Name: an in vitro system to gauge the thrombolytic efficacy of histotripsy and a lytic drug
Uploaded: 2021-06-04T14:30:00
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इस काम को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान, ग्रांट R01HL13334 द्वारा वित्त पोषित किया गया था। लेखक डॉ केविन हैवर्थ को डॉ केविन हैवर्थ को प्रोटोकॉल डिजाइन करने में उनके समर्थन के लिए ड्राबकिन की परख और डॉ विक्टर बोल्लेन के साथ सहायता करने के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं । लेखक भी हिस्टोरिप्सी सोर्स डिजाइन करने पर उनके मार्गदर्शन के लिए डॉ एडम मैक्सवेल के आभारी हैं ।

यहां प्रस्तुत परिणामों के लिए, शिरा मानव रक्त स्थानीय आंतरिक समीक्षा बोर्ड (आईआरबी #19-1300) से अनुमोदन के बाद थक्के बनाने के लिए तैयार किया गया था और स्वयंसेवक दाताओं द्वारा प्रदान की गई सूचित सहमति2...

प्रस्तावित प्रोटोकॉल lysotripsy के उपचार प्रभावकारिता की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक मॉडल प्रस्तुत करता है। हालांकि प्रमुख विवरणों पर चर्चा की गई है, इस प्रोटोकॉल की सफलता के लिए विचार करने के लिए कुछ म?...

