Name: systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model
Uploaded: 2021-02-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

Die Autoren möchten die Unterstützung durch die NIH-Förderung DK055679, DK089763, DK079392, DK061739, DK072564 und die University of Michigan Pathology Slide Scanning Services würdigen.

Alle beschriebenen Tierversuche wurden vom Committee on the Use and Care of Animals der University of Michigan genehmigt.
1. Gewebeernte
<ol><li>Euthanisieren Sie Mäuse human mit Isoflurananästhesie gefolgt von zervikalen Dislokation, in Übereinstimmung mit zugelassenen Protokollen. Für alle Tierversuche wurde die Zulassung durch einen zertifizierten Prüfungsausschuss gemäß den nationalen und institutionellen Richtlinien für den Umgang mit Tieren eingeholt.</li>
	<li>Platzieren Sie d...

<ol>
	<li>Kagnoff, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+epithelium+is+an+integral+component+of+a+communications+network.">The intestinal epithelium is an integral component of a communications network.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (7), 2841-2843 (2014).</li><li>Laukoetter, M. G., Nava, P., Nusrat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+intestinal+barrier+in+inflammatory+bowel+disease.">Role of the intestinal barrier in inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 14 (3), 401-407 (2008).</li><li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crohn's+disease.">Crohn's disease.</a> Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li><li>Ordas, I., Eckmann, L., Talamini, M., Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis.">Ulcerative colitis.</a> Lancet. 380 (9853), 1606-1619 (2012).</li><li>Vowinkel, T., Kalogeris, T. J., Mori, M., Krieglstein, C. F., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+dextran+sulfate+sodium+load+on+the+severity+of+inflammation+in+experimental+colitis.">Impact of dextran sulfate sodium load on the severity of inflammation in experimental colitis.</a> Digestive Diseases and Sciences. 49 (4), 556-564 (2004).</li><li>Kitajima, S., Takuma, S., Morimoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+murine+colitis+induced+by+dextran+sulfate+sodium+of+different+molecular+weights.">Histological analysis of murine colitis induced by dextran sulfate sodium of different molecular weights.</a> Experimental Animals. 49 (1), 9-15 (2000).</li><li>Mahler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> American Journal of Physiology. 274 (3), 544-551 (1998).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nature Protocols. 2 (3), 541-546 (2007).</li><li>Kozlowski, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+entirely+automated+method+to+score+DSS-induced+colitis+in+mice+by+digital+image+analysis+of+pathology+slides.">An entirely automated method to score DSS-induced colitis in mice by digital image analysis of pathology slides.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 855-865 (2013).</li><li>Perse, M., Cerar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulphate+colitis+mouse+model:+traps+and+tricks.">Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 718617 (2012).</li><li>Mizoguchi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+inflammatory+bowel+disease.">Animal models of inflammatory bowel disease.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 105, 263-320 (2012).</li><li>Flemming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desmocollin-2+promotes+intestinal+mucosal+repair+by+controlling+integrin-dependent+cell+adhesion+and+migration.">Desmocollin-2 promotes intestinal mucosal repair by controlling integrin-dependent cell adhesion and migration.</a> Molecular Biology of the Cell. 31 (6), 407-418 (2020).</li><li>Luna, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Armed Forces Institute of Pathology (U.S) &amp; Armed Forces Institute of Pathology (U.S.). Manual of Histologic Staining Methods of the Armed Forces Institute of Pathology. 3d edn. , (1968).</li><li>Kelm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+epithelium-expressed+sialyl+Lewis+glycans+improves+colonic+mucosal+wound+healing+and+protects+against+colitis.">Targeting epithelium-expressed sialyl Lewis glycans improves colonic mucosal wound healing and protects against colitis.</a> The Journal of Clinical Investigation Insight. 5 (12), (2020).</li><li>Reed, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+CD47+is+critical+for+mucosal+repair+in+the+murine+intestine+in+vivo.">Epithelial CD47 is critical for mucosal repair in the murine intestine in vivo.</a> Nature Communications. 10 (1), 5004 (2019).</li><li>Laukoetter, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JAM-A+regulates+permeability+and+inflammation+in+the+intestine+in+vivo.">JAM-A regulates permeability and inflammation in the intestine in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (13), 3067-3076 (2007).</li><li>Khounlotham, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compromised+intestinal+epithelial+barrier+induces+adaptive+immune+compensation+that+protects+from+colitis.">Compromised intestinal epithelial barrier induces adaptive immune compensation that protects from colitis.</a> Immunity. 37 (3), 563-573 (2012).</li></ol>

