Name: a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate
Uploaded: 2021-05-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

NIH-midler gjennom National Cancer Institute, stipend # CA228582. Shun Ishiyama mottar for tiden et stipend fra Toray Medical Co., Ltd.

Alle prosedyrer og eksperimenter som involverer rotter ble utført i henhold til protokoller godkjent av Johns Hopkins Animal Care and Use Committee.
1. SD rotte OS celle linje UMR-106 cellekultur protokoll
<ol><li>Vokse celler i DMEM, supplert med 10% (v / v) FBS, penicillin (10 U / ml) -streptomycin (10 U / ml) ved 37 ° C i fuktet 5% CO2 atmosfære. Utfør eksperimenter ved hjelp av celler med passasjer på 2-812.</li>
</ol>2. Intra...

<ol>
	<li>Link, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+adjuvant+chemotherapy+on+relapse-free+survival+in+patients+with+osteosarcoma+of+the+extremity.">The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity.</a> New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).</li><li>Bielack, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+high-grade+osteosarcoma+of+the+extremities+or+trunk:+an+analysis+of+1,702+patients+treated+on+neoadjuvant+cooperative+osteosarcoma+study+group+protocols.">Prognostic factors in high-grade osteosarcoma of the extremities or trunk: an analysis of 1,702 patients treated on neoadjuvant cooperative osteosarcoma study group protocols.</a> Journal of Clinical Oncology. 20 (3), 776-790 (2002).</li><li>Botter, S. M., Neri, D., Fuchs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+osteosarcoma.">Recent advances in osteosarcoma.</a> Current Opinion in Pharmacology. 16, 15-23 (2014).</li><li>Ek, E. T. H., Dass, C. R., Choong, P. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+mouse+models+of+osteosarcoma.">Commonly used mouse models of osteosarcoma.</a> Critical Reviews in Oncology Hematology. 60 (1), 1-8 (2006).</li><li>Guijarro, M. V., Ghivizzani, S. C., Gibbs, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+osteosarcoma.">Animal models in osteosarcoma.</a> Frontiers Oncology. 4, 189 (2014).</li><li>Janeway, K. A., Walkley, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+osteosarcoma+in+the+mouse:+From+bedside+to+bench.">Modeling human osteosarcoma in the mouse: From bedside to bench.</a> Bone. 47 (5), 859-865 (2010).</li><li>Mohseny, A. B., Hogendoorn, P. C., Cleton-Jansen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma+models:+from+cell+lines+to+zebrafish.">Osteosarcoma models: from cell lines to zebrafish.</a> Sarcoma. 2012, 417271 (2012).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+murine+osteosarcoma+with+clonally+related+variants+differing+in+pulmonary+metastatic+potential.">An orthotopic model of murine osteosarcoma with clonally related variants differing in pulmonary metastatic potential.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 18 (3), 261-271 (2000).</li><li>Martin, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parathyroid+hormone-responsive+adenylate+cyclase+in+induced+transplantable+osteogenic+rat+sarcoma.">Parathyroid hormone-responsive adenylate cyclase in induced transplantable osteogenic rat sarcoma.</a> Nature. 260 (5550), 436-438 (1976).</li><li>Fisher, J. L., Mackie, P. S., Howard, M. L., Zhou, H., Choong, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+urokinase+plasminogen+activator+system+in+metastatic+murine+osteosarcoma:+an+in+vivo+mouse+model.">The expression of the urokinase plasminogen activator system in metastatic murine osteosarcoma: an in vivo mouse model.</a> Clinical Cancer Research. 7 (6), 1654-1660 (2001).</li><li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+reproducible+osteosarcoma+rat+model+using+orthotopic+implantation+technique.">Establishment of reproducible osteosarcoma rat model using orthotopic implantation technique.</a> Oncology Reports. 21 (5), 1175-1180 (2009).</li><li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homologous+mesenchymal+stem+cells+promote+the+emergence+and+growth+of+pulmonary+metastases+of+the+rat+osteosarcoma+cell+line+UMR-106.">Homologous mesenchymal stem cells promote the emergence and growth of pulmonary metastases of the rat osteosarcoma cell line UMR-106.</a> Oncology Letters. 8 (1), 127-132 (2014).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+and+ErbB2+in+the+cardiac+response+to+doxorubicin+injury.">Heat shock protein 90 and ErbB2 in the cardiac response to doxorubicin injury.</a> Cancer Research. 67 (4), 1436-1441 (2007).</li><li>Sysa-Shah, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+cross-regulation+between+ErbB2+and+&#946;-adrenergic+signalling+pathways.">Bidirectional cross-regulation between ErbB2 and &#946;-adrenergic signalling pathways.</a> Cardiovascular Research. 109 (3), 358-373 (2016).</li><li>Wachtman, L. M., Browning, M. D., Bedja, D., Pin, S., Gabrielson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+use+of+long-term+indwelling+jugular+catheters+in+a+rat+model+of+cardiotoxicity.">Validation of the use of long-term indwelling jugular catheters in a rat model of cardiotoxicity.</a> Journal of American Association Laboratory Animal Science. 45, 55-64 (2006).</li><li>Abdou, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prognostic+role+of+Ezrin+and+HER2/neu+expression+in+osteosarcoma.">The Prognostic role of Ezrin and HER2/neu expression in osteosarcoma.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 24 (5), 355-363 (2016).</li><li>Hughes, D. P., Thomas, D. G., Giordano, T. J., McDonagh, K. T., Baker, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+erbB+family+phosphorylation+in+osteosarcoma+as+a+target+for+CI-1033+inhibition.">Essential erbB family phosphorylation in osteosarcoma as a target for CI-1033 inhibition.</a> Pediatric Blood &amp; Cancer. 46 (5), 614-623 (2006).</li><li>Wen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+in+osteosarcoma:+expression+and+mutational+analysis.">Epidermal growth factor receptor in osteosarcoma: expression and mutational analysis.</a> Human Pathology. 38 (8), 1184-1191 (2007).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+drug+development+path+that+targets+metastatic+progression+in+osteosarcoma.">Toward a drug development path that targets metastatic progression in osteosarcoma.</a> Clinical Cancer Research. 20 (16), 4200-4209 (2014).</li></ol>

