Name: systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model
Uploaded: 2021-02-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

Författarna vill erkänna stöd från NIH-finansiering DK055679, DK089763, DK079392, DK061739, DK072564 och University of Michigan Pathology Slide Scanning Services.

Alla djurförsök som beskrevs godkändes av University of Michigans kommitté för användning och vård av djur.
1. Vävnadsskörd
<ol><li>Avliva möss humant med isofluranbedövning följt av livmoderhalsförskjutning, i enlighet med godkända protokoll. För alla djurförsök erhölls godkännande av en certifierad granskningsnämnd i enlighet med nationella och institutionella riktlinjer för djurhantering.</li>
	<li>Placera musen på en dissekeringsplatta i ett supinläge. Immobilisera...

<ol>
	<li>Kagnoff, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+epithelium+is+an+integral+component+of+a+communications+network.">The intestinal epithelium is an integral component of a communications network.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (7), 2841-2843 (2014).</li><li>Laukoetter, M. G., Nava, P., Nusrat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+intestinal+barrier+in+inflammatory+bowel+disease.">Role of the intestinal barrier in inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 14 (3), 401-407 (2008).</li><li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crohn's+disease.">Crohn's disease.</a> Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li><li>Ordas, I., Eckmann, L., Talamini, M., Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis.">Ulcerative colitis.</a> Lancet. 380 (9853), 1606-1619 (2012).</li><li>Vowinkel, T., Kalogeris, T. J., Mori, M., Krieglstein, C. F., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+dextran+sulfate+sodium+load+on+the+severity+of+inflammation+in+experimental+colitis.">Impact of dextran sulfate sodium load on the severity of inflammation in experimental colitis.</a> Digestive Diseases and Sciences. 49 (4), 556-564 (2004).</li><li>Kitajima, S., Takuma, S., Morimoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+murine+colitis+induced+by+dextran+sulfate+sodium+of+different+molecular+weights.">Histological analysis of murine colitis induced by dextran sulfate sodium of different molecular weights.</a> Experimental Animals. 49 (1), 9-15 (2000).</li><li>Mahler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> American Journal of Physiology. 274 (3), 544-551 (1998).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nature Protocols. 2 (3), 541-546 (2007).</li><li>Kozlowski, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+entirely+automated+method+to+score+DSS-induced+colitis+in+mice+by+digital+image+analysis+of+pathology+slides.">An entirely automated method to score DSS-induced colitis in mice by digital image analysis of pathology slides.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 855-865 (2013).</li><li>Perse, M., Cerar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulphate+colitis+mouse+model:+traps+and+tricks.">Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 718617 (2012).</li><li>Mizoguchi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+inflammatory+bowel+disease.">Animal models of inflammatory bowel disease.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 105, 263-320 (2012).</li><li>Flemming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desmocollin-2+promotes+intestinal+mucosal+repair+by+controlling+integrin-dependent+cell+adhesion+and+migration.">Desmocollin-2 promotes intestinal mucosal repair by controlling integrin-dependent cell adhesion and migration.</a> Molecular Biology of the Cell. 31 (6), 407-418 (2020).</li><li>Luna, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Armed Forces Institute of Pathology (U.S) &amp; Armed Forces Institute of Pathology (U.S.). Manual of Histologic Staining Methods of the Armed Forces Institute of Pathology. 3d edn. , (1968).</li><li>Kelm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+epithelium-expressed+sialyl+Lewis+glycans+improves+colonic+mucosal+wound+healing+and+protects+against+colitis.">Targeting epithelium-expressed sialyl Lewis glycans improves colonic mucosal wound healing and protects against colitis.</a> The Journal of Clinical Investigation Insight. 5 (12), (2020).</li><li>Reed, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+CD47+is+critical+for+mucosal+repair+in+the+murine+intestine+in+vivo.">Epithelial CD47 is critical for mucosal repair in the murine intestine in vivo.</a> Nature Communications. 10 (1), 5004 (2019).</li><li>Laukoetter, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JAM-A+regulates+permeability+and+inflammation+in+the+intestine+in+vivo.">JAM-A regulates permeability and inflammation in the intestine in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (13), 3067-3076 (2007).</li><li>Khounlotham, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compromised+intestinal+epithelial+barrier+induces+adaptive+immune+compensation+that+protects+from+colitis.">Compromised intestinal epithelial barrier induces adaptive immune compensation that protects from colitis.</a> Immunity. 37 (3), 563-573 (2012).</li></ol>