Unser histologisches Colitis Score-System stellt ein zuverlässiges Werkzeug dar, um Gewebeentzündungen und Schäden im Darm zu quantifizieren. Dieser Ansatz bietet ein besseres Verständnis des histopathologischen Zustands des gesamten Organs, ohne dass die Voreingenommenheit bei der Auswahl kleiner Bereiche oder unvollständiger Abschnitte besteht. Zu den entscheidenden Schritten zur erfolgreichen Ausführung dieses Protokolls gehören die ordnungsgemäße Aufbereitung von Schweizer Walzen, die eine Analyse von mindes...

Die gastrointestinale Epithelbarriere spielt eine zentrale Rolle bei der Trennung von luminalen Antigenen und Krankheitserregern aus den darunter liegenden Gewebeteilen1. Epithelverletzungen und Schleimhautwunden, die bei pathologischen Erkrankungen wie entzündlicher Darmerkrankungen (IBD), Ischämie oder chirurgischen Verletzungen auftreten, sind mit klinischen Symptomen verbunden, die Durchfall, Gewichtsverlust, Blut im Stuhl und Bauchschmerzen umfassen. Als Reaktion auf Verletzungen wandern Epithelzellen und vermehren sich, um Mukohautbarrieredefekte erneut zu epithelialisieren und zu reparieren. Die Auflösung der Entzündung und die Wiederherstellung der Mukosalintegrität sind entscheidend für die Wiederherstellung der Darmschleimhauthomöostase und Funktion2,3,4.
Verschiedene Tiermodelle wurden eingesetzt, um die zugrunde liegenden molekularen Mechanismen zu untersuchen, die mit der Schädigung der Darmepithelbarriere verbunden sind. Gut etablierte und leicht anwendbare Modelle chemisch induzierter Kolitis sind weit verbreitet, insbesondere in Studien im Zusammenhang mit entzündlichen Verletzungen wie IBD. Ein gemeinsames, reproduzierbares und zuverlässiges muriner Kolitismodell verwendet Dextran-Natriumsulfat (DSS) vermittelte Darmverletzungen und Entzündungen. Der Schweregrad der Erkrankung variiert je nach Mausstamm, DSS-Dosis, Länge der DSS-Verabreichung und Molekulargewicht von DSS5,6,7.
Darmschleimhautschäden während DSS-Kolitis werden in der Regel mit dem Disease Activity Index (DAI) bewertet, einem zusammengesetzten Score, der durch Gewichtsverlust, Fäkalienblutgehalt und Stuhlkonsistenz bestimmt wird. Der Fäkalienblutgehalt kann mikroskopisch (mit einem Stuhlguainsäuretest nachgewiesen) oder makroskopisch sein; Die Fäkalienkonsistenz wird als hart, weich oder flüssig (d. h. Durchfall)5,8klassifiziert. Die Bewertung dieser klinischen Parameter kann subjektiv sein und je nach Erfahrung und Voreingenommenheit des Benutzers variieren, obwohl die Daten insgesamt zuverlässige Informationen liefern und daher von IBD-Forschern weit verbreitet sind. Im Gegensatz dazu gibt es keine allgemein anerkannte Methode zur histologischen Bewertung von Schleimhautschäden. Am häufigsten werden ausgewählte Bereiche des Dickdarms von einem ausgebildeten Pathologen untersucht und basierend auf mehreren Parametern bewertet, die in der Regel Kryptoverletzung und Leukozyteninfiltration9,10,11umfassen. Da jedoch die Anzahl der untersuchten Parameter und die Menge des analysierten Gewebes zwischen den einzelnen Berichten sehr unterschiedlich sind, ist die Vergleichbarkeit vieler veröffentlichter Studien begrenzt. Um die Voreingenommenheit der Beobachter zu verringern und die Übereinstimmung zwischen den Studien zu verbessern, sollte ein ideales histologisches Bewertungsprotokoll sein: 1) die gesamte Länge des Dickdarms umfassen, da Darmschleimhautentzündungen am häufigsten variabel sind und Übersprungläsionen häufig sind, 2) die Analyse auf bestimmte Schlüssel und leicht interpretierbare Parameter beschränken, um die Subjektivität zu reduzieren, 3) eine schnelle, konsistente Verarbeitung einer großen Anzahl von Proben zu ermöglichen und 4) weit verfügbare und erschwingliche Werkzeuge für die Datenerfassung, -analyse und -darstellung zu verwenden.
Hier beschreiben wir eine Technik zur Verarbeitung des gesamten Dickdarms oder der langen Segmente des Dünndarms in einer "Swiss Roll"-Konfiguration zusammen mit dem Einsatz eines kostenlosen computergestützten Scoring-Systems zur Analyse von Darmschleimhautentzündungen und -schäden aufgrund von DSS-induzierter Kolitis.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aperio AT2 &#8211; High Volume, Digital Whole Slide Scanning</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Aperio AT2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Underpads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>56616-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>American Line 66-0089 Single Edge Blade, 100 per pkg</td>
			<td>GT Midwest</td>
			<td>TL5837</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer-Lok Disposable Syringes without Needles</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-823-2A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>14084-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501640-19L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoPrep 70% Ea</td>
			<td>Fisherbran</td>
			<td>70% denatured ethyl alcohol</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageScope</td>
			<td>Aperio</td>
			<td>Version 12.3.3.5039</td>
			<td>http://www.leicabiosystems.com/pathology-imaging/aperio-epathology/integrate/imagescope/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LeakBuster Specimen Containers: Sterile</td>
			<td>Starplex Scientific</td>
			<td>B120210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffere Saline, without calcium &#38; magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Feeding tubes, 20 GA x 30 mm</td>
			<td>Instech</td>
			<td>FTP2030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 20 G x 1 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 27 G x 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 ml</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unisette Tissue Cassettes</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M505-2</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model

