Name: systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model
Uploaded: 2021-02-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

De auteurs willen steun van NIH-financiering DK055679, DK089763, DK079392, DK061739, DK072564 en de University of Michigan Pathology Slide Scanning Services erkennen.

Alle beschreven dierproeven werden goedgekeurd door het Committee on the Use and Care of Animals van de Universiteit van Michigan.
1. Weefseloogst
<ol><li>Euthanaseer muizen op humane wijze met behulp van isofluraan anesthesie gevolgd door cervicale dislocatie, in overeenstemming met goedgekeurde protocollen. Voor alle dierproeven is goedkeuring verkregen door een gecertificeerde beoordelingscommissie in overeenstemming met de nationale en institutionele richtlijnen voor de behandeling van d...

<ol>
	<li>Kagnoff, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+epithelium+is+an+integral+component+of+a+communications+network.">The intestinal epithelium is an integral component of a communications network.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (7), 2841-2843 (2014).</li><li>Laukoetter, M. G., Nava, P., Nusrat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+intestinal+barrier+in+inflammatory+bowel+disease.">Role of the intestinal barrier in inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 14 (3), 401-407 (2008).</li><li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crohn's+disease.">Crohn's disease.</a> Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li><li>Ordas, I., Eckmann, L., Talamini, M., Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis.">Ulcerative colitis.</a> Lancet. 380 (9853), 1606-1619 (2012).</li><li>Vowinkel, T., Kalogeris, T. J., Mori, M., Krieglstein, C. F., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+dextran+sulfate+sodium+load+on+the+severity+of+inflammation+in+experimental+colitis.">Impact of dextran sulfate sodium load on the severity of inflammation in experimental colitis.</a> Digestive Diseases and Sciences. 49 (4), 556-564 (2004).</li><li>Kitajima, S., Takuma, S., Morimoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+murine+colitis+induced+by+dextran+sulfate+sodium+of+different+molecular+weights.">Histological analysis of murine colitis induced by dextran sulfate sodium of different molecular weights.</a> Experimental Animals. 49 (1), 9-15 (2000).</li><li>Mahler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> American Journal of Physiology. 274 (3), 544-551 (1998).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nature Protocols. 2 (3), 541-546 (2007).</li><li>Kozlowski, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+entirely+automated+method+to+score+DSS-induced+colitis+in+mice+by+digital+image+analysis+of+pathology+slides.">An entirely automated method to score DSS-induced colitis in mice by digital image analysis of pathology slides.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 855-865 (2013).</li><li>Perse, M., Cerar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulphate+colitis+mouse+model:+traps+and+tricks.">Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 718617 (2012).</li><li>Mizoguchi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+inflammatory+bowel+disease.">Animal models of inflammatory bowel disease.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 105, 263-320 (2012).</li><li>Flemming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desmocollin-2+promotes+intestinal+mucosal+repair+by+controlling+integrin-dependent+cell+adhesion+and+migration.">Desmocollin-2 promotes intestinal mucosal repair by controlling integrin-dependent cell adhesion and migration.</a> Molecular Biology of the Cell. 31 (6), 407-418 (2020).</li><li>Luna, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Armed Forces Institute of Pathology (U.S) &amp; Armed Forces Institute of Pathology (U.S.). Manual of Histologic Staining Methods of the Armed Forces Institute of Pathology. 3d edn. , (1968).</li><li>Kelm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+epithelium-expressed+sialyl+Lewis+glycans+improves+colonic+mucosal+wound+healing+and+protects+against+colitis.">Targeting epithelium-expressed sialyl Lewis glycans improves colonic mucosal wound healing and protects against colitis.</a> The Journal of Clinical Investigation Insight. 5 (12), (2020).</li><li>Reed, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+CD47+is+critical+for+mucosal+repair+in+the+murine+intestine+in+vivo.">Epithelial CD47 is critical for mucosal repair in the murine intestine in vivo.</a> Nature Communications. 10 (1), 5004 (2019).</li><li>Laukoetter, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JAM-A+regulates+permeability+and+inflammation+in+the+intestine+in+vivo.">JAM-A regulates permeability and inflammation in the intestine in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (13), 3067-3076 (2007).</li><li>Khounlotham, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compromised+intestinal+epithelial+barrier+induces+adaptive+immune+compensation+that+protects+from+colitis.">Compromised intestinal epithelial barrier induces adaptive immune compensation that protects from colitis.</a> Immunity. 37 (3), 563-573 (2012).</li></ol>

Ons Histologisch Colitis Score systeem is een betrouwbaar hulpmiddel om weefselontsteking en schade in de darm te kwantificeren. Deze benadering biedt een beter begrip van de histopathologische toestand van het hele orgaan zonder de bias van het selecteren van kleine gebieden of onvolledige secties. Een van de kritieke stappen om dit protocol met succes uit te voeren, is een goede voorbereiding van Zwitserse rollen die analyse van ten minste 90% van de lengte van de dikke darm mogelijk maken; parallelle oriëntatie tijde...

