Name: systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model
Uploaded: 2021-02-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

Les auteurs souhaitent souligner le soutien du financement des NIH DK055679, DK089763, DK079392, DK061739, DK072564 et les Services de numérisation des diapositives de pathologie de l’Université du Michigan.

Toutes les expériences sur les animaux décrites ont été approuvées par le Comité sur l’utilisation et l’œur des animaux de l’Université du Michigan.
1. Récolte de tissus
<ol><li>Euthanasier les souris humainement à l’aide d’une anesthésie isoflurane suivie d’une dislocation cervicale, conformément aux protocoles approuvés. Pour toutes les expériences sur les animaux, l’approbation a été obtenue par un comité d’examen certifié conformément aux lignes directr...

<ol>
	<li>Kagnoff, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+epithelium+is+an+integral+component+of+a+communications+network.">The intestinal epithelium is an integral component of a communications network.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (7), 2841-2843 (2014).</li><li>Laukoetter, M. G., Nava, P., Nusrat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+intestinal+barrier+in+inflammatory+bowel+disease.">Role of the intestinal barrier in inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 14 (3), 401-407 (2008).</li><li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crohn's+disease.">Crohn's disease.</a> Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li><li>Ordas, I., Eckmann, L., Talamini, M., Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis.">Ulcerative colitis.</a> Lancet. 380 (9853), 1606-1619 (2012).</li><li>Vowinkel, T., Kalogeris, T. J., Mori, M., Krieglstein, C. F., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+dextran+sulfate+sodium+load+on+the+severity+of+inflammation+in+experimental+colitis.">Impact of dextran sulfate sodium load on the severity of inflammation in experimental colitis.</a> Digestive Diseases and Sciences. 49 (4), 556-564 (2004).</li><li>Kitajima, S., Takuma, S., Morimoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+murine+colitis+induced+by+dextran+sulfate+sodium+of+different+molecular+weights.">Histological analysis of murine colitis induced by dextran sulfate sodium of different molecular weights.</a> Experimental Animals. 49 (1), 9-15 (2000).</li><li>Mahler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> American Journal of Physiology. 274 (3), 544-551 (1998).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nature Protocols. 2 (3), 541-546 (2007).</li><li>Kozlowski, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+entirely+automated+method+to+score+DSS-induced+colitis+in+mice+by+digital+image+analysis+of+pathology+slides.">An entirely automated method to score DSS-induced colitis in mice by digital image analysis of pathology slides.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 855-865 (2013).</li><li>Perse, M., Cerar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulphate+colitis+mouse+model:+traps+and+tricks.">Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 718617 (2012).</li><li>Mizoguchi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+inflammatory+bowel+disease.">Animal models of inflammatory bowel disease.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 105, 263-320 (2012).</li><li>Flemming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desmocollin-2+promotes+intestinal+mucosal+repair+by+controlling+integrin-dependent+cell+adhesion+and+migration.">Desmocollin-2 promotes intestinal mucosal repair by controlling integrin-dependent cell adhesion and migration.</a> Molecular Biology of the Cell. 31 (6), 407-418 (2020).</li><li>Luna, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Armed Forces Institute of Pathology (U.S) &amp; Armed Forces Institute of Pathology (U.S.). Manual of Histologic Staining Methods of the Armed Forces Institute of Pathology. 3d edn. , (1968).</li><li>Kelm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+epithelium-expressed+sialyl+Lewis+glycans+improves+colonic+mucosal+wound+healing+and+protects+against+colitis.">Targeting epithelium-expressed sialyl Lewis glycans improves colonic mucosal wound healing and protects against colitis.</a> The Journal of Clinical Investigation Insight. 5 (12), (2020).</li><li>Reed, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+CD47+is+critical+for+mucosal+repair+in+the+murine+intestine+in+vivo.">Epithelial CD47 is critical for mucosal repair in the murine intestine in vivo.</a> Nature Communications. 10 (1), 5004 (2019).</li><li>Laukoetter, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JAM-A+regulates+permeability+and+inflammation+in+the+intestine+in+vivo.">JAM-A regulates permeability and inflammation in the intestine in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (13), 3067-3076 (2007).</li><li>Khounlotham, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compromised+intestinal+epithelial+barrier+induces+adaptive+immune+compensation+that+protects+from+colitis.">Compromised intestinal epithelial barrier induces adaptive immune compensation that protects from colitis.</a> Immunity. 37 (3), 563-573 (2012).</li></ol>

