Name: a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate
Uploaded: 2021-05-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

تمويل المعاهد القومية للصحة من خلال المعهد الوطني للسرطان، منحة # CA228582. شون إيشياما يتلقى حاليا منحة من شركة Toray الطبية المحدودة.

تم تنفيذ جميع الإجراءات والتجارب التي شملت الفئران وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها لجنة جونز هوبكنز لرعاية الحيوانات واستخدامها.
1. SD الفئران OS خط الخلية UMR-106 بروتوكول ثقافة الخلية
<ol><li>تنمو الخلايا في DMEM، تكمل مع 10٪ (v/v) FBS، البنسلين (10 U/mL)-streptomycin (10 U/mL) في 37 درجة مئوية في ا?...

<ol>
	<li>Link, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+adjuvant+chemotherapy+on+relapse-free+survival+in+patients+with+osteosarcoma+of+the+extremity.">The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity.</a> New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).</li><li>Bielack, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+high-grade+osteosarcoma+of+the+extremities+or+trunk:+an+analysis+of+1,702+patients+treated+on+neoadjuvant+cooperative+osteosarcoma+study+group+protocols.">Prognostic factors in high-grade osteosarcoma of the extremities or trunk: an analysis of 1,702 patients treated on neoadjuvant cooperative osteosarcoma study group protocols.</a> Journal of Clinical Oncology. 20 (3), 776-790 (2002).</li><li>Botter, S. M., Neri, D., Fuchs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+osteosarcoma.">Recent advances in osteosarcoma.</a> Current Opinion in Pharmacology. 16, 15-23 (2014).</li><li>Ek, E. T. H., Dass, C. R., Choong, P. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+mouse+models+of+osteosarcoma.">Commonly used mouse models of osteosarcoma.</a> Critical Reviews in Oncology Hematology. 60 (1), 1-8 (2006).</li><li>Guijarro, M. V., Ghivizzani, S. C., Gibbs, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+osteosarcoma.">Animal models in osteosarcoma.</a> Frontiers Oncology. 4, 189 (2014).</li><li>Janeway, K. A., Walkley, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+osteosarcoma+in+the+mouse:+From+bedside+to+bench.">Modeling human osteosarcoma in the mouse: From bedside to bench.</a> Bone. 47 (5), 859-865 (2010).</li><li>Mohseny, A. B., Hogendoorn, P. C., Cleton-Jansen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma+models:+from+cell+lines+to+zebrafish.">Osteosarcoma models: from cell lines to zebrafish.</a> Sarcoma. 2012, 417271 (2012).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+murine+osteosarcoma+with+clonally+related+variants+differing+in+pulmonary+metastatic+potential.">An orthotopic model of murine osteosarcoma with clonally related variants differing in pulmonary metastatic potential.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 18 (3), 261-271 (2000).</li><li>Martin, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parathyroid+hormone-responsive+adenylate+cyclase+in+induced+transplantable+osteogenic+rat+sarcoma.">Parathyroid hormone-responsive adenylate cyclase in induced transplantable osteogenic rat sarcoma.</a> Nature. 260 (5550), 436-438 (1976).</li><li>Fisher, J. L., Mackie, P. S., Howard, M. L., Zhou, H., Choong, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+urokinase+plasminogen+activator+system+in+metastatic+murine+osteosarcoma:+an+in+vivo+mouse+model.">The expression of the urokinase plasminogen activator system in metastatic murine osteosarcoma: an in vivo mouse model.</a> Clinical Cancer Research. 7 (6), 1654-1660 (2001).</li><li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+reproducible+osteosarcoma+rat+model+using+orthotopic+implantation+technique.">Establishment of reproducible osteosarcoma rat model using orthotopic implantation technique.</a> Oncology Reports. 21 (5), 1175-1180 (2009).</li><li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homologous+mesenchymal+stem+cells+promote+the+emergence+and+growth+of+pulmonary+metastases+of+the+rat+osteosarcoma+cell+line+UMR-106.">Homologous mesenchymal stem cells promote the emergence and growth of pulmonary metastases of the rat osteosarcoma cell line UMR-106.</a> Oncology Letters. 8 (1), 127-132 (2014).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+and+ErbB2+in+the+cardiac+response+to+doxorubicin+injury.">Heat shock protein 90 and ErbB2 in the cardiac response to doxorubicin injury.</a> Cancer Research. 67 (4), 1436-1441 (2007).</li><li>Sysa-Shah, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+cross-regulation+between+ErbB2+and+&#946;-adrenergic+signalling+pathways.">Bidirectional cross-regulation between ErbB2 and &#946;-adrenergic signalling pathways.</a> Cardiovascular Research. 109 (3), 358-373 (2016).</li><li>Wachtman, L. M., Browning, M. D., Bedja, D., Pin, S., Gabrielson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+use+of+long-term+indwelling+jugular+catheters+in+a+rat+model+of+cardiotoxicity.">Validation of the use of long-term indwelling jugular catheters in a rat model of cardiotoxicity.</a> Journal of American Association Laboratory Animal Science. 45, 55-64 (2006).</li><li>Abdou, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prognostic+role+of+Ezrin+and+HER2/neu+expression+in+osteosarcoma.">The Prognostic role of Ezrin and HER2/neu expression in osteosarcoma.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 24 (5), 355-363 (2016).</li><li>Hughes, D. P., Thomas, D. G., Giordano, T. J., McDonagh, K. T., Baker, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+erbB+family+phosphorylation+in+osteosarcoma+as+a+target+for+CI-1033+inhibition.">Essential erbB family phosphorylation in osteosarcoma as a target for CI-1033 inhibition.</a> Pediatric Blood &amp; Cancer. 46 (5), 614-623 (2006).</li><li>Wen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+in+osteosarcoma:+expression+and+mutational+analysis.">Epidermal growth factor receptor in osteosarcoma: expression and mutational analysis.</a> Human Pathology. 38 (8), 1184-1191 (2007).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+drug+development+path+that+targets+metastatic+progression+in+osteosarcoma.">Toward a drug development path that targets metastatic progression in osteosarcoma.</a> Clinical Cancer Research. 20 (16), 4200-4209 (2014).</li></ol>

