Name: assessing biofilm dispersal in murine wounds
Uploaded: 2021-08-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Biofilm Dispersal in Murine Wounds at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der National Institutes of Health (R21 AI137462-01A1), der Ted Nash Long Life Foundation, der Jasper L. and Jack Denton Wilson Foundation und des Verteidigungsministeriums (DoD MIDRP W0318_19_NM_PP) unterstützt.

Dieses Tierprotokoll wurde vom Institutional Animal Care and Use Committee des Texas Tech University Health Sciences Center (Protokollnummer 07044) überprüft und genehmigt. Diese Studie wurde in strikter Übereinstimmung mit den Empfehlungen des Leitfadens für die Pflege und Verwendung von Labortieren der National Institutes of Health durchgeführt.
1. Bakterien auf Mausinfektionen vorbereiten
HINWEIS: Hier beschreiben wir die Infektion von Mäusen nur mit Pseu...

<ol>
	<li>Rossolini, G. M., Arena, F., Pecile, P., Pollini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+the+antibiotic+resistance+crisis.">Update on the antibiotic resistance crisis.</a> Current Opinion in Pharmacology. 18, 56-60 (2014).</li><li>Stewart, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+Tolerance+in+Biofilms.">Antimicrobial Tolerance in Biofilms.</a> Microbiology Spectrum. 3 (3), (2015).</li><li>Flemming, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms:+an+emergent+form+of+bacterial+life.">Biofilms: an emergent form of bacterial life.</a> Nature Reviews Microbiology. 14 (9), 563-575 (2016).</li><li>Rumbaugh, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+well+are+we+translating+biofilm+research+from+bench-side+to+bedside.">How well are we translating biofilm research from bench-side to bedside.</a> Biofilm. 2 (100028), (2020).</li><li>Rumbaugh, K. P., Sauer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm+dispersion.">Biofilm dispersion.</a> Nature Reviews Microbiology. 18 (10), 571-586 (2020).</li><li>Fleming, D., Chahin, L., Rumbaugh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycoside+Hydrolases+Degrade+Polymicrobial+Bacterial+Biofilms+in+Wounds.">Glycoside Hydrolases Degrade Polymicrobial Bacterial Biofilms in Wounds.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (2), (2017).</li><li>Fleming, D., Rumbaugh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Consequences+of+Biofilm+Dispersal+on+the+Host.">The Consequences of Biofilm Dispersal on the Host.</a> Scientific Reports. 8 (1), 10738 (2018).</li><li>Baker, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exopolysaccharide+biosynthetic+glycoside+hydrolases+can+be+utilized+to+disrupt+and+prevent+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms.">Exopolysaccharide biosynthetic glycoside hydrolases can be utilized to disrupt and prevent Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Science Advances. 2 (5), 1501632 (2016).</li><li>Redman, W. K., Welch, G. S., Rumbaugh, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Efficacy+of+Glycoside+Hydrolases+to+Disperse+Biofilms.">Differential Efficacy of Glycoside Hydrolases to Disperse Biofilms.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 10, 379 (2020).</li><li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycoside+hydrolase+DisH+from+Desulfovibrio+vulgaris+degrades+the+N-acetylgalactosamine+component+of+diverse+biofilms.">Glycoside hydrolase DisH from Desulfovibrio vulgaris degrades the N-acetylgalactosamine component of diverse biofilms.</a> Environmental Microbiology. 20 (6), 2026-2037 (2018).</li><li>Fell, C. F., Rumbaugh, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Antibacterial Drug Discovery to Combat MDR. , 527-546 (2019).</li><li>Dalton, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vivo+polymicrobial+biofilm+wound+infection+model+to+study+interspecies+interactions.">An in vivo polymicrobial biofilm wound infection model to study interspecies interactions.</a> PLoS One. 6 (11), 27317 (2011).</li><li>Wolcott, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm+maturity+studies+indicate+sharp+debridement+opens+a+time-+dependent+therapeutic+window.">Biofilm maturity studies indicate sharp debridement opens a time- dependent therapeutic window.</a> Journal of Wound Care. 19 (8), 320-328 (2010).</li><li>Korgaonkar, A., Trivedi, U., Rumbaugh, K. P., Whiteley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Community+surveillance+enhances+Pseudomonas+aeruginosa+virulence+during+polymicrobial+infection.">Community surveillance enhances Pseudomonas aeruginosa virulence during polymicrobial infection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (3), 1059-1064 (2013).</li><li>Watters, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+perturb+wound+resolution+and+antibiotic+tolerance+in+diabetic+mice.">Pseudomonas aeruginosa biofilms perturb wound resolution and antibiotic tolerance in diabetic mice.</a> Medical Microbiology and Immunology. 202 (2), 131-141 (2013).</li><li>Watters, C., Everett, J. A., Haley, C., Clinton, A., Rumbaugh, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+treatment+modulates+the+host+immune+system+to+enhance+Pseudomonas+aeruginosa+wound+biofilms.">Insulin treatment modulates the host immune system to enhance Pseudomonas aeruginosa wound biofilms.</a> Infection and Immunity. 82 (1), 92-100 (2014).</li><li>Turner, K. H., Everett, J., Trivedi, U., Rumbaugh, K. P., Whiteley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirements+for+Pseudomonas+aeruginosa+acute+burn+and+chronic+surgical+wound+infection.">Requirements for Pseudomonas aeruginosa acute burn and chronic surgical wound infection.</a> PLOS Genetics. 10 (7), 1004518 (2014).</li><li>Harrison, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+1,000-Year-Old+Antimicrobial+Remedy+with+Antistaphylococcal+Activity.">A 1,000-Year-Old Antimicrobial Remedy with Antistaphylococcal Activity.</a> mBio. 6 (4), 01129 (2015).</li><li>Wolcott, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota+is+a+primary+cause+of+pathogenesis+of+chronic+wounds.">Microbiota is a primary cause of pathogenesis of chronic wounds.</a> Journal of Wound Care. 25, 33-43 (2016).</li><li>Ibberson, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-infecting+microorganisms+dramatically+alter+pathogen+gene+essentiality+during+polymicrobial+infection.">Co-infecting microorganisms dramatically alter pathogen gene essentiality during polymicrobial infection.</a> Nature Microbiology. 2, 17079 (2017).</li><li>Fleming, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+Glycoside+Hydrolases+to+Improve+the+Quantification+and+Visualization+of+Biofilm+Bacteria.">Utilizing Glycoside Hydrolases to Improve the Quantification and Visualization of Biofilm Bacteria.</a> Biofilm. 2, (2020).</li><li>DeLeon, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+interactions+of+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus+in+an+in+vitro+wound+model.">Synergistic interactions of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus in an in vitro wound model.</a> Infection and Immunity. 82 (11), 4718-4728 (2014).</li><li>Darch, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phage+Inhibit+Pathogen+Dissemination+by+Targeting+Bacterial+Migrants+in+a+Chronic+Infection+Model.">Phage Inhibit Pathogen Dissemination by Targeting Bacterial Migrants in a Chronic Infection Model.</a> mBio. 8 (2), (2017).</li><li>Chua, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersed+cells+represent+a+distinct+stage+in+the+transition+from+bacterial+biofilm+to+planktonic+lifestyles.">Dispersed cells represent a distinct stage in the transition from bacterial biofilm to planktonic lifestyles.</a> Nature Communications. 5, 4462 (2014).</li><li>Beitelshees, M., Hill, A., Jones, C. H., Pfeifer, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+Variation+during+Biofilm+Formation:+Implications+for+Anti-Biofilm+Therapeutic+Design.">Phenotypic Variation during Biofilm Formation: Implications for Anti-Biofilm Therapeutic Design.</a> Materials (Basel). 11 (7), (2018).</li><li>Sauer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+nutrient-induced+dispersion+in+Pseudomonas+aeruginosa+PAO1+biofilm.">Characterization of nutrient-induced dispersion in Pseudomonas aeruginosa PAO1 biofilm.</a> J Bacteriol. 186 (21), 7312-7326 (2004).</li><li>Kuklin, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+monitoring+of+bacterial+infection+in+vivo:+development+of+bioluminescent+staphylococcal+foreign-body+and+deep-thigh-wound+mouse+infection+models.">Real-time monitoring of bacterial infection in vivo: development of bioluminescent staphylococcal foreign-body and deep-thigh-wound mouse infection models.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 47 (9), 2740-2748 (2003).</li><li>Francis, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+pneumococcal+infections+in+the+lungs+of+live+mice+using+bioluminescent+Streptococcus+pneumoniae+transformed+with+a+novel+gram-positive+lux+transposon.">Visualizing pneumococcal infections in the lungs of live mice using bioluminescent Streptococcus pneumoniae transformed with a novel gram-positive lux transposon.</a> Infection and Immunity. 69 (5), 3350-3358 (2001).</li><li>Kadurugamuwa, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+optical+imaging+method+to+evaluate+postantibiotic+effects+on+biofilm+infection+in+vivo.">Noninvasive optical imaging method to evaluate postantibiotic effects on biofilm infection in vivo.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (6), 2283-2287 (2004).</li><li>Wimpenny, J., Manz, W., Szewzyk, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+biofilms.">Heterogeneity in biofilms.</a> FEMS Microbiology Reviews. 24 (5), 661-671 (2000).</li><li>Stewart, P. S., Franklin, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+heterogeneity+in+biofilms.">Physiological heterogeneity in biofilms.</a> Nature Reviews Microbiology. 6 (3), 199-210 (2008).</li><li>Tipton, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+wound+microbiome+colonization+on+mouse+model+following+cryogenic+preservation.">Chronic wound microbiome colonization on mouse model following cryogenic preservation.</a> PLoS One. 14 (8), 0221656 (2019).</li></ol>

Hier beschreiben wir Protokolle, mit denen die Wirksamkeit von Biofilm-Dispersionsmitteln untersucht werden kann. Diese Protokolle können leicht an die Verwendung mit verschiedenen Arten von Ausbreitungsmitteln, Bakterienarten oder Ex-vivo-Proben, einschließlich klinischer Debridementproben, angepasst werden. Dieses Protokoll bietet auch ein klinisch relevantes Modell zur Sammlung und Untersuchung verteilter Bakterienzellen. Es wurde gezeigt, dass sich die Phänotypen verteilter Bakterienzellen von denen der p...

