Name: assessing biofilm dispersal in murine wounds
Uploaded: 2021-08-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Biofilm Dispersal in Murine Wounds at JoVE.com

وقد دعم هذا العمل منح من المعاهد الوطنية للصحة (R21 AI137462-01A1) ومؤسسة تيد ناش للحياة الطويلة ومؤسسة جاسبر ل. وجاك دينتون ويلسون ووزارة الدفاع (وزارة الدفاع W0318_19_NM_PP.

تمت مراجعة هذا البروتوكول الحيواني والموافقة عليه من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوان واستخدامه التابعة لمركز العلوم الصحية بجامعة تكساس للتكنولوجيا (البروتوكول رقم 07044). وقد أجريت هذه الدراسة وفقا للتوصيات الواردة في دليل رعاية واستخدام المختبرات التابع للمعاهد الوطنية للصحة.
<p clas...

<ol>
	<li>Rossolini, G. M., Arena, F., Pecile, P., Pollini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+the+antibiotic+resistance+crisis.">Update on the antibiotic resistance crisis.</a> Current Opinion in Pharmacology. 18, 56-60 (2014).</li><li>Stewart, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+Tolerance+in+Biofilms.">Antimicrobial Tolerance in Biofilms.</a> Microbiology Spectrum. 3 (3), (2015).</li><li>Flemming, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms:+an+emergent+form+of+bacterial+life.">Biofilms: an emergent form of bacterial life.</a> Nature Reviews Microbiology. 14 (9), 563-575 (2016).</li><li>Rumbaugh, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+well+are+we+translating+biofilm+research+from+bench-side+to+bedside.">How well are we translating biofilm research from bench-side to bedside.</a> Biofilm. 2 (100028), (2020).</li><li>Rumbaugh, K. P., Sauer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm+dispersion.">Biofilm dispersion.</a> Nature Reviews Microbiology. 18 (10), 571-586 (2020).</li><li>Fleming, D., Chahin, L., Rumbaugh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycoside+Hydrolases+Degrade+Polymicrobial+Bacterial+Biofilms+in+Wounds.">Glycoside Hydrolases Degrade Polymicrobial Bacterial Biofilms in Wounds.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (2), (2017).</li><li>Fleming, D., Rumbaugh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Consequences+of+Biofilm+Dispersal+on+the+Host.">The Consequences of Biofilm Dispersal on the Host.</a> Scientific Reports. 8 (1), 10738 (2018).</li><li>Baker, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exopolysaccharide+biosynthetic+glycoside+hydrolases+can+be+utilized+to+disrupt+and+prevent+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms.">Exopolysaccharide biosynthetic glycoside hydrolases can be utilized to disrupt and prevent Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Science Advances. 2 (5), 1501632 (2016).</li><li>Redman, W. K., Welch, G. S., Rumbaugh, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Efficacy+of+Glycoside+Hydrolases+to+Disperse+Biofilms.">Differential Efficacy of Glycoside Hydrolases to Disperse Biofilms.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 10, 379 (2020).</li><li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycoside+hydrolase+DisH+from+Desulfovibrio+vulgaris+degrades+the+N-acetylgalactosamine+component+of+diverse+biofilms.">Glycoside hydrolase DisH from Desulfovibrio vulgaris degrades the N-acetylgalactosamine component of diverse biofilms.</a> Environmental Microbiology. 20 (6), 2026-2037 (2018).</li><li>Fell, C. F., Rumbaugh, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Antibacterial Drug Discovery to Combat MDR. , 527-546 (2019).</li><li>Dalton, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vivo+polymicrobial+biofilm+wound+infection+model+to+study+interspecies+interactions.">An in vivo polymicrobial biofilm wound infection model to study interspecies interactions.</a> PLoS One. 6 (11), 27317 (2011).</li><li>Wolcott, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm+maturity+studies+indicate+sharp+debridement+opens+a+time-+dependent+therapeutic+window.">Biofilm maturity studies indicate sharp debridement opens a time- dependent therapeutic window.</a> Journal of Wound Care. 19 (8), 320-328 (2010).</li><li>Korgaonkar, A., Trivedi, U., Rumbaugh, K. P., Whiteley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Community+surveillance+enhances+Pseudomonas+aeruginosa+virulence+during+polymicrobial+infection.">Community surveillance enhances Pseudomonas aeruginosa virulence during polymicrobial infection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (3), 1059-1064 (2013).</li><li>Watters, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+perturb+wound+resolution+and+antibiotic+tolerance+in+diabetic+mice.">Pseudomonas aeruginosa biofilms perturb wound resolution and antibiotic tolerance in diabetic mice.</a> Medical Microbiology and Immunology. 202 (2), 131-141 (2013).</li><li>Watters, C., Everett, J. A., Haley, C., Clinton, A., Rumbaugh, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+treatment+modulates+the+host+immune+system+to+enhance+Pseudomonas+aeruginosa+wound+biofilms.">Insulin treatment modulates the host immune system to enhance Pseudomonas aeruginosa wound biofilms.