes Genetics. 2, 21305-21315 (2012).</li><li>Zhao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+Gut-Specific+Carboxypeptidase:+A+Study+Using+the+Binary+Gal4/UAS+System+in+the+Mosquito+Aedes+Aegypti.">Regulation of the Gut-Specific Carboxypeptidase: A Study Using the Binary Gal4/UAS System in the Mosquito Aedes Aegypti.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 54, 1-10 (2014).</li><li>Imamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Gene+Expression+Using+the+GAL4/UAS+System+in+the+Silkworm+Bombyx+mori.">Targeted Gene Expression Using the GAL4/UAS System in the Silkworm Bombyx mori.</a> Genetics. 165 (3), 1329-1340 (2003).</li><li>Lynd, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+functional+genetic+tool+for+Anopheles+gambiae+oenocyte+characterisation:+application+to+cuticular+hydrocarbon+synthesis.">Development of a functional genetic tool for Anopheles gambiae oenocyte characterisation: application to cuticular hydrocarbon synthesis.</a> bioRxiv. , (2019).</li><li>Pondeville, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemocyte-targeted+gene+expression+in+the+female+malaria+mosquito+using+the+hemolectin+promoter+from+Drosophila.">Hemocyte-targeted gene expression in the female malaria mosquito using the hemolectin promoter from Drosophila.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 120, 103339 (2020).</li><li>Adolfi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genetic+validation+of+key+genes+conferring+insecticide+resistance+in+the+major+African+malaria+vector,+Anopheles+gambiae.">Functional genetic validation of key genes conferring insecticide resistance in the major African malaria vector, Anopheles gambiae.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (51), 25764-25772 (2019).</li><li>Pondeville, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+integrase-mediated+site-specific+germline+transformation+of+Anopheles+gambiae.">Efficient integrase-mediated site-specific germline transformation of Anopheles gambiae.</a> Nature Protocols. 9 (7), 1698-1712 (2014).</li><li>Horn, C., Schmid, B. G. M., Pogoda, F. S., Wimmer, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+transformation+markers+for+insect+transgenesis.">Fluorescent transformation markers for insect transgenesis.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 32, 1221-1235 (2002).</li><li>Clements, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A. Biology of Mosquitoes, Volume 1: Development, Nutrition and Reproduction. 1, (1992).</li><li>Trpi&#353;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+bleaching+and+decalcifying+method+for+general+use+in+zoology.">A new bleaching and decalcifying method for general use in zoology.</a> Canadian Journal of Zoology. 48, 892-893 (1970).</li><li>Kaiser, M. L., Duncan, F. D., Brooke, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+Development+and+Rates+of+Metabolic+Activity+in+Early+and+Late+Hatching+Eggs+of+the+Major+Malaria+Vector+Anopheles+gambiae.">Embryonic Development and Rates of Metabolic Activity in Early and Late Hatching Eggs of the Major Malaria Vector Anopheles gambiae.</a> PLoS ONE. 9 (12), 114381 (2014).</li><li>Grigoraki, L., Grau-Bov&#233;, X., Yates, H. C., Lycett, G. J., Ranson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+transcriptomic+analysis+of+Anopheles+gambiae+oenocytes+enables+the+delineation+of+hydrocarbon+biosynthesis.">Isolation and transcriptomic analysis of Anopheles gambiae oenocytes enables the delineation of hydrocarbon biosynthesis.</a> eLife. 9, 58019 (2020).</li><li>Xiao, Y. -. H., Yin, M. -. H., Hou, L., Pei, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+amplification+of+intron-containing+hairpin+RNA+construct+from+genomic+DNA.">Direct amplification of intron-containing hairpin RNA construct from genomic DNA.</a> BioTechniques. 41 (5), 548-552 (2006).</li><li>Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+and+Mapping+of+a+Sequence+on+the+Drosophila+melanogaster+X+and+Y+Chromosomes+That+Is+Transcribed+during+Spermatogenesis.">Organization and Mapping of a Sequence on the Drosophila melanogaster X and Y Chromosomes That Is Transcribed during Spermatogenesis.</a> Genetics. 107 (4), 611-634 (1984).</li><li>MR4, CDC, NEI &amp; beiResources. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The MR4 Methods in Anopheles Research Laboratory Manual. 5th Edition. , (2015).</li><li>Sik Lee, Y., Carthew, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+a+better+RNAi+vector+for+Drosophila:+use+of+intron+spacers.">Making a better RNAi vector for Drosophila: use of intron spacers.