Name: systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model
Uploaded: 2021-02-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

Forfatterne ønsker at anerkende støtte fra NIH finansiering DK055679, DK089763, DK079392, DK061739, DK072564 og University of Michigan Patologi Slide Scanning Services.

Alle de beskrevne dyreforsøg blev godkendt af University of Michigan's Komité for Brug og Pasning af Dyr.
1. Vævshøst
<ol><li>Aflive mus humant ved hjælp af isofluran anæstesi efterfulgt af livmoderhalskræft dislokation, i overensstemmelse med godkendte protokoller. For alle dyreforsøg blev godkendelse opnået af et certificeret bedømmelsesudvalg i overensstemmelse med de nationale og institutionelle retningslinjer for håndtering af dyr.</li>
	<li>Placer musen på en dissekerende p...

<ol>
	<li>Kagnoff, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+epithelium+is+an+integral+component+of+a+communications+network.">The intestinal epithelium is an integral component of a communications network.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (7), 2841-2843 (2014).</li><li>Laukoetter, M. G., Nava, P., Nusrat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+intestinal+barrier+in+inflammatory+bowel+disease.">Role of the intestinal barrier in inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 14 (3), 401-407 (2008).</li><li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crohn's+disease.">Crohn's disease.</a> Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li><li>Ordas, I., Eckmann, L., Talamini, M., Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis.">Ulcerative colitis.</a> Lancet. 380 (9853), 1606-1619 (2012).</li><li>Vowinkel, T., Kalogeris, T. J., Mori, M., Krieglstein, C. F., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+dextran+sulfate+sodium+load+on+the+severity+of+inflammation+in+experimental+colitis.">Impact of dextran sulfate sodium load on the severity of inflammation in experimental colitis.</a> Digestive Diseases and Sciences. 49 (4), 556-564 (2004).</li><li>Kitajima, S., Takuma, S., Morimoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+murine+colitis+induced+by+dextran+sulfate+sodium+of+different+molecular+weights.">Histological analysis of murine colitis induced by dextran sulfate sodium of different molecular weights.</a> Experimental Animals. 49 (1), 9-15 (2000).</li><li>Mahler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> American Journal of Physiology. 274 (3), 544-551 (1998).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nature Protocols. 2 (3), 541-546 (2007).</li><li>Kozlowski, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+entirely+automated+method+to+score+DSS-induced+colitis+in+mice+by+digital+image+analysis+of+pathology+slides.">An entirely automated method to score DSS-induced colitis in mice by digital image analysis of pathology slides.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 855-865 (2013).</li><li>Perse, M., Cerar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulphate+colitis+mouse+model:+traps+and+tricks.">Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 718617 (2012).</li><li>Mizoguchi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+inflammatory+bowel+disease.">Animal models of inflammatory bowel disease.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 105, 263-320 (2012).</li><li>Flemming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desmocollin-2+promotes+intestinal+mucosal+repair+by+controlling+integrin-dependent+cell+adhesion+and+migration.">Desmocollin-2 promotes intestinal mucosal repair by controlling integrin-dependent cell adhesion and migration.</a> Molecular Biology of the Cell. 31 (6), 407-418 (2020).</li><li>Luna, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Armed Forces Institute of Pathology (U.S) &amp; Armed Forces Institute of Pathology (U.S.). Manual of Histologic Staining Methods of the Armed Forces Institute of Pathology. 3d edn. , (1968).</li><li>Kelm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+epithelium-expressed+sialyl+Lewis+glycans+improves+colonic+mucosal+wound+healing+and+protects+against+colitis.">Targeting epithelium-expressed sialyl Lewis glycans improves colonic mucosal wound healing and protects against colitis.</a> The Journal of Clinical Investigation Insight. 5 (12), (2020).</li><li>Reed, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+CD47+is+critical+for+mucosal+repair+in+the+murine+intestine+in+vivo.">Epithelial CD47 is critical for mucosal repair in the murine intestine in vivo.</a> Nature Communications. 10 (1), 5004 (2019).</li><li>Laukoetter, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JAM-A+regulates+permeability+and+inflammation+in+the+intestine+in+vivo.">JAM-A regulates permeability and inflammation in the intestine in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (13), 3067-3076 (2007).</li><li>Khounlotham, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compromised+intestinal+epithelial+barrier+induces+adaptive+immune+compensation+that+protects+from+colitis.">Compromised intestinal epithelial barrier induces adaptive immune compensation that protects from colitis.</a> Immunity. 37 (3), 563-573 (2012).</li></ol>