थ्रोम्बोसिस अन्यथा स्वस्थ रक्त वाहिका में थक्के बनने की स्थिति है जो परिसंचरण में बाधा डालती है1,2. वेनस थ्रोम्बोएम्बोलिज्म की वार्षिक स्वास्थ्य देखभाल लागत $ 7-10 बिलियन है, जिसमें संयुक्त राज्य अमेरिका में 375,000-425,000 मामलेहैं। पल्मोनरी एम्बोलिज्म पल्मोनरी धमनी की बाधा है और वेनस थ्रोम्बोएम्बोलिज्म का सबसे गंभीर परिणाम है। पल्मोनरी बाधा का प्राथमिक स्रोत गहरी नस थ्रोम्बी है, मुख्य रूप से इलियोफेमोरल वेनस सेगमेंट4,5,6से। गहरी नस थ्रोम्बोसिस (डीवीटी) में फेफड़े के अवरोधों के अलावा अंतर्निहित सीक्वेल है, जिसमें दीर्घकालिक जटिलताएं होती हैं जिसके परिणामस्वरूप दर्द, सूजन, पैर के छाले और अंग विच्छेदन7,8,9होते हैं। महत्वपूर्ण अवरोधों के लिए, कैथेटर निर्देशित थ्रोम्बोलिटिक्स (सीडीटी) पोत पुनर्नैनाइजेशन10के लिए अग्रिम दृष्टिकोण हैं। सीडीटी का परिणाम कई कारकों पर निर्भर करता है, जिनमें थ्रोम्बस आयु, स्थान, आकार, संरचना, एटियोलॉजी और रोगी जोखिम श्रेणी11शामिल हैं। इसके अलावा, सीडीटी संवहनी क्षति, संक्रमण, रक्तस्राव जटिलताओं, और लंबे समय तक उपचार समय10से जुड़ा हुआ है। अगली पीढ़ी के उपकरणों का उद्देश्य मैकेनिकल थ्रोम्बेक्टॉमी को थ्रोम्बोलिटिक्स (यानी फार्माकोनिकल थ्रोम्बेक्टॉमी)12, 13के साथ जोड़ना है। इन उपकरणों का उपयोग lytic खुराक कम करने के लिए कम रक्तस्राव जटिलताओं के लिए अग्रणी है, और सीडीटी की तुलना में12,13,14 छोटा उपचार समय । ये उपकरण अभी भी रक्तस्रावी दुष्प्रभावों और पुरानी थ्रोम्बी15को अधूरा हटाने के मुद्दों को बनाए रखते हैं। इस प्रकार एक एडजुवेंट रणनीति की आवश्यकता होती है जो कम रक्तस्राव जटिलताओं के साथ थ्रोम्बस को पूरी तरह से हटा सकती है।
एक संभावित दृष्टिकोण हिस्टोट्रिप्सी-एडेड थ्रोम्बोलिटिक उपचार है, जिसे lysotripsy के रूप में जाना जाता है। हिस्टोट्रिप्सी एक गैर-इनवेसिव उपचार मोडलि मोडली है जो ऊतकों में बुलबुले के बादलों को नाभिित करने के लिए केंद्रित अल्ट्रासाउंड का उपयोग करता है16। बबल गतिविधि एक्सोजेनस नाभिक के माध्यम से उत्पन्न नहीं होती है, बल्कि अल्ट्रासाउंड दालों के आवेदन से ऊतकों के लिए नाभिक आंतरिक को सक्रिय करने के लिए पर्याप्त तनाव के साथ होती है, जिसमें थक्का17,18शामिल हैं। बुलबुले के बादल का यांत्रिक दोलन थक्के को तनाव प्रदान करता है, संरचना को एककोशिकीय मलबे में विघटित करता है19। हिस्टोट्रिप्सी बबल एक्टिविटी वीवो और इन विट्रो20 , 21 , 22दोनों में मुकर गए और अनट्रेक्ट रक्त के थक्केकाप्रभावी क्षरण प्रदान करतीहै। पूर्व अध्ययनों में23,24 ने दर्शाया है कि हिस्टोट्रिप्सी और लिस्टिक रेकॉम्बिनेंट टिश्यू-प्रकार प्लाज्मिनोजेन एक्टिवेटर (आरटी-पीए) का संयोजन अकेले lytic या हिस्टोट्रिप्सी की तुलना में उपचार प्रभावकारिता को काफी बढ़ाता है। यह परिकल्पना की जाती है कि हिस्टोट्रिप्सी बबल गतिविधि से जुड़े दो प्राथमिक तंत्र बेहतर उपचार प्रभावकारिता के लिए जिम्मेदार हैं: 1) बढ़ी हुई लाइटिक डिलीवरी के कारण फाइब्रिनोलिसिस में वृद्धि हुई है, और 2) थक्के के भीतर लाल रक्त कोशिकाओं का हीमोलिसिस। थक्का द्रव्यमान का थोक लाल रक्त कोशिकाओं24से शामिल है, और इसलिए, एरिथ्रोसाइट क्षरण पर नज़र रखने के नमूने के ablation के लिए एक अच्छा किराए है। अन्य गठित थक्के तत्वों की भी संभावना हिस्टोरिप्सी बबल गतिविधि के तहत विघटित हो जाती है लेकिन इस प्रोटोकॉल में विचार नहीं किया जाता है।
यहां, वीवीटी इन विट्रो के साथ एलियोट्रिप्सी के इलाज के लिए एक बेंचटॉप दृष्टिकोण रेखांकित किया गया है। प्रोटोकॉल हिस्टोरिप्सी स्रोत के महत्वपूर्ण ऑपरेटिंग मापदंडों, उपचार प्रभावकारिता का आकलन, और छवि मार्गदर्शन का वर्णन करता है। प्रोटोकॉल में एक iliofemoral शिराद खंड की नकल करने और मानव पूरे रक्त के थक्के का निर्माण करने के लिए एक प्रवाह चैनल डिजाइन करना शामिल है। प्रायोगिक प्रक्रिया प्रवाह चैनल में रखे थक्के के साथ हिस्टोट्रिप्सी एक्सपोजर प्राप्त करने के लिए हिस्टोट्रिप्सी स्रोत और इमेजिंग सरणी की स्थिति को रेखांकित करती है। थक्का व्यवधान प्राप्त करने और ऑफ-टारगेट बबल गतिविधि को कम करने के लिए प्रासंगिक इनसोनेशन पैरामीटर परिभाषित किए गए हैं। बबल गतिविधि के मार्गदर्शन और मूल्यांकन के लिए अल्ट्रासाउंड इमेजिंग का उपयोग24दर्शाया गया है । थक्के जन हानि, डी-डाइमर (फाइब्रिनोलिसिस), और हीमोग्लोबिन (हीमोलिसिस) जैसे उपचार प्रभावकारिता की मात्रा निर्धारित करने के लिए मैट्रिक्स23,24,25,26, 27बताए गए हैं। कुल मिलाकर, यह अध्ययन डीवीटी के इलाज के लिए lysotripsy की प्रभावकारिता को निष्पादित करने और उसका आकलन करने के लिए एक प्रभावी साधन प्रदान करता है।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Absorbing sheets</td>