</a> Methods. 30 (4), 322-329 (2003).</li><li>Cha-aim, K., Hoshida, H., Fukunaga, T., Akada, R., Peccoud, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gene Synthesis: Methods and Protocols. , 97-110 (2012).</li><li>Cavener, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+consensus+sequence+flanking+translational+start+sites+in+Drosophila+and+vertebrates.">Comparison of the consensus sequence flanking translational start sites in Drosophila and vertebrates.</a> Nucleic Acids Research. 15 (4), 1353-1361 (1987).</li><li>Wang, Y., Wang, F., Wang, R., Zhao, P., Xia, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2A+self-cleaving+peptide-based+multi-gene+expression+system+in+the+silkworm+Bombyx+mori.">2A self-cleaving peptide-based multi-gene expression system in the silkworm Bombyx mori.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li><li>Galizi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+synthetic+sex+ratio+distortion+system+for+the+control+of+the+human+malaria+mosquito.">A synthetic sex ratio distortion system for the control of the human malaria mosquito.</a> Nature Communications. 5, 3977 (2014).</li><li>Kondo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurochemical+organisation+of+the+Drosophila+Brain+Visualised+by+Endogenously+Tagged+Neurotransmitter+Receptors.">Neurochemical organisation of the Drosophila Brain Visualised by Endogenously Tagged Neurotransmitter Receptors.</a> Cell Reports. 30 (1), 284-297 (2020).</li><li>Lee, P. -. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gene-specific+T2A-GAL4+library+for+Drosophila.">A gene-specific T2A-GAL4 library for Drosophila.</a> eLife. 7, 35574 (2018).</li><li>Marois, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+sorting+of+mosquito+larvae+for+laboratory+studies+and+for+future+vector+control+interventions.">High-throughput sorting of mosquito larvae for laboratory studies and for future vector control interventions.</a> Malaria Journal. 11, 302 (2012).</li><li>Crawford, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+production+of+male+Wolbachia-infected+Aedes+aegypti+mosquitoes+enables+large-scale+suppression+of+wild+populations.">Efficient production of male Wolbachia-infected Aedes aegypti mosquitoes enables large-scale suppression of wild populations.</a> Nature Biotechnology. 38 (4), 482-492 (2020).</li><li>Goltsev, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+and+evolutionary+basis+for+drought+tolerance+of+the+Anopheles+gambiae+embryo.">Developmental and evolutionary basis for drought tolerance of the Anopheles gambiae embryo.</a> Developmental Biology. 330 (2), 462-470 (2009).</li><li>Rezende, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+desiccation+resistance+in+Aedes+aegypti:+presumptive+role+of+the+chitinized+Serosal+Cuticle.">Embryonic desiccation resistance in Aedes aegypti: presumptive role of the chitinized Serosal Cuticle.</a> BMC Developmental Biology. 8 (1), 82 (2008).</li><li>Vargas, H. C. M., Farnesi, L. C., Martins, A. J., Valle, D., Rezende, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serosal+cuticle+formation+and+distinct+degrees+of+desiccation+resistance+in+embryos+of+the+mosquito+vectors+Aedes+aegypti,+Anopheles+aquasalis+and+Culex+quinquefasciatus.">Serosal cuticle formation and distinct degrees of desiccation resistance in embryos of the mosquito vectors Aedes aegypti, Anopheles aquasalis and Culex quinquefasciatus.</a> Journal of Insect Physiology. 62, 54-60 (2014).</li><li>Chang, C. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-canonical+Notch+signaling+is+essential+for+the+control+of+fertility+in+Aedes+aegypti.">The non-canonical Notch signaling is essential for the control of fertility in Aedes aegypti.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 12 (3), 0006307 (2018).</li><li>Clemons, A., Flannery, E., Kast, K., Severson, D., Duman-Scheel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+Analysis+of+Protein+Expression+during+Aedes+aegypti+Development.">Immunohistochemical Analysis of Protein Expression during Aedes aegypti Development.</a> Spring Harbor Protocols. 10, 1-4 (2010).</li><li>Juhn, J., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybridization+in+situ+of+Salivary+Glands,+Ovaries+and+Embryos+of+Vector+Mosquitoes.">Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries and Embryos of Vector Mosquitoes.</a> Journal of Visualized Experiments. , e3709 (2012).</li></ol>

