Name: systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model
Uploaded: 2021-02-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

המחברים מבקשים להכיר בתמיכה של NIH מימון DK055679, DK089763, DK079392, DK061739, DK072564 ושירותי סריקת שקופיות פתולוגיה של אוניברסיטת מישיגן.

כל הניסויים בבעלי חיים שתוארו אושרו על ידי הוועדה של אוניברסיטת מישיגן לשימוש וטיפול בבעלי חיים.
1. קציר רקמות
<ol><li>המתת חסד עכברים באופן אנושי באמצעות הרדמה isoflurane ואחריו נקע בצוואר הרחם, בהתאם לפרוטוקולים שאושרו. עבור כל הניסויים בבעלי חיים, האישור התקבל על ידי ועדת בדיקה ?...

<ol>
	<li>Kagnoff, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+epithelium+is+an+integral+component+of+a+communications+network.">The intestinal epithelium is an integral component of a communications network.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (7), 2841-2843 (2014).</li><li>Laukoetter, M. G., Nava, P., Nusrat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+intestinal+barrier+in+inflammatory+bowel+disease.">Role of the intestinal barrier in inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 14 (3), 401-407 (2008).</li><li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crohn's+disease.">Crohn's disease.</a> Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li><li>Ordas, I., Eckmann, L., Talamini, M., Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis.">Ulcerative colitis.</a> Lancet. 380 (9853), 1606-1619 (2012).</li><li>Vowinkel, T., Kalogeris, T. J., Mori, M., Krieglstein, C. F., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+dextran+sulfate+sodium+load+on+the+severity+of+inflammation+in+experimental+colitis.">Impact of dextran sulfate sodium load on the severity of inflammation in experimental colitis.</a> Digestive Diseases and Sciences. 49 (4), 556-564 (2004).</li><li>Kitajima, S., Takuma, S., Morimoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+murine+colitis+induced+by+dextran+sulfate+sodium+of+different+molecular+weights.">Histological analysis of murine colitis induced by dextran sulfate sodium of different molecular weights.</a> Experimental Animals. 49 (1), 9-15 (2000).</li><li>Mahler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> American Journal of Physiology. 274 (3), 544-551 (1998).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nature Protocols. 2 (3), 541-546 (2007).</li><li>Kozlowski, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+entirely+automated+method+to+score+DSS-induced+colitis+in+mice+by+digital+image+analysis+of+pathology+slides.">An entirely automated method to score DSS-induced colitis in mice by digital image analysis of pathology slides.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 855-865 (2013).</li><li>Perse, M., Cerar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulphate+colitis+mouse+model:+traps+and+tricks.">Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 718617 (2012).</li><li>Mizoguchi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+inflammatory+bowel+disease.">Animal models of inflammatory bowel disease.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 105, 263-320 (2012).</li><li>Flemming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desmocollin-2+promotes+intestinal+mucosal+repair+by+controlling+integrin-dependent+cell+adhesion+and+migration.">Desmocollin-2 promotes intestinal mucosal repair by controlling integrin-dependent cell adhesion and migration.</a> Molecular Biology of the Cell. 31 (6), 407-418 (2020).</li><li>Luna, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Armed Forces Institute of Pathology (U.S) &amp; Armed Forces Institute of Pathology (U.S.). Manual of Histologic Staining Methods of the Armed Forces Institute of Pathology. 3d edn. , (1968).</li><li>Kelm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+epithelium-expressed+sialyl+Lewis+glycans+improves+colonic+mucosal+wound+healing+and+protects+against+colitis.">Targeting epithelium-expressed sialyl Lewis glycans improves colonic mucosal wound healing and protects against colitis.</a> The Journal of Clinical Investigation Insight. 5 (12), (2020).</li><li>Reed, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+CD47+is+critical+for+mucosal+repair+in+the+murine+intestine+in+vivo.">Epithelial CD47 is critical for mucosal repair in the murine intestine in vivo.</a> Nature Communications. 10 (1), 5004 (2019).</li><li>Laukoetter, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JAM-A+regulates+permeability+and+inflammation+in+the+intestine+in+vivo.">JAM-A regulates permeability and inflammation in the intestine in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (13), 3067-3076 (2007).</li><li>Khounlotham, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compromised+intestinal+epithelial+barrier+induces+adaptive+immune+compensation+that+protects+from+colitis.">Compromised intestinal epithelial barrier induces adaptive immune compensation that protects from colitis.</a> Immunity. 37 (3), 563-573 (2012).</li></ol>