Der Anstieg der Antibiotikaresistenz weltweit führt zu einem Mangel an Antibiotika-Optionen zur Behandlung einer Vielzahl von bakteriellen Infektionen1. Zusätzlich zur Antibiotikaresistenz können Bakterien eine Antibiotikatoleranz erlangen, indem sie einen Biofilm-assoziierten Lebensstilannehmen 2. Ein Biofilm ist eine Gemeinschaft von Mikroorganismen, die durch eine Matrix aus Polysacchariden, extrazellulärer DNA, Lipiden und Proteinen3geschützt sind, die zusammen als extrazelluläre polymere Substanz (EPS) bezeichnet werden. Da die Antibiotikaresistenzkrise andauert, werden neue Strategien, die den Einsatz von Antibiotika verlängern oder die Wirksamkeit von Antibiotika potenzieren, dringend benötigt. Anti-Biofilm-Wirkstoffe sind eine vielversprechende Lösung4.
Unter den verschiedenen Anti-Biofilm-Strategien, die vorgeschlagen wurden, steht die Verwendung von Dispersionsmitteln, die auf verschiedene Komponenten des Biofilm-EPS abzielen, an der Spitze der therapeutischen Entwicklung5. Glykosidhydrolasen (GH) sind eine solche Klasse von Dispersionsmitteln. GH sind eine große Klasse von Enzymen, die die Spaltung verschiedener Bindungen innerhalb der Polysaccharide katalysieren, die dem EPS strukturelle Integrität verleihen. Unsere Gruppe und andere haben gezeigt, dass GH Biofilme effektiv abbauen, Ausbreitung induzieren und die Antibiotikawirksamkeit für eine Reihe verschiedener Bakterienarten verbessern kann, sowohl in vitro als auch in vivo6,7,8,9,10,11.
Mit einem wachsenden Interesse an der Ausbreitung von Biofilmen ist es wichtig, wirksame Methoden zu entwickeln, die die Ausbreitungseffizienz bewerten. Hier präsentieren wir ein detailliertes Protokoll zur Behandlung von Biofilm-assoziierten Wundinfektionen mit einem Ausbreitungsmittel bei Mäusen und die Beurteilung der Ausbreitungswirksamkeit, in vivo und ex vivo. Das übergeordnete Ziel ist es, effektive Methoden bereitzustellen, die mit präklinischen Modellen verwendet werden können, um die Biofilmausbreitung effektiv und effizient zu messen.
Ein murines chirurgisches Exzisionsinfektionsmodell wurde in diesen Studien verwendet, um eine Biofilm-assoziierte Infektion zu etablieren. Wir verwenden dieses Modell seit über 15 Jahren und veröffentlichen unsere Beobachtungen ausführlich7,9,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21. Im Allgemeinen ist dies ein nicht-tödliches Infektionsmodell, bei dem Bakterien im Wundbett lokalisiert bleiben und biofilm-assoziiert sind (Bakterien in Aggregaten, die von EPS umgeben sind), was zu einer chronischen Infektion führt, die bis zu 3 Wochen dauert. Wenn Mäuse jedoch immungeschwächt sind (z. B. mit Typ-1-Diabetes), können sie in diesem Modell anfälliger für die Entwicklung einer tödlichen systemischen Infektion werden.
In diesem Bericht stellen wir Protokolle zur Beurteilung der Ausbreitung von Bakterien aus einer Wunde sowohl in vivo als auch ex vivo zur Verfügung. Beide Protokolle können verwendet werden, um die Wirksamkeit eines Dispersionsmittels zu untersuchen und haben ihre eigenen Stärken und Schwächen. Zum Beispiel kann die Beurteilung der Ausbreitung in vivo wichtige Echtzeitinformationen über die Ausbreitung von Bakterien auf andere Teile des Körpers nach der Ausbreitung liefern und wie der Wirt reagiert. Auf der anderen Seite kann die Beurteilung der Ausbreitung ex vivo für das Screening mehrerer Wirkstoffe, Dosen oder Formulierungen wünschenswerter sein, da das Gewebe in mehrere Abschnitte unterteilt werden kann, die separat getestet werden können, wodurch die Anzahl der benötigten Mäuse reduziert wird. Bei der Beurteilung mehrerer Wirkstoffe messen wir typischerweise die Ausbreitung zuerst in vitro, wie zuvor beschrieben 6,9,22. Wir testen dann die effektivsten ex vivo und reservieren in vivo Tests für eine begrenzte Anzahl von sehr vielversprechenden Wirkstoffen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14823434</td>
			<td>Use to complete serial dilutions of samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G 58 in needle</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14823434</td>
			<td>Attaches to 1 mL syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin Sodium Salt</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP1760-5</td>
			<td>Make a 50 mg/ mL stock solution and add 100 &#181;L to 10 mL of LB broth for both overnight and subculture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylase</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>2100447</td>
			<td>Make a 5% w/v solution, vortex- other dispersal agents can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR-LAB 5 mL (1 mg/mL)</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>RX216118</td>
			<td>Use as pain mainagement- may use other options</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellulase</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>2150583</td>
			<td>Add 5% w/v to the 5% w/v amylase solution, vortex, activate at 37 &#176;C for 30 min- other dispersal agents can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Walmart</td>
			<td>287746</td>
			<td>Use a small amount to massage into the hair follicles on the back of the animal and allot 10 min to remove hair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dressing Forceps, Serrated Tips</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-460-536</td>
			<td>Can use other forms of forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flasks baffled 125 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>101406</td>
			<td>Use to grow overnights and sub-cultures of bacteria</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FastPrep-24 Benchtop Homogenizer</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>6VFV9</td>
			<td>Use 5 m/s for 60 s two times to homogenize tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fatal Plus</td>
			<td>Vortech Pharmaceuticals</td>
			<td>0298-9373-68</td>
			<td>Inject 0.2 mL intraperitaneal for each mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizing tubes (Bead Tube 2 mL 2.4 mm Metal)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15340151</td>
			<td>Used to homogenize samples for plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Diamond Back Drugs</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride/xylazine hydrochloride solution C-IIIN</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>K4138</td>
			<td>Use as anasethia- other options can also be utilized to gain a surgical field of anasethia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth, Miller</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP1426-2</td>
			<td>Add 25 g/L and autoclave</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine 2% Injectable</td>
			<td>Diamond Back Drugs</td>
			<td>2468</td>
			<td>Inject 0.05 mL through the side of the marked wound bed area so it is deposited in the center of the mark. Allot 10 min prior to cutting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meropenem</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>PHR1772-500MG</td>
			<td>Make 5 mg/mL to add to the GH solution to apply topically and a 15 mg/mL solution to inject intraperitaneal 4 h prior and 6 h post-treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-sterile cotton gauze sponges</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-761-52</td>
			<td>Use to remove the depilatory cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAO1 pQF50-lux bacterial strain</td>
			<td>Ref [13]</td>
			<td>N/A</td>
			<td>PAO1 pgF50-lux was used as the P. aeruginosa strain of interest in this paper&#39;s representative results</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>PHR1772-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Saline 10x</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP3991</td>
			<td>Dilute 10x to 1x prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyurethane dressing</td>
			<td>Mckesson</td>
			<td>66024007</td>
			<td>Cut the rounded edge off and cut the remaining square into 4 equal sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pseudomonas isolation agar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>90004-394</td>
			<td>Add 20 mL/L of glycerol and 45 g/mL to water, autoclave, and pour 20 mL into petri dishes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh P.M.</td>
			<td>Walmart</td>
			<td></td>
			<td>Use on eyes to reduce dryness during procedure.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td>Use to clean the skin immediately prior to wounding to disinfect the area</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Delicate Scissors</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>89515</td>
			<td>Can also use curved scissors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiss Webster mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>551NCISWWEB</td>
			<td>Other mice strains can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syring Slip Tip 1 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14823434</td>
			<td>Used to administer drugs and enzyme treatment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing biofilm dispersal in murine wounds