Notre système histologique de score de colite constitue un outil fiable pour quantifier l’inflammation des tissus et les dommages dans l’intestin. Cette approche permet de mieux comprendre l’état histopathologique de l’organe tout entier sans biais de sélection de petites zones ou de sections incomplètes. Parmi les étapes critiques pour exécuter avec succès ce protocole figurent la préparation appropriée des rouleaux suisses qui permettent d’analyser au moins 90% de la longueur du côlon; orientation p...

La barrière épithéliale gastro-intestinale joue un rôle central dans la séparation des antigènes luminaires et des agents pathogènes des compartiments tissulairessous-jacents 1. Les dommages épithéliales et les blessures muqueuses vus dans des conditions pathologiques telles que la maladie intestinale inflammatoire (IBD), l’ischémie, ou les dommages chirurgicaux sont associés aux symptômes cliniques qui incluent la diarrhée, la perte de poids, le sang dans les selles, et la douleur abdominale. En réponse aux dommages, les cellules épithéliales migrent et prolifèrent pour rééthéthélialiser et réparer les défauts muqueux de barrière. La résolution de l’inflammation et la restitution de l’intégrité muqueuse sont cruciales pour rétablir l’homéostasie muqueuse intestinaleet la fonction 2,3,4.
Divers modèles animaux ont été utilisés pour étudier les mécanismes moléculaires sous-jacents qui sont associés aux dommages à la barrière épithéliale intestinale. Des modèles bien établis et facilement applicables de colite induite chimiquement sont largement utilisés, particulièrement dans les études liées aux dommages inflammatoires tels que IBD. Un modèle commun, reproductible, et fiable de colite murine emploie le sulfate de sodium dextran (DSS) a 2gé des dommages coloniques et l’inflammation. La gravité de la maladie varie selon la souche de souris, la dose de DSS, la longueur de l’administration de DSS, et le poids moléculaire de DSS5,6,7.
Les dommages muqueux intestinaux pendant la colite de DSS sont habituellement évalués utilisant l’indice d’activité de la maladie (DAI), un score composite déterminé par la perte de poids, la teneur en sang fécale, et la consistance de selles. La teneur en sang fécal peut être microscopique (détectée à l’aide d’un test d’acide guaiac selles) ou macroscopique; la consistance fécale est classée comme dure, molle ou liquide (c.-à-d. diarrhée)5,8. La notation de ces paramètres cliniques peut être subjective et peut varier en fonction de l’expérience et du parti pris de l’utilisateur, bien que dans l’ensemble, les données fournissent des informations fiables et sont donc largement utilisées par les chercheurs en MII. En revanche, il n’y a aucune méthode généralement acceptée pour l’évaluation histologique des dommages muqueux. Le plus souvent, certaines zones du côlon sont inspectées par un pathologiste formé et notées en fonction de plusieurs paramètres qui incluent habituellement des dommages de crypte et l’infiltration de leucocyte9,10,11. Toutefois, comme le nombre de paramètres étudiés et la quantité de tissu analysé varient considérablement d’un rapport à l’autre, la comparabilité de nombreuses études publiées est limitée. Pour réduire le biais des observateurs et améliorer la concordance inter-études, un protocole de notation histologique idéal devrait : 1) inclure toute la longueur du côlon, car l’inflammation muqueuse intestinale est le plus souvent variable et les lésions de saut sont courantes, 2) limiter l’analyse à des paramètres clés et facilement interprétables spécifiques pour réduire la subjectivité, 3) faciliter le traitement rapide et cohérent d’un grand nombre d’échantillons, et 4) utiliser des outils largement disponibles et abordables pour l’acquisition, l’analyse et la présentation de données.
Ici, nous décrivons une technique pour traiter l’ensemble du côlon ou de longs segments de l’intestin grêle dans une configuration « rouleau suisse » avec l’utilisation d’un système de notation assisté par ordinateur gratuit pour analyser l’inflammation muqueuse intestinale et les dommages causés par la colite induite par le DSS.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aperio AT2 &#8211; High Volume, Digital Whole Slide Scanning</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Aperio AT2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Underpads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>56616-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>American Line 66-0089 Single Edge Blade, 100 per pkg</td>
			<td>GT Midwest</td>
			<td>TL5837</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer-Lok Disposable Syringes without Needles</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-823-2A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>14084-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501640-19L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoPrep 70% Ea</td>
			<td>Fisherbran</td>
			<td>70% denatured ethyl alcohol</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageScope</td>
			<td>Aperio</td>
			<td>Version 12.3.3.5039</td>
			<td>http://www.leicabiosystems.com/pathology-imaging/aperio-epathology/integrate/imagescope/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LeakBuster Specimen Containers: Sterile</td>
			<td>Starplex Scientific</td>
			<td>B120210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffere Saline, without calcium &#38; magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Feeding tubes, 20 GA x 30 mm</td>
			<td>Instech</td>
			<td>FTP2030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 20 G x 1 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 27 G x 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 ml</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unisette Tissue Cassettes</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M505-2</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model