			<td>Precision acoustics</td>
			<td>F28-SMALL-M</td>
			<td>300mm x 300 mm x 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate Pasteur pippettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1367820A</td>
			<td>14.6 cm length, 2 mL capacity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22364111</td>
			<td>1.5 mL capacity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drabkin&#39;s assay</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5941-6VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Draw syringe</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-07945-43</td>
			<td>60 mL capacity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter bags</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>5162K111</td>
			<td>Remove particle size upto 1 microns</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow channel tubing</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>5154K25</td>
			<td>Polyethylene-lined EVA plastic tubing (Outer diameter: 3/8&#34;, Inner diameter: 1/4&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating elements</td>
			<td>Won Brothers</td>
			<td>HT 300 Titanium</td>
			<td>Titanium rods placed at the bottom of tank</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging array</td>
			<td>Verasonics</td>
			<td>L11-5v</td>
			<td>128 element with sensitivity from -55 to -49 dB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low gelling agarose</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A9414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model vessel</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>5234K98</td>
			<td>6.6 cm length, 0.6 cm inner diameter, 1 mm thickness</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanopure water</td>
			<td>Barnstead</td>
			<td>Nanopure Diamond</td>
			<td>ASTM type I, 18 Mohm-cm resistivity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma</td>
			<td>Vitalant</td>
			<td>4PF000</td>
			<td>Plasma frozen within 24 hours</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>Biotek</td>
			<td>Synergy Neo HST Plate Reader</td>
			<td>For haemoglobin quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Probe cover</td>
			<td>Civco</td>
			<td>610-362</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Programming platform</td>
			<td>MATLAB (the Mathworks, Natick, MA, USA)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant tissue-type plasminogen activator (rt-PA)</td>
			<td>Genentech</td>
			<td>Activase</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reservoir</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-07945-43</td>
			<td>60 mL capacity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-74900-20</td>
			<td>pump attached to the syringe to draw the flow in the flow channel at a pre-determined fized rate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transducer</td>
			<td>In-house customized</td>
			<td></td>
			<td>Eight-element, elliptically-focused transducer (9 cm major axis, 7 cm minor axis and 6 cm focal length), powered by custom designed and built class D amplifier and matching network</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound scaning system</td>
			<td>Verasonics</td>
			<td></td>
			<td>Vantage Research Ultrasound System</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water tank</td>
			<td>Advanced acrylics</td>
			<td>C133</td>
			<td>14 x 14 x 12, 1/2&#34;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro system to gauge the thrombolytic efficacy of histotripsy and a lytic drug