מערכת הקוליטיס ההיסטולוגית שלנו מהווה כלי אמין לכימות דלקת רקמות ונזק במעי. גישה זו מספקת הבנה משופרת של המצב ההיסטופטולוגי של האיבר כולו ללא הטיה של בחירת אזורים קטנים או קטעים לא שלמים. בין הצעדים הקריטיים לביצוע מוצלח של פרוטוקול זה ניתן למנות הכנה נכונה של לחמניות שוויצריות המאפשרות ?...

מחסום האפיתל במערכת העיכול ממלא תפקיד מרכזי בהפרדת אנטיגנים ופתוגנים לומינליים מתאי הרקמות הבסיסיים1. פגיעה אפיתל ופצעים ריר לראות בתנאים פתולוגיים כגון מחלות מעי דלקתיות (IBD), איסכמיה, או פציעה כירורגית קשורים עם תסמינים קליניים הכוללים שלשולים, ירידה במשקל, דם בצואה, וכאבי בטן. בתגובה לפציעה, תאי אפיתל נודדים ומתרבים כדי לאפיתל מחדש ולתקן פגמים במחסום הרירית. רזולוציה של דלקת והחזרת שלמות הרירית חיוניים להקמה מחדש של הומאוסטזיס הרירית במעיים ולתפקד2,3,4.
מודלים שונים של בעלי חיים שימשו כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים הבסיסיים הקשורים לפגיעה במחסום האפיתל במעיים. מודלים מבוססים היטב וישימים בקלות של קוליטיס המושרה כימית נמצאים בשימוש נרחב, במיוחד במחקרים הקשורים לפגיעה דלקתית כגון מחלות מעי דלקתיות. דגם קוליטיס מורין נפוץ, ניתן לשחזור ואמין מעסיק נתרן גופרתי (DSS) בתיווך פגיעה במעי הגס ודלקת. חומרת המחלה משתנה בהתאם לזן העכבר, מינון של DSS, אורך ניהול DSS, ומשקל מולקולרי של DSS5,6,7.
נזק ריר מעיים במהלך קוליטיס DSS מוערך בדרך כלל באמצעות מדד פעילות המחלה (DAI), ציון מרוכב שנקבע על ידי ירידה במשקל, תוכן דם צואה, ועקביות צואה. תכולת הדם בצואה יכולה להיות מיקרוסקופית (מזוהה באמצעות בדיקת חומצה guaiac צואה) או מקרוסקופי; עקביות צואה מסווגת קשה, רך, או נוזלי (כלומר, שלשול)5,8. ניקוד של פרמטרים קליניים אלה יכול להיות סובייקטיבי ועשוי להשתנות בהתאם לניסיון של המשתמש והטיה, אם כי בסך הכל, הנתונים מספקים מידע אמין ולכן נמצא בשימוש נרחב על ידי חוקרי IBD. לעומת זאת, אין שיטה מקובלת להערכה היסטולוגית של נזקי ריר. לרוב, אזורים נבחרים של המעי הגס נבדקים על ידי פתולוג מיומן וציון בהתבסס על מספר פרמטרים הכוללים בדרך כלל פגיעה בקריפטה וחדירת לויקוציטים9,10,11. עם זאת, מכיוון שמספר הפרמטרים שנחקרו וכמות הרקמות שנותחו משתנה במידה ניכרת בין דוחות בודדים, ההסתגלות של מחקרים רבים שפורסמו מוגבלת. כדי להפחית את הטיית הצופה ולשפר את הקונקורדנציה הבין-מחקרית, פרוטוקול ניקוד היסטולוגי אידיאלי צריך: 1) לכלול את כל אורך המעי הגס, שכן דלקת הרירית במעיים היא לרוב משתנה ולדלג על נגעים נפוצים, 2) להגביל ניתוח לפרמטרים ספציפיים מפתח קל לפרשנות כדי להפחית את הסובייקטיביות, 3) להקל על עיבוד מהיר ועקבי של מספר גדול של דגימות, ו 4) להשתמש בכלים זמינים ובמחיר סביר נרחב לרכישת נתונים, ניתוח ומצגת.
כאן אנו מתארים טכניקה לעבד את המעי הגס כולו או קטעים ארוכים של המעי הדק בתצורת "רול שוויצרי" יחד עם השימוש במערכת ניקוד בסיוע מחשב חינם כדי לנתח דלקת ריר מעיים ונזק בגלל קוליטיס הנגרמת על ידי DSS.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aperio AT2 &#8211; High Volume, Digital Whole Slide Scanning</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Aperio AT2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Underpads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>56616-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>American Line 66-0089 Single Edge Blade, 100 per pkg</td>
			<td>GT Midwest</td>
			<td>TL5837</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer-Lok Disposable Syringes without Needles</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-823-2A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>14084-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501640-19L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoPrep 70% Ea</td>
			<td>Fisherbran</td>
			<td>70% denatured ethyl alcohol</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageScope</td>
			<td>Aperio</td>
			<td>Version 12.3.3.5039</td>
			<td>http://www.leicabiosystems.com/pathology-imaging/aperio-epathology/integrate/imagescope/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LeakBuster Specimen Containers: Sterile</td>
			<td>Starplex Scientific</td>
			<td>B120210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffere Saline, without calcium &#38; magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Feeding tubes, 20 GA x 30 mm</td>
			<td>Instech</td>
			<td>FTP2030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 20 G x 1 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 27 G x 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 ml</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unisette Tissue Cassettes</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M505-2</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model