एनोफिलीज को नियंत्रित करने और मलेरिया संचरण को प्रभावित करने के लिए नए दृष्टिकोण विकसित करने के लिए मच्छर जीन समारोह को समझना महत्वपूर्ण है। वर्णित GAL4-UAS प्रणाली उम्मीदवार जीन के कार्यात्मक विश्ले...

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 x 15 mm plastic Petri dish</td>
			<td>SLS</td>
			<td>2175546</td>
			<td>Pack of 10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L Gilson Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F144059P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20/25 mL Universal Tubes</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>E1412-3020</td>
			<td>Pack of 400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Pasteur Pipettes</td>
			<td>SLS</td>
			<td>G612398</td>
			<td>Greiner Pasteur pipette 3 mL sterile individually wrapped</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Falcon Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11512303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-500</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>SLS</td>
			<td>45726-1L-F</td>
			<td>1 L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cages</td>
			<td>SLS</td>
			<td>E6099</td>
			<td>30x30x30 with screen port</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Paint Brushes</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>UKDPB66</td>
			<td>KOLAMOON 9 Pieces Detail Painting Brush Set Miniture Brushes for Watercolor, Acrylic Painting, Oil Painting (Wine Red)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish food</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
			<td>Tetra Min Fish Food, Complete Food for All Tropical Fish for Health, Colour and Vitality, 10 L&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde Solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouth Aspirator</td>
			<td>John Hock</td>
			<td>612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pond Salt</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
			<td>Blagdon Guardian Pond Tonic Salt, for Fish Health, Water Quality, General Tonic, pH Buffer, 9.08 kg, treats 9,092 L&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pupae Pots</td>
			<td>Cater4you</td>
			<td>SP8OZ</td>
			<td>250 pots with lids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Plastic Buckets</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
			<td>2.5 L White Plastic Pail Complete with White Lid (Pack of 10)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hypochlorite</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S25552</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the gal4-uas system for functional genetics in anopheles gambiae