Biofilmbedingte Infektionen sind an einer Vielzahl chronischer Erkrankungen wie nicht heilenden diabetischen Fußgeschwüren, chronischer Sinusitis, wiederkehrender Mittelohrentzündung und vielem mehr beteiligt. Mikrobielle Zellen innerhalb dieser Infektionen werden durch eine extrazelluläre polymere Substanz (EPS) geschützt, die verhindern kann, dass Antibiotika und Wirtsimmunzellen die Infektion beseitigen. Um dieses Hindernis zu überwinden, haben die Forscher begonnen, Dispersionsmittel als potenzielle Therapeutika zu entwickeln. Diese Wirkstoffe zielen auf verschiedene Komponenten innerhalb des Biofilms EPS ab, schwächen die Struktur und initiieren die Ausbreitung der Bakterien, was theoretisch die Antibiotikapotenz und die Immunclearance verbessern kann. Um die Wirksamkeit von Dispersionsmitteln bei Wundinfektionen zu bestimmen, haben wir Protokolle entwickelt, die die Ausbreitung von Biofilmen sowohl ex vivo als auch in vivomessen. Wir verwenden ein chirurgisches Exzisionsmodell der Maus, das gut beschrieben wurde, um biofilm-assoziierte chronische Wundinfektionen zu erzeugen. Um die Ausbreitung in vivo zuüberwachen, infizieren wir die Wunden mit Bakterienstämmen, die Luciferase exprimieren. Sobald sich reife Infektionen etabliert haben, bewässern wir die Wunden mit einer Lösung, die Enzyme enthält, die Bestandteile des Biofilms EPS abbauen. Anschließend überwachen wir die Lage und Intensität des Leuchtsignals in den Wund- und Filterorganen, um Informationen über den erreichten Ausbreitungsgrad zu erhalten. Für die Ex-vivo-Analyse der Biofilmausbreitung wird infiziertes Wundgewebe in biofilmabbauende Enzymlösung getaummt, wonach die im Gewebe verbleibende Bakterienlast im Vergleich zur Bakterienlast in Lösung bewertet wird. Beide Protokolle haben Stärken und Schwächen und können optimiert werden, um die Wirksamkeit von Ausbreitungsbehandlungen genau zu bestimmen.