الفئران مع زراعة الظنبوب OS تطوير أورام قابلة للقياس من قبل 3 أسابيع بعد زرع. إذا تم بتر الأطراف المصابة بالأورام بعد 3 أسابيع من الزرع ، يتم تقليل حدوث انبثاث الرئة بشكل كبير. OSs هي على حد سواء هشاشة العظام والعظام. الفئران دون بتر تطوير الانبثاث الرئة التي هي متعددة ومتباينة الحجم، لوحظ من ق?...

أوستيوساركوما (OS) هو ورم العظام الأساسي الأكثر شيوعا في الأطفال والمراهقين والشباب. أحدث تقدم في علاج نظام التشغيل حدث في 1980s عندما تبين العلاج الكيميائي متعدد الوكلاء لتحسين البقاء على قيد الحياة عموما مقارنة مع الجراحة وحدها1. يتطور نظام التشغيل أثناء النمو السريع للعظام ، وعادة ما يحدث في العظام الأنبوبية الطويلة مثل عظم الفخذ والساق وعظم العضد. وهي تتميز بمظهر أوستيوليك، أو أوستيوبلاستيك، أو مختلط مع رد فعل ملحوظ من قبل الخلايا القيطية2. العلاج الكيميائي واستئصال الجراحية يمكن أن تحسن النتيجة للمرضى الذين يعانون من البقاء على قيد الحياة لمدة 5 سنوات ل 65٪ من المرضى2،3. لسوء الحظ، مرضى نظام التشغيل عالية الجودة مع مرض النقيلي لديهم البقاء على قيد الحياة 20٪. نظام التشغيل يغزو إقليميا وينتشر في المقام الأول إلى الرئتين أو العظام الأخرى وأكثر انتشارا في الذكور. الحاجة الأكثر إلحاحا لهؤلاء المرضى الصغار هو العلاج الجديد الذي يمنع ويزيل صلاحية الانبثاث البعيدة.
وقد استعرضت نماذج نظام التشغيل ما قبلالسريرية 4,5,6,7 وعدد قليل من النماذج المتاحة المناعية باستخدام بتر نظام التشغيل التقويمي وقد وضعت. في عام 2000، تم تطوير نموذج مهم باستخدام BALB / ج الفئران مع نظام التشغيل السنجني تقويم العظام وبتر8. بالمقارنة مع هذا النموذج الماوس، ويستند نموذج الفئران على الحيوانات الأصيلة وراثيا وأكبر 10 مرات مما يؤدي إلى بعض المزايا. تم تطوير نموذج UMR106 الفئران من نظام التشغيل المستحث 32P في الفئران داولي سبراغ (SD) ، والتي اشتقت إلى خط الخلية9. في عام 2001 ، تم وصف زرع تقويم العظام من UMR106-01 لأول مرة في الساق المزروعة من الفئران اللاهية مع تطور الورم الأولي السريع والمتسق والسمات الإشعاعية والهصلة المشتركة مع نظام التشغيل في البشر. تطورت الانبثاث الرئوي وكانت تعتمد على وضع تقويم العظام من UMR106 في البيئة الدقيقة العظام10. في عام 2009،أنشأ Yu وآخرون. كانت عمليات زرع الورم الناجحة ومعدل الانبثاث الرئوي في الفئران دون بتر مماثلة للبيانات المعروضة هنا. في هذه الدراسة، تم إجراء بتر إضافي للنموذج باستخدام الفئران الصغيرة، مما يشير إلى أن توقيت إزالة الورم الأولي أمر بالغ الأهمية في نمذجة نظام التشغيل، وخاصة فيما يتعلق بالتقدم النقيلي. مع هذا الصقل، وبتر والتصوير في الجسم الحي تحسين هذا النموذج للدراسات ما قبل السريرية لتقييم المخدرات رواية لنظام التشغيل.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AKT</td>
			<td>Cell Signaling TECHNOLOGY</td>
			<td>4685S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>absorbable suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J214H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-47778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;2-AR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-569</td>
			<td>replaced by &#946;2-AR (E-3): sc-271322</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bis&#8211;Tris gels</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NP0321PK2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR Lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>IZ-70000-201908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>#A0452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>#14-0688-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemiluminescent substrate</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>RPN2232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL-Xposure film</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>34089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Anesthesia System</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>922120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diaminobenzidine</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>Actavis</td>
			<td>NDC 45963-733-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGFR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-03</td>
			<td>replaced by EGFR (A-10): sc-373746</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB2 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-284</td>
			<td>replaced by Neu (3B5): sc-33684</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB4 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-283</td>
			<td>replaced by ErbB4 (C-7): sc-8050</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERK antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-514302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye lubricant</td>
			<td>PHARMADERM</td>
			<td>NDC 0462-0211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe (100 &#181;L)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>Model 1710 SN SYR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>horseradish peroxidase-linked secondary antibody</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>NA934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>BUTLER SCHEIN</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane vaporizer</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UMR-106 cell</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray</td>
			<td>Faxitron</td>
			<td>UltraFocus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray processor</td>
			<td>Hope X-Ray Peoducts Inc</td>
			<td>MicroMax X-ray Processor</td>
			<td>Hope Processors are not available in USA anymore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wound clips</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>427631</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate

أحدث تقدم في علاج الساركوما العظمية (OS) حدث في 1980s عندما ثبت العلاج الكيميائي متعدد الوكلاء لتحسين البقاء على قيد الحياة عموما بالمقارنة مع الجراحة وحدها. ولمعالجة هذه المشكلة، تهدف الدراسة إلى تحسين نموذج أقل شهرة لنظام التشغيل في الفئران باستخدام نهج شامل في الهسولوجيا والتصوير والبيولوجيا والزرع والبتر يطيل أمد البقاء على قيد الحياة. استخدمنا مناعة، تفوق سبراغ دولي (SD)، نموذج الفئران السينجينية مع زرع UMR106 OS خط الخلية (التي تنشأ من الفئران SD) مع زرع الورم الظنبوبي التقويمي في الفئران الذكور والإناث 3 أسابيع لنموذج نظام التشغيل للأطفال. وجدنا أن الفئران تتطور الأورام الرئوية الأولية والنقية القابلة للاستنساخ، وأن بتر الأطراف في 3 أسابيع بعد الزرع يقلل بشكل كبير من حدوث الانبثاث الرئوي ويمنع الوفيات غير المتوقعة. من الناحية النسيجية ، كانت OSs الأولية والمنقوتة في الفئران مشابهة جدا لنظام التشغيل البشري. مسح التعبير البروتيني لخلايا نظام التشغيل يكشف أن هذه الأورام تعبر عن kinases الأسرة ErbB. وبما أن هذه kinases هي أيضا أعرب للغاية في معظم منظمة الدول الأمريكية الإنسان، يمكن استخدام هذا النموذج الفئران لاختبار مثبطات مسار ErbB للعلاج.

وتستخدم الفئران المتجاوزة SD المناعة لهذه الدراسات نظام التشغيل، والذي يقدم نموذجا حيوانية مع نظام المناعة سليمة. لقد استخدمنا خط الخلية UMR106 من ATCC ، التي تم تطويرها من الخلايا التي تم عزلها في البداية من نظام التشغيل من فأر SD. زرعنا الخلايا في فئران SD ، وبالتالي توفير نموذج syngeneic لنظام التش?...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

هنا ، يتم وصف زرع تقويم العظام السينغي يليه إجراء بتر لساركوما العظام مع الانبثاث الرئوي التلقائي الذي يمكن استخدامه للتحقيق قبل السريري لبيولوجيا الانبثاث وتطوير علاجات جديدة.

A Syngeneic العظام العظام سبراغ داولي نموذج الفئران مع بتر للسيطرة على معدل الانبثاث