द्विपक्षीय GAL4-UAS प्रणाली कार्यात्मक आनुवंशिक विश्लेषण के लिए एक बहुमुखी और शक्तिशाली उपकरण है। प्रणाली का सार ट्रांसजेनिक 'ड्राइवर' लाइनों को पार करना है जो खमीर प्रतिलेखन कारक GAL4 को ऊतक विशिष्ट तरीके से व्यक्त करते हैं, ट्रांसजेनिक 'उत्तरदाता' लाइनों के साथ एक उम्मीदवार जीन / आरएनए हस्तक्षेप निर्माण को ले जाता है जिसकी अभिव्यक्ति अपस्ट्रीम सक्रियण अनुक्रम (यूएएस) द्वारा नियंत्रित होती है जो GAL4 को बांधती है। आगामी संतानों में, जीन या मौन निर्माण इस प्रकार एक निर्धारित स्पैटिओटेम्पोरल तरीके से व्यक्त किया जाता है, जिससे परिणामी फेनोटाइप्स को परखने और जीन फ़ंक्शन का अनुमान लगाया जा सकता है। बाइनरी सिस्टम कई ऊतक-विशिष्ट पैटर्न में ट्रांसजीन अभिव्यक्ति द्वारा उत्पन्न फेनोटाइप्स को स्क्रीन करने के लिए प्रयोगात्मक दृष्टिकोण में लचीलापन सक्षम बनाता है, भले ही गंभीर फिटनेस लागत प्रेरित हो। हमने अफ्रीका में प्रमुख मलेरिया वेक्टर एनोफिलीज़ गाम्बिया के लिए इस प्रणाली को अनुकूलित किया है।
इस लेख में, हम GAL4-UAS विश्लेषण के दौरान उपयोग की जाने वाली कुछ सामान्य प्रक्रियाएं प्रदान करते हैं। हम पहले से ही उत्पन्न एक गाम्बिया GAL4-UAS लाइनों का वर्णन करते हैं, साथ ही साथ upregulation और RNAI नॉकडाउन के लिए नए उत्तरदाता निर्माणों की क्लोनिंग का वर्णन करते हैं। हम आनुवांशिक क्रॉस स्थापित करने के लिए मच्छर प्यूपे के सेक्सिंग के लिए एक कदम-दर-चरण मार्गदर्शिका निर्दिष्ट करते हैं, जिसमें फ्लोरोसेंट जीन मार्करों की विरासत का पालन करने के लिए स्क्रीनिंग संतान भी शामिल है जो ड्राइवर और उत्तरदाता सम्मिलन को टैग करते हैं। हम भ्रूण के विकास का अध्ययन करने के लिए एक गाम्बिया भ्रूण को साफ करने के लिए एक प्रोटोकॉल भी प्रस्तुत करते हैं। अंत में, हम लक्ष्य जीन के नीचे GAL4 के CRISPR / Cas9 सम्मिलन के माध्यम से ड्राइवर लाइनों को उत्पन्न करने के लिए विधि के संभावित अनुकूलन का परिचय देते हैं।

eYFP, dsRed और eCFP की 3xP3 अभिव्यक्ति विश्वसनीय, आसानी से पहचानयोग्य पहचान प्रदान करती है, जो आंखों में अभिव्यक्ति का उत्पादन करने वाले मार्कर जीन रखने वाले व्यक्तियों की पहचान करते हैं और An. gambiae pupae के वेंट्र?...

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Using the GAL4-UAS System for Functional Genetics in Anopheles gambiae

द्विपक्षीय GAL4-UAS प्रणाली एक नियंत्रित spatiotemporal तरीके से जीन अभिव्यक्ति के संशोधन के लिए एक बहुमुखी उपकरण है जो Anopheles gambiae में कार्यात्मक आनुवंशिक विश्लेषण की अनुमति देता है। इस प्रणाली का उपयोग करने के लिए वर्णित प्रक्रियाएं एक अर्ध-मानकीकृत क्लोनिंग रणनीति, सेक्सिंग और फ्लोरोसेंट प्रोटीन मार्करों और भ्रूण निर्धारण के लिए प्यूपे की स्क्रीनिंग हैं।

Anopheles gambiae में कार्यात्मक आनुवंशिकी के लिए GAL4-UAS प्रणाली का उपयोग करना

The bipartite GAL4-UAS system is a versatile and powerful tool for functional genetic analysis. The essence of the system is to cross transgenic 'driver' ...