In diesem Experiment wurden 8-10 Wochen alte weibliche Schweizer Webster-Mäuse mit 104 KBE PAO1 infiziert, die das Lumineszenzplasmid pQF50-lux trugen. Wie oben beschrieben, durfte eine Infektion für 48 h etabliert werden, bevor 3 x 30 Minuten Behandlungen von entweder PBS (Fahrzeugkontrolle) oder 10% GH (Behandlung) verabreicht wurden, um das Biofilm-EPS zu verdauen. Mäuse wurden vor der Behandlung, direkt nach der Behandlung (0 h) und nach 10 h und 20 h nach der Behandlung abgebildet. <strong class="xfig"...

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Assessing Biofilm Dispersal in Murine Wounds

Hier beschreiben wir ex vivo und in vivo Methoden zur Beurteilung der bakteriellen Ausbreitung aus einer Wundinfektion bei Mäusen. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um die Wirksamkeit topischer antimikrobieller und Anti-Biofilm-Therapien zu testen oder die Ausbreitungskapazität verschiedener Bakterienstämme oder -arten zu bewerten.

Beurteilung der Biofilmausbreitung in murinen Wunden

Biofilm-related infections are implicated in a wide array of chronic conditions such as non-healing diabetic foot ulcers, chronic sinusitis, reoccurring ...