De gastro-intestinale epitheelbarrière speelt een cruciale rol bij het scheiden van luminale antigenen en pathogenen van onderliggende weefselcompartimenten1. Epitheliaal letsel en mucosale wonden gezien in pathologische aandoeningen zoals inflammatoire darmziekte (IBD), ischemie of chirurgisch letsel worden geassocieerd met klinische symptomen zoals diarree, gewichtsverlies, bloed in de ontlasting en buikpijn. Als reactie op letsel migreren en verspreiden epitheelcellen zich om mucosale barrièredefecten opnieuw te epithelialiseren en te herstellen. Oplossing van ontsteking en restitutie van mucosale integriteit zijn cruciaal voor het herstellen van intestinale mucosale homeostase en functie2,3,4.
Verschillende diermodellen zijn gebruikt om de onderliggende moleculaire mechanismen te bestuderen die verband houden met de schade aan de intestinale epitheelbarrière. Gevestigde en gemakkelijk toepasbare modellen van chemisch geïnduceerde colitis worden veel gebruikt, met name in studies met betrekking tot ontstekingsletsel zoals IBD. Een gemeenschappelijk, reproduceerbaar en betrouwbaar murine colitis model maakt gebruik van dextran natriumsulfaat (DSS) gemedieerde darmletsel en ontsteking. De ernst van de ziekte varieert afhankelijk van de muisstam, dosis DSS, de duur van de toediening van DSS en het molecuulgewicht van DSS5,6,7.
Intestinale mucosale schade tijdens DSS-colitis wordt meestal geëvalueerd met behulp van de Disease Activity Index (DAI), een samengestelde score die wordt bepaald door gewichtsverlies, fecaal bloedgehalte en ontlastingsconsistentie. Het fecale bloedgehalte kan microscopisch (gedetecteerd met behulp van een guaiaczuurtest in de ontlasting) of macroscopisch zijn; fecale consistentie wordt geclassificeerd als hard, zacht of vloeibaar (d.w.z. diarree)5,8. Het scoren van deze klinische parameters kan subjectief zijn en kan variëren afhankelijk van de ervaring en bias van de gebruiker, hoewel de gegevens over het algemeen betrouwbare informatie bieden en dus veel worden gebruikt door IBD-onderzoekers. Daarentegen is er geen algemeen aanvaarde methode voor histologische evaluatie van mucosale schade. Meestal worden geselecteerde delen van de dikke darm geïnspecteerd door een getrainde patholoog en gescoord op basis van verschillende parameters, waaronder crypteletsel en leukocyteninfiltratie9,10,11. Omdat het aantal onderzochte parameters en de hoeveelheid geanalyseerd weefsel echter aanzienlijk varieert tussen individuele rapporten, is de vergelijkbaarheid van veel gepubliceerde studies beperkt. Om de bias van waarnemers te verminderen en de concordantie tussen studies te verbeteren, moet een ideaal histologisch scoreprotocol: 1) de volledige lengte van de dikke darm omvatten, omdat darmslijmvliesontsteking meestal variabel is en skip-laesies gebruikelijk zijn, 2) analyse beperken tot specifieke sleutel en gemakkelijk interpreteerbare parameters om subjectiviteit te verminderen, 3) snelle, consistente verwerking van grote aantallen monsters vergemakkelijken en 4) breed beschikbare en betaalbare tools gebruiken voor het verzamelen, analyseren en presenteren van gegevens.
Hier beschrijven we een techniek om de hele dikke darm of lange segmenten van de dunne darm te verwerken in een "Swiss roll" -configuratie, samen met het gebruik van een gratis computerondersteund scoresysteem om darmslijmvliesontsteking en schade als gevolg van DSS-geïnduceerde colitis te analyseren.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aperio AT2 &#8211; High Volume, Digital Whole Slide Scanning</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Aperio AT2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Underpads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>56616-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>American Line 66-0089 Single Edge Blade, 100 per pkg</td>
			<td>GT Midwest</td>
			<td>TL5837</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer-Lok Disposable Syringes without Needles</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-823-2A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>14084-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501640-19L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoPrep 70% Ea</td>
			<td>Fisherbran</td>
			<td>70% denatured ethyl alcohol</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageScope</td>
			<td>Aperio</td>
			<td>Version 12.3.3.5039</td>
			<td>http://www.leicabiosystems.com/pathology-imaging/aperio-epathology/integrate/imagescope/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LeakBuster Specimen Containers: Sterile</td>
			<td>Starplex Scientific</td>
			<td>B120210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffere Saline, without calcium &#38; magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Feeding tubes, 20 GA x 30 mm</td>
			<td>Instech</td>
			<td>FTP2030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 20 G x 1 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 27 G x 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 ml</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unisette Tissue Cassettes</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M505-2</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model