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

زرع خلايا هشاشة العظام داخل البيئة الدقيقة الساق يعزز الانبثاث الرئة. يمكن أن يكون هذا النموذج مفيدا أيضا لدراسة آليات الانبثاث الرئوي أو علاجات السرطان الجديدة التي تتطلب جهازا مناعيا سليما. بمجرد أن يتم تأسيس الورم ، يكون البتر ضروريا للتحكم في معدل الانبثاث في دراسات البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل.نحن نستخدم الحقن الوداجية للسماح بتصور تسليم المخدرات عن طريق الوريد. حقن الوريد الوداجي مفيد للعديد من نماذج الأمراض الأخرى التي يتطلب تسليم الدواء الدقيق. لقد استخدمنا هذه الطريقة لتقديم الجسيمات النانوية واللويغانات ذات اللوبيلات المشعة للتصوير في الجسم الحي.ننصح المستخدمين الجدد بممارسة إزالة أحد الأطراف من خمسة إلى عشرة فئران قتل رحيم قبل محاولة إجراء تجربة لإتقان آليات بتر الأطراف دون فقدان الدم. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لرد الفعل القضيب، وتأمين الفئران تخدير في nosecone على وسادة حرارة الإعداد منخفضة الحرارة في موقف ضعيف. إزالة الشعر على الساق اليمنى، حتى البطن وأسفل الظهر.استخدام الشاش أو رذاذ لتطهير المنطقة الجراحية مع 70٪ الإيثانول ومطهر المخفف المناسب وتطبيق مرهم على عيون الحيوان. باستخدام حركة تشبه الحفر لإجراء فتحة ، أدخل إبرة عيار 22 معلمة 10 ملليمترات من الطرف 10 ملليمترات في ديافيس من الساق في منتصف الهضبة الظنبوبية ، وتمديد الإبرة من خلال الميتافيزيقي إلى الانبثاث. بعد إزالة الإبرة، اخلط بلطف تعليق الخلية السرطانية ذات الأهمية للحصول على تعليق خلية متجانسة، وتحميل 7.5 × 10 إلى الرابع من الخلايا في 20 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في حقنة هاملتون.ضع علامة على حقنة هاملتون بخلايا على بعد 10 ملليمترات من طرف الإبرة وأدخل الإبرة إلى علامة 10 ملليمترات في الحفرة التي صنعتها إبرة قياس 22. ثم تصريف بلطف حجم كامل من الخلايا في تجويف النخاع، ووضع الفئران في قفص على لوحة التدفئة مع الرصد حتى شغل كامل. بالنسبة لإدارة الدوكسوروبيسين عن طريق الوريد ، بعد تأكيد التخدير ، استخدم التشريح الدقيق لتصور الوريد الوداجي الأيمن أو الأيسر ، وأدخل الإبرة في أنسجة العضلات المفرطة.توجيه الإبرة نحو الرأس في تجويف الوريد الوداجي، كما هو تصور في الوريد الوداجي الأمامي إلى العضلات الصدرية، ورسم حجم صغير من الدم في طرف إبرة لتأكيد الإدراج دقيقة. عندما تكون الإبرة في مكانها، قم بحقن 100 إلى 150 ميكرولتر ببطء من مليغرامين لكل كيلوغرام من الدوكسوروبيسين على مدى دقيقة واحدة. يجب أن يكون المحلول مرئيا داخل الوريد أثناء الولادة.