गहरी नस थ्रोम्बोसिस (डीवीटी) एक वैश्विक स्वास्थ्य चिंता का विषय है। महत्वपूर्ण अवरोधों के लिए पोत पुनर्नैनाइजेशन प्राप्त करने के लिए प्राथमिक दृष्टिकोण कैथेटर-निर्देशित थ्रोम्बोलिटिक्स (सीडीटी) है। कास्टिक दुष्प्रभावों को कम करने और सीडीटी, एडजुवेंट और वैकल्पिक दृष्टिकोणों से जुड़े लंबे उपचार के समय के विकास के अधीन हैं। ऐसा ही एक दृष्टिकोण हिस्टोट्राइप्सी है, जो बुलबुला क्लाउड न्यूक्लियेशन के माध्यम से ऊतक को त्यागने के लिए एक केंद्रित अल्ट्रासाउंड थेरेपी है। प्री-क्लीनिकल अध्ययनों ने थक्का क्षरण के लिए हिस्टोट्रिप्सी और थ्रोम्बोलिटिक्स के बीच मजबूत तालमेल का प्रदर्शन किया है। इस रिपोर्ट में हिस्टोट्राइप्सी-एडेड थ्रोम्बोलिटिक थेरेपी या lysotripsy की प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए एक बेंचटॉप विधि की रूपरेखा तैयार की गई है ।
ताजा मानव शिराक रक्त से निर्मित थक्के को एक प्रवाह चैनल में पेश किया गया था जिसके आयाम और एसीोस्टो-मैकेनिकल गुण एक iliofemoral नस की नकल करते हैं। चैनल प्लाज्मा और lytic recombinant ऊतक प्रकार प्लाज्मिनोजेन एक्टिवेटर के साथ perfused था । फीमोरल वेनस क्लॉट्स के उपचार के लिए डिज़ाइन किए गए एक केंद्रित अल्ट्रासाउंड स्रोत के साथ थक्के में बुलबुला बादल उत्पन्न हुए थे। थक्के की लंबाई के साथ स्रोत फोकस का अनुवाद करने के लिए मोटर चालित स्थितिकमान का उपयोग किया गया था। प्रत्येक इनसोनेशन स्थान पर, बुलबुले के बादल से ध्वनिक उत्सर्जन निष्क्रिय रूप से दर्ज किए गए थे, और निष्क्रिय कैविटेशन छवियों को उत्पन्न करने के लिए मुस्कराते हुए। उपचार प्रभावकारिता को मापने के लिए मैट्रिक्स में थक्का द्रव्यमान हानि (समग्र उपचार प्रभावकारिता), और परफ्यूसेट में डी-डाइमर (फाइब्रिनोलिसिस) और हीमोग्लोबिन (हीमोलिसिस) की सांद्रता शामिल थी। विट्रो डिजाइन में इसकी सीमाएं हैं, जिनमें वीवो साइड इफेक्ट्स में आकलन करने के लिए साधनों की कमी या थक्के के रूप में प्रवाह दर में गतिशील परिवर्तन शामिल हैं। कुल मिलाकर, सेटअप डीवीटी के इलाज के लिए हिस्टोट्रिप्सी-आधारित रणनीतियों की प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए एक प्रभावी तरीका प्रदान करता है।