Vårt histologiska kolitpoängsystem utgör ett pålitligt verktyg för att kvantifiera vävnadsinflammation och skador i tarmen. Detta tillvägagångssätt ger en förbättrad förståelse för det histopatologiska tillståndet i hela organet utan partiskhet att välja små områden eller ofullständiga avsnitt. Bland de kritiska stegen för att framgångsrikt utföra detta protokoll är korrekt förberedelse av schweiziska rullar som möjliggör analys av minst 90% av tjocktarmens längd; Parallell orientering under pa...

Den gastrointestinala epitelbarriären spelar en avgörande roll vid separation av luminala antigener och patogener från underliggande vävnadsutrymmen1. Epitelskada och slemhinnor som ses i patologiskt tillstånd såsom inflammatorisk tarmsjukdom (IBD), ischemi eller kirurgisk skada är förknippade med kliniska symtom som inkluderar diarré, viktminskning, blod i avföring och buksmärta. Som svar på skada migrerar epitelceller och förökar sig för att åter epitelialisera och reparera slemhinnor barriär defekter. Upplösning av inflammation och upprättelse av slemhinnor integritet är avgörande för att återupprätta intestinala slemhinnan homeostas och funktion2,3,4.
Olika djurmodeller har använts för att studera de underliggande molekylära mekanismerna som är förknippade med skadorna på tarmepitela barriären. Väletablerade och lätt tillämpliga modeller av kemiskt inducerad kolit används ofta, särskilt i studier relaterade till inflammatorisk skada som IBD. En vanlig, reproducerbar och pålitlig murin kolit modell använder dextran natriumsulfat (DSS) medierad colonic skada och inflammation. Svårighetsgraden av sjukdomen varierar beroende på musstam, dos av DSS, längden på DSS-administrering och molekylvikten för DSS5,6,7.
Intestinala slemhinnor under DSS kolit utvärderas vanligtvis med hjälp av Disease Activity Index (DAI), en sammansatt poäng som bestäms av viktminskning, fekal blodhalt och avföring konsistens. Fekalblodhalten kan vara mikroskopisk (detekteras med hjälp av ett avförings guaiac acid test) eller makroskopisk; fekal konsistens klassificeras som hård, mjuk eller flytande (dvs. diarré)5,8. Poängsättning av dessa kliniska parametrar kan vara subjektiv och kan variera beroende på användarens erfarenhet och partiskhet, även om uppgifterna totalt sett ger tillförlitlig information och används därför i stor utsträckning av IBD-forskare. Däremot finns det ingen allmänt accepterad metod för histologisk utvärdering av slemhinnor skador. Oftast inspekteras utvalda områden i tjocktarmen av en utbildad patolog och poängsätts baserat på flera parametrar som vanligtvis inkluderar kryptskada och leukocytinfiltration9,10,11. Men eftersom antalet undersökta parametrar och mängden vävnad som analyseras varierar avsevärt mellan enskilda rapporter, är jämförbarheten hos många publicerade studier begränsad. För att minska observatörens partiskhet och förbättra överensstämmelsen mellan studier bör ett idealiskt histologiskt poängprotokoll: 1) omfatta hela tjocktarmens längd, eftersom tarmslemhinnainflammation oftast är variabel och hoppa över lesioner är vanliga, 2) begränsa analysen till specifika nyckel- och lätttolkande parametrar för att minska subjektiviteten, 3) underlätta snabb, konsekvent bearbetning av ett stort antal prover och 4) använda allmänt tillgängliga och prisvärda verktyg för datainsamling, analys och presentation.
Här beskriver vi en teknik för att bearbeta hela tjocktarmen eller långa segment av tunntarmen i en "schweizisk rulle" konfiguration tillsammans med användningen av en fri datorstödd poängsättningssystem för att analysera intestinala slemhinneinflammation och skador på grund av DSS-inducerad kolit.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aperio AT2 &#8211; High Volume, Digital Whole Slide Scanning</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Aperio AT2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Underpads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>56616-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>American Line 66-0089 Single Edge Blade, 100 per pkg</td>
			<td>GT Midwest</td>
			<td>TL5837</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer-Lok Disposable Syringes without Needles</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-823-2A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>14084-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501640-19L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoPrep 70% Ea</td>
			<td>Fisherbran</td>
			<td>70% denatured ethyl alcohol</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageScope</td>
			<td>Aperio</td>
			<td>Version 12.3.3.5039</td>
			<td>http://www.leicabiosystems.com/pathology-imaging/aperio-epathology/integrate/imagescope/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LeakBuster Specimen Containers: Sterile</td>
			<td>Starplex Scientific</td>
			<td>B120210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffere Saline, without calcium &#38; magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Feeding tubes, 20 GA x 30 mm</td>
			<td>Instech</td>
			<td>FTP2030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 20 G x 1 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 27 G x 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 ml</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unisette Tissue Cassettes</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M505-2</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model