</a> Infection and Immunity. 82 (1), 92-100 (2014).</li><li>Turner, K. H., Everett, J., Trivedi, U., Rumbaugh, K. P., Whiteley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirements+for+Pseudomonas+aeruginosa+acute+burn+and+chronic+surgical+wound+infection.">Requirements for Pseudomonas aeruginosa acute burn and chronic surgical wound infection.</a> PLOS Genetics. 10 (7), 1004518 (2014).</li><li>Harrison, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+1,000-Year-Old+Antimicrobial+Remedy+with+Antistaphylococcal+Activity.">A 1,000-Year-Old Antimicrobial Remedy with Antistaphylococcal Activity.</a> mBio. 6 (4), 01129 (2015).</li><li>Wolcott, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota+is+a+primary+cause+of+pathogenesis+of+chronic+wounds.">Microbiota is a primary cause of pathogenesis of chronic wounds.</a> Journal of Wound Care. 25, 33-43 (2016).</li><li>Ibberson, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-infecting+microorganisms+dramatically+alter+pathogen+gene+essentiality+during+polymicrobial+infection.">Co-infecting microorganisms dramatically alter pathogen gene essentiality during polymicrobial infection.</a> Nature Microbiology. 2, 17079 (2017).</li><li>Fleming, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+Glycoside+Hydrolases+to+Improve+the+Quantification+and+Visualization+of+Biofilm+Bacteria.">Utilizing Glycoside Hydrolases to Improve the Quantification and Visualization of Biofilm Bacteria.</a> Biofilm. 2, (2020).</li><li>DeLeon, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+interactions+of+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus+in+an+in+vitro+wound+model.">Synergistic interactions of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus in an in vitro wound model.</a> Infection and Immunity. 82 (11), 4718-4728 (2014).</li><li>Darch, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phage+Inhibit+Pathogen+Dissemination+by+Targeting+Bacterial+Migrants+in+a+Chronic+Infection+Model.">Phage Inhibit Pathogen Dissemination by Targeting Bacterial Migrants in a Chronic Infection Model.</a> mBio. 8 (2), (2017).</li><li>Chua, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersed+cells+represent+a+distinct+stage+in+the+transition+from+bacterial+biofilm+to+planktonic+lifestyles.">Dispersed cells represent a distinct stage in the transition from bacterial biofilm to planktonic lifestyles.</a> Nature Communications. 5, 4462 (2014).</li><li>Beitelshees, M., Hill, A., Jones, C. H., Pfeifer, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+Variation+during+Biofilm+Formation:+Implications+for+Anti-Biofilm+Therapeutic+Design.">Phenotypic Variation during Biofilm Formation: Implications for Anti-Biofilm Therapeutic Design.</a> Materials (Basel). 11 (7), (2018).</li><li>Sauer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+nutrient-induced+dispersion+in+Pseudomonas+aeruginosa+PAO1+biofilm.">Characterization of nutrient-induced dispersion in Pseudomonas aeruginosa PAO1 biofilm.</a> J Bacteriol. 186 (21), 7312-7326 (2004).</li><li>Kuklin, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+monitoring+of+bacterial+infection+in+vivo:+development+of+bioluminescent+staphylococcal+foreign-body+and+deep-thigh-wound+mouse+infection+models.">Real-time monitoring of bacterial infection in vivo: development of bioluminescent staphylococcal foreign-body and deep-thigh-wound mouse infection models.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 47 (9), 2740-2748 (2003).</li><li>Francis, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+pneumococcal+infections+in+the+lungs+of+live+mice+using+bioluminescent+Streptococcus+pneumoniae+transformed+with+a+novel+gram-positive+lux+transposon.">Visualizing pneumococcal infections in the lungs of live mice using bioluminescent Streptococcus pneumoniae transformed with a novel gram-positive lux transposon.</a> Infection and Immunity. 69 (5), 3350-3358 (2001).</li><li>Kadurugamuwa, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+optical+imaging+method+to+evaluate+postantibiotic+effects+on+biofilm+infection+in+vivo.">Noninvasive optical imaging method to evaluate postantibiotic effects on biofilm infection in vivo.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (6), 2283-2287 (2004).</li><li>Wimpenny, J., Manz, W., Szewzyk, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+biofilms.">Heterogeneity in biofilms.</a> FEMS Microbiology Reviews. 24 (5), 661-671 (2000).</li><li>Stewart, P. S., Franklin, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+heterogeneity+in+biofilms.">Physiological heterogeneity in biofilms.</a> Nature Reviews Microbiology. 6 (3), 199-210 (2008).</li><li>Tipton, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+wound+microbiome+colonization+on+mouse+model+following+cryogenic+preservation.">Chronic wound microbiome colonization on mouse model following cryogenic preservation.</a> PLoS One. 14 (8), 0221656 (2019).</li></ol>