Les modèles murins de colite sont des outils qui sont largement employés dans des études concentrées sur la compréhension de la pathobiologie des désordres intestinaux inflammatoires. Toutefois, des normes robustes pour la quantification objective et reproductible de la gravité de la maladie restent à définir. La plupart des méthodes d’analyse de la colite reposent sur une notation histologique limitée de petits segments de l’intestin, conduisant à des analyses partielles ou biaisées. Ici, nous combinons l’acquisition d’image à haute résolution et l’analyse longitudinale de l’ensemble du côlon pour quantifier les lésions intestinales et l’ulcération dans le modèle induit par le sulfate de sodium de dextran (DSS) de colite murine. Ce protocole permet la génération de résultats objectifs et reproductibles sans formation approfondie des utilisateurs. Ici, nous fournissons des détails complets sur la préparation de l’échantillon et l’analyse d’image à l’aide d’exemples de données de colite induite par le MAS. Cette méthode peut être facilement adaptée à d’autres modèles de colite murine qui ont une inflammation significative associée à des lésions muqueales. Nous démontrons que la fraction de la muqueuse enflammée/blessée et érodée/ulcérée par rapport à la longueur complète du côlon est étroitement parallèle aux résultats cliniques tels que la perte de poids au milieu de la progression induite par le DSS. Ce protocole histologique fournit un temps fiable et une aide rentable pour normaliser les analyses de l’activité de la maladie d’une manière impartiale dans les expériences de colite DSS.

Pour illustrer la fiabilité de cette analyse histologique de score de colite dans le contexte des dommages muqueux après défi de DSS et rétablissement suivant de la colite, nous avons administré 2.5% DSS dans l’eau potable de huit souris mâles de type C57BL6 mâles de 10 semaines pendant 5 jours suivies d’une période de rétablissement avec l’eau régulière pendant 5 jours. Il n’y a eu aucun changement dans le poids corporel pendant l’administration aiguë de DSS, du jou...

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Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model

La notation systématique de l’inflammation intestinale utilisant un système informatique-aidé libre est un outil puissant pour comparer quantitativement des changements histopathologiques dans des modèles de colite caractérisés par la présence des ulcères et des changements inflammatoires. L’évaluation histologique de score de colite renforce des observations cliniques et facilite l’interprétation de données.

Analyse systématique de notation pour l’inflammation intestinale dans un modèle de colite induite par le sulfate de sodium murine dextran

Murine colitis models are tools that are extensively employed in studies focused on understanding the pathobiology of inflammatory intestinal disorders. ...

