Name: a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate
Uploaded: 2021-05-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

מימון NIH באמצעות המכון הלאומי לסרטן, מענק # CA228582. שון אישיאמה מקבל בימים אלה מענק ממשרד תומרי מדיקל בע"מ

כל ההליכים והניסויים הקשורים לחולדות בוצעו על פי פרוטוקולים שאושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים של ג'ונס הופקינס.
1. פרוטוקול תרבית התאים של מערכת ההפעלה של עכברוש SD UMR-106
<ol><li>לגדל תאים ב- DMEM, בתוספת 10% (v/v) FBS, פניצילין (10 U/mL)-סטרפטומיצין (10 U/mL) ב 37 °C באטמוספירה לחה 5% CO...

<ol>
	<li>Link, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+adjuvant+chemotherapy+on+relapse-free+survival+in+patients+with+osteosarcoma+of+the+extremity.">The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity.</a> New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).</li><li>Bielack, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+high-grade+osteosarcoma+of+the+extremities+or+trunk:+an+analysis+of+1,702+patients+treated+on+neoadjuvant+cooperative+osteosarcoma+study+group+protocols.">Prognostic factors in high-grade osteosarcoma of the extremities or trunk: an analysis of 1,702 patients treated on neoadjuvant cooperative osteosarcoma study group protocols.</a> Journal of Clinical Oncology. 20 (3), 776-790 (2002).</li><li>Botter, S. M., Neri, D., Fuchs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+osteosarcoma.">Recent advances in osteosarcoma.</a> Current Opinion in Pharmacology. 16, 15-23 (2014).</li><li>Ek, E. T. H., Dass, C. R., Choong, P. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+mouse+models+of+osteosarcoma.">Commonly used mouse models of osteosarcoma.</a> Critical Reviews in Oncology Hematology. 60 (1), 1-8 (2006).</li><li>Guijarro, M. V., Ghivizzani, S. C., Gibbs, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+osteosarcoma.">Animal models in osteosarcoma.</a> Frontiers Oncology. 4, 189 (2014).</li><li>Janeway, K. A., Walkley, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+osteosarcoma+in+the+mouse:+From+bedside+to+bench.">Modeling human osteosarcoma in the mouse: From bedside to bench.</a> Bone. 47 (5), 859-865 (2010).</li><li>Mohseny, A. B., Hogendoorn, P. C., Cleton-Jansen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma+models:+from+cell+lines+to+zebrafish.">Osteosarcoma models: from cell lines to zebrafish.</a> Sarcoma. 2012, 417271 (2012).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+murine+osteosarcoma+with+clonally+related+variants+differing+in+pulmonary+metastatic+potential.">An orthotopic model of murine osteosarcoma with clonally related variants differing in pulmonary metastatic potential.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 18 (3), 261-271 (2000).</li><li>Martin, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parathyroid+hormone-responsive+adenylate+cyclase+in+induced+transplantable+osteogenic+rat+sarcoma.">Parathyroid hormone-responsive adenylate cyclase in induced transplantable osteogenic rat sarcoma.</a> Nature. 260 (5550), 436-438 (1976).</li><li>Fisher, J. L., Mackie, P. S., Howard, M. L., Zhou, H., Choong, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+urokinase+plasminogen+activator+system+in+metastatic+murine+osteosarcoma:+an+in+vivo+mouse+model.">The expression of the urokinase plasminogen activator system in metastatic murine osteosarcoma: an in vivo mouse model.</a> Clinical Cancer Research. 7 (6), 1654-1660 (2001).</li><li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+reproducible+osteosarcoma+rat+model+using+orthotopic+implantation+technique.">Establishment of reproducible osteosarcoma rat model using orthotopic implantation technique.</a> Oncology Reports. 21 (5), 1175-1180 (2009).</li><li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homologous+mesenchymal+stem+cells+promote+the+emergence+and+growth+of+pulmonary+metastases+of+the+rat+osteosarcoma+cell+line+UMR-106.">Homologous mesenchymal stem cells promote the emergence and growth of pulmonary metastases of the rat osteosarcoma cell line UMR-106.</a> Oncology Letters. 8 (1), 127-132 (2014).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+and+ErbB2+in+the+cardiac+response+to+doxorubicin+injury.">Heat shock protein 90 and ErbB2 in the cardiac response to doxorubicin injury.</a> Cancer Research. 67 (4), 1436-1441 (2007).</li><li>Sysa-Shah, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+cross-regulation+between+ErbB2+and+&#946;-adrenergic+signalling+pathways.">Bidirectional cross-regulation between ErbB2 and &#946;-adrenergic signalling pathways.</a> Cardiovascular Research. 109 (3), 358-373 (2016).</li><li>Wachtman, L. M., Browning, M. D., Bedja, D., Pin, S., Gabrielson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+use+of+long-term+indwelling+jugular+catheters+in+a+rat+model+of+cardiotoxicity.">Validation of the use of long-term indwelling jugular catheters in a rat model of cardiotoxicity.</a> Journal of American Association Laboratory Animal Science. 45, 55-64 (2006).</li><li>Abdou, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prognostic+role+of+Ezrin+and+HER2/neu+expression+in+osteosarcoma.">The Prognostic role of Ezrin and HER2/neu expression in osteosarcoma.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 24 (5), 355-363 (2016).</li><li>Hughes, D. P., Thomas, D. G., Giordano, T. J., McDonagh, K. T., Baker, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+erbB+family+phosphorylation+in+osteosarcoma+as+a+target+for+CI-1033+inhibition.">Essential erbB family phosphorylation in osteosarcoma as a target for CI-1033 inhibition.</a> Pediatric Blood &amp; Cancer. 46 (5), 614-623 (2006).</li><li>Wen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+in+osteosarcoma:+expression+and+mutational+analysis.">Epidermal growth factor receptor in osteosarcoma: expression and mutational analysis.</a> Human Pathology. 38 (8), 1184-1191 (2007).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+drug+development+path+that+targets+metastatic+progression+in+osteosarcoma.">Toward a drug development path that targets metastatic progression in osteosarcoma.</a> Clinical Cancer Research. 20 (16), 4200-4209 (2014).</li></ol>