عندما يتم تسليم كل من الحل، استخدم الشاش العقيم لتطبيق ضغط لطيف على الوريد، واستخدام ثلاثة إلى أربعة مقاطع الجرح لإغلاق الشق. بعد تأكيد التخدير، قم بإزالة الشعر على الساق اليمنى، حتى البطن وأسفل البطن الظهري، ووضع الجرذ في وضع السطان على وسادة التدفئة. فرك الجلد من منتصف العجل إلى أعلى مفصل الورك من أسفل البطن الأيمن كما هو موضح وتطبيق مرهم على عيون الحيوان.باستخدام قفازات وأدوات معقمة، اسحب الساق من خلال تنفيس الستائر الجراحية العقيمة واصنع شقا جلديا محيطيا قريب فقط من الخنق. قفاز الطرف الخلفي لفضح الشريان الفخذي والوريد على سطح البطن الوسطي من الطرف الخلفي، واستخدام الغرز 4-0 القابلة للامتصاص للتقاضي الأوعية على مستوى منتصف الفخذ وعبر استئصال distally. المشبك الوريد distally للحد من التسرب أثناء تشريح العضلات واستخدام تشريح حادة لاختطاف مفصل الورك مع تناوب خارجي الجانبية.حدد موقع رئيس عظم الفخذ وافكه عن الأسيتابولوم، وأزل أي نسيج متبقي، مع الحفاظ على ربط الساق بالجسم. إدارة كتلة دفقة إلى الأسيتابولوم والعصب الوركي مع ما يقرب من ستة ملليغرام لكل كيلوغرام من ropivacaine، واستخدام خياطة بسيطة توقف 4-0 قابلة للامتصاص لإغلاق العضلات على الأسيتابولوم. ثم استخدم قصاصات الجرح الموضوعة من 5 إلى 10 ملليمترات لإغلاق حواف الجلد.يسمح التصوير بالأشعة السينية لمراقبة الورم بتأكيد غزو ورم العظام ويمكن إجراؤه على أطراف مبتورة أو ثابتة مؤخرا. يسمح التصوير بالأشعة السينية أيضا بتقييم المورفولوجيا الإشعاعية للرئتين مع أو بدون الانبثاث ، مما يوفر طريقة سريعة وسهلة لتحديد الحاجة إلى القتل الرحيم لمنع الوفيات العفوية غير الضرورية. في سرطان العظام الفئران، يمكن تأكيد كل من مورفولوجيا الورم العظمي والعظام عن طريق علم الأنسجة من الطرف المبتور.لاحظ أن العظم القشري غائب في هذا المثال وأن العظام المجاورة قد تم استبدالها أو محصنة بعظم منسوج جديد موجه عموديا إلى العمود الحالي للقشرة. ويمكن أيضا أن يتم تحديد جزر من osteoids غير ناضجة داخل الورم. في هذه الصور ، يمكن ملاحظة مورفولوجيا المجهرية من الانبثاث الرئة التمثيلية ، وبعضها مع العظام المعدنية والورم الاوعية الدموية emboli.يمكن أن يكشف التأصل المناعي لأورام هشاشة العظام الأولية عن تسلل الأورام من قبل مجموعات الخلايا المناعية ، مثل الضامة الإيجابية CD68 أو الخلايا التائية الإيجابية CD3. يمكن استخدام النشاف الغربي لليسات بروتين الخلايا السرطانية لتحديد التعبير عن كيناسي البروتين، مستقبلات كيناز البروتين، وغيرها من البروتينات التي تتفاعل مع هذه المسارات. لزرع الظنبوب، بمجرد إجراء أول ثقب تيبي، والاستمرار في عقد الساق في يدك غير المهيمنة في نفس الزاوية للحفاظ على الجلد وثقوب العظام اصطف لجعل إدراج إبرة هاملتون أسهل.للحقن الوداجي، أدخل الإبرة في العضلات، ولكن لا زاوية الإبرة كثيرا لتجنب فقدان الوريد. للبتر، وممارسة التفكك على الفئران القتل الرحيم أولا.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