هنا نحن وصف البروتوكولات التي يمكن استخدامها لدراسة فعالية عوامل التشتت بيو فيلم. ويمكن تكييف هذه البروتوكولات بسهولة لاستخدامها مع أنواع مختلفة من عوامل التشتت أو الأنواع البكتيرية أو عينات الجسم الحي السابق، بما في ذلك عينات الحطام السريري. يوفر هذا البروتوكول أيضا نموذجا مناسبا ...

ارتفاع مقاومة المضادات الحيوية في جميع أنحاء العالم يؤدي إلى عدم وجود خيارات المضادات الحيوية لعلاج مجموعة متنوعة من الالتهابات البكتيرية1. بالإضافة إلى مقاومة المضادات الحيوية، يمكن للبكتيريا الحصول على تحمل المضادات الحيوية من خلال اعتماد نمط الحياة المرتبطة بيو فيلم2. بيو فيلم هو مجتمع من الكائنات الحية الدقيقة التي تحميها مصفوفة من السكريات، الحمض النووي خارج الخلية، الدهون، والبروتينات3،تسمى مجتمعة مادة البوليمر خارج الخلية (EPS). ومع استمرار أزمة مقاومة المضادات الحيوية، هناك حاجة ماسة إلى استراتيجيات جديدة تطيل أمد استخدام المضادات الحيوية أو تعمل على فعاليتها. عوامل مكافحة بيو فيلم هي واحدة واعدة الحل4.
من بين مختلف استراتيجيات مكافحة بيو فيلم التي تم اقتراحها، واستخدام عوامل التشتت، والتي تستهدف مكونات مختلفة من EPS بيو فيلم، هي في طليعة التنمية العلاجية5. الهدرلاسات الجليكوزيدية (GH) هي واحدة من هذه الفئة من عوامل التشتت. هرمون النمو هي فئة كبيرة من الانزيمات التي تحفز انشقاق الروابط المختلفة داخل السكريات التي توفر السلامة الهيكلية لEPS. وقد أظهرت مجموعتنا، فضلا عن غيرها، أن هرمون النمو يمكن أن تتحلل بشكل فعال الأغشية الحيوية، والحث على التشتت وتحسين فعالية المضادات الحيوية لعدد من الأنواع البكتيرية المختلفة، سواء في المختبر وفي الجسم الحي6،7،8،9،10،11.
مع تزايد الاهتمام في التشتت بيو فيلم، من المهم تطوير أساليب فعالة لتقييم فعالية التشتت. هنا، نقدم بروتوكول مفصل لعلاج التهابات الجروح المرتبطة بيو فيلم مع عامل التشتت في الفئران، وتقييم فعالية التشتت، في الجسم الحي وفي الجسم الحي السابق. الهدف العام هو توفير أساليب فعالة يمكن استخدامها مع نماذج ما قبل السريرية لقياس تشتت بيو فيلم بفعالية وكفاءة.
تم استخدام نموذج عدوى استئصال مورين الجراحية في هذه الدراسات لإنشاء عدوى مرتبطة بيو فيلم. لقد استخدمنا هذا النموذج لأكثر من 15 عاما ونشرنا ملاحظاتنا على نطاق واسع7،9،12،13،14،15،16،17،18،19،20،21. بشكل عام ، هذا هو نموذج العدوى غير المميتة حيث تظل البكتيريا مترجمة إلى سرير الجرح وترتبط بيو فيلم (البكتيريا التي ينظر إليها في المجاميع محاطة EPS) ، وإعداد عدوى مزمنة تستمر لمدة تصل إلى 3 أسابيع. ومع ذلك ، إذا كانت الفئران منقوصة المناعة (مع مرض السكري من النوع 1 على سبيل المثال) ، فإنها يمكن أن تصبح أكثر عرضة لتطوير عدوى جهازية قاتلة في هذا النموذج.
في هذا التقرير، نقدم بروتوكولات لتقييم تشتت البكتيريا من الجرح، سواء في الجسم الحي أو الجسم الحي السابق. يمكن استخدام كلا البروتوكولين لفحص فعالية عامل التشتت ويكون له نقاط قوته ونقاط ضعفه الخاصة. على سبيل المثال، يمكن لتقييم التشتت في الجسم الحي أن يوفر معلومات مهمة في الوقت الحقيقي حول انتشار البكتيريا إلى أجزاء أخرى من الجسم بعد التشتت، وكيفية استجابة المضيف. من ناحية أخرى ، قد يكون تقييم التشتت في الجسم الحي أكثر جاذبية لفحص عوامل أو جرعات أو تركيبات متعددة ، حيث يمكن تقسيم الأنسجة إلى أقسام متعددة يمكن اختبارها بشكل منفصل ، وبالتالي تقليل عدد الفئران المطلوبة. عند تقييم عوامل متعددة، ونحن عادة قياس التشتت أولا في المختبر كما هو موضح سابقا 6،9،22. ثم نقوم باختبار الجسم الحي السابق الأكثر فعالية والاحتياطي في اختبار الجسم الحي لعدد محدود من العوامل الواعدة للغاية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14823434</td>
			<td>Use to complete serial dilutions of samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G 58 in needle</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14823434</td>
			<td>Attaches to 1 mL syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin Sodium Salt</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP1760-5</td>
			<td>Make a 50 mg/ mL stock solution and add 100 &#181;L to 10 mL of LB broth for both overnight and subculture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylase</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>2100447</td>
			<td>Make a 5% w/v solution, vortex- other dispersal agents can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR-LAB 5 mL (1 mg/mL)</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>RX216118</td>
			<td>Use as pain mainagement- may use other options</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellulase</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>2150583</td>
			<td>Add 5% w/v to the 5% w/v amylase solution, vortex, activate at 37 &#176;C for 30 min- other dispersal agents can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Walmart</td>
			<td>287746</td>
			<td>Use a small amount to massage into the hair follicles on the back of the animal and allot 10 min to remove hair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dressing Forceps, Serrated Tips</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-460-536</td>
			<td>Can use other forms of forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flasks baffled 125 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>101406</td>
			<td>Use to grow overnights and sub-cultures of bacteria</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FastPrep-24 Benchtop Homogenizer</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>6VFV9</td>
			<td>Use 5 m/s for 60 s two times to homogenize tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fatal Plus</td>
			<td>Vortech Pharmaceuticals</td>
			<td>0298-9373-68</td>
			<td>Inject 0.2 mL intraperitaneal for each mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizing tubes (Bead Tube 2 mL 2.4 mm Metal)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15340151</td>
			<td>Used to homogenize samples for plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Diamond Back Drugs</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride/xylazine hydrochloride solution C-IIIN</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>K4138</td>
			<td>Use as anasethia- other options can also be utilized to gain a surgical field of anasethia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth, Miller</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP1426-2</td>
			<td>Add 25 g/L and autoclave</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine 2% Injectable</td>
			<td>Diamond Back Drugs</td>
			<td>2468</td>
			<td>Inject 0.05 mL through the side of the marked wound bed area so it is deposited in the center of the mark. Allot 10 min prior to cutting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meropenem</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>PHR1772-500MG</td>
			<td>Make 5 mg/mL to add to the GH solution to apply topically and a 15 mg/mL solution to inject intraperitaneal 4 h prior and 6 h post-treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-sterile cotton gauze sponges</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-761-52</td>
			<td>Use to remove the depilatory cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAO1 pQF50-lux bacterial strain</td>
			<td>Ref [13]</td>
			<td>N/A</td>
			<td>PAO1 pgF50-lux was used as the P. aeruginosa strain of interest in this paper&#39;s representative results</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>PHR1772-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Saline 10x</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP3991</td>
			<td>Dilute 10x to 1x prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyurethane dressing</td>
			<td>Mckesson</td>
			<td>66024007</td>
			<td>Cut the rounded edge off and cut the remaining square into 4 equal sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pseudomonas isolation agar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>90004-394</td>
			<td>Add 20 mL/L of glycerol and 45 g/mL to water, autoclave, and pour 20 mL into petri dishes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh P.M.</td>
			<td>Walmart</td>
			<td></td>
			<td>Use on eyes to reduce dryness during procedure.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td>Use to clean the skin immediately prior to wounding to disinfect the area</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Delicate Scissors</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>89515</td>
			<td>Can also use curved scissors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiss Webster mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>551NCISWWEB</td>
			<td>Other mice strains can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syring Slip Tip 1 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14823434</td>
			<td>Used to administer drugs and enzyme treatment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing biofilm dispersal in murine wounds