इस अध्ययन में उल्लिखित प्रोटोकॉल में डीवीटी के इन विट्रो सेटअप में शिरस क्लॉट मॉडलिंग, थक्का व्यवधान के लिए lysotripsy और अल्ट्रासाउंड इमेजिंग के विवरण पर प्रकाश डाला गया है। अपनाई गई प्रक्रिया आरटी-पीए और ?...

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An In vitro System to Gauge the Thrombolytic Efficacy of Histotripsy and a Lytic Drug

गहरी नस थ्रोम्बोसिस के उपचार के लिए हिस्टोट्रिप्सी-एडेड लाइटिक डिलीवरी या लाइसोट्रिप्सी का विकास किया जा रहा है। इस संयोजन चिकित्सा की प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए यहां एक इन विट्रो प्रक्रिया प्रस्तुत की गई है। थक्का मॉडल, छवि मार्गदर्शन, और उपचार प्रभावकारिता के मूल्यांकन के लिए मुख्य प्रोटोकॉल पर चर्चा कर रहे हैं ।

हिस्टोट्रिप्सी और एक Lytic दवा की थ्रोम्बोलिटिक प्रभावकारिता गेज करने के लिए एक इन विट्रो सिस्टम

Deep vein thrombosis (DVT) is a global health concern. The primary approach to achieve vessel recanalization for critical obstructions is ...