فلوري مثلي نموذج الفأر من سرطان البنكرياس

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

فأري موديل التجريبية التنمية الورم الأصلي والبريتوني ورم خبيث<em&gt; عبر</em&gt; مثلي تلقيح مع خلايا المبيض سرطان

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

والوريد البابي حقن نموذج لدراسة الكبد الانبثاث من سرطان الثدي

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

الاعتبارات العملية في دراسة الاستعمار الرئة المنتشر في أوستيوساركوما باستخدام مقايسة خبيث الرئوية

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

A Preclinical Mouse Model of Osteosarcoma to Define the Extracellular Vesicle-mediated Communication Between Tumor and Mesenchymal Stem Cells

نموذج ماوس الإكلينيكية من أوستيوساركوما لتعريف الاتصال خارج الخلية حويصلة بوساطة بين الورم والخلايا الجذعية الوسيطة

Within the tumor microenvironment, resident or recruited mesenchymal stem cells (MSCs) contribute to malignant progression in multiple cancer types. Under ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

نموذج سرطان البنكرياس سينجينيك ماوس دراسة آثار انهانسر لا رجعة فيه

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

نموذج أورثوتوبيك طرحه ونيون مورين سينجينيك المعتمدة على الاندروجين والاخصاء مقاومة سرطان البروستاتا

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

إيمونوفينوتيبينج من أورثوتوبيك هوموجرافت (سينجينيك) من الفيلق الابتدائي موريني البنكرياس الأقنية غدية بالتدفق الخلوي

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

أورثوتوبيك زرع الخلايا غدية الرئة سينجينيك لدراسة التعبير PD-L1

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

نموذج الرئة اللاخلوي والخلوية لدراسة ورم خبيث

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...