وتورط العدوى ذات الصلة بيو فيلم في مجموعة واسعة من الحالات المزمنة مثل قرحة القدم السكري غير الشفاء، والتهاب الجيوب الأنفية المزمن، والتهاب الأذن الوسطى المتكرر، وغيرها الكثير. الخلايا الميكروبية داخل هذه العدوى محمية بمادة بوليمرية خارج الخلية (EPS) ، والتي يمكن أن تمنع المضادات الحيوية وتستضيف الخلايا المناعية من إزالة العدوى. للتغلب على هذه العقبة، بدأ المحققون في تطوير عوامل التشتت كعلاجات محتملة. تستهدف هذه العوامل مكونات مختلفة داخل EPS بيو فيلم، وإضعاف الهيكل، والشروع في تشتت البكتيريا، والتي يمكن نظريا تحسين فعالية المضادات الحيوية وإزالة المناعة. لتحديد فعالية عوامل التشتت لالتهابات الجروح ، قمنا بتطوير بروتوكولات تقيس تشتت بيو فيلم في الجسم الحي السابق وفي الجسم الحي. نحن نستخدم نموذج استئصال الماوس الجراحية التي تم وصفها بشكل جيد لخلق التهابات الجروح المزمنة المرتبطة بيو فيلم. لرصد التشتت في الجسم الحي، نصيب الجروح بسلالات بكتيرية تعبر عن لوسيفيراز. بمجرد أن تنشأ العدوى الناضجة ، نروي الجروح بمحلول يحتوي على إنزيمات تتحلل مكونات EPS بيو فيلم. ثم نراقب موقع وشدة الإشارة الإنارة في الجرح وتصفية الأعضاء لتوفير معلومات حول مستوى التشتت الذي تم تحقيقه. لتحليل الجسم الحي السابق لتشتت بيو فيلم ، يتم غمر أنسجة الجرح المصابة في محلول الإنزيم المهين للبيو فيلم ، وبعد ذلك يتم تقييم الحمل البكتيري المتبقي في الأنسجة ، مقابل الحمل البكتيري في المحلول. كلا البروتوكولين لديها نقاط القوة والضعف ويمكن تحسينها للمساعدة في تحديد بدقة فعالية العلاجات التشتت.

في هذه التجربة، أصيبت 8-10 أسابيع من الفئران السويسرية ويبستر القديمة مع 104 CFU من PAO1 تحمل البلازميد التلألؤ pQF50-لوكس. كما هو موضح أعلاه، سمح للعدوى لتحديد لمدة 48 ساعة قبل إعطاء العلاجات 3 × 30 دقيقة من برنامج تلفزيوني إما (مراقبة السيارة) أو 10٪ GH (العلاج) لهضم EPS بيو فيلم. تم تصوير الفئران قب?...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Biofilm Dispersal in Murine Wounds at JoVE.com

Assessing Biofilm Dispersal in Murine Wounds

هنا، ونحن نصف السابقين في الجسم الحي وفي أساليب الجسم الحي لتقييم التشتت البكتيري من عدوى الجرح في الفئران. ويمكن استخدام هذا البروتوكول لاختبار فعالية العلاجات الموضعية المضادة للميكروبات والأغشية الحيوية، أو لتقييم قدرة تشتت السلالات البكتيرية المختلفة أو الأنواع.

تقييم تشتت بيو فيلم في جروح مورين

Biofilm-related infections are implicated in a wide array of chronic conditions such as non-healing diabetic foot ulcers, chronic sinusitis, reoccurring ...