מודלים קוליטיס מורין הם כלים כי הם מועסקים בהרחבה במחקרים התמקדו בהבנת הפתוביולוגיה של הפרעות מעיים דלקתיות. עם זאת, סטנדרטים חזקים לכימות אובייקטיבי וניתן לשחזור של חומרת המחלה נשארים מוגדרים. רוב שיטות ניתוח קוליטיס מסתמכות על ניקוד היסטולוגי מוגבל של מקטעים קטנים של המעי, מה שמוביל לניתוחים חלקיים או מוטים. כאן, אנו משלבים רכישת תמונה ברזולוציה גבוהה וניתוח אורך של המעי הגס כולו כדי לכמת פגיעה במעיים וכיב במודל דקסטרן נתרן גופרתי (DSS) המושרה של קוליטיס מורין. פרוטוקול זה מאפשר יצירת תוצאות אובייקטיביות ושחזוריות ללא הכשרה נרחבת של המשתמש. כאן, אנו מספקים פרטים מקיפים על הכנת מדגם וניתוח תמונה באמצעות דוגמאות של נתונים של קוליטיס המושרה DSS. שיטה זו יכולה להיות מותאמת בקלות מודלים אחרים של קוליטיס מורין כי יש דלקת משמעותית הקשורים לפגיעה הרירית. אנו מראים כי השבר של רירית מודלקת/פצועה ושחוקה/כיבית ביחס לאורך המלא של המעי הגס מקבילה באופן הדוק לממצאים קליניים כגון ירידה במשקל בין התקדמות המחלה הנגרמת על ידי DSS. פרוטוקול היסטולוגי זה מספק זמן אמין וסיוע חסכוני לתקנן ניתוחים של פעילות המחלה בצורה לא משוחדת בניסויי קוליטיס DSS.