Murine Colitis Modelle sind Werkzeuge, die ausgiebig in Studien verwendet werden, die auf das Verständnis der Pathobiologie von entzündlichen Darmerkrankungen konzentriert. Es müssen jedoch noch robuste Standards für eine objektive und reproduzierbare Quantifizierung der Schwere der Erkrankung festgelegt werden. Die meisten Kolitis-Analysemethoden basieren auf einer begrenzten histologischen Bewertung kleiner Darmsegmente, was zu partiellen oder voreingenommenen Analysen führt. Hier kombinieren wir hochauflösende Bildaufnahme und Längsschnittanalyse des gesamten Dickdarms, um Darmverletzungen und Ulzerationen im dextran Natriumsulfat (DSS) induzierten Modell der murinen Kolitis zu quantifizieren. Dieses Protokoll ermöglicht die Generierung objektiver und reproduzierbarer Ergebnisse ohne umfassende Benutzerschulung. Hier bieten wir umfassende Details zur Probenvorbereitung und Bildanalyse anhand von Datenbeispielen aus DSS-induzierter Kolitis. Diese Methode kann leicht an andere Modelle der murinen Kolitis angepasst werden, die erhebliche Entzündungen im Zusammenhang mit Schleimhautverletzungen haben. Wir zeigen, dass der Anteil der entzündeten/verletzten und erodierten/ulzerierten Schleimhaut im Verhältnis zur gesamten Länge des Dickdarms eng parallel zu klinischen Befunden wie Gewichtsverlust inmitten der DSS-induzierten Krankheitsprogression ist. Dieses histologische Protokoll bietet eine zuverlässige zeit- und kosteneffektive Hilfe bei der unvoreingenommenen Standardisierung von Analysen der Krankheitsaktivität in DSS-Kolitisexperimenten.