Murine colitis modellen zijn hulpmiddelen die uitgebreid worden gebruikt in studies gericht op het begrijpen van de pathobiologie van inflammatoire darmaandoeningen. Er moeten echter nog robuuste normen worden vastgesteld voor objectieve en reproduceerbare kwantificering van de ernst van de ziekte. De meeste colitis-analysemethoden zijn gebaseerd op beperkte histologische scoring van kleine darmsegmenten, wat leidt tot gedeeltelijke of bevooroordeelde analyses. Hier combineren we beeldverwerving met hoge resolutie en longitudinale analyse van de hele dikke darm om darmletsel en ulceratie te kwantificeren in het door dextrannatriumsulfaat (DSS) geïnduceerde model van muriene colitis. Dit protocol maakt het mogelijk om objectieve en reproduceerbare resultaten te genereren zonder uitgebreide gebruikerstraining. Hier bieden we uitgebreide details over monstervoorbereiding en beeldanalyse aan de hand van voorbeelden van gegevens van DSS-geïnduceerde colitis. Deze methode kan gemakkelijk worden aangepast aan andere modellen muriene colitis die significante ontsteking hebben geassocieerd met mucosale letsel. We tonen aan dat de fractie ontstoken/gewond en geërodeerd/gezwollen slijmvlies ten opzichte van de volledige lengte van de dikke darm nauw parallel loopt met klinische bevindingen zoals gewichtsverlies te midden van DSS-geïnduceerde ziekteprogressie. Dit histologische protocol biedt een betrouwbare tijd en kosteneffectieve hulp om analyses van ziekteactiviteit op een onbevooroordete manier te standaardiseren in DSS-colitis-experimenten.

Om de betrouwbaarheid van deze Histologische Colitis Score Analyse te illustreren in de context van mucosale schade na DSS uitdaging en daaropvolgend herstel van colitis, hebben we 2,5% DSS toegediend in het drinkwater van acht 10 weken oude mannelijke C57BL6 wilde type muizen gedurende 5 dagen gevolgd door een herstelperiode met regelmatig water gedurende 5 dagen. Er was geen verandering in lichaamsgewicht tijdens de acute toediening van DSS, van dag 0 tot 5 (figuur ...

Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model

Systematische scoring van darmontsteking met behulp van een gratis computerondersteund systeem is een krachtig hulpmiddel om histopathologische veranderingen in colitismodellen kwantitatief te vergelijken, gekenmerkt door de aanwezigheid van zweren en ontstekingsveranderingen. Histologische colitis score evaluatie versterkt klinische observaties en vergemakkelijkt de interpretatie van gegevens.

Systematische scoringsanalyse voor darmontsteking in een muriene dextran natriumsulfaat-geïnduceerde colitismodel

Murine colitis models are tools that are extensively employed in studies focused on understanding the pathobiology of inflammatory intestinal disorders. ...