Rotter med OS-tibiale implantater utvikler målbare svulster med 3 uker etter implantasjon. Hvis lemmer med svulster amputeres 3 uker etter implantasjon, reduseres forekomsten av lungemetastase betydelig. OSer er både osteolytiske og osteoblastiske. Rotter uten amputasjon utvikler lungemetastaser som er flere og variably størrelse, observert ved radiografi eller ved nekropsi med 7 uker etter implantasjon. EGFR, ErbB2 og ErbB4 uttrykkes i rotte UMR106 OS, lik menneskelig OS16,<sup clas...

Osteosarkom (OS) er den vanligste primære bensvulsten hos barn, ungdom og unge voksne. Det siste fremskrittet i behandlingen av OS skjedde på 1980-tallet da multi-agent kjemoterapi ble vist å forbedre total overlevelse sammenlignet med kirurgi alene1. OS utvikler seg under rask beinvekst, vanligvis forekommer i lange rørformede bein som lårben, tibia og humerus. De er preget av en osteolytisk, osteoblastisk eller blandet utseende med bemerkelsesverdig periosteal reaksjon2. Kjemoterapi og kirurgisk reseksjon kan forbedre utfallet for pasienter med 5 års overlevelse for 65% av pasientene2,3. Dessverre har høyverdige OS-pasienter med metastatisk sykdom 20% overlevelse. OS invaderer regionalt og metastaserer hovedsakelig til lungene eller andre bein og er mer utbredt hos menn. Det mest overbevisende behovet for disse unge pasientene er en ny terapi som forhindrer og eliminerer levedyktighet av fjerne metastaser.
OS prekliniske modeller har blitt gjennomgått4,5,6,7 og få tilgjengelige immunotokmpente modeller ved hjelp av amputasjon av ortotopisk OS er utviklet. I 2000 ble en viktig modell utviklet ved hjelp av BALB/c mus med ortotopisk syngeneisk OS og amputasjon8. Sammenlignet med denne musemodellen er rottemodellen basert på genetisk utavlet og 10 ganger større dyr som fører til noen fordeler. Rotten UMR106-modellen ble utviklet fra et 32P indusert OS i en Sprague Dawley (SD) rotte, som ble avledet til en cellelinje9. I 2001 ble ortotopisk implantasjon av UMR106-01 først beskrevet i implanterte tibias av athymiske mus med rask, konsistent primær tumorutvikling og radiologiske, histologiske trekk til felles med OS hos mennesker. Lungemetastaser utviklet seg og var avhengige av ortotopisk plassering av UMR106 i beinmikromiljøet10. I 2009 etablerte Yu et al.11 en reproduserbar ortotopisk femur OS-rottemodell ved hjelp av UMR106-celler i større mannlige SD-rotter. De vellykkede tumorimplantasjonene og lungemetastaseraten hos rotter uten amputasjon var lik dataene som presenteres her. I denne studien ble det utført en ekstra amputasjon til modellen ved hjelp av unge rotter, noe som antydet at tidspunktet for primær tumorfjerning er avgjørende for modellering av OS, spesielt relatert til metastatisk progresjon. Med denne raffinement, amputasjon og in vivo imaging forbedre denne modellen for pre-kliniske studier for nye narkotika vurdering for OS.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AKT</td>
			<td>Cell Signaling TECHNOLOGY</td>
			<td>4685S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>absorbable suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J214H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-47778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;2-AR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-569</td>
			<td>replaced by &#946;2-AR (E-3): sc-271322</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bis&#8211;Tris gels</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NP0321PK2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR Lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>IZ-70000-201908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>#A0452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>#14-0688-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemiluminescent substrate</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>RPN2232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL-Xposure film</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>34089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Anesthesia System</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>922120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diaminobenzidine</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>Actavis</td>
			<td>NDC 45963-733-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGFR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-03</td>
			<td>replaced by EGFR (A-10): sc-373746</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB2 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-284</td>
			<td>replaced by Neu (3B5): sc-33684</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB4 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-283</td>
			<td>replaced by ErbB4 (C-7): sc-8050</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERK antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-514302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye lubricant</td>
			<td>PHARMADERM</td>
			<td>NDC 0462-0211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe (100 &#181;L)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>Model 1710 SN SYR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>horseradish peroxidase-linked secondary antibody</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>NA934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>BUTLER SCHEIN</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane vaporizer</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UMR-106 cell</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray</td>
			<td>Faxitron</td>
			<td>UltraFocus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray processor</td>
			<td>Hope X-Ray Peoducts Inc</td>
			<td>MicroMax X-ray Processor</td>
			<td>Hope Processors are not available in USA anymore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wound clips</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>427631</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate

Det siste fremskrittet i behandlingen av osteosarkom (OS) skjedde på 1980-tallet da multi-agent kjemoterapi ble vist å forbedre total overlevelse sammenlignet med kirurgi alene. For å løse dette problemet er målet med studien å avgrense en mindre kjent modell av OS hos rotter med en omfattende histologisk, avbildning, biologisk, implantasjon og amputasjonskirurgisk tilnærming som forlenger overlevelsen. Vi brukte en immunotokmpetent, utbrent Sprague-Dawley (SD), syngeneisk rottemodell med implantert UMR106 OS-cellelinje (som stammer fra en SD-rotte) med ortotopiske tibiale tumorimplantater i 3 uker gamle mannlige og kvinnelige rotter for å modellere pediatrisk OS. Vi fant at rotter utvikler reproduserbare primære og metastatiske lungetumorer, og at lemamputasjoner ved 3 uker etter implantasjon reduserer forekomsten av lungemetastase betydelig og forhindrer uventede dødsfall. Histologisk var de primære og metastatiske OSene hos rotter svært lik humane OS. Ved hjelp av immunhiistokjemimetoder viser studien at rotte os er infiltrert med makrofager og T-celler. En proteinuttrykksundersøkelse av OS-celler avslører at disse svulstene uttrykker ErbB-familiens kinaser. Siden disse kinasene også er sterkt uttrykt i de fleste menneskelige operativsystemer, kan denne rottemodellen brukes til å teste ErbB-banehemmere for terapi.