Vores Histological Colitis Score system udgør et pålideligt værktøj til at kvantificere vævsbetændelse og skader i tarmen. Denne tilgang giver en bedre forståelse af hele organets histopatologiske tilstand uden bias ved at vælge små områder eller ufuldstændige sektioner. Blandt de kritiske skridt til at gennemføre denne protokol med succes er korrekt forberedelse af schweiziske ruller, der giver mulighed for analyse af mindst 90% af tyktarmens længde; parallel orientering under paraffinindlejring og sektions...

Den gastrointestinale epitelbarriere spiller en central rolle i adskillelsen af luminale antigener og patogener fra underliggende vævsrum1. Epitelskade og slimhindesår set i patologiske tilstande som inflammatorisk tarmsygdom (IBD), iskæmi eller kirurgisk skade er forbundet med kliniske symptomer, der omfatter diarré, vægttab, blod i afføringen og mavesmerter. Som reaktion på skader migrerer og formerer epitelceller sig for at re-epithelialisere og reparere slimhindebarrierefejl. Opløsning af inflammation og tilbagelevering af slimhindeintegritet er afgørende for at genetablere tarmslimkosale homøostase og funktion2,3,4.
Forskellige dyremodeller er blevet anvendt til at studere de underliggende molekylære mekanismer, der er forbundet med skaderne på tarmepitelebarrieren. Veletablerede og let anvendelige modeller af kemisk induceret colitis anvendes i vid udstrækning, især i undersøgelser relateret til inflammatorisk skade som IBD. En fælles, reproducerbar, og pålidelig murine colitis model beskæftiger dextran natrium sulfat (DSS) medieret colon skade og betændelse. Sværhedsgraden af sygdommen varierer afhængigt af musestammen, dosis af DSS, længden af DSS-administrationen og den molekylære vægt af DSS5,6,7.
Tarmslimhindeskader under DSS-colitis evalueres normalt ved hjælp af Disease Activity Index (DAI), en sammensat score bestemt af vægttab, fækalt blodindhold og afføringskonsistens. Fækalt blodindhold kan være mikroskopisk (detekteret ved hjælp af en afføring guaiac syre test) eller makroskopisk; fækal konsistens er klassificeret som hård, blød eller flydende (dvs. diarré)5,8. Scoring af disse kliniske parametre kan være subjektiv og kan variere afhængigt af brugerens erfaring og bias, selv om dataene samlet set giver pålidelige oplysninger og derfor i vid udstrækning anvendes af IBD-forskere. I modsætning hertil er der ingen generelt accepteret metode til histologisk vurdering af slimhindeskader. Oftest inspiceres udvalgte områder af tyktarmen af en uddannet patolog og scores baseret på flere parametre, der normalt omfatter kryptskade og leukocyt infiltration9,10,11. Men da antallet af undersøgte parametre og mængden af analyseret væv varierer betydeligt mellem de enkelte rapporter, er sammenligneligheden af mange offentliggjorte undersøgelser begrænset. For at reducere observatør bias og forbedre inter-study konkordans, en ideel histologisk scoring protokol bør: 1) omfatte hele længden af tyktarmen, som tarm slimhindebetændelse er oftest variabel og springe læsioner er fælles, 2) begrænse analyse til specifikke centrale og let fortolkelige parametre for at reducere subjektivitet, 3) lette hurtig, konsekvent behandling af et stort antal prøver, og 4) bruge bredt tilgængelige og overkommelige værktøjer til dataindsamling, analyse og præsentation.
Her beskriver vi en teknik til at behandle hele tyktarmen eller lange segmenter af tyndtarmen i en "schweizisk roll" konfiguration sammen med brugen af en gratis computer-assisteret scoring system til at analysere tarm slimhindebetændelse og skader på grund af DSS-induceret colitis.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aperio AT2 &#8211; High Volume, Digital Whole Slide Scanning</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Aperio AT2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Underpads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>56616-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>American Line 66-0089 Single Edge Blade, 100 per pkg</td>
			<td>GT Midwest</td>
			<td>TL5837</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer-Lok Disposable Syringes without Needles</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-823-2A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>14084-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501640-19L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoPrep 70% Ea</td>
			<td>Fisherbran</td>
			<td>70% denatured ethyl alcohol</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageScope</td>
			<td>Aperio</td>
			<td>Version 12.3.3.5039</td>
			<td>http://www.leicabiosystems.com/pathology-imaging/aperio-epathology/integrate/imagescope/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LeakBuster Specimen Containers: Sterile</td>
			<td>Starplex Scientific</td>
			<td>B120210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffere Saline, without calcium &#38; magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Feeding tubes, 20 GA x 30 mm</td>
			<td>Instech</td>
			<td>FTP2030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 20 G x 1 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 27 G x 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 ml</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unisette Tissue Cassettes</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M505-2</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model