Mikrobiologen und Ärzte für Infektionskrankheiten beginnen zu erkennen, wie wichtig Biofilm-assoziierte Infektionen bei chronischen Erkrankungen sind. Das NIH hat sogar gesagt, dass über 80% der chronischen Infektionen auf bakterielle Biofilme zurückzuführen sind. Dies hat also den Schwerpunkt auf die Behandlung von Biofilm und die Entwicklung von Therapeutika gelegt, die das Biofilmproblem angehen.Und eine Lotta diese Therapeutika konzentrieren sich darauf, Bakterienzellen, die sich in Biofilmen befinden, aus dem Biofilm zu dispergieren, so dass sie leichter abgetötet werden können. Aber es gibt derzeit wirklich nicht viele Protokolle in der Literatur, die sich damit befassen, wie man die Wirksamkeit eines solchen Dispersionsmittels bestimmen kann. Wir haben also das Gefühl, dass dies ein gutes Protokoll ist.Es ist eine Art von bakterieller Infektion, die biofilm-assoziiert ist. Und wir denken auch, dass es ziemlich einfach optimiert werden kann, viele verschiedene Arten von Bakterienarten zu untersuchen und wie sie Biofilme bilden und sich ausbreiten, sowie verschiedene Dispersionsmittel. Und wir denken, dass es wichtig ist, dies in einem Videoformat zu liefern, weil wir gesehen haben, dass es Nuancen gibt, insbesondere bei der Lieferung des Agenten, den wir bei Mäusen optimal gefunden haben.Um zu beginnen, beurteilen Sie die Ebene der Anästhesie durch Zehenklemme und durch Überwachung der Atemfrequenz und Anstrengung. Rasieren Sie die dorsale Oberfläche und tragen Sie eine Enthaarungscreme für 10 Minuten oder gemäß den Anweisungen des Produkts auf die rasierte Region auf. Entfernen Sie vorsichtig die Enthaarungscreme.Und stellen Sie sicher, dass die Haut trocken ist. Zeichnen Sie mit einem alkoholbeständigen Marker einen Kreis mit einem Durchmesser von 1,5 Zentimetern in Richtung des hinteren Bereichs des Rückens. Zur Schmerzbehandlung 0,05 Milliliter Lidocain subkutan in den zu entfernenden Bereich verabreichen.Und 0,02 Milliliter Buprenorphin subkutan im Hals. Warten Sie 10 Minuten, um sicherzustellen, dass die Schmerzbehandlung erreicht wird. Vor der Exzision die dorsale Oberfläche mit einem Alkoholtupfer desinfizieren.Halten Sie während des gesamten Eingriffs ein steriles Operationsfeld aufrecht und verwenden Sie autoklavierte Instrumente und sterile Handschuhe, um die Kontamination zu begrenzen. Verabreichen Sie eine Exzisionshautwunde in voller Dicke auf Höhe des Panniculus-Muskels mit einer chirurgischen Schere. Nach der Exzision die Wunde sofort mit einem semipermeablen Polyurethanverband abdecken.Trennen Sie den Träger vorsichtig vom Verband mit zwei feinspitzigen Zetten, falls zutreffend. Injizieren Sie etwa 10 bis die vierte KBE von Bakterien und 100 Mikroliter PBS unter den Verband und auf das Wundbett, um eine Infektion zu etablieren. Beachten Sie, dass Wunden auch mit mehreren Bakterienarten und / oder Pilzen gleichzeitig infiziert werden können oder indem vorgeformte Biofilme oder sogar Debridementgewebe, das von Patienten extrahiert wurde, auf das Wundbett gelegt werden.Legen Sie mäuse nach der Infektion in Käfige auf Papiertücher, um zu verhindern, dass die Mäuse auf dem Bettmaterial ersticken. Legen Sie die Käfige auf Heizkissen und überwachen Sie die Mäuse, bis sie ihren Aufrändungsreflex wiedererlangt haben. Entfernen Sie an dieser Stelle das Papiertuch.Lassen Sie Wundinfektionen für 48 Stunden etablieren. Untersuchen Sie den Verband täglich auf Risse in Bereichen, in denen es nicht haftend ist, und ersetzen Sie ihn bei Bedarf. Setzen Sie Mäuse unter Isoflurananästhesie bei 3% und einem Liter Sauerstoff pro Minute, während Sie Behandlungen verabreichen.Injizieren Sie 200 Mikroliter Enzymlösung oder PBS-Kontrolle auf die Wunde, indem Sie die Haut leicht vor der Wunde mit einer Zette anheben, die angehobene Haut vorsichtig mit der Spritze durchbohren und die Lösung langsam in den Bereich zwischen dem Wundbett und dem Verband injizieren. Um sicherzustellen, dass das gesamte Wundbett mit Lösung bedeckt ist, heben Sie den Verband vorsichtig mit einer Zette an, ziehen Sie ihn vom Wundbett weg, während Sie die Lösung langsam injizieren. Nach der Behandlung legen Sie die Mäuse für 30 Minuten wieder in Käfige.Nach 30 Minuten Exposition gegenüber der Behandlung reanesthetisieren Sie die Mäuse mit Isofluran und saugen die verbleibende Lösung mit einer Spritze