Um die Zuverlässigkeit dieser histologischen Colitis Score Analyse im Zusammenhang mit Schleimhautschäden nach DSS-Herausforderung und anschließender Genesung von Kolitis zu veranschaulichen, verabreichten wir 2,5% DSS im Trinkwasser von acht 10 Wochen alten männlichen C57BL6 Wildtypmäusen für 5 Tage, gefolgt von einer Erholungsphase mit regelmäßigem Wasser für 5 Tage. Es gab keine Veränderung des Körpergewichts während der akuten Verabreichung von DSS, von Tag 0 bis 5 (<stron...

Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model

Die systematische Bewertung von Darmentzündungen mit einem freien computergestützten System ist ein leistungsfähiges Werkzeug, um histopathologische Veränderungen in Kolitismodellen, die durch das Vorhandensein von Geschwüren und entzündlichen Veränderungen gekennzeichnet sind, quantitativ zu vergleichen. Die auswertung der histologischen Colitis-Score-Bewertung stärkt klinische Beobachtungen und erleichtert die Dateninterpretation.

Systematische Scoring-Analyse für Darmentzündungen in einem Murine Dextran Natriumsulfat-induzierte Colitis Modell

Murine colitis models are tools that are extensively employed in studies focused on understanding the pathobiology of inflammatory intestinal disorders. ...