Immunocompetente SD-utrangerte rotter brukes til disse OS-studiene, som tilbyr en dyremodell med et intakt immunsystem. Vi har brukt UMR106-cellelinjen fra ATCC, utviklet fra celler som opprinnelig var isolert fra et OPERATIVSYSTEM fra en SD-rotte. Vi implanterte cellene i SD-rotter, og ga dermed en ny modell for OS. UMR106-celler implanteres i tibia av 3 uker gamle mannlige og kvinnelige SD-rotter, og simulerer en pediatrisk OS-modell. Videre gir den ortotopiske implantasjonen av UMR106-celler direkte inn i tibiametasti...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

Her beskrives en syngeneisk ortotopisk implantasjon etterfulgt av en amputasjonsprosedyre av osteosarkom med spontan lungemetastase som kan brukes til preklinisk undersøkelse av metastasebiologi og utvikling av nye terapeutiske stoffer.

En Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Modell med amputasjon for å kontrollere metastase rate

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

Implantering av osteosarkomceller inne i tibiamikromiljøet fremmer lungemetastase. Denne modellen kan også være nyttig for å studere mekanismene for lungemetastase eller nye kreftbehandlinger som krever et intakt immunsystem. Når svulsten er etablert, er amputasjon nødvendig for å kontrollere metastaseringsraten i langsiktige overlevelsesstudier.Vi bruker jugulære injeksjoner for å tillate visualisering av intravenøs legemiddellevering. Jugular vene injeksjon er nyttig for mange andre sykdomsmodeller som en presis legemiddellevering er nødvendig for. Vi har brukt denne metoden til å levere nanopartikler og radiomerkede liganer for in-vivo-avbildning.Vi anbefaler nye brukere å øve på å fjerne en lem fra fem til 10 euthanized rotter før du prøver et eksperiment for å mestre mekanikken til lem amputasjon uten blodtap. Etter å ha bekreftet mangel på respons på penis refleks, sikre bedøvet rotte i en nosecone på en lav varme innstilling varmepute i liggende stilling. Fjern håret på høyre ben, opp til ventral og dorsal underliv.Bruk gasbind eller spray for å desinfisere det kirurgiske området med 70% etanol og et passende fortynnet antiseptisk middel og påfør salve på dyrets øyne. Bruk en borelignende bevegelse for å lage en åpning, sett inn en 22-gauge nål merket 10 millimeter fra spissen 10 millimeter inn i diafysen av tibia midt på det tibiale platået, og utvid nålen gjennom metafysen inn i diafysen. Etter å ha fjernet nålen, bland forsiktig tumorcellefjæringen av interesse for å oppnå en homogen cellefjæring, og last 7,5 x 10 til den fjerde av cellene i 20 mikroliter PBS i en Hamilton-sprøyte.Merk Hamilton-sprøyten med celler 10 millimeter fra nålespissen og sett nålen til 10 millimeter-merket i hullet laget av 22-gauge nålen. La deretter hele volumet av celler forsiktig ut i marghulen, og legg rotten i et bur på en varmepute med overvåking til full heftelse. For intravenøs doksorubicin administrering, etter anestesi bekreftelse, bruk forsiktig disseksjon for å visualisere høyre eller venstre jugular vene, og sette nålen inn i overliggende muskelvev.Rett nålen mot hodet inn i jugularvenen lumen, da den visualiseres i jugularvenen fremre til pectoralismuskelen, og trekk et lite volum blod inn i nålespissen for å bekrefte en nøyaktig innsetting. Når