an, wobei Sie in der gleichen Stelle wie zuvor punktieren. Beachten Sie, dass diese Aspirierte Lösung dispergierte Bakterienzellen enthält, die für verschiedene nachgeschaltete Analysen gespeichert werden können. Verabreichen Sie die zweite und dritte Bewässerungsbehandlung wie bei der ersten mit einer neuen Spritze jedes Mal.Wenn ein lumineszierender Bakterienstamm verwendet wird, um eine Infektion auszulösen, kann ein In-vivo-Bildgebungssystem verwendet werden, um die Ausbreitung aus dem Wundbett zu visualisieren. Zur Analyse öffnen Sie die Bilder in der IVIS-Software und wählen mit der Werkzeugpalette den zu analysierenden Bereich aus. Um den Hintergrund zu berücksichtigen, platzieren Sie einen Kreis auf dem Hintergrund eines Bildes und platzieren Sie dann den kreisigen Kreis der gleichen Größe auf dem Wundbett für jede Maus.Wählen Sie in der Werkzeugpalette die Option MEASURE ROIs aus, und laden Sie die Messtabelle in eine Tabelle hoch. Subtrahieren Sie den Hintergrundkreiswert von jeder der Wundbettmessungen, um die Lumineszenz für jede Probe zu berechnen. Nach der humanen Euthanasie ernten Sie das Wundbettgewebe, indem Sie zuerst den Verband mit einer sterilen Zette vorsichtig entfernen und mit einer sterilen chirurgischen Schere um den Umfang des Wundbettes schneiden.Verwenden Sie eine Zette, um ein Ende des Wundbettes sanft anzuheben, und schneiden Sie dann mit einer Schere die Gewebeprobe von der Muskelschicht ab. Legen Sie die Gewebeprobe in ein vorgewogenes Zwei-Milliliter-Homogenisierungsröhrchen, das einen Milliliter PBS enthält. Wiegen Sie das Röhrchen nach dem Einsetzen der Probe erneut.Um die Milz zu ernten, legen Sie die Maus in eine anatomische Rückenlage und sichern Sie sie, indem Sie die Extremitäten an eine Sezieroberfläche heften. Weichen Sie den zu sezierenden Bereich mit 70% Ethanol ein, um eine Kontamination zu vermeiden. Machen Sie einen kleinen Schnitt senkrecht zur Mittellinie mit einer chirurgischen Schere in der Dermis des Unterbauchs.Stellen Sie sicher, dass Sie die Haut von den inneren Organen nach oben und weg ziehen. Setzen Sie den Schnitt entlang der Mittellinie fort, bis das Brustbein erreicht ist. Sobald die Peritonealhöhle freigelegt ist und die inneren Organe sichtbar sind, trennen Sie die Milz vom Bindegewebe und legen Sie sie in ein separates vorgewogenes Homogenisierungsröhrchen.Wiegen Sie den Schlauch nach dem Einsetzen der Milz erneut. Homogenisieren Sie die Proben mit fünf Metern pro Sekunde, für 60 Sekunden, zweimal. Um die KBE aufzuzählen, verdünnen Sie die homogenisierten Proben seriell und punktieren Sie sie.100 Mikroliter der homogenisierten Probe werden durch Pipettieren in 900 Mikroliter PBS und ein 1,5-Milliliter-Zentrifugenröhrchen seriell verdünnt. Wirbel vor der Fortsetzung der Verdünnung durch Pipettieren von 100 Mikrolitern der verdünnten Probe in ein separates Röhrchen mit 900 Mikrolitern PBS. Wiederholen Sie diese Schritte, bis sechs Verdünnungen erreicht sind.Pipetten Sie 10 Mikroliter jeder Verdünnung auf die angegebene Fläche auf einer Agarplatte wie gezeigt. Wenn eine genauere CFU-Quantifizierung erforderlich ist, verteilen Sie 100 Mikroliter jeder Verdünnung der Probe auf separate Agarplatten. Verwundete und infizieren Mäuse mit etwa 10 bis zur vierten KBE von Bakterien, wie im In-vivo-Protokoll beschrieben.Lassen Sie die Infektion für 48 Stunden etablieren und extrahieren Sie dann das Wundbett auf ähnliche Weise wie das In-vivo-Protokoll. Beginnen Sie, indem Sie den Verband vorsichtig entfernen. Schneiden um den Umfang der Wunde.Und sich von der Muskelschicht trennen. Die Wundbettprobe kann in mehrere Abschnitte unterteilt werden, um die Anzahl der Proben zu erhöhen. Anschließend legen Sie die geteilten Proben in separate vorgewogene leere Homogenisierungsröhrchen.Wiegen Sie das Röhrchen erneut und berechnen Sie das Gewicht der Probe, indem Sie das Gewicht des Röhrchens ohne die Probe vom Gewicht des Röhrchens mit der Probe abziehen. Fügen Sie ein Milliliter PBS in das Homogenisierungsröhrchen mit der Probe hinzu und kehren Sie das Röhrchen einige Male vorsichtig um, um es zu spülen. PbS-Waschung entfernen und entsorgen.Fügen Sie einen Milliliter GH-Behandlung oder PBS als Negativkontrolle hinzu und inkubieren Sie zwei Stunden bei 37 Grad Celsius mit Schütteln bei 80 U / min. Entfernen Sie die Galle aus