Die systematische Scoring-Analyse ist eine Technik zur Bewertung von Schleimhautverletzungen, die eine histologische Interpretation erleichtert, die von ausgebildeten Forschern durchgeführt werden kann. Die Wichtigsten Vorteile dieser Methode ist, dass es kostenlos und einfach zu bedienen ist. Es ermöglicht eine quantitative Analyse von histologischen Daten aus dem Darm von Mäusen mit Kolitis erhalten.Dieses Protokoll bietet eine schnelle und reproduzierbare Möglichkeit, die Schwere der Krankheit des gesamten Dickdarms zu interpretieren, die für den Vergleich von Krankheiten von Tieren unterschiedlichen genetischen Hintergrunds notwendig ist. Für die Gewebeaufbereitung ist es wichtig, alle Reagenzien und Materialien zu organisieren. Beginnen Sie, indem Sie eine eingeschläferte Maus auf einem Sezieren Pad in einer Supine-Position und immobilisieren Sie die Maus Extremitäten mit 20 Gauge 1,5 Zoll Nadeln.Mit Zangen und Schere, machen Sie einen kleinen Schnitt auf der Bauchhaut und ziehen Sie es zur Seite, um das Peritoneum auszusetzen, dann öffnen Sie die Bauchhöhle mit einem Mittellinienschnitt im Peritoneum vom Schambein bis zu den Seiten des Bauches. Entfernen Sie vorsichtig Gewebe und Organe, bis der Dickdarm visualisiert ist. Schneiden Sie den Beckenknochen auf beiden Seiten des Dickdarms, um das Organ vollständig zu visualisieren, vom Anus bis zum Cecum.Entfernen Sie vorsichtig Fett, kleine Venen und Arterien, die am Dickdarm befestigt sind, während Sie das Organ vorsichtig sezieren, nur proximal zum Anus schneiden und distal zum Cecum. Spülen Sie den Doppelpunkt vorsichtig mit PBS, um fäkalen Inhalt mit einer flexiblen Kunststoff-Gavage-Nadel zu entfernen, die durch den Anus eingeführt wird. Positionieren Sie den Doppelpunkt in einer geraden Linie und öffnen Sie längs entlang der mesenterischen Arterie.Bisect den Kolon längs vom distalen bis zum proximalen Ende. Verwenden Sie die Hälfte des Gewebes für die histologische Analyse und die andere Hälfte für Western Blot, PCR, oder gerollt in eine zweite Schweizer Rolle für die frisch gefrorene Immunfluoreszenzmikroskopie. Schneiden Sie zusätzliches Gewebe aus dem proximalen Dickdarm mit einer Rasierklinge, bis ungefähr die gleiche Breite entlang der Länge des gesamten Dickdarms erhalten wird.Richten Sie den Dickdarm aus, um das Lumen freizulegen, und glätten Sie das Gewebe vollständig mit einer flexiblen Gavage-Nadel. Fügen Sie bei Bedarf weitere PBS hinzu, um das Gewebe während des gesamten Verfahrens feucht zu halten. Entfernen Sie die überschüssige PBS mit einem Papierwisch.Mit einer Spritze und gavage Nadel, fügen Sie 10%neutral gepufferte formalin Lösung für zwei bis drei Minuten, um das Gewebe zu fixieren und abzuflachen, dann verwenden Sie gerade Zange, um das Ende des distalen Dickdarms zu greifen und drehen Sie den Dickdarm in konzentrische Kreise vom distalen zu proximalen Ende. Legen Sie eine 27-Spur-Nadel ein, um den Doppelpunkt in der Mitte zu fixieren und halten Sie die Schweizer Rolle, und legen Sie die Schweizer Rolle dann in eine Einbettkassette in einen histologischen Probenbehälter, der das Gewebe parallel zur Kassette orientiert. Fixieren Sie das Gewebe in 10%neutral gepufferter Formalinlösung über Nacht bei vier Grad Celsius.Waschen Sie das Gewebe nach der nächtlichen Fixierung dreimal mit PBS. 70% Ethanol vor dem Paraffin-Einbettungsprozess hinzufügen und die Nadel von der Schweizer Rolle entfernen, bevor Sie fortfahren. Das Gewebe kann in Ethanol bei Raumtemperatur bis zur Paraffineinbettung gelagert werden.Nachdem Sie die gescannten Bilder in der Bildverarbeitungssoftware geöffnet haben, stellen Sie sicher, dass der gesamte Doppelpunkt sichtbar ist und keine Bereiche der Probe fehlen. Aktivieren Sie die Etikettenbildr- und Skalenleistenwerkzeuge, um gescannte Folien ordnungsgemäß zu identifizieren, indem Sie auf Etikettenbildr klicken. Öffnen Sie das Anmerkungswerkzeug, indem Sie auf Anmerkungen klicken, und erstellen Sie drei verschiedene Layer, indem Sie auf eine neue Ebene klicken, um die Gesamtlänge der Schweizer Rolle, Entzündung oder Verletzung sowie Erosion oder Ulzeration zu quantifizieren.Wählen Sie für jede Ebene eine andere Farbe aus, indem Sie auf die Layerfarbe klicken. Messen Sie die Länge jeder Ebene oder Kategorie, indem Sie auf das Stiftwerkzeug klicken, um eine Linie nach der Muskulatur zu zeichnen, und den Zeiger nach Bedarf bewegen, um den angrenzenden Bereich für die Analyse zu visualisieren. Sehen Sie sich das Bild mit 400 Mikrometer Zoom an, um eine adäquate Visualisierung der Muskulatur zu ermöglichen.Jedes Mal, wenn der Stift angehalten wird, wird ein kleiner neuer Layer-Bereich generiert. Sie kann mit der Registerkarte Layer-Bereiche visualisiert und bearbeitet werden. Überprüfen Sie die Gesamtlänge, Entzündung oder Verletzung, und Erosion oder Ulzeration gemessen mit der Muskulatur Schleimhaut als Referenz.Nachdem alle Layer definiert sind, exportieren Sie die Daten mithilfe des Exportrasters in die Textdateischaltfläche innerhalb der Layer-Regionsoptionen. Öffnen Sie die Textdateien, und kopieren Sie die Daten in eine Tabellenkalkulationssoftware. Alle Segmente aus jeder Region zusammen und berechnen den Prozentsatz der Schädigung und Ulzeration in Bezug auf die Gesamtlänge.Betrachten Sie drei Hauptmerkmale, um den histologischen Colitis-Score zu berechnen und den Schweregrad der Krankheit zu bewerten. Suchen Sie nach einer gesunden Darmschleimhaut, die sich durch organisierte Epithelzellen in der Krypta-Luminalachse, Lamina-Propria mit wenigen Immunzellen und subjacent-muskuläre Schleimhaut auszeichnet. Als nächstes überprüfen Sie auf Entzündungen oder Verletzungen, die durch epitheliale Krypten gekennzeichnet sind, die abgeschwächt sind oder teilweise fehlen Epithelzellen und Schleimhautentzündung mit neutrophiler Infiltration in Krypten.Schließlich überprüfen Sie das Vorhandensein von Erosion oder Ulzeration, die durch Bereiche ohne Oberflächenepithel oder Bereiche ohne Epithelkrypten mit oder ohne assoziierte Leukozyten gekennzeichnet ist. Um die Zuverlässigkeit dieser histologischen Kolitis-Score-Analyse im Zusammenhang mit Schleimhautschäden zu veranschaulichen, wurden 2,5%DSS fünf Tage lang im Trinkwasser von acht C57BL6-Wildtypmäusen verabreicht, gefolgt von einer Erholungsphase mit regelmäßigem Wasser für fünf Tage. Das Körpergewicht blieb während der akuten Verabreichung von DSS konstant, nahm aber dramatisch ab, als Mäuse begannen, regelmäßiges Leitungswasser zu trinken.Blut und weiche Stühle erschienen nach drei Tagen DSS-Verabreichung und dauerten bis zum achten Tag des Experiments. Diese Beobachtungen legten nahe, dass die nachteiligsten Auswirkungen der Exposition gegenüber DSS während des Erholungszeitraums zwischen den Tagen fünf und acht beobachtet wurden. Die Messung der Dickdarmlänge am 10. Tag bestätigte eine signifikante Verkürzung am Ende des Experiments.Die Kolons wurden am Tag null, zwei, fünf, sieben, acht und zehn geerntet, um Paraffin-Schweizer Brötchen herzustellen. Das Gewebe wurde mit H&E befleckt und High-Definition-Scans wurden analysiert, um den histologischen Colitis-Score und den Prozentsatz der Verletzungen und Geschwüre zu berechnen. Normale Kryptoarchitektur wurde bei unbehandelten Mäusen beobachtet.Nach zwei Tagen DSS-Verabreichung wurde die Rekrutierung von Immunzellen beobachtet. Am fünften Tag scheinen Epithelzellen beschädigt zu sein und es gab eine Infiltration von Neutrophilen über das Epithel, das mit Epithelverletzungen verbunden war. Vom fünften bis achten Tag wurden Epithelverluste mit Entzündungen und Geschwüren beobachtet.Am 10. Tag begannen Epithelzellen zu regenerieren und ulzerierte Bereiche wieder zu bevölkern, wodurch die Kolonschleimhaut langsam wiederhergestellt wurde. Beim Versuch dieses Protokolls ist es wichtig, eine richtig orientierte und gut erhaltene Schweizer Rolle zu schaffen sowie Schleimhautentzündungen oder Verletzungen sowie Geschwüre oder Erosion richtig zu identifizieren. Diese Methode kann verwendet werden, um Verletzungen entlang der gesamten Länge der Kolonschleimhaut in anderen Modellen der Kolitis, wie TMS oder T-Zell-Transfermodell, quantitativ zu bewerten.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris Infektion: Ein Modell des Typ-2-Immunität und Entzündung im Darm