כדי להמחיש את האמינות של ניתוח ניקוד קוליטיס היסטולוגי זה בהקשר של נזק ריר לאחר אתגר DSS והתאוששות לאחר מכן קוליטיס, ניהלנו 2.5% DSS במי שתייה של שמונה עכברים מסוג C57BL6 זכר בן 10 שבועות במשך 5 ימים ואחריו תקופת התאוששות עם מים רגילים במשך 5 ימים. לא חל שינוי במשקל הגוף במהלך הניהול...

Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model

ניקוד שיטתי של דלקת מעיים באמצעות מערכת חופשית בסיוע מחשב הוא כלי רב עוצמה להשוות כמותית שינויים היסטופטולוגיים במודלים קוליטיס המאופיינת על ידי נוכחות של כיבים ושינויים דלקתיים. הערכת ניקוד קוליטיס היסטולוגית מחזקת תצפיות קליניות ומאפשרת פרשנות נתונים.

ניתוח ניקוד שיטתי עבור דלקת מעיים במודל קוליטיס נתרן סולפט הנגרמת על ידי מורין

Murine colitis models are tools that are extensively employed in studies focused on understanding the pathobiology of inflammatory intestinal disorders. ...

ניתוח הניקוד השיטתי הוא טכניקה להערכת פגיעה ריר, להקל על פרשנות היסטולוגית שיכולה להתבצע על ידי חוקרים מיומנים. היתרונות העיקריים של שיטה זו היא שהיא חופשית וקלה לשימוש. זה מאפשר ניתוח כמותי של נתונים היסטולוגיים המתקבלים מהמעיים של עכברים עם קוליטיס.פרוטוקול זה מספק דרך מהירה וניתן לשחזור לפרש את חומרת המחלה של המעי הגס כולו, אשר הכרחי להשוואת מחלות מבעלי חיים מרקעים גנטיים שונים. להכנת רקמות, חשוב לארגן את כל ריאגנטים וחומרים. התחל על ידי הנחת עכבר מורדם על כרית מנתח בתנוחה סופית לשתק את גפי העכבר באמצעות 20 מד 1.5 מחטים אינץ '.באמצעות מלקחיים ומספריים, לעשות חתך קטן על עור הבטן ולמשוך אותו לצד כדי לחשוף את הצפק, ואז לפתוח את חלל הבטן עם חתך קו האמצע בצפק מעצם הערווה לצדדים של הבטן. בזהירות להסיר רקמות ואיברים עד המעי הגס הוא דמיון. חותכים את עצם האגן משני צידי המעי הגס כדי לדמיין באופן מלא את האיבר, המשתרע מפי הטבעת לכיוון cecum.בעדינות להסיר שומן, ורידים קטנים, ועורקים המחוברים המעי הגס תוך ניתוח זהיר של האיבר, חיתוך רק קרוב לפי הטבעת ו distal כדי cecum. בזהירות לשטוף את המעי הגס עם PBS כדי להסיר תוכן צואה באמצעות מחט gavage פלסטיק גמיש מוכנס דרך פי הטבעת. מקמו את המעי הגס בקו ישר ופתחו לאורך העורק המזנטרי.חוצה את המעי הגס לאורך זמן מהדיסטלי לקצה הפרוקסימלי. השתמש במחצית הרקמה לניתוח היסטולוגי ואת החצי השני עבור כתם מערבי, PCR, או התגלגל לתוך גליל שוויצרי שני עבור מיקרוסקופיה קפואה טרי. לקצץ רקמה נוספת מן המעי הגס proximal עם סכין גילוח עד בערך באותו רוחב לאורך המעי הגס כולו מתקבל.ליישר את המעי הגס כדי לחשוף את לומן לשטח את הרקמה לחלוטין באמצעות מחט gavage גמיש. הוסף עוד PBS במידת הצורך כדי לשמור על הרקמה לחה לאורך כל ההליך. הסר את PBS העודף באמצעות ניגוב נייר.עם מזרק ומחט gavage, להוסיף 10% ניטרלי אגירה פורמלין פתרון במשך שתיים עד שלוש דקות כדי לתקן ולשטח את הרקמה, ולאחר מכן להשתמש במלקחיים ישרים לתפוס את הקצה של המעי הגס דיסטלי ולסובב את המעי הגס לתוך מעגלים קונצנטריים מן הדיסטלי לקצה proximal. הכנס מחט 27 מד להצמיד את המעי הגס באמצע ולהחזיק את צורת הגליל השוויצרי שלה, ולאחר מכן למקם את הגליל השוויצרי לתוך קלטת הטבעה בתוך מיכל דגימה היסטולוגית מכוון את הרקמה במקביל לקלטת. לתקן את הרקמה בתמיסת פורמלין אגירה ניטרלית 10% לילה בארבע מעלות צלזיוס.לאחר קיבוע לילה, לשטוף את הרקמה שלוש פעמים עם PBS. מוסיפים 70% אתנול לפני תהליך הטמעת הפרפין ומסירים את המחט מהגליל השוויצרי לפני שתמשיך. הרקמה יכולה להיות מאוחסנת באתנול בטמפרטורת החדר עד הטבעה פרפין.