חולדות עם שתלים טיביים של מערכת ההפעלה מפתחות גידולים מדידים ב-3 שבועות לאחר ההשתלה. אם גפיים עם גידולים נקטעים 3 שבועות לאחר ההשתלה, השכיחות של גרורות ריאות מופחתת באופן משמעותי. מערכות יס הן אוסטיאולטיות ואוסטאובלסטיות. חולדות ללא קטיעה לפתח גרורות ריאות כי הם מרובים ומגוון בגודל, נצפתה ?...

אוסטאוסרקומה (OS) הוא הגידול העיקרי הנפוץ ביותר בעצמות אצל ילדים, מתבגרים ומבוגרים צעירים. ההתקדמות האחרונה בטיפול במערכת ההפעלה התרחשה בשנות השמונים כאשר הוכח כי כימותרפיה רב-גורמית משפרת את ההישרדות הכללית בהשוואה לניתוחלבדו 1. מערכת ההפעלה מתפתחת במהלך צמיחת עצם מהירה, המתרחשת בדרך כלל בעצמות צינוריות ארוכות כגון עצם הירך, השוקה, עצם הרחם. הם מאופיינים במראה אוסטיאוליטי, אוסטאובלסטי או מעורב עם תגובה periosteal בולט2. כימותרפיה וחתך כירורגי יכול לשפר את התוצאה עבור חולים עם הישרדות של 5 שנים עבור 65% מהחולים2,3. למרבה הצער, חולי מערכת הפעלה ברמה גבוהה עם מחלה גרורתית יש 20% הישרדות. מערכת ההפעלה פולשת באופן אזורי וגורמת גרורות בעיקר לריאות או לעצמות אחרות והיא נפוצה יותר אצל גברים. הצורך המשכנע ביותר עבור חולים צעירים אלה הוא טיפול חדשני המונע ומבטל את הכדאיות של גרורות רחוקות.
מודלים פרה-קליניים של מערכת ההפעלה נבדקו4,5,6,7 ומעט דגמים חיסוניים זמינים באמצעות כריתה של מערכת ההפעלה האורתוטופית פותחו. בשנת 2000 פותח דגם חשוב באמצעות עכברי BALB/c עם מערכת הפעלה סינגנית אורתוטופית וקטיעה8. בהשוואה למודל העכבר הזה, מודל החולדות מבוסס על בעלי חיים גדולים פי 10 מהמובילים ליתרונות מסוימים. מודל UMR106 החולדה פותח מערכת הפעלה המושרה 32P בחולדה ספראג דולי (SD), אשר נגזר לתוך קו תא9. בשנת 2001, השתלה אורתוטופית של UMR106-01 תוארה לראשונה בשוקה מושתלת של עכברים אתימיים עם התפתחות גידול ראשונית מהירה ועקבית ותכונות רדיולוגיות, היסטולוגיות במשותף עם מערכת ההפעלה בבני אדם. גרורות ריאתיות התפתחו והיו תלויות במיקום האורתופולוגי של UMR106 לתוך מיקרו-סביבה בעצמות10. בשנת 2009, יו ואח' 11 הקים מודל עכברוש עצם הירך האורתוטופית לשחזור באמצעות תאי UMR106 בחולדות SD זכריות גדולות יותר. השתלות הגידול המוצלחות וקצב גרורות הריאות בחולדות ללא קטיעה היו דומים לנתונים שהוצגו כאן. במחקר זה בוצעה קטיעה נוספת למודל באמצעות חולדות צעירות, מה שהציע כי התזמון של הסרת הגידול העיקרי הוא קריטי בדוגמנות מערכת ההפעלה, הקשורה במיוחד להתקדמות גרורתית. עם עידון זה, קטיעה והדמיה in vivo לשפר את המודל הזה עבור מחקרים פרה קליניים להערכת תרופות חדשניות עבור מערכת ההפעלה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AKT</td>
			<td>Cell Signaling TECHNOLOGY</td>
			<td>4685S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>absorbable suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J214H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-47778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;2-AR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-569</td>
			<td>replaced by &#946;2-AR (E-3): sc-271322</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bis&#8211;Tris gels</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NP0321PK2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR Lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>IZ-70000-201908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>#A0452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>#14-0688-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemiluminescent substrate</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>RPN2232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL-Xposure film</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>34089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Anesthesia System</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>922120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diaminobenzidine</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>Actavis</td>
			<td>NDC 45963-733-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGFR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-03</td>
			<td>replaced by EGFR (A-10): sc-373746</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB2 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-284</td>
			<td>replaced by Neu (3B5): sc-33684</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB4 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-283</td>
			<td>replaced by ErbB4 (C-7): sc-8050</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERK antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-514302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye lubricant</td>
			<td>PHARMADERM</td>
			<td>NDC 0462-0211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe (100 &#181;L)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>Model 1710 SN SYR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>horseradish peroxidase-linked secondary antibody</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>NA934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>BUTLER SCHEIN</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane vaporizer</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UMR-106 cell</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray</td>
			<td>Faxitron</td>
			<td>UltraFocus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray processor</td>
			<td>Hope X-Ray Peoducts Inc</td>
			<td>MicroMax X-ray Processor</td>
			<td>Hope Processors are not available in USA anymore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wound clips</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>427631</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate

ההתקדמות האחרונה בטיפול באוסטאוסרקומה (OS) התרחשה בשנות השמונים כאשר הוכח כי כימותרפיה רב-גורמית משפרת את ההישרדות הכללית בהשוואה לניתוח בלבד. כדי לטפל בבעיה זו, מטרת המחקר היא לחדד מודל פחות ידוע של מערכת ההפעלה בחולדות עם גישה היסטולוגית מקיפה, הדמיה, ביולוגית, השתלה וקטיעה כירורגית המאריכה את ההישרדות. השתמשנו במודל עכברושים אימונו-תחרותי, מלידה ספראג-דולי (SD), מודל חולדה סינגנית עם קו תאים מושתל של מערכת ההפעלה UMR106 (שמקורו בחולדה SD) עם שתלי גידול טיבי אורתוטופיים לחולדות זכר ונקבה בנות 3 שבועות כדי לדגמן מערכת הפעלה לילדים. מצאנו שחולדות מפתחות גידולי ריאות ראשוניים ומדסטטיים ניתנים לשחזור, וכי קטיעות גפיים בגיל 3 שבועות לאחר ההשתלה מפחיתות באופן משמעותי את שכיחות גרורות הריאות ומונעות מקרי מוות בלתי צפויים. מבחינה היסטולוגית, מערכות ההפעלה העיקריות והמטאסטטיות בחולדות היו דומות מאוד למערכת ההפעלה האנושית. סקר ביטוי חלבון של תאי מערכת ההפעלה מגלה כי גידולים אלה מבטאים קינאזים משפחתיים של ErbB. מאז קינאז אלה באים לידי ביטוי גם ב- OSs האנושי ביותר, מודל חולדה זה יכול לשמש כדי לבדוק מעכבי מסלול ErbB לטיפול.

חולדות IMUNOcompetent SD מלידה משמשות למחקרי מערכת ההפעלה האלה, המציע מודל בעלי חיים עם מערכת חיסונית שלמה. השתמשנו בקו התא UMR106 מ- ATCC, שפותח מתאים שבודדו בתחילה מ מערכת הפעלה מעכברוש SD. שתלנו את התאים בחולדות SD, ובכך סיפקנו מודל סניקני למערכת ההפעלה. תאי UMR106 מושתלים בשוקה של חולדות SD זכר ונקבה בנות 3 ...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

כאן, השתלה אורתוטופית סינגנית ואחריה הליך קטיעה של אוסטאוסרקומה עם גרורות ריאות ספונטניות שניתן להשתמש בהן לחקירה פרה-קלינית של ביולוגיה גרורות ופיתוח של טיפולים חדשניים מתואר.