Murine colitis modeller är verktyg som används i stor utsträckning i studier fokuserade på att förstå patobiologin hos inflammatoriska tarmsjukdomar. Robusta standarder för objektiv och reproducerbar kvantifiering av sjukdomens svårighetsgrad återstår dock att definiera. De flesta kolit analys metoder förlitar sig på begränsad histologisk poängsättning av små segment av tarm, vilket leder till partiella eller partiska analyser. Här kombinerar vi högupplöst bildförvärv och longitudinell analys av hela tjocktarmen för att kvantifiera tarmskada och ulceration i dextran natriumsulfat (DSS) inducerad modell av murin kolit. Detta protokoll möjliggör generering av objektiva och reproducerbara resultat utan omfattande användarutbildning. Här ger vi omfattande information om provberedning och bildanalys med hjälp av exempel på data från DSS inducerad kolit. Denna metod kan enkelt anpassas till andra modeller av murin kolit som har betydande inflammation i samband med slemhinneskada. Vi visar att fraktionen av inflammerade/skadade och eroderade/ulcerated slemhinnan i förhållande till hela längden av kolon nära paralleller kliniska resultat såsom viktminskning bland DSS-inducerad sjukdom progression. Detta histologiska protokoll ger en tillförlitlig tid och kostnadseffektivt stöd för att standardisera analyser av sjukdomsaktivitet på ett opartiskt sätt i DSS-kolitexperiment.

För att illustrera tillförlitligheten hos denna histologiska kolit poäng analys i samband med slemhinneskador efter DSS utmaning och efterföljande återhämtning från kolit, administrerade vi 2,5% DSS i dricksvatten av åtta 10 veckor gammal manliga C57BL6 vilda typ möss i 5 dagar följt av en återhämtningsperiod med regelbundet vatten i 5 dagar. Det fanns ingen förändring i kroppsvikten under akut administrering av DSS, från dag 0 till 5 (figur 4A...

Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model

Systematisk poängsättning av intestinala inflammation med hjälp av ett gratis datorassisterat system är ett kraftfullt verktyg för att kvantitativt jämföra histopatologiska förändringar i kolitmodeller som kännetecknas av förekomsten av sår och inflammatoriska förändringar. Histologisk kolit poäng utvärdering stärker kliniska observationer och underlättar data tolkning.

Systematisk poänganalys för tarminflammation i en murin dextran natriumsulfatinducerad kolitmodell

Murine colitis models are tools that are extensively employed in studies focused on understanding the pathobiology of inflammatory intestinal disorders. ...