der Ausbreitungslösung und legen Sie sie in ein separates 1,5-Milliliter-Zentrifugenröhrchen. Diese enthält die dispergierten Zellen.Waschen Sie das verbleibende Gewebe wie zuvor mit einem Milliliter PBS und entsorgen Sie die PBS-Wäsche. Fügen Sie dem verbleibenden Gewebe einen Milliliter PBS hinzu und homogenisieren Sie mit fünf Metern pro Sekunde für 60 Sekunden. Verdünnen Sie sowohl die Lösung der dispergierten Zellen als auch die homogenisierte Gewebeprobe seriell, indem Sie 100 Mikroliter der Probe in einem 1,5-Milliliter-Zentrifugenröhrchen in 900 Mikroliter PBS pipettieren.Wirbeln Sie die verdünnte Probe vor und setzen Sie die Verdünnung fünf weitere Male für insgesamt sechs Verdünnungen fort. Spotplatte der Probe durch Pipettieren von 10 Mikrolitern jeder Verdünnung auf die angegebene Fläche auf einer selektiven Agarplatte. Zählen Sie die KBE und berechnen Sie die prozentuale Verteilung, indem Sie die dispergierte KBE durch die gesamte KBE dividieren und mit 100 multiplizieren.In diesem Experiment wurden acht bis 10 Wochen alte weibliche Schweizer Webster-Mäuse mit 10 bis der vierten CFU von PA01 infiziert, die das Lumineszenzplasmid PQF50-lux trugen. Die Infektion durfte sich 48 Stunden lang etablieren, bevor drei 30-minütige Behandlungen entweder PBS als Vehikelkontrolle oder 10% GH als experimentelle Behandlung zur Verdauung des Biofilm-EPS verabreichen. In Abschnitt A wurden Mäuse vor der Behandlung, direkt nach der Behandlung und 10 und 20 Stunden nach der Behandlung abgebildet.Mit IVIS kann eine etablierte Infektion im Wundbett visualisiert werden, wodurch ein helles biolumineszierendes Signal erzeugt wird. Die Ausbreitung von Bakterien aus dem Wundbett kann unmittelbar nach der GH-Behandlung, nicht aber nach der PBS-Behandlung visualisiert werden. Die bakterielle Ausbreitung in die Organe kann auch beobachtet werden, indem die Maus zur Bildgebung auf die Seite gelegt wird, wie in den unteren Tafeln gezeigt.In Abschnitt B zeigten Bilder sowohl von pbS- als auch von GH-behandelten Mäusen einen Anstieg des Lumineszenzsignals nach 20 Stunden nach der Behandlung im Vergleich zur Vorbehandlung. Aufgrund der Nachweisschwelle einer Lumineszenz in IVIS ist es jedoch immer noch wichtig, die CFU zu quantifizieren. Nach 20 Stunden nach der Behandlung wurden die Mäuse eingeschläfert und die Wundbetten und Milz wurden gesammelt, um die CFU pro Gramm Gewebe aufzuzählen.Abschnitt C zeigt die Bakterienbelastung im Wundbett, während Abschnitt D die Bakterienbelastung in der Milz zeigt. Diese Daten deuten auf eine disseminierte Ausbreitung der dispergierten Bakterien hin, da Bakterien nur in der Milz der Mäuse nachgewiesen wurden, die mit der EPS-zielgerichteten GH-Lösung behandelt wurden. Obwohl diese Protokolle sehr nützlich sind, gibt es einige Einschränkungen.Zunächst ist zu beachten, dass es eine Nachweisbeschränkung mit dem In-vivo-Bildgebungssystem oder IVIS gibt. Eine Abnahme des Leuchtsignals kann beobachtet werden, wenn die Bakterien in die stationäre Phase eintreten. Daher ist es wichtig, interessantes Gewebe zu sammeln und die vorhandene KBE zu messen, da es zu einer Trennung zwischen der Lumineszenz und der aufgezählten KBE kommen kann.IVIS ist jedoch nützlich, um die Wirksamkeit der Behandlung während einer Studie zu visualisieren, ohne das Tier tatsächlich einschläfern zu müssen. Eine weitere zu berücksichtigenden Einschränkung ist die Anforderung einer genauen Überwachung der Bandagen. Die Bandagen werden benötigt, um die kontraktile Heilung zu reduzieren und die Wunde von anderen Bakterien steril zu halten.Bandagen müssen häufig ausgetauscht werden, was zu einem versehentlichen Debridement der Wunde und der Möglichkeit einer Kontamination führen kann. Diese Protokolle beschreiben neuartige Methoden zur Untersuchung von Galle aus der Ausbreitung und die Bewertung von therapeutischer Galle aus Dispersionsmitteln. Diese Modelle ermöglichen die Entwicklung komplexer polymikrobieller Biofilm-assoziierter Infektionen, die klinisch relevante Infektionen beim Menschen nachahmen.Wir hoffen, dass diese Protokolle genutzt und verfeinert werden, um die Entwicklung von Anti-Biofilm-Ausbreitungsmitteln für therapeutische Zwecke voranzutreiben.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Pseudomonas aeruginosa und Saccharomyces cerevisiae Biofilm im Flow Cells