nålen er på plass, injiser sakte 100 til 150 mikroliter med to milligram per kilo doxorubicin over ett minutt. Løsningen skal være synlig i venen under leveransen.Når hele løsningen er levert, bruk steril gasbind for å påføre forsiktig trykk på venen, og bruk tre til fire sårklemmer for å lukke snittet. Etter å ha bekreftet sedasjon, fjern håret på høyre ben, opp til ventral og dorsal underliv, og plasser rotten i liggende stilling på en varmepute. Skrubb huden fra midten av kalven til like over hofteleddet i høyre underliv som demonstrert og påfør salve på dyrets øyne.Bruk sterile hansker og instrumenter, trekk benet gjennom ventilen til den sterile kirurgiske gardinen og gjør et omkretsskjærende snitt bare proksimalt til kveleren. Deglove bakre lem for å eksponere lårarterien og venen på den ventrale mediale overflaten av bakre lem, og bruk 4-0 absorberbare suturer for å prosedere karene på nivået av midt-lårbenet og transekt distalt. Klem venen distalt for å redusere lekkasje under muskel disseksjon og bruk stump disseksjon for å bortføre hofteleddet med lateral utover rotasjon.Finn og disarticulate hodet på lårbenet fra acetabulum, og fjern eventuelt gjenværende vev, hold benet festet til kroppen. Administrer en sprutblokk til acetabulum og isjiasnerven med omtrent seks milligram per kilo ropivacaine, og bruk en enkel avbrutt 4-0 absorberbar sutur for å lukke muskulaturen over acetabulumet. Bruk deretter sårklemmer plassert fem til 10 millimeter for å lukke kantene på huden.Røntgenbilder for tumorovervåkning tillater bekreftelse av beinsvulstinvasjon og kan utføres på nylig amputerte eller formalin-faste lemmer. Røntgenavbildning tillater også evaluering av lungenes radiografiske morfologi med og uten metastaser, noe som gir en rask og enkel metode for å bestemme behovet for eutanasi for å forhindre unødvendige spontane dødsfall. I rotte osteosarcoma kan både osteolytisk og osteoblastisk tumormorfologi bekreftes av histopatologi av amputert lem.Legg merke til at det kortikale beinet er fraværende i dette eksemplet, og at det tilstøtende beinet har blitt erstattet med eller befestet av nytt vevd bein som er orientert vinkelrett på den eksisterende akselen av cortex. Øyer med umodne osteoider kan også identifiseres i svulsten. I disse bildene kan den mikroskopiske morfologien til representative lungemetastaser, noen med mineralisert bein og tumor vaskulær emboli observeres.Immunstaining av primære osteosarcoma svulster kan avsløre infiltrasjon av svulster av immuncellepopulasjoner, som CD68-positive makrofager eller CD3-positive T-celler. Vestlig blotting av tumorcelleproteinlytter kan brukes til å bestemme uttrykket av proteinkinase, proteinkinasereseptorer og andre proteiner som samhandler med disse veiene. For tibial implantasjon, når det første tibial hullet er laget, fortsett å holde benet i din ikke-dominerende hånd i samme vinkel for å holde huden og beinhullene stilt opp for å gjøre Hamilton nålinnsetting enklere.For jugular injeksjon, sett nålen inn i muskelen, men ikke vinkle nålen for mye for å unngå å gå glipp av venen. For amputasjonen, øv disarticulation på euthanized rotter først.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescent ortotopiske musemodell for kreft i bukspyttkjertelen