De systematische scoringsanalyse is een techniek voor het evalueren van mucosale letsels, waardoor histologische interpretatie wordt vergemakkelijkt die kan worden uitgevoerd door getrainde onderzoekers. De belangrijkste voordelen van deze methode is dat het gratis en gemakkelijk te gebruiken is. Het maakt kwantitatieve analyse mogelijk van histologische gegevens verkregen uit de darmen van muizen met colitis.Dit protocol biedt een snelle en reproduceerbare manier om de ernst van de ziekte van de hele dikke darm te interpreteren, wat nodig is om ziektes van dieren met verschillende genetische achtergronden te vergelijken. Voor weefselvoorbereiding is het belangrijk om alle reagentia en materialen te organiseren. Begin met het plaatsen van een geëuthanaseerde muis op een ontleedkussen in een liggende positie en immobiliseer de uiteinden van de muis met behulp van 20 gauge 1,5 inch naalden.Maak met behulp van een tang en schaar een kleine incisie op de buikhuid en trek deze naar de zijkant om het peritoneum bloot te leggen en open vervolgens de buikholte met een middellijnincisie in het buikvlies van het schaambeen naar de zijkanten van de buik. Verwijder voorzichtig weefsels en organen totdat de dikke darm wordt gevisualiseerd. Snijd het bekkenbeen aan beide zijden van de dikke darm om het orgaan volledig te visualiseren, dat zich uitstrekt van de anus naar het cecum.Verwijder voorzichtig vet, kleine aderen en slagaders die aan de dikke darm zijn bevestigd terwijl u het orgaan zorgvuldig ontleedt, snijdt het gewoon proximaal naar de anus en distaal naar het cecum. Spoel de dikke darm voorzichtig door met PBS om de fecale inhoud te verwijderen met behulp van een flexibele plastic galpenaald die door de anus wordt ingebracht. Plaats de dikke darm in een rechte lijn en open in de lengterichting langs de mesenterische slagader.Bisect de dikke darm in de lengterichting van het distale naar het proximale uiteinde. Gebruik de helft van het weefsel voor histologische analyse en de andere helft voor westerse vlek, PCR, of gerold in een tweede Zwitserse rol voor verse bevroren immunofluorescentiemicroscopie. Knip extra weefsel uit de proximale dikke darm met een scheermesje tot ongeveer dezelfde breedte over de lengte van de hele dikke darm is verkregen.Lijn de dikke darm uit om het lumen bloot te leggen en het weefsel volledig af te vlakken met behulp van een flexibele galnaald. Voeg indien nodig meer PBS toe om het weefsel vochtig te houden tijdens de procedure. Verwijder de overtollige PBS met een papieren doekje.Voeg met een spuit en gavage naald gedurende twee tot drie minuten 10% neutrale gebufferde formalineoplossing toe om het weefsel te fixeren en af te vlakken, gebruik vervolgens rechte tang om het uiteinde van de distale dikke darm te grijpen en draai de dikke darm in concentrische cirkels van het distale naar proximale uiteinde. Steek een naald van 27 gauge om de dikke darm in het midden te spelden en houd de Zwitserse rolvorm vast en plaats de Zwitserse rol vervolgens in een insluitcassette in een histologische monstercontainer die het weefsel parallel ten opzichte van de cassette oriënteert. Fixeer het weefsel in 10%neutrale gebufferde formalineoplossing 's nachts bij vier graden Celsius.Was het weefsel na een nachtfixatie driemaal met PBS. Voeg 70% ethanol toe voorafgaand aan het inbeddingsproces van paraffine en verwijder de naald van de Zwitserse rol voordat u verdergaat. Het weefsel kan bij kamertemperatuur in ethanol worden bewaard tot paraffine-inbedding.Controleer na het openen van de gescande afbeeldingen in de beeldverwerkingssoftware of de hele dubbele punt zichtbaar is en of er geen ontbrekende delen van het voorbeeld zijn. Activeer de gereedschappen labelafbeelding en schaalbalk om gescande dia's correct te identificeren door op labelafbeelding te klikken. Open het gereedschap annotaties door op annotaties te klikken en maak drie verschillende lagen door op een nieuwe laag te klikken om de totale lengte van de Zwitserse rol, ontsteking of letsel en erosie of ulceratie te kwantificeren.Kies een andere kleur voor elke laag door op laagkleur te klikken. Meet de lengte van elke laag of categorie door op het pengereedschap te klikken om een lijn te tekenen langs het muscularis-slijmvlies en beweeg de aanwijzer indien nodig om het aangrenzende gebied voor analyse te visualiseren. Bekijk het beeld op 400 micrometer zoom om een adequate visualisatie van het muscularis slijmvlies te vergemakkelijken.Telkens wanneer de pen wordt gestopt, wordt een klein nieuw laaggebied gegenereerd. Het kan worden gevisualiseerd en bewerkt met het tabblad laaggebieden. Bekijk de totale lengte, ontsteking of letsel, en erosie of ulceratie gemeten met behulp van het muscularis-slijmvlies als referentie.Zodra alle lagen zijn gedefinieerd, exporteert u de gegevens met behulp van het exportraster