L’analyse systématique de notation est une technique pour évaluer des dommages muqueux, facilitant l’interprétation histologique qui peut être exécutée par des chercheurs formés. Les principaux avantages de cette méthode est qu’elle est gratuite et facile à utiliser. Il permet une analyse quantitative des données histologiques obtenues à partir des intestins des souris atteintes de colite.Ce protocole fournit un moyen rapide et reproductible d’interpréter la gravité de la maladie de l’ensemble du côlon, ce qui est nécessaire pour comparer la maladie d’animaux de différents milieux génétiques. Pour la préparation des tissus, il est important d’organiser tous les reagents et matériaux. Commencez par placer une souris euthanasiée sur un tampon de dissecting dans une position supine et immobiliser les extrémités de la souris à l’aide d’aiguilles de calibre 1,5 pouce de calibre 20.À l’aide de forceps et de ciseaux, faire une petite incision sur la peau abdominale et la tirer sur le côté pour exposer le péritoine, puis ouvrir la cavité abdominale avec une incision de midline dans le péritoine de l’os pubien aux côtés de l’abdomen. Retirez soigneusement les tissus et les organes jusqu’à ce que le gros intestin soit visualisé. Couper l’os pelvien des deux côtés du côlon pour visualiser complètement l’organe, s’étendant de l’anus vers le cécu.Retirez doucement la graisse, les petites veines et les artères attachées au côlon tout en disséquant soigneusement l’organe, en coupant juste proximal à l’anus et distal au cécage. Rincer soigneusement le côlon avec du PBS pour enlever le contenu fécal à l’aide d’une aiguille de gavage en plastique souple insérée dans l’anus. Placez le côlon en ligne droite et ouvrez longitudilement le long de l’artère mésentérique.Couper le côlon longitudinellement du distal à l’extrémité proximale. Utilisez la moitié du tissu pour l’analyse histologique et l’autre moitié pour la tache occidentale, PCR, ou roulé dans un deuxième rouleau suisse pour la microscopie d’immunofluorescence fraîchement congelée. Couper les tissus supplémentaires du côlon proximal à l’aide d’une lame de rasoir jusqu’à ce qu’environ la même largeur le long de la longueur du côlon entier soit obtenue.Aligner le côlon pour exposer le lumen et aplatir complètement le tissu à l’aide d’une aiguille de gavage flexible. Ajouter plus de PBS si nécessaire pour garder le tissu humide tout au long de la procédure. Retirer l’excès de PBS à l’aide d’un lingette en papier.À l’aide d’une seringue et d’une aiguille de gavage, ajouter une solution formaline tamponnée neutre à 10 % pendant deux à trois minutes pour fixer et aplatir le tissu, puis utiliser des forceps droits pour saisir l’extrémité du côlon distal et tordre le côlon en cercles concentriques de l’extrémité distale à l’extrémité proximale. Insérez une aiguille de calibre 27 pour épingler le côlon au milieu et maintenir sa forme de rouleau suisse, puis placez le rouleau suisse dans une cassette d’intégration à l’intérieur d’un récipient de spécimen histologique orientant le tissu en parallèle par rapport à la cassette. Fixer le tissu dans 10% neutre tamponné solution formaline nuit à quatre degrés Celsius.Après la fixation de nuit, laver le tissu trois fois avec PBS. Ajouter 70 % d’éthanol avant le processus d’intégration de la paraffine et retirer l’aiguille du rouleau suisse avant de procéder. Le tissu peut être stocké dans de l’éthanol à température ambiante jusqu’à ce que la paraffine soit enseilée.Après avoir ouvert les images numérisées dans le logiciel de traitement d’image, vérifiez que l’ensemble du côlon est visible et qu’il n’y a pas de zones manquantes de l’échantillon. Activez l’imageur d’étiquettes et les outils de barre d’échelle pour identifier correctement les diapositives numérisées en cliquant sur l’imageur d’étiquette. Ouvrez l’outil annotations en cliquant sur annotations et créez trois couches différentes en cliquant sur une nouvelle couche pour quantifier la longueur totale du rouleau suisse, l’inflammation ou les blessures, et l’érosion ou l’ulcération.Choisissez une couleur différente pour chaque couche en cliquant sur la