द्विपक्षीय GAL4-UAS प्रणाली एक spatiotemporal नियंत्रित तरीके से जीन अभिव्यक्ति के आनुवंशिक संशोधन के माध्यम से Anopheles gambiae में कार्यात्मक आनुवंशिक विश्लेषण के लिए एक बहुमुखी उपकरण है। बाइनरी सिस्टम ट्रांसजीन अभिव्यक्ति के फेनोटाइपिक लक्षण वर्णन के लिए प्रयोगात्मक दृष्टिकोण में लचीलापन सक्षम बनाता है, भले ही गंभीर फिटनेस लागत प्रेरित हो। इस प्रणाली का उपयोग संभावित रूप से कीटनाशक प्रतिरोध, रोगज़नक़ संचरण, या आनुवंशिक नियंत्रण विधियों में उपयोग किए जाने वाले जीनों के फेनोटाइपिक लक्षण वर्णन के लिए किया जा सकता है।फ्रेजर कोलमैन, एक शोध तकनीशियन, इस प्रक्रिया को प्रदर्शित करने में मदद करेगा, एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के साथ उपयोग के लिए उपयुक्त एक स्पष्ट फ्लैट डिश पर अंत में कटौती के साथ तीन-मिलीलीटर प्लास्टिक पाश्चर पिपेट का उपयोग करके प्यूपे एकत्र करके शुरू करें। ध्यान से pupae के आसपास के पानी के अधिकांश निकालें. फ्लोरोसेंट बल्ब को चालू करें और इसे गर्म होने दें।एक अभिव्यक्ति के रंग spatiotemporal पैटर्न और विभिन्न फेनोटाइप के अनुपात पर विचार करें जो फ्लोरोसेंट मार्कर के लिए स्क्रीनिंग करते समय अपेक्षित हैं। प्रतिदीप्ति स्टीरियोस्कोप पर आवश्यक फ़िल्टर का चयन करें और जांचें कि प्रकाश का एक रंगीन बीम दिखाई दे रहा है जो स्टेज प्लेट के केंद्र में निर्देशित है। सफेद प्रकाश के तहत, देखने के क्षेत्र में प्यूपे को केंद्र में रखें और उन्हें ध्यान में लाएं।सफेद प्रकाश को बंद करें और ध्यान में एक दृश्यमान फ्लोरोसेंट पैटर्न के साथ ब्याज के फेनोटाइप को ले जाने वाले प्यूपे के क्षेत्र को लाने के लिए ठीक फोकस का उपयोग करें। एक ठीक विवरण पेंटब्रश का उपयोग करने के लिए धीरे से pupae बारी और गुदा paddles ले जाने के लिए इतना है कि बाहरी जननांग की पहचान की जा सकती है. विशिष्ट बाह्य जननांगों के आधार पर अलग प्यूपे।नर में एक लंबी ट्यूब होती है जो अंतिम पृष्ठीय खंड से गुदा पैडल की लंबाई का लगभग आधा हिस्सा निकालती है। मादा प्यूपे का बाहरी जननांग काफी छोटा और विभाजित होता है। पानी के साथ स्पष्ट 20-मिलीलीटर ट्यूबों में 10 या उससे कम के समूहों में सेक्स्ड प्यूपे को अलग करें, और कपास ऊन की एक गेंद के साथ ट्यूबों को सील करें।एक पिंजरे या छोटी बाल्टी में ट्यूबों से पुरुष और महिला वयस्कों की वांछित संख्या को एस्पिरेट करें, इस हस्तांतरण के दौरान वयस्कों को नुकसान न पहुंचाने का ध्यान रखें। रक्त खिलाने से पहले पांच से सात दिनों के लिए क्रॉस बनाए रखें। अगले दिन, भ्रूण के विकास का अध्ययन करने के लिए अंडे एकत्र किए जा सकते हैं।Oviposition कक्ष को इकट्ठा करें और ध्यान से इसमें 10 से 15 रक्त-खिलाया महिलाओं को पेश करें। Oviposition कक्ष को कवर करें और 20 मिनट के लिए छोड़ दें। ध्यान से oviposition पॉट से 50-milliliter polypropylene ट्यूब अलग, मच्छरों को जारी नहीं करने के लिए सुनिश्चित कर रही है।