Den systematiska poänganalysen är en teknik för att utvärdera slemhinnor och underlätta histologisk tolkning som kan utföras av utbildade forskare. De främsta fördelarna med denna metod är att den är gratis och enkel att använda. Det möjliggör kvantitativ analys av histologiska data som erhållits från tarmarna hos möss med kolit.Detta protokoll ger ett snabbt och reproducerbart sätt att tolka sjukdomens svårighetsgrad av hela tjocktarmen, vilket är nödvändigt för att jämföra sjukdom från djur med olika genetisk bakgrund. För vävnadsberedning är det viktigt att organisera alla reagenser och material. Börja med att placera en avlivad mus på en dissekeringsplatta i ett supinläge och immobilisera musens extremiteter med hjälp av 20 gauge 1,5 tums nålar.Använd tång och sax, gör ett litet snitt på bukhuden och dra den åt sidan för att exponera bukhinnan och öppna sedan bukhålan med ett mittlinjesnitt i bukhinnan från könsbenet till bukens sidor. Ta försiktigt bort vävnader och organ tills tjocktarmen visualiseras. Skär bäckenbenet på båda sidor av tjocktarmen för att helt visualisera organet och sträck sig från anusen mot cecum.Ta försiktigt bort fett, små vener och artärer som är fästa vid tjocktarmen samtidigt som de noggrant dissekerar organet, skär bara proximalt till anus och distala till cecum. Spola försiktigt kolonet med PBS för att ta bort fekalt innehåll med hjälp av en flexibel plastdlande nål som sätts in genom anusen. Placera tjocktarmen i en rak linje och öppna längs längs den mesenteriala artären.Dela tjocktarmen längsgående från den distala till den proximala änden. Använd hälften av vävnaden för histologisk analys och den andra hälften för western blot, PCR, eller rullad i en andra schweizisk rulle för färsk fryst immunofluorescensmikroskopi. Trimma extra vävnad från proximalkolonet med ett rakblad tills ungefär samma bredd längs hela tjocktarmens längd erhålls.Rikta kolonet för att exponera lumen och platta vävnaden helt med en flexibel sondagenål. Tillsätt mer PBS om det behövs för att hålla vävnaden fuktig under hela proceduren. Ta bort överflödig PBS med en pappersservett.Med en spruta och sondagenål, tillsätt 10% neutral buffrad formalinlösning i två till tre minuter för att fixa och platta till vävnaden, använd sedan raka tång för att ta tag i änden av det distala tjocktarmen och vrid kolonet till koncentriska cirklar från den distala till proximala änden. Sätt in en 27 gauge nål för att fästa tjocktarmen i mitten och håll sin schweiziska rullform och placera sedan den schweiziska rullen i en inbäddningskassett inuti en histologisk provbehållare som orienterar vävnaden parallellt med kassetten. Fixa vävnaden i 10% neutral buffrad formalinlösning över natten vid fyra grader Celsius.Efter fixering över natten, tvätta vävnaden tre gånger med PBS. Tillsätt 70% etanol före paraffininbäddningsprocessen och ta bort nålen från den schweiziska rullen innan du fortsätter. Vävnaden kan förvaras i etanol vid rumstemperatur tills paraffininbäddning.När du har öppnat de skannade bilderna i bildbehandlingsprogrammet kontrollerar du att hela kolonet är synligt och att det inte saknas några områden i exemplet. Aktivera verktygen för etikettbildaren och skalningslisten för att identifiera skannade bilder korrekt genom att klicka på etikettbildaren. Öppna anteckningsverktyget genom att klicka på anteckningar och skapa tre olika lager genom att klicka på nytt lager för att kvantifiera den totala längden på den schweiziska rullen, inflammation eller skada och erosion eller sårbildning.Välj en annan färg för varje lager genom att klicka på lagerfärg. Mät längden på varje lager eller kategori genom att klicka på ritstiftsverktyget för att rita en linje efter muskulatursslemhinnan och flytta pekaren efter behov för att visualisera det intilliggande området för analys. Visa bilden vid 400 mikrometer zoom för att underlätta adekvat visualisering av muscularis slemhinnan.Varje gång pennan stoppas genereras en liten ny lagerregion. Den kan visualiseras och redigeras med fliken lagerregioner. Granska den totala längden, inflammationen eller skadan och erosion eller sårbildning mätt med muskulära slemhinnan som referens.När alla lager har definierats exporterar du data med hjälp av exportrutnätet till textfilsknappen i alternativen för lagerområden. Öppna textfilerna och kopiera data till ett kalkylbladsprogram. Totalt alla