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Durchflusszytometrie-Analyse von Immunzellen innerhalb Murine Aorten

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Analyse der Lungen-Reifung von dendritischen Zellen und Migration während der allergischen Atemwegsentzündung

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Die<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: Studieren Erreger und Wirt Beiträge zur Infectious Colitis

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Einem Mausmodell für Pathogen-induzierten chronischen Entzündung an lokalen und systemischen Seiten

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Die Induktion von Murine Darmentzündungen durch adoptiven Transfer von Effektor CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hoch</sup&gt; T-Zellen in immundefizienten Mäusen

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

Ein optimiertes Verfahren zur Isolierung und Ausbau unveränderlichen natürlichen Killer T-Zellen aus der Milz der Maus

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran erhöht die Effizienz der Lentivirale Transduktion von murinen und menschliche primäre NK-Zellen

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Induction and Scoring of Graft-Versus-Host Disease in a Xenogeneic Murine Model and Quantification of Human T Cells in Mouse Tissues using Digital PCR

Induktion und Bewertung der Graft-Versus-Host-Krankheit in einem xenogenen Murine-Modell und Quantifizierung menschlicher T-Zellen in Mausgeweben mit digitaler PCR

Acute graft-versus-host disease (GVHD) is a significant limitation for patients receiving hematopoietic stem cell transplant as therapy for hematological ...