Murine colitis modeller er værktøjer, der er flittigt ansat i undersøgelser med fokus på at forstå patobiologi af inflammatoriske tarmsygdomme. Der mangler dog stadig at blive fastlagt solide standarder for objektiv og reproducerbar kvantificering af sygdoms sværhedsgraden. De fleste colitis analysemetoder er afhængige af begrænset histologisk scoring af små segmenter af tarmen, hvilket fører til delvise eller partiske analyser. Her kombinerer vi billedopsamling i høj opløsning og langsgående analyse af hele tyktarmen for at kvantificere tarmskade og sårdannelse i dextrannatriumsulfat (DSS) induceret model af murin colitis. Denne protokol giver mulighed for generering af objektive og reproducerbare resultater uden omfattende brugeruddannelse. Her giver vi omfattende detaljer om prøveforberedelse og billedanalyse ved hjælp af eksempler på data fra DSS-induceret colitis. Denne metode kan let tilpasses andre modeller af murin colitis, der har betydelig betændelse forbundet med slimhindeskade. Vi viser, at den brøkdel af betændte / tilskadekomne og eroderet / sår slimhinden i forhold til den komplette længde af tyktarmen nøje paralleller kliniske fund såsom vægttab midt DSS-induceret sygdomsprogression. Denne histologiske protokol giver en pålidelig tid og omkostningseffektiv støtte til at standardisere analyser af sygdomsaktivitet på en upartisk måde i DSS colitis eksperimenter.

For at illustrere pålideligheden af denne Histological Colitis Score Analysis i forbindelse med slimhindeskader efter DSS-udfordring og efterfølgende genopretning fra colitis administrerede vi 2,5% DSS i drikkevandet på otte 10 uger gamle mandlige C57BL6 vilde type mus i 5 dage efterfulgt af en genopretningsperiode med regelmæssigt vand i 5 dage. Der var ingen ændring i kropsvægten under akut indgift af DSS fra dag 0 til 5 (Figur 4A). Kropsvægten faldt...

Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model

Systematisk scoring af tarmbetændelse ved hjælp af et gratis computerassisteret system er et kraftfuldt værktøj til kvantitativt at sammenligne histopatologiske ændringer i colitismodeller karakteriseret ved tilstedeværelsen af sår og inflammatoriske ændringer. Evaluering af histologisk colitisscore styrker kliniske observationer og letter datafortolkning.

Systematisk scoringsanalyse for tarmbetændelse i en Murine Dextran Natrium sulfat-induceret colitismodel

Murine colitis models are tools that are extensively employed in studies focused on understanding the pathobiology of inflammatory intestinal disorders. ...