بدأ علماء الأحياء المجهرية وأطباء الأمراض المعدية يدركون مدى أهمية العدوى المرتبطة بالبيو فيلم في الأمراض المزمنة. حتى أن المعاهد القومية للصحة قالت إن أكثر من 80٪ من العدوى المزمنة ترجع إلى الأغشية الحيوية البكتيرية. لذلك حث هذا على التركيز على معالجة بيو فيلم ، وتطوير العلاجات التي تعالج مشكلة بيو فيلم.وتركز الكثير من تلك العلاجات على تشتيت الخلايا البكتيرية الموجودة في الأغشية الحيوية من بيو فيلم بحيث يمكن قتلها بسهولة أكبر. ولكن في الحقيقة لا يوجد الكثير من البروتوكولات في الأدبيات التي تعالج حاليا كيفية تحديد فعالية مثل هذا العامل التشتت. لذلك نشعر أن هذا بروتوكول جيد للاستخدام.إنه نوع واحد من العدوى البكتيرية المرتبطة بيو فيلم. ونعتقد أيضا أنه يمكن تحسينها بسهولة كبيرة لدراسة العديد من الأنواع المختلفة من الأنواع البكتيرية ، وكيف تشكل الأغشية الحيوية وتتفرق ، وكذلك عوامل التشتت المختلفة. ونعتقد أنه من المهم تقديم هذا في شكل فيديو ، لأننا رأينا أن هناك فروقا دقيقة خاصة في تسليم الوكيل الذي وجدناه يعمل على النحو الأمثل في الفئران.للبدء، تقييم مستوى التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم، ومراقبة معدل التنفس والجهد. حلق السطح الظهري وتطبيق كريم إزالة الشعر إلى منطقة حلق لمدة 10 دقائق، أو وفقا لتعليمات المنتج. إزالة بلطف كريم إزالة الشعر.وتأكد من جفاف الجلد. باستخدام علامة مقاومة للكحول، ارسم دائرة قطرها 1.5 سنتيمتر نحو المنطقة الخلفية من الظهر. لإدارة الألم، وإدارة 0.05 ملليلتر من الليدوكائين تحت الجلد في المنطقة ليتم استئصالها.و0.02 ملليلتر من البوبرينورفين تحت الجلد في سكروف الرقبة. انتظر 10 دقائق لضمان الوصول إلى إدارة الألم. قبل استئصال، تطهير السطح الظهري باستخدام مسحة الكحول.الحفاظ على حقل جراحي معقم طوال العملية، واستخدام الأدوات الاوتوسلافية والقفازات العقيمة للحد من التلوث. إدارة كامل سمك الجرح الجلد استئصالي إلى مستوى العضلات panniculus، مع مقص الجراحية. بعد استئصال، تغطية الجرح فورا مع شبه نفاذية البولي يوريثين خلع الملابس.فصل بعناية دعم من خلع الملابس باستخدام اثنين من ملقط غرامة يميل، إذا كان ذلك ممكنا. حقن ما يقرب من 10 إلى CFU الرابع من البكتيريا، و 100 ميكرولتر PBS تحت خلع الملابس وعلى سرير الجرح لإنشاء عدوى. ملاحظة، يمكن أيضا أن تكون مصابة الجروح مع أنواع متعددة من البكتيريا و / أو الفطريات في وقت واحد، أو عن طريق وضع الأغشية الحيوية مسبقة التشكيل أو حتى الأنسجة debridement المستخرجة من المرضى على سرير الجرح.بعد العدوى، ضع الفئران في أقفاص فوق المناشف الورقية لمنع الفئران من الاختناق على مواد الفراش. وضع الأقفاص على منصات التدفئة ورصد الفئران حتى أنها استعادت منعكس الحق. إزالة منشفة ورقية في هذه المرحلة.السماح لالتهابات الجروح بالثبات لمدة 48 ساعة. فحص خلع الملابس يوميا للدموع في مناطق عدم الاتساق واستبداله إذا لزم الأمر. وضع الفئران تحت التخدير isoflurane في 3٪ ولتر واحد في الدقيقة الواحدة من الأوكسجين، في حين إعطاء العلاجات.حقن 200 ميكرولتر من محلول الإنزيم أو التحكم في PBS على الجرح عن طريق رفع الجلد الأمامي قليلا من الجرح مع ملقط، ثقب بعناية الجلد رفع مع الحقنة، وحقن ببطء الحل في المنطقة بين سرير الجرح وخلع الملابس. لضمان تغطية سرير الجرح بأكمله بالمحلول ، ارفع الضمادة برفق مع ملقط ، وسحبها بعيدا عن سرير الجرح ، مع حقن المحلول ببطء. بعد العلاج، ضع الفئران مرة أخرى في أقفاص لمدة 30 دقيقة.