couleur de la couche. Mesurez la longueur de chaque couche ou catégorie en cliquant sur l’outil de stylet pour tracer une ligne suivant la muqueuse muscularis, en déplaçant le pointeur au besoin pour visualiser la zone adjacente pour analyse. Visualisez l’image à 400 micromètres de zoom pour faciliter une visualisation adéquate de la muqueuse muscularis.Chaque fois que le stylet est arrêté, une petite nouvelle couche de région sera générée. Il peut être visualisé et modifié avec l’onglet régions de couche. Examinez la longueur totale, l’inflammation ou les blessures, ainsi que l’érosion ou l’ulcération mesurée à l’aide de la muqueuse muscularis comme référence.Une fois que toutes les couches sont définies, exportez les données à l’aide de la grille d’exportation vers le bouton fichier texte à l’intérieur des options de régions de couche. Ouvrez les fichiers texte et copiez les données sur un logiciel de feuille de calcul. Totalez tous les segments de chaque région et calculez le pourcentage de blessures et d’ulcération par rapport à la longueur totale.Considérez trois caractéristiques principales pour calculer le score histologique de colite et pour évaluer la sévérité de la maladie. Vérifiez la santé de la muqueuse intestinale, qui se caractérise par des cellules épithéliales organisées dans l’axe luminaire de la crypte, des propria lamina avec peu de cellules immunitaires et des muqueuses muscularis sous-jacentes. Ensuite, vérifiez l’inflammation ou les blessures, qui se caractérisent par des cryptes épithéliales atténuées ou partiellement manquantes et une inflammation muqueuse avec infiltration de neutrophiles dans les cryptes.Enfin, vérifiez la présence d’érosion ou d’ulcération, qui se caractérise par des zones dépourvues d’épithélium de surface ou des zones dépourvues complètement de cryptes d’épithélium avec ou sans leucocytes associés. Pour illustrer la fiabilité de cette analyse histologique de score de colite dans le contexte des dommages muqueux, 2.5%DSS a été administré dans l’eau potable de huit souris sauvages de type C57BL6 pendant cinq jours, suivie d’une période de rétablissement avec l’eau régulière pendant cinq jours. Le poids corporel est resté constant pendant l’administration aiguë de DSS, mais a considérablement diminué quand les souris ont commencé à boire l’eau régulière du robinet.Le sang et les selles molles sont apparus après trois jours d’administration du DSS et se sont poursuivis jusqu’au huitième jour de l’expérience. Ces observations ont suggéré que les effets les plus préjudiciables de l’exposition au DSS aient été observés pendant la période de rétablissement entre les jours cinq et huit. La mesure de la longueur du côlon le jour 10 a confirmé un raccourcissement significatif à la fin de l’expérience.Les colons ont été récoltés aux jours zéro, deux, cinq, sept, huit et dix pour faire des rouleaux suisses de paraffine. Le tissu a été taché avec H&E et des balayages de haute définition ont été analysés pour calculer le score histologique de colite et le pourcentage de dommages et d’ulcération. L’architecture normale de crypte a été observée chez les souris non traitées.Après deux jours d’administration de DSS, le recrutement de cellules immunitaires a été observé. Le cinquième jour, les cellules épithéliales semblent endommagées et il y avait une infiltration des neutrophiles à travers l’épithélium lié aux dommages épithéliales. Du cinquième au huit jour, des secteurs de perte épithéliale avec l’inflammation et l’ulcération ont été observés.Le jour 10, les cellules épithéliales ont commencé à se régénérer et à repeupler les zones ulcérées, rétablissant lentement la muqueuse du côlon. Lorsque vous essayez ce protocole, il est important de créer un rouleau suisse bien orienté et bien conservé, ainsi que d’identifier correctement l’inflammation muqueuse ou les blessures et l’ulcération ou l’érosion. Cette méthode peut être utilisée pour évaluer quantitativement les blessures sur toute la longueur de la muqueuse du côlon dans d’autres modèles de colite, tels que tms ou modèle de transfert de cellules T.

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