यह प्रोटोकॉल क्रिटिकल डीप नस थ्रोम्बोसिस के इलाज के लिए एक वैकल्पिक गैर-आक्रामक दृष्टिकोण, हिस्टोट्राइप्सी एडेड थ्रोम्बोलिटिक थेरेपी या लाइसोट्रिप्सी की कार्रवाई की प्रभावकारिता और तंत्र का आकलन करने के लिए एक बेंचटॉप विधि प्रदान करता है। यह तकनीक एक बढ़ी हुई लाइटिक डिलीवरी और थक्के के भीतर लाल रक्त कोशिकाओं के हीमोलिसिस के कारण बढ़ी हुई फाइब्रिनोलिसिस के माध्यम से दो तरह की प्रभाव के लिए बुलबुला गतिविधि का उपयोग करती है। गहरी नस थ्रोम्बोसिस के इलाज के लिए यह बेंचटॉप दृष्टिकोण रक्त के थक्के के मॉडलिंग, लाइसोट्रिप्सी के साथ उपचार और उपचार के दौरान एक साथ इमेजिंग की सुविधा प्रदान करता है।बबल क्लाउड जनरेशन, ट्रीटमेंट प्लानिंग और इमेज गाइडेंस का इस्तेमाल किडनी और लिवर ट्यूमर जैसी अन्य बीमारियों के विट्रो हिस्टोट्रिप्सी-आधारित उपचारों की जांच के लिए आगे किया जा सकता है । हिस्टोट्रिप्सी स्रोत स्थापित करने के लिए, स्रोत को मोटराइज्ड पोजिशनिंग सिस्टम पर माउंट करें। इमेजिंग सरणी को जांच कवर के साथ कवर करें और हिस्टोट्रिप्सी स्रोत के एपर्चर में सरणी को निश्चित करें।इमेजिंग सरणी को अल्ट्रासाउंड स्कैनिंग सिस्टम से कनेक्ट करें और टैंक में हिस्टोट्रिप्सी स्रोत और इमेजिंग सरणी को पूरी तरह से जलमग्न कर दें। किसी भी हवा के बुलबुले को धीरे से हटाने के लिए एक सिरिंज का उपयोग करें और इमेजिंग सरणी और स्कैनर का उपयोग करने के लिए 20 फ्रेम प्रति सेकंड पर degassed बी मोड पानी छवियों को प्राप्त करने के लिए । छवियों को प्राप्त करते समय, कॉन्फोकल ट्रांसड्यूसर खोलने के अंदर इमेजिंग सरणी की स्थिति को समायोजित करें जब तक कि बुलबुला बादल छवि खिड़की के केंद्र में लगभग स्थित न हो और इमेजिंग विंडो में पता लगाया फोकल स्थान रिकॉर्ड न करे।फिर इनसोनेशन को बंद करें और हिस्टोर्रिप्सी स्रोत पर लागू वोल्टेज को शून्य पर सेट करें। विश्लेषण के लिए एक थक्का तैयार करने के लिए, चिमटा का उपयोग एक थक्का युक्त एक पिपेट के सील अंत में कटौती करने के लिए और थक्का और सीरम स्लाइड एक पेट्री डिश में चलो । थक्के को एक सेंटीमीटर लंबाई में काटने के लिए स्केलपेल का उपयोग करें और किसी भी अतिरिक्त तरल पदार्थ को हटाने के लिए धीरे-धीरे कट सेक्शन को दागने के लिए एक सफाई पोंछ का उपयोग करें।एक पैमाने पर थक्का के खंड को ध्यान से रखने और वजन रिकॉर्ड करने के लिए चिमटी का उपयोग करें। इसके बाद, मैन्युअल रूप से एक डिगैस्ड रिवर्स ऑस्मोसिस पानी टैंक से बाहर प्रवाह चैनल उठाएं और चैनल से मॉडल पोत को हटा दें। थक्के को नुकसान पहुंचाए बिना मॉडल पोत में थक्का रखने के लिए चिमटी का उपयोग करें और प्रवाह चैनल के लिए पोत संलग्न करें।प्रवाह चैनल को टैंक में कम करें ताकि जलाशय के सापेक्ष चरण का समीपस्थ अंत डिस्टल साइड की तुलना में कम हो, और जलाशय में 37 डिग्री सेल्सियस गर्म प्लाज्मा के 30 माइक्रोलीटर जोड़ने के लिए एक पिपेट का उपयोग करें। पानी की टंकी के तापमान की निगरानी करें जब तक कि यह कम से ३६ डिग्री सेल्सियस तक न पहुंच जाए, और प्लाज्मा जलाशय में ८०.४ माइक्रोग्राम आरटी-पीए जोड़ने के लिए एक पिपेट का उपयोग करें । प्रवाह चैनल को प्राइम करने के लिए, जलाशय से चैनल में प्लाज्मा खींचने के लिए एक सिरिंज पंप का उपयोग करें जब तक मॉडल पोत भर नहीं दिया गया है।फिर मॉडल पोत को मैन्युअल रूप से स्तर दें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि मॉडल पोत में कोई हवा के बुलबुले मौजूद नहीं हैं, जैसा कि इमेजिंग विंडो के भीतर देखा गया है। थक्के की लंबाई के साथ एक समान हिस्टोट्रिप्सी एक्सपोजर के लिए हिस्टोट्रिप्सी स्रोत और इमेजिंग सरणी के लिए एक पथ की योजना बनाने के लिए, इमेजिंग स्क्रिप्ट का उपयोग करने के लिए मोटरचालित स्थिति का उपयोग करने के लिए थक्के की लंबाई के समानांतर इमेजिंग सरणी संरेखित करें और पुष्टि करें कि पोत में कोई हवा के बुलबुले मौजूद नहीं हैं। इमेजिंग सरणी को संरेखित करने के लिए मोटराइज्ड पोजिशनर्स का उपयोग करें ताकि इमेजिंग विमान थक्के के क्रॉस सेक्शन के समानांतर हो।