Den systematiske scoringsanalyse er en teknik til evaluering af slimhindeskade, hvilket letter histologiske fortolkninger, der kan udføres af uddannede forskere. De vigtigste fordele ved denne metode er, at den er gratis og nem at bruge. Det giver mulighed for kvantitativ analyse af histologiske data opnået fra tarmene hos mus med colitis.Denne protokol giver en hurtig og reproducerbar måde at fortolke sygdom sværhedsgraden af hele tyktarmen, som er nødvendig for at sammenligne sygdom fra dyr med forskellige genetiske baggrunde. Til vævsforberedelse er det vigtigt at organisere alle reagenser og materialer. Begynd med at placere en aflivet mus på en dissekeringspude i en liggende stilling og immobilisere musens ekstremiteter ved hjælp af 20 gauge 1,5 tommer nåle.Brug pincet og saks, lav et lille snit på bughuden og træk det til siden for at udsætte bughinden, og åbn derefter bukhulen med et midterlinjeindsnit i bughinden fra skambenet til siderne af maven. Fjern forsigtigt væv og organer, indtil tyktarmen er visualiseret. Skær bækkenbenet på begge sider af tyktarmen for fuldt ud at visualisere organet, der strækker sig fra anus mod cecum.Fjern forsigtigt fedt, små vener og arterier fastgjort til tyktarmen, mens du forsigtigt dissekerer organet, skærer bare proksimalt til anus og distal til cecum. Skyl forsigtigt tyktarmen med PBS for at fjerne fækalt indhold ved hjælp af en fleksibel plastpiskerål indsat gennem anus. Placer tyktarmen i en lige linje og åbne longitudinally langs mesenteric arterie.Gennemskyder tyktarmen i længderetningen fra distal til den proksimale ende. Brug halvdelen af vævet til histologisk analyse og den anden halvdel til western blot, PCR, eller rullet ind i en anden schweizisk rulle til frisk frossen immunfluorescensmikroskopi. Trim ekstra væv fra det proksimale kolon med et barberblad, indtil omtrent samme bredde langs længden af hele tyktarmen er opnået.Juster tyktarmen for at udsætte lumen og flade vævet helt ved hjælp af en fleksibel sonde nål. Tilsæt mere PBS, hvis det er nødvendigt for at holde vævet fugtigt under hele proceduren. Fjern den overskydende PBS ved hjælp af en papirservietter.Med en sprøjte og sonde nål, tilsæt 10% neutral buffer formalin opløsning i to til tre minutter for at fastsætte og flade vævet, derefter bruge lige pincet til at få fat i slutningen af distale kolon og vride tyktarmen i koncentriske cirkler fra desarmere til proksimale ende. Sæt en 27 gauge nål til pin tyktarmen i midten og holde sin schweiziske roll form, derefter placere den schweiziske rulle i en indlejring kassette inde i en histologisk prøve container orientere væv parallelt med hensyn til kassette. Reklarer vævet i 10%neutral bufferformiopløsning natten over ved fire grader Celsius.Efter natten fiksering, vask vævet tre gange med PBS. Tilsæt 70% ethanol før paraffinindlejringsprocessen og fjern nålen fra den schweiziske rulle, før du fortsætter. Vævet kan opbevares i ethanol ved stuetemperatur indtil paraffinindlejring.Når du har åbnet de scannede billeder i billedbehandlingssoftwaren, skal du kontrollere, at hele kolonet er synligt, og at der ikke mangler områder i prøven. Aktiver værktøjerne til etiketbillede og skaleringslinje for at identificere scannede dias korrekt ved at klikke på etiketbillede. Åbn anmærkningsværktøjet ved at klikke på anmærkninger og oprette tre forskellige lag ved at klikke på nyt lag for at kvantificere den samlede længde af den schweiziske rulle, betændelse eller skade og erosion eller sårdannelse.Vælg en anden farve for hvert lag ved at klikke på lagfarve. Mål længden af hvert lag eller hver kategori ved at klikke på penværktøjet for at tegne en streg efter muscularis slimhinden og flytte markøren efter behov for at visualisere det tilstødende område til analyse. Se billedet ved 400 mikrometer zoom for at lette tilstrækkelig visualisering af muscularis slimhinden.Hver gang pennen stoppes, genereres et lille nyt lagområde. Det kan visualiseres og redigeres med fanen lagområder. Gennemgå den samlede længde, betændelse eller skade, og erosion eller sårdannelse målt ved hjælp af muscularis slimhinden som reference.Når alle lag er defineret, skal du eksportere dataene ved hjælp af eksportgitteret til tekstfilknappen i indstillingerne