बर्तन को कवर करें और अंडे को ब्याज के विकास के चरण में परिपक्व होने की अनुमति दें। एक ठीक विवरण पेंटब्रश का उपयोग करके बर्तन से अंडे उठाएं और उन्हें 40-वर्ग मिलीमीटर खुदाई किए गए ग्लास ब्लॉक में पानी पर रखें। सावधानी से एक माइक्रोपिपेट के साथ ग्लास ब्लॉक से पानी को हटा दें और एफएए के 500 माइक्रोलीटर में अंडे को कवर करें।30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर कक्षीय शेकर पर धीरे से दोलन करें। एफएए समाधान के सभी निशानों को हटाने के लिए आसुत पानी के साथ अंडे को 15 बार अच्छी तरह से कुल्ला करें। एक 1000-माइक्रोलीटर माइक्रोपिपेट का उपयोग करके जोड़ें और फिर एक समय में एक मिलीलीटर आसुत पानी को हटा दें, ऐसा करते समय अंडे को नुकसान न पहुंचाने का ध्यान रखें।Trpis समाधान के एक मिलीलीटर के साथ निश्चित अंडे को कवर करें और 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें। अंडे पांच मिनट के बाद पीला पैच विकसित करना शुरू कर देंगे इनक्यूबेशन अंततः एक बार साफ होने के बाद एक दूधिया सफेद रंग तक पहुंच जाएगा। Trpis समाधान के सभी निशान को हटाने के लिए आसुत पानी के साथ अंडे को अच्छी तरह से 15 बार कुल्ला।3xP3 प्रमोटर द्वारा संचालित फ्लोरोसेंट मार्करों की अभिव्यक्ति आंखों और Anopheles gambiae pupae के वेंट्रल गैन्ग्लिया में देखी जाती है। विभिन्न रंगीन फ्लोरोसेंट मार्करों का उपयोग करना विभिन्न GAL4 और UAS घटकों को ले जाने वाले संशोधित व्यक्तियों के चयन और स्क्रीनिंग की अनुमति देता है। एक द्विपक्षीय GAL4-UAS प्रणाली के साथ काम करते समय, GAL4 और UAS दोनों घटकों को ले जाने वाली संतानों को प्राप्त करने के लिए विभिन्न उपभेदों से पुरुषों और महिलाओं को पार करना आवश्यक है।प्यूपे के पुरुष और महिला बाहरी जननांगों में देखी जाने वाली विभेदक आकृति विज्ञान का उपयोग सेक्सिंग के लिए किया जाता है। एक अज्ञात प्यूपे का एक उदाहरण यहां हाइलाइट किया गया है। प्यूपे से सभी पानी को हटाने, जैसा कि दाईं ओर दिखाया गया है, लिंग की कठिनाई को बढ़ाता है क्योंकि गुदा पैडल जननांगों के अस्पष्ट विज़ुअलाइज़ेशन को जोड़ता है।द्विपक्षीय GAL4-UAS प्रणाली एक नियंत्रित spatiotemporal तरीके से जीन अभिव्यक्ति के संशोधन की अनुमति देता है। यह oenocyte और सर्वव्यापी GAL4 चार उत्तरदाता लाइन UAS-mCherry के साथ ड्राइवर लाइनों को व्यक्त पार करके कल्पना की जा सकती है। एक द्विपक्षीय GAL4-UAS प्रणाली का उपयोग करने का एक महत्वपूर्ण लाभ भ्रूण चरण में भी घातक फेनोटाइप का अध्ययन करने में आसानी है।ऐसा करने के लिए, भ्रूण की आंतरिक आकृति विज्ञान की कल्पना करना आवश्यक है। 12, 24, और 36 घंटे के बाद भ्रूण विकास के विभिन्न चरणों में देखी गई सामान्य रूपात्मक विशेषताओं को भ्रूण समाशोधन प्रोटोकॉल के पूरा होने के बाद देखा जा सकता है। इस प्रक्रिया के दौरान यह महत्वपूर्ण है कि प्यूपे और अंडे को desiccate करने की अनुमति नहीं है।इसलिए, तरल पदार्थों को हटाते समय जल्दी से काम करना महत्वपूर्ण है। GAL4-UAS विधि ने हमें कीटनाशक प्रतिरोध में शामिल जीन और जीन ड्राइव नियंत्रण विधियों में संभावित उपयोगों वाले जीनों को कार्यात्मक रूप से चिह्नित करने की अनुमति दी है।