segment från varje region och beräkna procentandelen skada och sårbildning med avseende på total längd.Tänk på tre huvudegenskaper för att beräkna den histologiska kolitpoängen och för att utvärdera svårighetsgraden av sjukdomen. Kontrollera om det finns friska tarmslemhinnor, som kännetecknas av organiserade epitelceller i kryptans luminalaxel, lamina propria med få immunceller och subjacent muscularis slemhinna. Därefter, kontrollera för inflammation eller skada, som kännetecknas av epitelkrypter som dämpas eller delvis saknar epitelceller och slemhinneinflammation med neutrofiltrering i krypter.Slutligen, kontrollera förekomsten av erosion eller ulceration, som kännetecknas av områden utan ytepiteletium eller områden som helt saknar epitelkrypterade med eller utan tillhörande leukocyter. För att illustrera tillförlitligheten i denna histologiska kolit poäng analys i samband med slemhinneskador, 2,5%DSS administrerades i dricksvatten av åtta C57BL6 vilda möss i fem dagar, följt av en återhämtningsperiod med regelbundet vatten i fem dagar. Kroppsvikten förblev konstant under akut administrering av DSS, men minskade dramatiskt när möss började dricka vanligt kranvatten.Blod och mjuka avföring uppträdde efter tre dagar av DSS administration och fortsatte fram till dag åtta av experimentet. Dessa observationer tydde på att de mest skadliga effekterna av exponering för DSS observerades under återhämtningsperioden mellan dag fem och åtta. Mätning av kolonlängd dag 10 bekräftade en betydande förkortning i slutet av experimentet.Kolon skördades på dag noll, två, fem, sju, åtta och tio för att göra paraffin schweiziska rullar. Vävnaden var färgas med H&E och högupplösta skanningar analyserades för att beräkna histologiska kolit poäng och procentandel av skada och ulceration. Normal krypt arkitektur observerades i obehandlade möss.Efter två dagar av DSS administration observerades immun cell rekrytering. Dag fem verkar epitelceller skadas och det fanns en infiltration av neutrofiler över epitel är associerad med epitelial skada. Från dag fem till åtta observerades områden av epitelial förlust med inflammation och ulceration.På dag 10 började epitelceller regenerera och återbefolka ulcerated områden, långsamt återställa colonic slemhinnan. När du försöker detta protokoll är det viktigt att skapa en korrekt orienterad och välbevarad schweizisk rulle, samt att korrekt identifiera slemhinna inflammation eller skada och sårbildning eller erosion. Denna metod kan användas för att kvantitativt utvärdera skada längs hela längden av kolonisk slemhinna i andra modeller av kolit, såsom TMS eller T-cells överföringsmodell.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris Muris Infektion: En modell av typ 2 Immunitet och inflammation i tarmen

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Flödescytometrisk analys av immunceller Inom Murine artärer

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Analys av Pulmonell mognad av dendritiska celler och migration under Allergisk luftvägsinflammation

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Den<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mus Modell: Studera patogen och värd Bidrag till infektiös kolit

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

En musmodell för patogen-inducerad Kronisk inflammation vid lokala och system webbplatser

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induktion av murina tarminflammation med adoptiv överföring av Effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hög</sup&gt; T-celler i möss med immunbrist

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

En optimerad metod för att isolera och utöka Invariant Natural Killer T-celler från musmjälte

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran effektiviserar Lentiviral transduktion murina och mänskliga primära NK-celler

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Induction and Scoring of Graft-Versus-Host Disease in a Xenogeneic Murine Model and Quantification of Human T Cells in Mouse Tissues using Digital PCR

Induktion och poängsättning av graft-versus-host-sjukdom i en Xenogeneisk murin modell och kvantifiering av humana T-celler i mus vävnader med hjälp av digital PCR

Acute graft-versus-host disease (GVHD) is a significant limitation for patients receiving hematopoietic stem cell transplant as therapy for hematological ...