לאחר פתיחת התמונות הסרוקות בתוכנת עיבוד התמונה, ודא שהמעי הגס כולו גלוי ושאם אין אזורים חסרים במדגם. הפעל את ה Imager של התווית ואת כלי סרגל קנה המידה כדי לזהות כראוי שקופיות סרוקות על-ידי לחיצה על Imager תווית. פתח את כלי הביאורים על ידי לחיצה על ביאורים וליצור שלוש שכבות שונות על ידי לחיצה על שכבה חדשה כדי לכמת את האורך הכולל של רול שוויצרי, דלקת או פציעה, שחיקה או כיב.בחרו צבע אחר לכל שכבה בלחיצה על צבע השכבה. מדוד את אורך כל שכבה או קטגוריה על-ידי לחיצה על הכלי עט כדי למתוח קו בעקבות רירית השרירים, והזז את המצביע לפי הצורך כדי להמחיש את האזור הסמוך לניתוח. הצג את התמונה בזום של 400 מיקרומטר כדי להקל על הדמיה נאותה של רירית השרירים.בכל פעם שהעט יופסק, ייווצר אזור שכבה חדש וקטן. ניתן להמחיש ולערוך אותו באמצעות הכרטיסיה 'אזורי שכבה'. סקור את האורך הכולל, דלקת או פציעה, ושחיקה או כיב נמדד באמצעות רירית השרירים כנקודת התייחסות.לאחר הגדרת כל השכבות, ייצאו את הנתונים באמצעות רשת הייצוא ללחצן קובץ מלל בתוך אפשרויות אזורי השכבה. פתח את קבצי הטקסט והעתק את הנתונים לתוכנת גיליון אלקטרוני. סה"כ את כל המקטעים מכל אזור וחשב את אחוז הפציעה והכיב ביחס לאורך הכולל.שקול שלושה מאפיינים עיקריים כדי לחשב את הציון קוליטיס היסטולוגית כדי להעריך את חומרת המחלה. בדוק רירית מעיים בריאה, המאופיינת בתאי אפיתל מאורגנים בציר הקריפטה הזוהר, למינה פרופריה עם מעט תאי חיסון ורירית שרירים תת-קרקעית. לאחר מכן, בדוק דלקת או פציעה, המאופיינת בקריפטות אפיתל מוחלשים או חסרים חלקית בתאי אפיתל ודלקת ריר עם חדירת נויטרופילים לקריפטות.לבסוף, בדוק את נוכחותם של שחיקה או כיב, אשר מאופיין באזורים נטולי אפיתל פני השטח או אזורים חסרים לחלוטין קריפטות אפיתל עם או בלי לויקוציטים הקשורים. כדי להמחיש את האמינות של ניתוח ניקוד קוליטיס היסטולוגי זה בהקשר של נזק ריר, 2.5%DSS היה מנוהל במי השתייה של שמונה עכברים מסוג C57BL6 פראי במשך חמישה ימים, ואחריו תקופת התאוששות עם מים רגילים במשך חמישה ימים. משקל הגוף נשאר קבוע במהלך הממשל החריף של DSS, אבל ירד באופן דרמטי כאשר עכברים התחילו לשתות מי ברז רגילים.דם ושרפרפים רכים הופיעו לאחר שלושה ימים של ניהול DSS ונמשכו עד היום השמיני של הניסוי. תצפיות אלה הראו כי ההשפעות המזיקות ביותר של חשיפה DSS נצפו במהלך תקופת ההחלמה בין ימים חמש לשמונה. מדידת אורך המעי הגס ביום 10 אישרה קיצור משמעותי בסוף הניסוי.המעי הגס נקצרו ביום אפס, שתיים, חמש, שבע, שמונה, ו -10 כדי להפוך לחמניות שוויצרי פרפין. הרקמה הוכתמה ב- H& סריקות בחדות גבוהה נותחו כדי לחשב את ציון הקוליטיס ההיסטולוגית ואת אחוז הפציעה וכיב. ארכיטקטורת קריפטה רגילה נצפתה בעכברים לא מטופלים.לאחר יומיים של ניהול DSS, גיוס תאים חיסוניים נצפתה. ביום החמישי, תאי אפיתל מופיעים פגומים והייתה חדירה של נויטרופילים על פני האפיתל הקשורים לפגיעה אפיתל. מהיום החמישי עד שמונה, אזורים של אובדן אפיתל עם דלקת וכיב נצפו.ביום העשירי, תאי אפיתל החלו להתחדש ולאכלס מחדש אזורים כיביים, תוך שחזור איטי של רירית המעי הגס. בעת ניסיון פרוטוקול זה, חשוב ליצור גליל שוויצרי מכוון היטב שמור היטב, כמו גם לזהות כראוי דלקת הרירית או פציעה וכיב או שחיקה. שיטה זו יכולה לשמש כדי להעריך כמותית פציעה לאורך כל רירית המעי הגס במודלים אחרים של קוליטיס, כגון TMS או T-cell העברת מודל.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris זיהום: מודל של חסינות סוג 2, דלקת במעיים