بعد 30 دقيقة من التعرض للعلاج ، وإعادة تخدير الفئران مع isoflurane و أسبايرات الحل المتبقي مع حقنة ، ثقب في نفس المنطقة كما كان من قبل. لاحظ أن هذا المحلول المهتلأ يحتوي على خلايا بكتيرية مشتتة، والتي يمكن حفظها لمختلف التحليلات المصب. إدارة علاجات الري الثانية والثالثة كما تم القيام به لأول مرة باستخدام حقنة جديدة في كل مرة.إذا تم استخدام سلالة من البكتيريا الإنارة لبدء العدوى، يمكن استخدام نظام تصوير في الجسم الحي لتصور التشتت من سرير الجرح. للتحليل، افتح الصور في برنامج IVIS وحدد المنطقة التي سيتم تحليلها باستخدام لوحة الأدوات. لحساب الخلفية، ضع دائرة على خلفية صورة، ثم ضع نفس الدائرة ذات الحجم فوق سرير الجرح لكل فأر.من لوحة الأدوات، حدد قياس ROIs ثم قم بتحميل جدول القياسات إلى جدول بيانات. طرح قراءة دائرة الخلفية من كل من قياسات سرير الجرح لحساب التلألؤ لكل عينة. بعد القتل الرحيم الإنساني ، احصد أنسجة سرير الجرح عن طريق إزالة الضمادة أولا بلطف مع ملقط معقم ، والقطع حول محيط سرير الجرح بمقص جراحي معقم.استخدم ملقط لرفع بلطف أحد طرفي سرير الجرح، ثم استخدم مقصا لقطع عينة الأنسجة بعيدا عن طبقة العضلات. ضع عينة الأنسجة في أنبوب تجانس زنته مسبقا ملليلترين يحتوي على ملليلتر واحد من PBS. وزن الأنبوب مرة أخرى بعد إدراج العينة.لحصاد الطحال، ضع الماوس في وضع تشريحي ينم عن الأمان عن طريق تثبيت الأطراف على سطح تشريح. نقع المنطقة ليتم تشريحها مع 70٪ الإيثانول للمساعدة في منع التلوث. جعل شق صغير عمودي على خط الوسط مع مقص الجراحية في الأدمة من أسفل البطن.تأكد من سحب الجلد صعودا وبعيدا عن الأعضاء الداخلية. استمر في الشق على طول خط الوسط حتى يتم الوصول إلى القص. بمجرد أن يتعرض التجويف البريتوني وتظهر الأعضاء الداخلية ، افصل الطحال عن النسيج الضام ووضع في أنبوب تجانس منفصل قبل الوزن.وزن الأنبوب مرة أخرى بعد إدخال الطحال. تجانس العينات في خمسة أمتار في الثانية الواحدة، لمدة 60 ثانية، مرتين. تعداد CFU، مخففة بشكل متسلسل ولوحة بقعة عينات متجانسة.تمييع المسلسل عن طريق الأنابيب 100 ميكرولتر من العينة المتجانسة إلى 900 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني وأنبوب طرد مركزي 1.5 ملليلتر. دوامة قبل مواصلة التخفيف عن طريق الأنابيب 100 ميكرولتر من العينة المخففة في أنبوب منفصل يحتوي على 900 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. كرر هذه الخطوات حتى يتم تحقيق ستة تمييع.ماصة 10 ميكرولتر من كل تخفيف على المنطقة المشار إليها على لوحة أجار كما هو مبين. إذا كان مطلوبا كمية CFU أكثر دقة، وانتشار 100 ميكرولتر من كل تخفيف العينة عبر لوحات أجار منفصلة. الجرح وإصابة الفئران مع ما يقرب من 10 إلى CFU الرابع من البكتيريا، كما هو موضح في بروتوكول في الجسم الحي.السماح للعدوى لتحديد لمدة 48 ساعة، ثم استخراج سرير الجرح بطريقة مماثلة لبروتوكول في الجسم الحي. تبدأ عن طريق إزالة بعناية خلع الملابس. قطع محيط الجرح.والانفصال عن طبقة العضلات. يمكن تقسيم عينة سرير الجرح إلى أقسام متعددة لزيادة عدد العينات. ثم ضع العينات المقسمة في أنابيب تجانس فارغة منفصلة قبل وزنها.وزن الأنبوب مرة أخرى وحساب وزن العينة عن طريق طرح وزن الأنبوب دون عينة من وزن الأنبوب مع العينة. إضافة ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني إلى أنبوب التجانس التي تحتوي على العينة، وعكس بلطف أنبوب عدة مرات لشطف. إزالة غسل برنامج تلفزيوني وتجاهل.إضافة ملليلتر واحد من العلاج GH، أو برنامج تلفزيوني كتحكم سلبي، واحتضان لمدة ساعتين في 37 درجة مئوية، مع اهتزاز في 80 دورة في الدقيقة. إزالة الصفراء من محلول التشتت ووضعها في أنبوب طرد مركزي منفصل 1.5 ملليلتر. هذا يحتوي على خلايا متفرقة.