for lagområder. Åbn tekstfilerne, og kopier dataene til en regnearkssoftware. I alt alle segmenter fra hver region og beregne procentdelen af skader og sår i forhold til den samlede længde.Overvej tre hovedkarakteristika til at beregne den histologiske colitis score og til at evaluere sværhedsgraden af sygdommen. Check for sund tarmslimhinde, som er kendetegnet ved organiserede epitelceller i kryptens luminale akse, lamina propria med få immunceller og subjacent muscularis slimhinde. Dernæst skal du kontrollere for betændelse eller skade, som er karakteriseret ved epitelkrypter, der er svækkede eller delvist manglende epitelceller og slimhindebetændelse med neutrofil infiltration i krypter.Endelig skal du kontrollere tilstedeværelsen af erosion eller sårdannelse, som er karakteriseret ved områder uden overfladeepitelet eller områder, der helt mangler epitelkrypter med eller uden tilhørende leukocytter. For at illustrere pålideligheden af denne histologiske colitis scoreanalyse i forbindelse med slimhindeskader blev 2,5%DSS administreret i drikkevandet hos otte C57BL6 vilde mus i fem dage efterfulgt af en genopretningsperiode med regelmæssigt vand i fem dage. Kropsvægten forblev konstant under den akutte administration af DSS, men faldt dramatisk, da mus begyndte at drikke almindeligt postevand.Blod og bløde afføring dukkede op efter tre dages DSS administration og fortsatte indtil dag otte af eksperimentet. Disse observationer tydede på, at de mest skadelige virkninger af eksponering for DSS blev observeret i genopretningsperioden mellem dag fem og otte. Måling af tyktarmslængde på dag 10 bekræftede en betydelig afkortning ved forsøgets afslutning.Koloner blev høstet på dag nul, to, fem, syv, otte og 10 for at gøre paraffin schweiziske ruller. Vævet var plettet med H &E og high definition scanninger blev analyseret for at beregne histologiske colitis score og procentdel af skader og sårdannelse. Normal kryptarkitektur blev observeret hos ubehandlede mus.Efter to dages DSS-administration blev immuncellerekruttering observeret. På dag fem ser epitelcellerne ud til at være beskadigede, og der var en infiltration af neutrofiler på tværs af epitelet forbundet med epitelskade. Fra dag fem til otte blev der observeret områder med epiteltab med betændelse og sårdannelse.På dag 10 begyndte epitelceller at regenerere og genbefolke sårområder og langsomt genoprette colon slimhinde. Når du forsøger denne protokol, er det vigtigt at skabe en korrekt orienteret og velbevaret schweizisk rulle, samt at identificere slimhindebetændelse eller skade og sårdannelse eller erosion. Denne metode kan bruges til kvantitativt at vurdere skader langs hele længden af den colon slimhinde i andre modeller af colitis, såsom TMS eller T-celle overførsel model.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Analyse af Pulmonal dendritiske celle modning og migration under Allergisk luftvejene

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Den<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: Undersøgelse Patogen og Host Bidrag til infektiøs colitis

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

En mus Model for Patogen-induceret kronisk inflammation på lokale og systemiske websteder

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induktion af murine tarmbetændelse ved adoptiv overførsel af effektor CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Høj</sup&gt; T celler i immunsvækkede mus

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

En optimeret fremgangsmåde til isolering og udvidelse Invariant Natural Killer T-celler fra musemilt

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran effektiviserer Lentiviral transduktion af Murine og menneskelige primære NK-celler

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Induction and Scoring of Graft-Versus-Host Disease in a Xenogeneic Murine Model and Quantification of Human T Cells in Mouse Tissues using Digital PCR

Induktion og scoring af graft-versus-Host-sygdom i en xenogen Murinmodel og kvantificering af humane T-celler i muse væv ved hjælp af digital PCR

Acute graft-versus-host disease (GVHD) is a significant limitation for patients receiving hematopoietic stem cell transplant as therapy for hematological ...