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

ניתוח תזרים cytometry של תאים חיסוניים בתוך Aortas Murine

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

ניתוח של התבגרות ריאתי Cell Migration הדנדריטים ובמהלך דלקת אלרגית Airway

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; דגם עכבר: תרומות הפתוגן ומארח לומדים קוליטיס המדבק

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

מודל של עכברים של דלקת כרונית הנגרם על ידי פתוגן באתרים מקומיים ומערכתיים

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

אינדוקציה של Murine דלקת מעיים על ידי העברת המאמצת של מפעיל CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; גבוה</sup&gt; תאי T לעכברי immunodeficient

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

שיטה אופטימלית עבור בידוד והרחבת תאי Invariant הטבעי רוצח T מטחול העכבר

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

לתוספי משפר את היעילות התמרה חושית Lentiviral של תאי NK העיקרי מאתר ואנושי

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Induction and Scoring of Graft-Versus-Host Disease in a Xenogeneic Murine Model and Quantification of Human T Cells in Mouse Tissues using Digital PCR

אינדוקציה והבקיע של מחלת השתל מול מארחים ב מודל Murine מורה Xenoic ו כימות האדם תאים T ברקמות העכבר באמצעות PCR דיגיטלי

Acute graft-versus-host disease (GVHD) is a significant limitation for patients receiving hematopoietic stem cell transplant as therapy for hematological ...