מודל עכברוש אוסטאוסרקומה סנגנית אורתוטופית עם קטיעה כדי לשלוט בקצב גרורות

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

השתלת תאי אוסטאוסרקומה בתוך מיקרו-וירוס השוקה מקדמת גרורות ריאות. מודל זה יכול גם להיות שימושי לחקר המנגנונים של גרורות ריאות או טיפולים חדשניים בסרטן הדורשים מערכת חיסונית שלמה. לאחר הגידול הוקם, קטיעה יש צורך לשלוט בקצב גרורות במחקרי הישרדות לטווח ארוך.אנו משתמשים בזריקות הצוואר כדי לאפשר הדמיה של משלוח סמים תוך ורידי. הזרקת וריד הצוואר שימושית עבור מודלים רבים אחרים מחלה שעבורם משלוח סמים מדויק נדרש. השתמשנו בשיטה זו כדי לספק חלקיקים ולירגנות radiolabeled להדמיה in-vivo.אנו ממליצים למשתמשים חדשים לתרגל הסרת איבר מחמש עד 10 חולדות מורדמות לפני ניסיון ניסוי לשלוט במכניקה של קטיעה בגפיים ללא איבוד דם. לאחר אישור חוסר תגובה לרפלקס הפין, אבטחו את החולדה המורדמת ב- nosecone על כרית חום נמוכה בתנוחת החום. הסר את השיער על רגל ימין, עד הבטן התחתונה הגחון והגב.השתמש גזה או ספריי כדי לחטא את האזור הכירורגי עם 70% אתנול וחיטוי מדולל מתאים ולהחיל משחה על העיניים של החיה. באמצעות תנועה דמוית מקדחה כדי להפוך את פתח, להכניס מחט 22 מד מסומן 10 מילימטרים מן הקצה 10 מילימטרים לתוך diaphysis של השוקה באמצע הרמה tibial, הרחבת המחט דרך המטפיזיס לתוך הדיאפיזה. לאחר הסרת המחט, מערבבים בעדינות את ההשעיה של תאי הגידול של עניין כדי להשיג השעיית תא הומוגני, לטעון 7.5 x 10 עד הרביעי של התאים ב 20 microliters של PBS לתוך מזרק המילטון.סמנו את מזרק המילטון עם תאים 10 מילימטרים מקצה המחט והכניסו את המחט לסימן 10 מ"מ לתוך החור שנעשה על ידי מחט 22 מד. לאחר מכן לפרוק בעדינות את כל נפח התאים לתוך חלל מח העצם, ולהניח את החולדה לתוך כלוב על כרית חימום עם ניטור עד recumbency מלא. עבור ניהול דוקסורובicin תוך ורידי, לאחר אישור הרדמה, להשתמש בניתוח זהיר כדי לדמיין את וריד הצוואר ימין או שמאל, ולהכניס את המחט לתוך רקמת השריר overlying.כוון את המחט לכיוון הראש לתוך לומן וריד הצוואר, כפי שהוא דמיין את הצוואר הצווארי האחורי לשריר החזה, ולמשוך נפח קטן של דם לתוך קצה המחט כדי לאשר החדרה מדויקת. כאשר המחט היא במקום, לאט להזריק 100 עד 150 microliters של שני מיליגרם לכל קילוגרם דוקסורוביצין מעל דקה אחת. הפתרון צריך להיות גלוי בתוך הווריד במהלך המסירה.כאשר כל הפתרון נמסר, השתמש גזה סטרילית כדי להפעיל לחץ עדין על הווריד, ולהשתמש שלושה עד ארבעה קליפים פצע כדי לסגור את החתך. לאחר אישור הפחתת השעה, הסר את השיער ברגל ימין, עד לגחון ולבטן התחתונה של גב, והניח את החולדה בתנוחת העל-אדמה על כרית חימום. לשפשף את העור מאמצע העגל רק מעל מפרק הירך של הבטן התחתונה הימנית כפי שהוכח ולהחיל משחה על העיניים של החיה.באמצעות כפפות ומכשירים סטריליים, למשוך את הרגל דרך פתח האוורור של וילון כירורגי סטרילי ולעשות חתך עורי היקף רק פרוקסימלי לחנק. Deglove את האיבר האחורי כדי לחשוף את העורק הירך ואת הווריד על פני השטח הגחון-מנדל של הגפה האחורית, ולהשתמש 4-0 תפרים נספגים כדי להתדיין על כלי הדם ברמה של אמצע הירך ו transect distally. מהדקים את הווריד בצורה לא ברורה כדי להפחית דליפה במהלך ניתוח שרירים ולהשתמש בניתוח קהה כדי לחטוף את מפרק הירך עם סיבוב חיצוני לרוחב.אתר ופרק את ראש עצם הירך מן acetabulum, ולהסיר את כל הרקמה הנותרת, שמירה על הרגל מחוברת לגוף. לנהל בלוק התזה אל acetabulum ועצב sciatic עם כשישה מיליגרם לכל קילוגרם של ropivacaine, ולהשתמש פשוט מופרע 4-0 ספיגה כדי לסגור את השרירים מעל acetabulum. לאחר מכן להשתמש מהדקי פצע להציב חמישה עד 10 מילימטרים כדי לסגור את קצוות העור.הדמיית רנטגן למעקב אחר הגידול מאפשרת אישור לפלישה לגידול בעצמות וניתן לבצעה על גפיים שנקטעו לאחרונה או קבועות בפורמלין. הדמיית רנטגן מאפשרת גם הערכה של המורפולוגיה הרדיוגרפית של הריאות עם ובלי גרורות, ומספקת שיטה מהירה וקלה לקביעת הצורך בהמתת חסד כדי למנוע מקרי מוות ספונטניים מיותרים. בחולדה osteosarcoma, הן מורפולוגיה גידול אוסטאוליטי אוסטאובלסטי יכול להיות מאושר על ידי היסטופתולוגיה של הגפה קטועה.שים לב כי עצם קליפת המוח נעדרת בדוגמה זו וכי העצם הסמוכה הוחלפה או מועשרת על ידי עצם ארוגה חדשה המכווונים בניצב לפיר הקיים של קליפת המוח. איים של אוסטואידים לא בוגרים ניתן לזהות גם בתוך הגידול. בתמונות אלה, מורפולוגיה מיקרוסקופית של גרורות ריאות מייצגות, חלקם עם עצם מינרלית ותסחיף כלי דם גידול ניתן לראות.חיסון של גידולי אוסטאוסרקומה ראשוניים יכול לחשוף חדירה של הגידולים על ידי אוכלוסיות תאי החיסון, כגון מקרופאגים חיוביים CD68 או תאי T חיוביים CD3. סופג מערבי של חלבון תאי הגידול lysates יכול לשמש כדי לקבוע את הביטוי של קינאז חלבון, קולטני קינאז חלבון, וחלבונים אחרים אינטראקציה עם מסלולים אלה. עבור השתלת טיבי, לאחר החור tibial הראשון נעשה, להמשיך להחזיק את הרגל ביד הלא דומיננטית שלך באותה זווית כדי לשמור על העור ואת חורי העצם בשורה כדי להפוך את החדרת מחט המילטון קל יותר.להזרקת וריד הצוואר, הכנס את המחט לתוך השריר, אך אל תכוון את המחט יותר מדי כדי למנוע החמצת הווריד. לכריתה, תרגלו קודם את הפירוק של חולדות מורדמות.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