naar de knop tekstbestand in de opties voor laaggebieden. Open de tekstbestanden en kopieer de gegevens naar een spreadsheetsoftware. Totaal alle segmenten uit elke regio en bereken het percentage letsel en ulceratie met betrekking tot de totale lengte.Overweeg drie belangrijke kenmerken om de histologische colitisscore te berekenen en de ernst van de ziekte te evalueren. Controleer op gezond darmslijmvlies, dat wordt gekenmerkt door georganiseerde epitheelcellen in de cryptische luminale as, lamina propria met weinig immuuncellen en subjacent muscularis mucosa. Controleer vervolgens op ontsteking of letsel, dat wordt gekenmerkt door epitheliale crypten die verzwakt zijn of gedeeltelijk epitheelcellen missen en mucosale ontsteking met neutrofiele infiltratie in crypten.Controleer ten slotte op de aanwezigheid van erosie of ulceratie, die wordt gekenmerkt door gebieden zonder oppervlakte-epitheel of gebieden die volledig ontbreken aan epitheel crypten met of zonder bijbehorende leukocyten. Om de betrouwbaarheid van deze histologische colitisscoreanalyse in de context van mucosale schade te illustreren, werd 2,5% DSS gedurende vijf dagen toegediend in het drinkwater van acht C57BL6 wilde muizen, gevolgd door een herstelperiode met regelmatig water gedurende vijf dagen. Het lichaamsgewicht bleef constant tijdens de acute toediening van DSS, maar nam dramatisch af toen muizen regelmatig kraanwater begonnen te drinken.Bloed en zachte ontlasting verschenen na drie dagen DSS-toediening en gingen door tot dag acht van het experiment. Deze waarnemingen suggereerden dat de meest schadelijke effecten van blootstelling aan DSS werden waargenomen tijdens de herstelperiode tussen dag vijf en acht. Meting van de lengte van de dikke darm op dag 10 bevestigde een significante verkorting aan het einde van het experiment.Colons werden geoogst op dag nul, twee, vijf, zeven, acht en 10 om paraffine Zwitserse broodjes te maken. Het weefsel was bevlekt met H&E en high definition scans werden geanalyseerd om de histologische colitisscore en het percentage letsel en ulceratie te berekenen. Normale cryptearchitectuur werd waargenomen bij onbehandelde muizen.Na twee dagen DSS-toediening werd de rekrutering van immuuncellen waargenomen. Op dag vijf lijken epitheelcellen beschadigd en was er een infiltratie van neutrofielen in het epitheel geassocieerd met epitheliale verwonding. Vanaf dag vijf tot acht werden gebieden met epitheelverlies met ontsteking en ulceratie waargenomen.Op dag 10 begonnen epitheelcellen gezwollen gebieden te regenereren en opnieuw te bevolken, waardoor het darmslijmvlies langzaam werd hersteld. Bij het proberen van dit protocol is het belangrijk om een goed georiënteerde en goed bewaarde Zwitserse rol te creëren, evenals om mucosale ontsteking of letsel en ulceratie of erosie correct te identificeren. Deze methode kan worden gebruikt om letsel over de gehele lengte van het darmslijmvlies kwantitatief te evalueren in andere modellen van colitis, zoals TMS of T-cel transfermodel.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris Muris Infectie: Een model van type 2 immuniteit en ontsteking in de darm

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Flowcytometrie-analyse van de immuuncellen Binnen Murine aorta

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Analyse van de pulmonale dendritische cel maturatie en migratie tijdens de allergische luchtwegontsteking

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

De<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Muis Model: Studeren pathogeen en gastheer Bijdragen aan infectieuze colitis

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Een muismodel voor pathogenen geïnduceerde Chronische ontsteking op lokale en systemische sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Inductie van Muriene darmontsteking door adoptieve overdracht van effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hoog</sup&gt; T cellen in immunodeficiënte muizen

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

Een geoptimaliseerde werkwijze voor het isoleren en Expanding Invariant Natural Killer T-cellen van Mouse Spleen

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran verbetert de efficiëntie van de lentivirale transductie van lymfkliertest en menselijke primaire NK-cellen

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Induction and Scoring of Graft-Versus-Host Disease in a Xenogeneic Murine Model and Quantification of Human T Cells in Mouse Tissues using Digital PCR

Inductie en scoren van transplantaat-versus-gastheer ziekte in een xenogene Murine model en kwantificering van menselijke T cellen in muizen weefsels met behulp van digitale PCR

Acute graft-versus-host disease (GVHD) is a significant limitation for patients receiving hematopoietic stem cell transplant as therapy for hematological ...