غسل الأنسجة المتبقية مع ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني، كما فعلت سابقا، وتجاهل غسل برنامج تلفزيوني. إضافة ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني إلى الأنسجة المتبقية وتجانس في خمسة أمتار في الثانية الواحدة، لمدة 60 ثانية. تمييع كل من محلول الخلايا المشتتة وعينة الأنسجة المتجانسة عن طريق أنابيب 100 ميكرولتر من العينة إلى 900 ميكرولتر من PBS في أنبوب طرد مركزي 1.5 ملليلتر.دوامة العينة المخففة ومواصلة التخفيف خمس مرات أخرى لما مجموعه ستة تمييع. لوحة بقعة العينة عن طريق الأنابيب 10 ميكرولتر من كل تخفيف على المنطقة المشار إليها على لوحة أجار انتقائية. عد CFU وحساب التشتت في المئة بقسمة CFU مشتتة على CFU مجموع، وضرب من قبل 100.في هذه التجربة، أصيبت ثمانية إلى 10 أسابيع من الفئران السويسرية ويبستر القديمة مع 10 إلى CFU الرابع من PA01 تحمل البلازميد التلألؤ PQF50-لوكس. سمح للعدوى بتأسيس لمدة 48 ساعة قبل إدارة ثلاثة علاجات لمدة 30 دقيقة من برنامج تلفزيوني إما كتحكم في السيارة ، أو 10٪ GH كعلاج تجريبي لهضم EPS بيو فيلم. تم تصوير الفئران في القسم A قبل العلاج، مباشرة بعد العلاج، وفي 10 و 20 ساعة بعد العلاج.باستخدام IVIS ، يمكن تصور عدوى ثابتة داخل سرير الجرح مما يولد إشارة مضيئة مضيئة. يمكن تصور تشتت البكتيريا من سرير الجرح مباشرة بعد علاج هرمون النمو ، ولكن ليس بعد علاج PBS. ويمكن أيضا أن ينظر إلى نشر البكتيريا في الأجهزة عن طريق وضع الماوس على جانبها للتصوير، كما هو مبين في الألواح السفلية.في القسم B، أظهرت الصور من كل من برنامج تلفزيوني والفئران المعالجة GH زيادة في إشارة الإنارة في 20 ساعة بعد العلاج، مقارنة مع ما قبل العلاج. ومع ذلك، فإنه لا يزال من المهم لكمية CFU بسبب عتبة الكشف عن التلألؤ في IVIS. في 20 ساعة بعد العلاج، تم قتل الفئران بالرصاص وتم جمع أسرة الجرح والطحال لتعداد CFU لكل غرام من الأنسجة.يظهر القسم ج الحمل البكتيري في سرير الجرح، في حين يظهر القسم D الحمل البكتيري في الطحال. وتشير هذه البيانات إلى انتشار البكتيريا المتناثرة، حيث لم يتم اكتشاف البكتيريا إلا في طحال الفئران المعالجة بمحلول هرمون النمو الذي يستهدف EPS. على الرغم من أن هذه البروتوكولات مفيدة جدا، هناك بعض القيود.أولا ، تجدر الإشارة إلى أن هناك قصورا في الكشف مع نظام التصوير في الجسم الحي ، أو IVIS. ويمكن رؤية انخفاض في إشارة الإنارة عندما تدخل البكتيريا مرحلة ثابتة. ولذلك فمن المهم لجمع الأنسجة ذات الاهتمام وقياس CFU الحاضر، كما يمكن أن يكون هناك انقطاع بين التلألؤ وCFU تعدادها.ومع ذلك ، فإن IVIS مفيد لتصور فعالية العلاج طوال الدراسة ، دون الحاجة إلى القتل الرحيم للحيوان. وثمة قيد آخر يجب مراعاته وهو اشتراط الرصد الدقيق للضمادات. الضمادات مطلوبة للحد من الشفاء الانكماشي وكذلك الحفاظ على الجرح معقمة من البكتيريا الأخرى.وسيتعين استبدال الضمادات في كثير من الأحيان، مما قد يؤدي إلى إصابة الجرح عن طريق الخطأ وفرصة للتلوث. تصف هذه البروتوكولات أساليب جديدة لدراسة الصفراء من التشتت ، وتقييم الصفراء العلاجية من عوامل التشتت. تسمح هذه النماذج بتطوير العدوى المعقدة المرتبطة بالبيو فيلم متعدد الميكروبات التي تحاكي العدوى البشرية ذات الصلة سريريا.ويحدونا الأمل في أن تستخدم هذه البروتوكولات وتصقلها لتعزيز تطوير عوامل تشتيت مكافحة الأغشية الحيوية للاستخدام العلاجي.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