דגם פלורסנט Orthotopic עכבר של סרטן הלבלב

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק<em&gt; דרך</em&gt; Orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

מודל הזרקת Portal Vein לחקר גרור בכבד של סרטן השד

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

שיקולים מעשיים בלימוד כיבוש ריאות גרורתי אוסטאוסרקומה באמצעות וזמינותו גרורות בריאות

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

A Preclinical Mouse Model of Osteosarcoma to Define the Extracellular Vesicle-mediated Communication Between Tumor and Mesenchymal Stem Cells

דגם פרה העכבר של אוסטאוסרקומה כדי להגדיר את התקשורת חוץ-תאית שלפוחית בתיווך בין גידול בתאי גזע Mesenchymal

Within the tumor microenvironment, resident or recruited mesenchymal stem cells (MSCs) contribute to malignant progression in multiple cancer types. Under ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

דגם העכבר סרטן הלבלב Syngeneic ללמוד את השפעות בלתי הפיכות אלקטרופורציה

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

דגם Syngeneic Orthotopic זוהרים, פלורסנט מאתר של סירוס עמידים ו אנדרוגן תלויי סרטן הערמונית

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping של Orthotopic מאותו מין (Syngeneic) של KPC העיקרי מאתר אדנוקרצינומה Ductal הלבלב על ידי Cytometry זרימה

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Orthotopic השתלת ריאות Syngeneic תאים אדנוקרצינומה ללמוד ביטוי PD-L1

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

דגם לונג acellular וסלולריות ללמוד גרורות הגידול

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...