Research

JoVE Journal

Genetics

Using the GAL4-UAS System for Functional Genetics in Anopheles gambiae

Analysis of the Ambient Particulate Matter-induced Chromosomal Aberrations Using an In Vitro System

Analysis of the Ambient Particulate Matter-induced Chromosomal Aberrations Using an In Vitro System

परिवेश पार्टिकुलेट मैटर प्रेरित गुणसूत्र aberrations के विश्लेषण से एक का उपयोग<em&gt; इन विट्रो</em&gt; सिस्टम

Exposure to particulate matter (PM) is a major world health concern, which may damage various cellular components, including the nuclear genetic material. ...

Detection of Copy Number Alterations Using Single Cell Sequencing

नकल संख्या बदलाव की जांच सिंगल सेल अनुक्रमण का उपयोग

Detection of genomic changes at single cell resolution is important for characterizing genetic heterogeneity and evolution in normal tissues, cancers, and ...

Systemic Delivery of MicroRNA Using Recombinant Adeno-associated Virus Serotype 9 to Treat Neuromuscular Diseases in Rodents

रिकॉमबिनेंट Adeno-एसोसिएटेड वायरस सीरोटाइप 9 का उपयोग कर MicroRNA की प्रणालीगत डिलिवरी कुतर में Neuromuscular रोगों का इलाज

RNA interference via the endogenous miRNA pathway regulates gene expression by controlling protein synthesis through post-transcriptional gene silencing. ...

Determination of the Optimal Chromosomal Location(s) for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

Determination of the Optimal Chromosomal Locations for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

इष्टतम गुणसूत्र स्थान का निर्धारण (ओं) एक डीएनए तत्व के लिए एक उपंयास Transposon-मध्यस्थता दृष्टिकोण का उपयोग कर ई कोलाई में

The optimal chromosomal position(s) of a given DNA element was/were determined by transposon-mediated random insertion followed by fitness selection. In ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

Drosophila भ्रूण और Tyramide संकेत प्रवर्धन का उपयोग कर ऊतकों में सीटू संकरण में उच्च संकल्प फ्लोरोसेंट

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

CRISPR-Mediated Reorganization of Chromatin Loop Structure

CRISPR-क्रोमेटिन लूप संरचना की मध्यस्थता पुनर्गठन

Recent studies have clearly shown that long-range, three-dimensional chromatin looping interactions play a significant role in the regulation of gene ...

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System (REQS)

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System REQS

घूर्णन व्यायाम ठहराव प्रणाली (REQS) का उपयोग Drosophila melanogaster में व्यायाम के स्तर को मापने

Drosophila melanogaster is a new model organism for studies in exercise biology. To date, two main exercise systems, the Power Tower and the Treadwheel ...

Characterizing Histone Post-translational Modification Alterations in Yeast Neurodegenerative Proteinopathy Models

विशेषता हिस्one पोस्ट-translational में संशोधन परिवर्तन खमीर न्यूरोडेजेनेरेटिव प्रोटिनोपैथी मॉडल

Neurodegenerative diseases, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Parkinson&#39;s disease (PD), cause the loss of hundreds of thousands of lives ...

In vivo Application of the REMOTE-control System for the Manipulation of Endogenous Gene Expression

अंतर्जात जीन अभिव्यक्ति के हेरफेर के लिए दूरस्थ नियंत्रण प्रणाली के vivo आवेदन में

Here we describe a protocol for implementing the REMOTE-control system (Reversible Manipulation of Transcription at Endogenous loci), which allows for ...

In Vivo Functional Study of Disease-associated Rare Human Variants Using Drosophila

In Vivo Functional Study of Disease-associated Rare Human Variants Using Drosophila

रोग से जुड़े दुर्लभ मानव वेरिएंट Drosophila का उपयोग कर के Vivo कार्यात्मक अध्ययन में

Advances in sequencing technology have made whole-genome and whole-exome datasets more accessible for both clinical diagnosis and cutting-edge human ...