والزائفة الزنجارية السكيراء بيوفيلم في خلايا خميرة تدفق

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological ...

Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Microtiter تشكيل بيوفيلم الطبق الفحص

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings.  In fact, life in a biofilm ...

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

تشكيل بيوفيلم في المختبر في غرفة الشرائح 8 جيد

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Assessing Somatic Hypermutation in Ramos B Cells after Overexpression or Knockdown of Specific Genes

تقييم Hypermutation الجسدية في خلايا B راموس بعد Overexpression أو ضربة قاضية لجينات معينة

B cells start their life with low affinity antibodies generated by V(D)J recombination.  However, upon detecting a pathogen, the variable (V) region of an ...

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

تقييم تطوير خلايا الفئران الجذعية بلازماوية في بقع باير طريق نقل بالتبني من أسلاف المكونة للدم

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

تحريض الفئران المعوية التهاب عن طريق نقل بالتبني من المستجيب CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; عالية</sup&gt; خلايا T في الفئران العوز المناعي

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

تصور آثار البلغم للتنمية بيوفيلم باستخدام نموذج غرف ساترة

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

تأتي إلى "جانب الضوء": "في فيفو" الرصد الزائفة الزّنجاريّة بيوفيلم الالتهابات في "الجروح المزمنة" في "نموذج مورين أصلع السكري"

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

التصور "تشكيل بيوفيلم" في المبيضات البيض باستخدام جهاز موائع جزيئية الآلي

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Bile Salt-induced Biofilm Formation in Enteric Pathogens: Techniques for Identification and Quantification

تشكيل بيوفيلم التي يسببها الملح الصفراوية في مسببات الأمراض المعوية: تقنيات لتحديد وتقدير حجم

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, ...