एक गाइड के रूप में इमेजिंग खिड़की का उपयोग करना, जलाशय के सापेक्ष, थक्के के समीपस्थ अंत में हिस्टोट्रिप्सी स्रोत को स्थानांतरित करें। थक्के की लंबाई के साथ ओंओनेशन पथ निर्धारित करने के लिए, पांच मिलीमीटर वेतन वृद्धि में थक्के की लंबाई के साथ waypoints सेट करें। प्रत्येक मार्ग को अंतिम रूप देने से पहले, प्रदर्शन के समान इनसोनेशन मापदंडों के साथ हिस्टोरिप्सी स्रोत से अग्नि परीक्षण दालों, लेकिन समग्र जोखिम के साथ 10 कुल दालों को कम किया गया।प्रत्येक मार्ग पर, निर्माता द्वारा नामित आदेशों का उपयोग करके मोटर पदों को बचाएं। पूर्व उपचार चरण में परिभाषित पथ के अनुसार अपनी लंबाई के साथ थक्का का इलाज करने के लिए, सिरिंज पंप को प्रति मिनट 0.65 मिलीलीटर सेट करें, और प्लाज्मा के मेनिस्कस को स्थानांतरित करने की प्रतीक्षा करें। एक निश्चित चरण आकार के साथ स्थापित वेपॉइंट के बीच मध्यवर्ती चरणों के साथ उपचार पथ को इंटरपोलेट करें, और मूल रूप से सेट एंसोनेशन मापदंडों का उपयोग करके प्रत्येक पथ स्थान पर हिस्टोर्रिप्सी स्रोत को स्थानांतरित करने के लिए पोजिशनर्स का उपयोग करें।इसके बाद, प्रत्येक स्थान पर हिस्टोट्रिप्सी पल्स के आवेदन से कुछ सेकंड पहले थक्का और मॉडल पोत की बी-मोड छवि प्राप्त करने के लिए इमेजिंग सरणी स्थापित करने के लिए एक स्क्रिप्ट बनाएं। फिर विश्लेषण के बाद निष्क्रिय कैविटेशन छवियों को बनाने के लिए स्क्रिप्ट में ध्वनिक उत्सर्जन प्राप्त करते हुए, प्रत्येक मार्ग पर हिस्टोट्रिप्सी पल्स लागू करें। प्रत्येक पथ स्थान पर हिस्टोर्रिप्सी पल्स के आवेदन के दौरान बुलबुला गतिविधि छवि के लिए इमेजिंग विंडो का उपयोग करें।विश्लेषण के बाद, मैन्युअल रूप से मॉडल पोत को गुरुत्वाकर्षण के माध्यम से परफ्यूसेट को निकालने के लिए पानी की टंकी से बाहर निकालें, और एक छोटे से बीकर में पूरे परफ्यूसेट के संग्रह की अनुमति देने के लिए प्रवाह चैनल से प्लाज्मा समाधान आकर्षित करने के लिए सिरिंज पंप का उपयोग करें। मॉडल पोत को डिस्कनेक्ट करें और थक्का हटा दें। फिर क्लॉट को लैब टिश्यू से पोंछें और थक्के के बड़े पैमाने पर नुकसान का आकलन करने के लिए थक्का तौलें।हिस्टोर्रिप्सी स्रोत के लिए पर्याप्त वोल्टेज के आवेदन पर, ट्रांसड्यूसर के फोकल क्षेत्र में एक बुलबुला बादल उत्पन्न होता है और अल्ट्रासाउंड इमेजिंग के माध्यम से कल्पना की जाती है। फोकल स्थिति को बुलबुले के बादल के केंद्र के रूप में परिभाषित किया गया है। यह नियंत्रण अकेले प्लाज्मा के संपर्क में आने वाले थक्के का उपयोग करता है, और एक lysotripsy इलाज थक्के के इस परफ्यूसेट का उपयोग हीमोग्लोबिन और डी-डाइमर सामग्री का आकलन करने के लिए किया जाता था जैसा कि प्रदर्शन किया गया था।हीमोग्लोबिन एकाग्रता में परिवर्तनशीलता ऑप्टिकल अवशोषण द्वारा निर्धारित किया जा सकता है। यहां, निष्क्रिय कैविटेशन छवि के विभाजन के लिए थक्का स्थिति निर्धारित करने के लिए हिस्टोट्रिप्सी एक्सपोजर से पहले बी-मोड इमेजिंग के माध्यम से एक मॉडल पोत के भीतर एक थक्का कल्पना की जा सकती है। जैसा कि इस निष्क्रिय कैविटेशन छवि थक्के की बी-मोड छवि के साथ सह-पंजीकृत पुष्टि करता है, ध्वनिक ऊर्जा मुख्य रूप से हिस्टोट्रिप्सी एक्सपोजर के दौरान थक्के के भीतर निहित होती है।हिस्टोर्रिप्सी के संपर्क में आने वाले नमूनों में, व्यवधान मुख्य रूप से क्लॉट सेंटर तक सीमित है, जो निष्क्रिय कैविटेशन इमेजिंग के माध्यम से ट्रैक किए गए बुलबुले गतिविधि के मनाए गए स्थानों के अनुरूप है। lytic के अलावा के साथ, थक्के की परिधि के करीब क्षेत्रों में बड़े पैमाने पर नुकसान भी होता है। वैकल्पिक रूप से, आरटी-पीए युक्त इकोजेनिक लिपोसोम का उपयोग प्रणालीगत आरटी-पीए वितरण के स्थान पर किया जा सकता है ताकि थक्के को लक्षित दवा वितरण के आकलन की अनुमति दी जा सके।Lysotripsy कई बीमारियों के इलाज के लिए एक वैकल्पिक गैर आक्रामक दृष्टिकोण प्रदान करता है। यह इन विट्रो प्रोटोकॉल उपचार की प्रभावकारिता और वीवो आवेदन में इसकी संभावित सफलता का आकलन करने में सक्षम बनाता है।

Research

JoVE Journal

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