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Eksperimentell modell av Original Tumor Utvikling og Peritoneal metastaser<em&gt; via</em&gt; Ortotopiske Inoculation med ovarialcancer Cells

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

En Portal Vein Injection modell for å studere levermetastaser fra brystkreft

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

Praktiske hensyn i å studere metastatisk lungekreft kolonisering i Osteosarcoma bruker lunge metastasering analysen

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

A Preclinical Mouse Model of Osteosarcoma to Define the Extracellular Vesicle-mediated Communication Between Tumor and Mesenchymal Stem Cells

En prekliniske musemodell Osteosarcoma definere den ekstracellulære Vesicle-mediert kommunikasjonen mellom svulst og Mesenchymal stamceller

Within the tumor microenvironment, resident or recruited mesenchymal stem cells (MSCs) contribute to malignant progression in multiple cancer types. Under ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

En Syngeneic bukspyttkjertelkreft musemodell å studere virkningene av Irreversible Electroporation

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

En Bioluminescent og fluorescerende Orthotopic Syngeneic murint modell av Androgen-avhengige og kastrering-resistente prostatakreft

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping av Orthotopic Homograft (Syngeneic) av Murine primære KPC bukspyttkjertelen Ductal Adenocarcinoma av flowcytometri

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Orthotopic transplantasjon av Syngeneic lunge Adenocarcinoma celler å studere PD-L1 uttrykk

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Acellular og cellulær lunge modell å studere svulst metastasering

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...