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Mikrotiterschale Biofilmbildung Assay

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings.  In fact, life in a biofilm ...

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

In-vitro-Bildung von Biofilmen in einem 8-well Chamber Slide

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Assessing Somatic Hypermutation in Ramos B Cells after Overexpression or Knockdown of Specific Genes

Die Beurteilung Somatische Hypermutation in Ramos B-Zellen nach Überexpression oder Knockdown von spezifischen Genen

B cells start their life with low affinity antibodies generated by V(D)J recombination.  However, upon detecting a pathogen, the variable (V) region of an ...

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

Die Beurteilung der Entwicklung der Murine Plasmazytoide dendritischen Zellen in Peyer-Patches mit Adoptiv Übertragung von hämatopoetischen Vorläuferzellen

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Die Induktion von Murine Darmentzündungen durch adoptiven Transfer von Effektor CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hoch</sup&gt; T-Zellen in immundefizienten Mäusen

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Visualisierung der Auswirkungen von Sputum auf Biofilm-Entwicklung eines Modells mit Kammerdeckgläser

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Besuchen Sie die Licht-Seite: In Vivo Monitoring von Pseudomonas Aeruginosa Biofilms Infektionen bei chronischen Wunden in einer diabetischen haarlose Mausmodell

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualisierung der Biofilmbildung in Candida Albicans ein automatisiertes mikrofluidischen Gerät

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Bile Salt-induced Biofilm Formation in Enteric Pathogens: Techniques for Identification and Quantification

Galle-Salz-induzierte Biofilmbildung im enterischen Krankheitserregern: Techniken für die Identifizierung und Quantifizierung

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, ...